Hazai természetesvízi és tógazdasági halakból származó Aeromonas veronii törzsek összehasonlító vizsgálata Sellyei Boglárka, Varga Zsuzsanna, Papp Melitta, Paulus Petra, Molnár Kálmán, Székely Csaba MTA Agrártudományi Kutatóközpont, Állatorvos-tudományi Intézet NÉBIH Élelmiszer Mikrobiológiai Laboratórium Budapest
Halak bakteriális megbetegedése A leggyakoribb kórképek - fekélyes bőrgyulladás - Columnaris -betegség (uszony-, farok rothadás) - gümőkór Forrás: www.malawifish.com
Bőrgyulladás típusai Érintett fajok: elsődlegesen pontyfélék ponty, bodorka, ezüstkárász, compó vörösszárnyú-, dévérkeszeg Tünetek: - pikkelyhiány - kipirult, gyulladásos hám - pikkelytasak gyulladás - izomba terjedő, kipirult szegélyű hámhiány
Bőrgyulladásból izolálható baktériumok fertőző ágens: Aeromonas (hydrophila, veronii) Pseudomonas (fluorescens) Flexibacter columnare Aeromonas nemzetség előfordulás: édes-, brakk-, csap-, szennyvíz, iszap morfológia: G (-), fakultatív anaerob egyenes pálca egyesével, párokban v. rövid láncokban mozgás: változó, ált. egy poláris flagellum növekedési tartomány: 4-42ºC (opt. 22-37ºC) pszichrofil és mezofil fajok patogenitás: gerinctelenek béka, tengeri v. édesvízi halak háziállatok, ember
Aeromonas nemzetség A salmonicida complex A caviae complex A hydrophila complex A veronii complex
Vizsgálati anyag A vizsgálati időszak: 2013.10 2014.04 Balaton, Tisza-tó - ponty, dévérkeszeg, bodorka, csuka tógazdaságok - ponty, lénai tok, szivárványos pisztráng Heves Pest Jász- Nagykun- Szolnok Somogy Tolna Békés Mintavétel: bőrfelszíni elváltozások, fekélyek, kopoltyú, máj, lép, vese, bél
- izolálás: szelektív és TSA agaron Módszerek - morfológiai vizsgálatok telepmorfológia, natív-, festett kenet, oxidáz reakció - molekuláris vizsgálatok genus-specifikus PCR (Kong et al., 1999) cnp gén szekvenálás (fajazonosítás) (Miñana-Galbis et al., 2009) virulencia gének vizsgálata (Nam és Joh, 2007) - patogenitási teszt (Le Coadic et al., 2011)
24 Aeromonas törzs (83% A veronii, 10% A hydrophila, A sobria, A salmonicida) egyéb potenciális kórokozók: Acinetobacter sp., Cryseobacterium sp., Streptococcus sp., Staphylococcus sp.,pseudomonas sp., Flavobacterium sp., Shewanella sp., Yersinia sp., Citrobacter Az A veronii törzsek gyakorisága: - nemzetközi irodalom Zhou et al., 2013 Distribution and virulence gene comparison of Aeromonas strains isolated from diseased fish and water environment - hazai megfigyelés Glatz et al., 2013 Halakból és humán mintákból izolált Aeromonas sp. törzsek azonosítása klasszikus és modern módszerekkel Az A veronii törzsek patogenitása: Izolált törzsek Cai et al., 2012 Characterization of pathogenic Aeromonas veronii bv. veronii associated with ulcerative syndrome from Chinese longsnout catfish (Leiocassis longirostris Günther) Kozinska et al., 2002 Phenotypic characteristics and pathogenicity of Aeromonas genomospecies isolated from common carp (Cyprinus carpio L.)
Virulencia faktorok M L S G A N Lf Törzs Eredet Lip Ser GCAT Aero Nuc LafB A hydrophila harcsa + + - + + - A salmonicida pisztráng + + + + - - A sobria csuka - + - + - - A caviae hu + - - - - - A media hu + - - - - - A7 ponty + + - + - - A8 ponty - + - + - - A9 ponty - + - + - - A10 ponty - + - + - - A11 ponty - + - + - - A12 ponty - + - + - - A13 ponty - + - + - - A14 ponty - + - + - - A15 ponty - + - + - - A16 ponty - + - + - - A18 ponty - + - + - - A19 ponty + + - + - - A20 ponty - - - + - - A21 ponty - - - + - - M 100bp molekula marker L lipáz S szerin proteáz G glicerofoszfolipid-koleszterol transzferáz A aerolizin (hemolizin) N nukleáz Lf laterális fimbria A22 dévérkeszeg - + - + - - A23 dévérkeszeg - - - + - - A24 bodorka - + - + - - A26 bodorka - + - + - - A28 pisztráng + + + - + -
Patogenitási teszt A28 Lip, Ser, GCAT, Nuc A7 Lip, Ser, Aero A26 Ser, Aero A19 Lip, Ser, Aero A20 - Aero A28 A7 A26 A19 A20 0 h 0 0 0 0 0 1 h 7 5 2 0 2 2 h 7 5 3 0 2 3 h 7 5 3 1 2 4 h 7 5 4 2 2 5 h 7 5 5 4 2 6 h 7 5 5 6 2 7 h 7 5 6 6 3 8 h 7 5 7 7 3 9 h 7 5 8 8 5 10 h 9 5 9 9 7 11 h 9 6 9 9 8 12 h 9 6 9 9 8 elhullott egyedek száma 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 órák A28 A7 A26 A19 A20
Összefoglalás - a hazai fekélyes bőrgyulladást mutató halakból izolált Aeromonas törzsek többsége A. veronii (ezen faj térhódítását kiterjedt hőmérsékleti tűréstartománya és széles gazdaspektruma teszi jelentőssé) 24C 42C -A veronii törzsekben kimutatható virulencia faktorok megoszlása eltérő ennek megfelelően, az egyes törzsek patogenitása különböző
Köszönöm a figyelmet!
Rahman M., Colque-Navarro P., Kühn I., Huys G., Swings J., Möllby R. Identification and characterization of pathogenic Aeromonas veronii bv. sobria associated with epizootic ulcerative syndrome in fish in Bangladesh. Appl. Environ. Microbiol. 2002;68:650 655. doi: 10.1128/AEM.68.2.650-655.2002. [PMC free article] [PubMed] [Cross Ref] 7. Cai S.-H., Wu Z.-H., Jian J.-C., Lu Y.-S., Tang J.F. Characterization of pathogenic Aeromonas veronii bv. veronii associated with ulcerative syndrome from Chinese longsnout catfish (Leiocassis longirostris Günther) Braz. J. Microbiol. 2012;43:382 388. doi: 10.1590/S1517-83822012000100046. [PMC free article] [PubMed] [Cross Ref]