20 éves a Mamma Klinika A sejtdiagnosztika modern eszközei a diagnosztikában és terápiában dr Járay Balázs, dr Székely Eszter Medserv Kft, Semmelweis Egyetem II. Patológiai Intézet Budapest
1
22196 betegből 25223 biopszia történt
Citológiai dignózisok megoszlása C1 2268 9% C2 16655 66% C3 1216 4,8% C4 699 2,7% C5 4385 17,5% Összesen 25223 100%
1-9 mm 982 IDC 10-14 mm 15mm-nél nagyobb C1 C2 C3 C4 C5 6,3% 7% 3,27% 4,7% 1,8% 0,3% 16,6% 9,3% 7,5% 21,4% 17,7% 14% 42% 63% 73%
Kiegészítő vizsgálatok citológiai mintákon Speciális festések--kórokozók, nyák - diagnosztikus cél Immuncitokémiai vizsgálatok--diagnosztikus és terápiás cél hám vagy egyéb tumor, receptor status Fluorescens in situ hibridizáció--terápiás cél Polimeráz lánc reakció--terápiás cél Szekvenálás--terápiás cél Célzott kezelés
Immuncitokémia direkt keneten Érveink mások is.
Immuncitokémia direkt keneten Érveink - Ellenérvek Gyors Egyszerű Látványos Vér elszíntelenedik Controll. Könnyű elrontani hm Korlátozott mennyiségű anyag Törött keneten nem működik (automatában)
Terápiás célú immuncitokémiai vizsgálatok Mikor? Inoperábilis esetekben Ha a core biopszia ellenjavalt vagy nem kivitelezhető Metastasisok esetében a prognosztikai markerek meghatározhatóak aspirációs citológiai mintán is
Immunhisztokémia - Immuncitokémia Differenciálatlan daganatok eredetének(hisztogenezisének) tisztázása Áttéti daganat esetén a daganat kiindulási szervének meghatározása Fehérjék kimutatása a daganatban, melynek prognosztikai és / vagy terápiás jelentősége van Tumor markerek ( szöveti)
CK + sejtek - lobuláris cc. áttéte
????????????????????????????????? Angiosarcoma Idiopatiás-jól körülírt tapintható csomó Irradiációs-sötét vörös vagy ibolya színű bőrelváltozás, ezzel összefüggő tapintható csomó
Angiosarcoma-citológia
CD 31, CD 34
Sanger szekvenálás Emlőrákok esetében leírt és vizsgálható mutációk Kritériuma minimum 35% tumorarány a mintában, esetleg ALM-Ph 20-25% tumoraránynál. Abban az esetben, ha a vizsgált mintában mutációt detektálunk, a mutációt tartalmazó génszakaszt újraszekvenáljuk. Vizsgálható gének: PIK3CA gén 1. és 20. exonja EGFR gén 18. 19. 20. és 21. exonja HER2 gén 19. és 20. exonja AKT1 gén 4. exonja MET gén 2. 13. 14. 15. 16. 17. 18. és 19. exonja NGS (IonTorrent) szekvenálás Kritériuma minimum 25% tumorarány a mintában. A kiértékelés során az egy minta két párhuzamos szekvenálásának readszámát ellenőrizzük, majd összehasonlítjuk. Elsősorban azokat a mutációkat leletezzük ki, amelyek mindkét párhuzamos vizsgálatban jelen vannak, illetve a Quality értékük minimum 30, a Coverage értékük pedig minimum 200. Vizsgálható gének: BRCA1-2, PIK3CA, EGFR, TP53, HER2, AKT, PTEN, MET, ATM, CHEK2 PTEN, AKT, EGFR, MET: NGS szekvenálás HER2-gátlókkal történő kezelés hatékonyságát befolyásolja a rezisztencia kialakulása, amely lehetőségei közé tartozik többek között, hogy megváltozik a jelút (PTEN és p27 vesztése, AKT aktiválása) vagy más receptorokhoz tartozó jelutak aktiválódnak (pl. EGFR3, MET). BRCA1-2, PTEN, ATM, CHEK2: NGS szekvenálás "BRBRCAness": a BRCA-funkció elvesztését kísérő hasonló változások- más tumorokon (spordaikus emlőrákon vagy más tumortípusokon)-, amelyek szenzitizálhatnak PARP-gátlókkal szemben. Bizonyos szuppresszor gének aktivitása jelezheti ennek a fennállását.
KRAS P C R - R F L P KRAS gén pontmutáció vizsgálata 12. codon GGT 13. codon GGC EGFR immun vizsgálattal kiegészítve! Ha nem mutált és EGFR pozitív reagál. Módszer DNS izolálás PCR-RFLP szekvenálás
PCR - RFLP
1* 2 9 10 11* Fluorescence Fluorescence H358 12.codon HCT116 13.codon H358 hct116 6x 160 140 120 100 Wt Mut 400 300 Wt Mut Pozitív kontroll minták 80 60 40 20 Alsó marker Felső marker 200 100 Alsó marker Felső marker 0-20 20 40 60 80 100 120 Time (seconds) 3 4 5 6* 0 1 2* 3 45 6 78 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 Time (seconds) Heterogén(mut/wt) termék az enzim denat. miatt. Mut. Wt. Experion kapilláris gélelektroforézis virtuális gélkép 0% Mut. 2.5% 5% Mut. Mut. 7.5% Mut. 10% Mut. 20% Mut. 30% Mut. 40% Mut. 50% 70% Mut. Mut. 100% Mut. dr Rásó Erzsébet
>1_Kr6#SrS_C01_05 sequence exported from chromatogram file TNAGTCCATTTTCATTATTTTTATTATAAGGCCTGCTGAAAATGACTGAATATAAACTTG TGGTAGTTGGAGCTGGTGGCGTAGGCAAGAGTGCCTTGACGATACAGCTAATTCAGAATC ATTTTGTGGACGAATATGATCCAACAATAGAGGtAAATCTTGTTTTAATATGCATATTAC TGGGTGCAGGACCAAN >1_Kr3#SrS_A01_01 sequence exported from chromatogram file CCNNTNNCNTTATTTTTATTATAAGGCCTGCTGAAAATGACTGAATATAAACTTGTGGTA GTTGGAGCTGGTNGCGTAGGCAAGAGTGCCTTGACGATACAGCTAATTCAGAATCATTTT GTGGACGAATATGATCCAACAATAGAGGTAAATCTTGTTTTAATATGCATATTACTGGGT GCAGGACCAA ABI 3100 Genetic Analyser / BigDye Cycle Sequencing kit alkalmazásával dr Rásó Erzsébet
Reliability of immunocytochemical and fluorescence in situ hybridization tests performed on fine needle aspiration cytology samples of breast tumors: a comparative study Balazs Acs, M.D., Nora Szekely, M.D., Marcell Szasz A. M.D., Ph.D., Gabor Lotz, M.D., Ph.D., Tamas Szekely, M.D., Roland Istok, M.D., Eszter Szekely, M.D., Ph.D., Janina Kulka M.D. Ph.D., Balazs Jaray, M.D. 2nd Department of Pathology, Semmelweis University, Budapest, Hungary
Eredményeink a közleményből oestrogén IC 97 db volt, 25 %-ban fals neg volt keneten, de ahol + volt, ott a szövettan is az volt. HER2 IC már gyengébb, de ha +, akkor a szövettan is, de nem szenzitív, azaz sok a fals neg. A HER2 FISH 100%-os volt.