Az újszülöttkori galactosaemia szűrés eredményei és differenciáldiagnosztikai lehetőségei Balázs Imre SZTE ÁOK Gyermekgyógyászati Klinika és Gyermekegészségügyi Centrum Anyagcsere-Szűrő Laboratórium Magyar Orvosi Laboratóriumi Szakdolgozók Egyesülete IX. Nagygyűlés; Bük, 2005. szeptember 29-30.
A kötelező egészségbiztosítás ellátásairól szóló 1997. évi LXXXIII. törvény 83. ( 3 ) bekezdésének a) és b) pontjában megfogalmazottak alapján Phenylketonuria Galactosaemia Hypothyreosis Biotinidase hiány betegségekre van kötelező szűrés.
Mire irányul? A veleszületett anyagcsere betegségek korai diagnosztizálására. Klasszikus angol meghatározása: Egy enzim vagy hormon aktivitásának monogenetikus működési zavara az intermedier anyagcsere folyamatban.
Országos szűrőcentrumok Országos szűrőcentrumok 1. Fővárosi Önkormányzat Budai Gyermekkórháza 1. SZTE Gyermekklinika 2. Fővárosi SZTE Gyermekklinika Önkormányzat Budai Gyermekkórháza
Schleicher-Schüll szűrőpapír - Guthrie kártya Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem NÉV: NÉV: NÉV: NÉV:
Schleicher-Schüll szűrőpapír - Guthrie kártya Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem NÉV: NÉV: NÉV: NÉV:
Mi a galactosaémia? Enzimhiányon alapuló veleszületett anyagcsere betegség. / autoszomális, recesszív / Tejcukor ( Laktóz ) ( diszaharid ) Vékonybél bolyhainak tövében laktáz enzim Galaktóz Szőlőcukor monoszaharid monoszaharid Glükóz monoszaharid
Története: 1908 Von Ruess galactosaemia felfedezése / megfigyelés anyatej táplálásnál / 1917 Tejmentes diéta bevezetése 1935 Mason és Turner Leroir cukor metabolizmusának leírása / 1970 Nobel dij / 1956 Galactosaemia génjének felfedezése 1963 Guthrie és Paigen újszülöttkori szűrés bevezetése 1970 SZOTE szűrés megkezdése 1975 Kötelező szűrés bevezetése
glükóz-1-p ATP galaktóz aldózreduktáz galaktitol NADPH + H NADP ADP UTP galaktokináz galaktóz-1-p gal.-1-p uridil transzf. Weidemann P ~ P UDP galaktóz UDP gal.-4-epimeráz UDP glükóz Beutler UDPG pirofoszforiláz
- Galaktokináz enzimhiány: újszülöttkorban tünetmentes tejtáplálás után galactosaemia, cataracta felnőttkorban a galaktitól miatt vakság -Galaktóz-1-PUT enzimhiány: / klasszikus galactosaemia / hányás, hasmenés, elhúzódó sárgaság veseelégtelenség, máj megnagyobbodás fejlődési zavar, cataracta mentális retardáció -Duarte - galactosaemia
Mikrobiológiai tömegszűrés Galactosaemia újszülöttkori tömegszűrése Guthrie metabolitgátláson alapuló mikrobiológiai módszerével történik. Elve: galaktózra érzékeny mutáns E. coli baktérium-törzset tartalmazó agaróz táptalajra helyezzük fel a vérrel átitatott szűrőpapír korongokat
Zavaró tényezők: Ál-pozitív eredmény: 1. ha olyan antibiotikumot kapott az újszülött ami gátolja az E-coli növekedését 2. bármilyen szennyezés ami kioltási zónát ad Ál-negatív eredmény: 1. ha vérmintát a tejtáplálás megkezdése előtt vették le 2. ha a szűrőpapír nem volt megfelelően átitatva 3. ha az újszülött transzfúziót kapott
glükóz-1-p ATP galaktóz aldózreduktáz galaktitol NADPH + H NADP ADP UTP galaktokináz galaktóz-1-p gal.-1-p uridil transzf. Weidemann P ~ P UDP galaktóz UDP gal.-4-epimeráz UDP glükóz Beutler UDPG pirofoszforiláz
Weidemann teszt: galaktóz 30 mg % fölött Elve: A galaktóz dehidrogenáz ( Gal-DH ) enzim a galaktózról a NAD-ra hidrogént visz át, fluoreszkáló NADH-t képezve. Kontroll (mg % ) Minta 20 25 30 35 40
Beutler próba: a galaktóz-1-foszf foszfát- uridil-transzfer transzferáz ( G-1-PUT ) enzim hiányának kimutatása a klasszikus galaktozémia diagnózisának megerősítésére Minta: heparinnal levett teljes vér ( vérgázkapillárisban ) azonos körülmények között levett, tárolt és szállított egészséges kontroll minta
Elve: Vér G-1-PUT jelenlétében a NADP redukálódik fluoreszkáló NADPH-t képezve + galaktóz-1-foszfát + NADP 30 60 90 120 Kontroll: Minta:
Idő ( perc ) 0 30 60 90 120 Kontroll Galactosaemia heterzygote Galactosemic Duarte variant Duarte variant heterozygote
összgalaktóz totál galaktóz mérése / galaktóz és galaktóz-1- foszfát / Galaktót 1- foszfát alkalikus foszfatáz Galaktóz galaktóz dehidrogenáz Galaktóz + NAD+H 2 O Galaktono (1,4) lakton + NADH + H NADH + NBT ( sárga ) / nitroblu-terazolium / diaphorase NBT ( ibolya ) + NAD
Specifikus enzimvizsgálatok: galactokinase gal.-1-p uridil transzferase Németország A szűrésből kimaradó populációk pl.: roma török észak afrikai
1956 Galactosaemia génjének felfedezése Ma már több száz mutációt ismerünk Galactokinase: P28T G1PTU enzim: Q188R K285N Duarte: G1391A N314D
THE END
Köszönöm a figyelmet!