DR. GAÁL KRISZTINA DE-OEC I.BELGYÓGYÁSZATI KLINIKA A DISZFUNKCIONÁLIS HDL MEGHATÁROZÁSA ÉS JELENTŐSÉGE KRÓNIKUS GYULLADÁSBAN
A PROTEKTÍV HDL ÁTALAKULÁSA PROINFLAMMATORIKUS HDL MOLEKULÁVÁ I. NORMÁL HDL Reverz koleszterin transzport: - A HDL molekulán található apoa-i és más lipoproteinek az érfalban, macrophagokban és a perifériás sejtekben lévő felesleges koleszterint transzportálják más lipoproteinekre és a májba újrahasznosítás illetve kiürítés céljából. Antioxidatív hatás: - Elsősorban a PON 1, LCAT, PAF-AH és a glutationperoxidáz fejti ki. PROINFLAMMATORIKUS HDL Károsodott reverz koleszterin transzport: - Klorin-, nitrogén-, és oxigén gyökök hatására az ApoA-I funkciója károsul. - A gyulladás miatt csökken a lipoprotein szintézis. Prooxidatív hatás: - A módosult ApoA-I inaktiválja a PON 1-t. - Az enzimek szintézise a gyulladás miatt csökken. - A HDL-hez prooxidáns hatású SAA és cöruloplazmin kötődik. Antiinflammatórikus hatás: -Megakadályozza az oxldl és más proinflammatórikus lipidek oxidációját. - Megakadályozza az endothel sejtek MCP-1 és más kemotaktikus molekulák expresszióját. - Csökkenti a T-sejtek és a monocyták közti kölcsönhatást. Proinflammatórikus hatás: - Elsősorban az LDL oxidációt segíti elő.
A PROTEKTÍV HDL ÁTALAKULÁSA PROINFLAMMATÓRIKUS HDL MOLEKULÁVÁ I.
Abszorbancia (45 nm) A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN I.,35,3 LAG TIME - LDL,25,2,15,1,5 Lag time = 68 perc V max 3 6 9 12 15 18 Idő (perc)
Abszorbancia (45 nm) A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN II. LAG TIME - EGÉSZSÉGES HDL,35,3,25,2,15,1,5 Lag time HDL = 125% (86 perc) Lag time LDL = 1% (68 perc) V max LDL V max HDL 3 6 9 12 15 18 Idő (perc) LDL Egészséges HDL
Abszorbancia (45 nm) A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN III. LAG TIME - DISZFUNKCIONÁLIS HDL,4,35,3,25,2,15,1,5 Lag time HDL = 12% (7 perc) Lag time LDL = 1% (68 perc) V max HDL V max LDL 3 6 9 12 15 18 Idő (perc) LDL Diszfunkcionális HDL
Abszorbancia (45 nm) A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN IV. LAG TIME - PROINFLAMMATÓRIKUS HDL,4,35,3,25,2,15,1,5 V max HDL Lag time HDL = 73,5% (5 perc) Lag time LDL = 1% (68 perc) V max LDL 3 6 9 12 15 18 Idő (perc) LDL Proinflammatórikus HDL
A MÓDSZER MEGBÍZHATÓSÁGA: LAG TIME ÉS KONJUGÁLT DIÉN KÉPZŐDÉS MÉRÉSE 1.8 LDL oxidáció magában.36 1.7.34 Konjugált dién (abszorbancia 234 nm) 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 Lag time LDL 133 perc (1%).32.3.28.26.24.22.2 Hem degradáció (abszorbancia 45 nm) 1..18.9.16 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 Idő (perc) konjugált dién hem degradáci ó
KONJUGÁLT DIÉN KÉPZŐDÉS ÉS LAG TIME EGÉSZSÉGES HDL JELENLÉTÉBEN 3. LDL oxidáció egészséges HDL jelenlétében.4 2.8.38 Konjugált dién (abszorbancia 234 nm) 2.6 2.4 2.2 2. 1.8 1.6 1.4 Lag time egészséges HDL 152 perc (114,3%).36.34.32.3.28.26 Hem degradáció (abszorbancia 45 nm) 1.2.24 1..22 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 Idő (perc) konjugált dién hem degradáci ó
KONJUGÁLT DIÉN KÉPZŐDÉS ÉS LAG TIME PROINFLAMMATÓRIKUS HDL JELENLÉTÉBEN 4.5 LDL oxidáció RA beteg HDL jelenlétében.38 4..36 Konjugált dién (abszorbancia 234 nm) 3.5 3. 2.5 2. Lag time proinflammatórikus HDL 118 perc (88,7%).34.32.3.28.26.24 Hem degradáció (abszorbancia 45 nm) 1.5.22 1..2 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 Idő (perc) konjugált dién hem degradáci ó
Abszorbancia (45 nm) A LAG TIME ÉS A HDL KONCENTRÁCIÓ KAPCSOLATA I. LAG TIME KÜLÖNBÖZŐ HDL KONCENTRÁCIÓK MELLETT,35,3,25,2,15,1,5 3 6 9 12 15 18 Idő (perc) LDL 2 ug/ml 15 ug/ml 1 ug/ml 5 ug/ml
Lag time (%) A LAG TIME ÉS A HDL KONCENTRÁCIÓ KAPCSOLATA II. LAG TIME A HDL KONCENTRÁCIÓ FÜGGVÉNYÉBEN 14 12 1 8 6 4 2 R 2 =,894 R 2 =,9764 5 1 15 2 25 Koncentráció (ug/ml) Egészséges HDL Lineáris (RA beteg HDL) RA beteg HDL Lineáris (Egészséges HDL)
A PROINFLAMMATORIKUS ILLETVE A DISZFUNKCIONÁLIS HDL ELŐFORDULÁSA KÜLÖNBÖZŐ MEGBETEGEDÉSEKBEN Krónikus szisztémás gyulladással járó állapotokban: Koronáriabetegség Rosszul kontrolált 2. típusú diabetes mellitus Metabolikus szindróma Szisztémás lupus erythematosus Rheumatoid arthritis Szisztémás sclerosis Crohn-betegség Krónikus veseelégtelenség Alvási apnoe Szívtranszplantáción átesettek Akut szisztémás gyulladással járó állapotokban: Sebészeti beavatkozás Influenza vírus infekció
Proinflammatorikus HDL és gyulladásos paraméterek vizsgálata rheumatoid arthritisben Betegek: 1 fő (8 nő és 2 ffi) Kezelés: havonta sc. inj. formájában 6 hónapig TNF- gátló (golimumab) Kezelés eredményességének követése:., 1., 3., 6. hónapban laboratóriumi vizsgálatok és a betegségaktivitást értékelő klinikai tesztek (DAS28, ACR2, ACR5, ACR7) Célok: - TNF- gátló kezelés hatásának vizsgálata a betegség aktivitásra - A betegség aktivitás és a proinflammatorikus HDL előfordulása valamint a PON1 aktivitás közötti kapcsolat vizsgálata - A proinflammatorikus HDL és a kialakulásában szerepet játszó tényezők (myeloperoxidáz MPO; szérum amyloid A SAA) közötti asszociáció meghatározása
Beteg és kontrol karakterisztika I. Betegek Kontrolok P Létszám (fő) 1 12 - Átlagéletkor (év) 45,3 46,6 NS BMI 25,1 25,8 NS dohányzik (fő) 1 3 NS hypertonia (fő) 4 4 NS diabetes (fő) 1 1 NS anamnézisben cardiovascularis ill. cerebrovascularis történés (fő) NS Sys RR (Hgmm) 133 124 NS Dias RR (Hgmm) 84,9 75,8,7
Beteg és kontrol karakterisztika II. Betegek Kontrolok P Összkoleszterin (mmol/l) 5,5 5,3 NS LDL (mmol/l) 3,12 2,83 NS HDL (mmol/l) 1,71 1,55 NS TG (mmol/l) 1,8 1,23 NS ApoA1 (g/l) 1,85 1,55,57 ApoB (g/l),76,76 NS Lp(a) (mg/l) 397,57 218,36 NS CRP (mg/l) 8,4 1,87,2 anti-ccp (U/l) 212,33 7,72 NS vwf Ag (%) 169,8 122,4,44
Betegek és kontrolok általunk mért paraméterei Betegek Kontrolok P PON aktivitás (U/l) 116,24 117,16 NS Só stimulált PON aktivitás (U/l) 221,55 29,98 NS Aryl-észteráz aktivitás (U/l) 122,4 123,77 NS PON/aryl,94,89 NS Só/aryl 1,8 1,6 NS PON fenotípus AA AA NS MPO aktivitás 1136,28 66,37,118 MPO/PON 14,25 7,47 NS MPO/aryl 9,7 4,87,81 PON/HDL-C 76,217 78,76 NS PON/aryl/HDL-C,616,62 NS Trendvonalak meredeksége,16,125 NS LAG TIME (%) 1,75 13,9 NS SAA (ng/ml) 73,79 56,28,3
HAQ-DI ACR kritériumot teljesítő betegek aránya (%) CRP (mg/l) ill. We (mm/óra) DAS28 A gyulladás klinikai és laboratóriumi paramétereinek változása a kezelés során CRP és We a kezelés során DAS28 változása a kezelés során 25 6 2 15 5 4 1 5 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónap CRP We 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok HAQ-DI változása a kezelés során ACR változása a kezelés során 1,4 1,2 1,8,6,4,2 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónap ACR2 ACR 5 ACR7
Trendvonalak meredeksége Enzimaktivitás (U/l) Specifikus aktivitás A HDL antioxidáns kapacitásának változása a kezelés során PON1 aktivitás változása a kezelés során 25 2 15 1 5 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok 1,95,9,85,8,75,7,65,6 A PON1 specifikus aktivitásának változása a kezelés során 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok PON aktivitás Sóval stimulált PON aktivitás Aryl-észteráz aktivitás PON/aryl PON/aryl/HDL-C Trendvonalak meredekségének változása a kezelés során,25,2,15,1,5 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok
MPO/PON SAA/HDL-C (ug/mmol) MPO aktivitás (ng/ml) SAA (ng/ml) A HDL funkciót befolyásoló tényezők változása a kezelés hatására MPO aktivitás változása a kezelés során SAA mennyiségének változása a kezelés során 12 1 8 8 7 6 5 6 4 2 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok Pro- és antioxidáns enzimek arányának változása a kezelés során Egységnyi HDL-en levő SAA mennyiségének változása a kezelés során 18 16 14 12 1 8 6 4 2 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok 5 45 4 35 3 25 2 15 1 5 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónapok
SAA (ng/ml) SAA (ng/ml) vwf Ag (%) Korrelációk I.: Betegség aktivitás és gyulladásos markerek DAS28 és SAA - Betegek 9 8 7 r =,4889 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8 DAS28 DAS28 és vwf Ag - Betegek 3 25 2 r =,4398 15 1 5 2 4 6 8 DAS28 CRP és SAA - Betegek 12 1 8 r =,4687 6 4 2 1 2 3 4 CRP (mg/l)
SAA (ng/ml) PON/HDL Trendvonalak meredeksége Trendvonalak meredeksége Korrelációk II.: HDL funkció, szerkezet és enzimek,1 PON és Trendvonalak meredeksége - 3. hó PON/Aryl/HDL és trendvonalak meredeksége - 3. hó,8,6,4,2 r=,6216 -,2, 5, 1, 15, 2, -,4 -,6 PON (U/l),1,8,6,4,2 -,2 -,4 -,6 r=,4398,5 1 1,5 2 PON/Aryl/HDL PON/HDL és SAA - 1.hó PON/HDL és MPO - 1. hó 85 8 75 7 65 6 55 5 45 4 r = -,776 5 1 15 2 25 PON/HDL 25 2 15 1 5 r= -,9272 5 1 15 2 MPO (ng/ml)
HDL-C (mmol/l) PON/Aryl/HDL Korrelációk III.: Betegség aktivitás és HDL funkció DAS28 és HDL-C - Betegek DAS28 és PON/aryl/HDL-C - Betegek 3,5 1,4 3 1,2 2,5 2 1,5 r=,1 1,8,6 r =-,4743 1,4,5,2 2 4 6 8 2 4 6 8 DAS28 DAS28
PON/aryl/HDL PON/aryl/HDL A terápiára adott válasz: responderek és non-responderek Responderek Non responderek 1,4 1,2 1 2 1,8 1,6 1,4,8 1,2 1,6,8,4,2,6,4,2 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónap R1/2 R4 R5 R8 R1 R11 1 2 3 4 5 6 7 Kezelési hónap R3 R6 R9 R12
Összefoglalás Rheumatoid arthritisben a TNF- gátló golimumab alkalmazása eredményesen csökkentette a gyulladás hagyományos klinikai és laboratóriumi paramétereit továbbá az MPO és SAA szintjét. Az aktív gyulladásos tüneteket mutató RA-s betegeknél a HDL a betegek közel felében diszfunkcionális és a funkcionális deficit mértéke korrelál a gyulladás súlyosságával. A golimumab kezelés hatására a gyulladás csökkenésével párhuzamosan javult a HDL antioxidáns aktivitása.
Köszönöm a figyelmet!