Molekuláris biológiai technikák Wunderlich, Lívius
|
|
- Klaudia Margit Kisné
- 8 évvel ezelőtt
- Látták:
Átírás
1 Molekuláris biológiai technikák Wunderlich, Lívius
2 Molekuláris biológiai technikák Wunderlich, Lívius Szerzői jog 2014 Wunderlich Lívius, Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem, Semmelweis Egyetem
3 Tartalom Molekuláris biológiai technikák... xii Előszó... xiii 1. Történeti áttekintés A molekuláris biológia története A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés A molekuláris biológia objektumai Szénhidrátok Lipidek Fehérjék Nukleotidok, nukleinsavak A molekuláris biológia összefüggései Sejtek Makromolekulák keletkezése Határtudományok Kísérleti tervezés Elválasztási technikák Szűrés, koncentrálás Centrifugálás Kromatográfia Kizárásos kromatográfia Adszorpciós kromatográfia Megoszlási kromatográfia Ioncserés kromatográfia Affinitás kromatográfia Gélelektroforézis Agaróz gélelektroforézis Pulzáló erőterű gélelektroforézis Poliakrilamid gélelektroforézis (PAGE) Kétdimenziós (2D) gélelektroforézis Kapilláris elektroforézis Sejttenyészetek fenntartása, manipulálása Baktériumok Baktériumok tenyésztése Baktériumok transzformálása Élesztőgombák Élesztőgomba tenyésztése Élesztő transzformálása Sejtkultúra állatokból Állati sejtek tenyésztése Állati sejtek transzfektálása Növényi sejtkultúra Transzgének növényi sejtekbe juttatása Vírusok DNS-, RNS-, fehérjeizolálási technikák Nukleinsavak izolálása Genomi DNS-izolálás Plazmid izolálás DNS-fragment izolálása Elektroelúció Alacsony olvadáspontú (low melting point) agaróz alkalmazása Olvasztás kaotróp sókkal Préselés a gélből RNS-izolálás Fehérjék izolálása Nukleinsav-módosító enzimek Polimerázok iii
4 Molekuláris biológiai technikák DNS-polimeráz RNS-polimeráz Nukleázok Dezoxiribonukleázok Aspecifikus DN-ázok Restrikciós endonukleázok Ribonukleázok Ligázok Másodlagos DNS-módosító enzimek Alkalikus foszfatázok Polinukleotid-kináz Metilázok Térszerkezet-módosító enzimek Helikázok Topoizomerázok Polimeráz láncreakció A PCR elve Exponenciális szaporodás A reakcióelegy összetétele Primerek tervezése A PCR alkalmazási területei, feltételei Hőstabil polimerázok A PCR-reakció specifitása Extra szakaszok beépítése Pontmutációk vizsgálata hagyományos PCR-rel Degenerált PCR, multiplex PCR Kvantitatív mérések PCR-rel Kvantitatív mérések real-time PCR-rel Pontmutáció kimutatása real-time PCR-rel Szekvenciameghatározás DNS-szekvenálás A Sanger-féle lánctermináción alapuló DNS-szekvenálás Új generációs szekvenálás Fehérjeszekvenálás Szekvenálás Edman-degradációval Szekvenálás tömegspektrométerrel Hibridizációs technikák Southern-blot Northern blot Dot blot és slot blot Nuclease-protection assay DNS-chip (DNA-microarray) Kolónia hibridizáció Fluoreszcens in situ hibridizáció (FISH) Vektorok Plazmidok pbr Antibiotikumok, rezisztencia Bakteriofágok λ-fág M13 fág Kék-fehér szelekció puc18/ Vektorok in vitro transzkripcióhoz Fágemid vektorok pbluescript Kozmidok Mesterséges kromoszómák YAC BAC iv
5 Molekuláris biológiai technikák HAC Virális vektorok Klónozás, nukleinsav-könyvtárak Klónozás restrikciós enzimekkel Ligáz nélküli klónozások USER technológia Háromnukleotidos technológia TOPO-klónozás Rekombinációs klónozás Genomi könyvtárak cdns könyvtárak Az első szál szintézise A második szál szintézise RACE Expressziós rendszerek Expressziós vektorok Expresszió baktériumsejtekben Fehérjetermelés élesztőben Fehérjeexpresszió bakulovírus segítségével Expresszió emlőssejt-tenyészetekben Expresszió állatokban Sejtmentes fehérjeexpresszió Mutagenezis, géncsendesítés Mutagenezis Irányított pontmutációk generálása A Kunkel-módszer A metiláción alapuló módszer Restrikciós hasításon alapuló módszer A megaprimer-módszer Mutagenezis láncközi primerekkel Random mutációk készítése PCR-rel Deléciók készítése Deléció készítése exonukleázokkal Deléció készítése hiányos primerrel Deléció készítése PCR-rel Génfúzió PCR-rel Génkiütött állatok Géncsendesítés A géncsendesítés elmélete Géncsendesítési módszerek Fehérjék kimutatása Antitestek termeltetése Poliklonális antitestek készítése Monoklonális antitestek készítése Másodlagos antitestek Aptamerek Western blot ELISA Fehérje interakciók In vitro kapcsolatok kimutatása Kapcsolatok kimutatása fúziós fehérjével Immunprecipitáció Ko-immunprecipitáció Gél-shift Kromatin-immunprecipitáció In vivo kapcsolatok kimutatása Élesztő két-hibrid rendszerek Szolubilis fehérjék kapcsolódásához Membránfehérjék kapcsolódásához Élesztő egy-hibrid rendszerek v
6 Molekuláris biológiai technikák Ismeretlen fehérje DNS-kötődése Transzkripciós faktorok promóter/enhancer-preferenciája Élesztő három-hibrid rendszer Felhasznált irodalom vi
7 Az ábrák listája Levene--Photo-by-Lo?printerFriendly=1; Tetranucleotide_.png UserPic_Large/85629/evt jpg Griffith_experiment.svg.png UserPic_Large/170191/evt jpg; athans.jpg; x315.jpg WalterGilbert2.jpg; vii
8 Molekuláris biológiai technikák y_(front,_angled_view)_-_sketchup.png aOb5sik9M/ShOg05PUyII/AAAAAAAABuA/d0IIlC_4XKY/AMG410b.jpg _Silica_membrane_vs_Anion_Exchange_ pdf viii
9 Molekuláris biológiai technikák prep_kit.jpg e/en019_1.gif aks+-+ggs+live+pcr+-+reaction+scheme.jpg DNA_sequence.svg.png ix
10 Molekuláris biológiai technikák igs.htm Products/FF91B67397D945E0956F CF7E3/Long%20Description/E8200a.jpg ch_i3cohnps/te_xc48qsji/aaaaaaaaaim/ezn9oxy84j0/s1600/biofreaks+-+ggs+live+- +Protein+purification+from+E.coli+-+Elution.jpg EZbr0GM7Pg0/TmudbUAhInI/AAAAAAAAB2I/sCsYcaVFr10/w500/GFP.jpg In_Vitro_Mutagenesis_files/image005.jpg x
11 Molekuláris biológiai technikák xi
12 Molekuláris biológiai technikák Wunderlich Lívius Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem, Semmelweis Egyetem, 2014 Wunderlich Lívius Typotex Kiadó, ISBN: Creative Commons NonCommercial-NoDerivs 3.0 (CC BY-NC-ND 3.0) A szerző nevének feltüntetése mellett nem kereskedelmi céllal szabadon másolható, terjeszthető, megjelentethető és előadható, de nem módosítható. Készült a TÁMOP-4.1.2/A/1-11/ számú, Konzorcium a biotechnológia aktív tanulásáért című projekt keretében. xii
13 Előszó A Molekuláris biológiai technikák jegyzet a BME-n tanuló biomérnök BSc. és MSc. hallgatóknak készült a Molekuláris biológiai módszerek és az Új molekuláris biológiai módszerek tantárgy segédanyagaként. Egyes részei hasznosak lehetnek a genetikát, a mikrobiális genetikát, illetve a biokémiát hallgató diákok számára is. A jegyzet fő célja, hogy biztos elméleti alapok mellett a szükséges gyakorlati tudást is biztosítsa a diákok számára. Erre főleg azért van szükség, mert az egyetemen, anyagi okok miatt, a molekuláris biológiai technikák gyakorlati oktatása egyelőre nem megoldott. A könyv a gyakorlati tudást úgy igyekszik biztosítani, hogy bizonyos technikák esetében az elméleti háttér ismertetése után a gyakorlati lépések megfelelően részletes leírása következik egy apró betűs részben. A szöveg megértését az anyagrészekhez kapcsolódó ábrák segítik. Az anyag úgy lett megszerkesztve és elrendezve, hogy az elején ismertetett, egymástól függetlennek tűnő, egyszerűbb technikák a könyv vége felé összekapcsolhatóak legyenek, és általuk érthetővé váljanak akár teljes kísérleti rendszereket kiszolgáló, komplex technikák is. Igyekeztünk olyan szellemben írni a könyvet, hogy az elsősorban a probléma-megoldásra koncentráljon. A jegyzet (és a hozzá kapcsolódó kontaktóra) anyagát elsajátítva, azt összefüggéseiben megértve, a hallgatók alkalmassá válnak arra, hogy önálló tudományos problémákat oldjanak meg a megfelelő kísérletek megtervezésével és a hozzájuk kapcsolható technikák alkalmazásával. A jegyzet 15 fejezetből áll. Az első fejezet egy történeti áttekintést ad a fontosabb felfedezésekről, a második a molekuláris biológia és határtudományainak összefüggéseiről, valamint a kutatások során szükséges kísérleti procedúráról értekezik. A 3. és 5. fejezetekben a legfontosabb makromolekulákat érintő elválasztási és tisztítási technikákat, a 4. fejezetben pedig az élő sejtek tenyésztéséhez használatos módszereket ismertetjük. A 7., 8. és 9. fejezetben a nukleinsavak sokszorosítására és azonosítására kidolgozott technikákkal, míg a 10., 11. és 12. fejezetben a rekombináns DNS-technikák alkalmazásával és a technikák hozadékával (például specifikus fehérjék termeltetésével) foglalkozunk. A 13. fejezet genetikai mutációk generálását és a géncsendesítés mechanizmusát, a 14. fejezet a fehérjék kimutatási módszereit, a 15. fejezet pedig a fehérjék által létrehozott kapcsolatok vizsgálati módszereit írja le. A molekuláris biológia a jövő tudománya. Reményeink szerint a jegyzet hozzájárul majd a molekuláris biológia elméletének jobb megértéséhez, és elősegíti a mérnökhallgatók tervezési képességeinek fejlődését. xiii
14
15 1. fejezet - Történeti áttekintés A molekuláris biológia története A molekuláris biológia egy viszonylag fiatal tudományág. Születésének pontos időpontját nehéz lenne meghatározni, magát a kifejezést először Warren Weaver matematikus használta 1938-ban. Szerinte az élet nem volt más, mint fizikai és kémiai folyamatok összessége, ezen folyamatok vizsgálati eszköztárát nevezte ő molekuláris biológiának. Általánosan azt mondhatjuk, hogy a tudományterület elsősorban az élet szubcelluláris összetevőinek, azon belül is főleg az élethez szükséges szerves makromolekulák (elsősorban fehérjék és nukleinsavak) tulajdonságainak megfigyelését és megváltoztatását lehetővé tévő technikák összessége. A molekuláris biológia tudományának fejlődése összefonódik a nukleinsavak megismerésének történetével ben Friedrich Miescher svájci orvos és biológus (1-1. ábra) izolált sejtmagból egy foszfátgazdag anyagot, melyet mag-anyagnak (nuclein) nevezett el ben Richard Altmann német patológus fedezte fel a maganyag savas természetét, és ő használta rá először a nukleinsav elnevezést. A nukleinsavakban lévő bázisok (adenin, guanin, citozin, uracil, timin) felfedezése és elnevezése Albrecht Kossel német orvos (1-2. ábra) nevéhez fűződik, aki 1885 és 1901 között végezte ez irányú kutatásait. A nukleinsavakban jelen lévő ribóz és dezoxiribóz felfedezése Phoebus Levene litván/amerikai biokémikus (1-3. ábra) nevéhez fűződik. Ugyancsak az ő nevéhez fűződik a nukleotidok pontos szerkezetének, és egymáshoz cukor-foszfát kötéssel való kapcsolódásuknak felfedezése is (1919), bár ő még úgy gondolta, hogy a négyféle nukleotid egymáshoz kapcsolódva gyűrűszerű tetranukleotidokat képez. Egészen 1950-ig ez volt az általánosan elfogadott vélemény, amikor is Erwin Chargaff(1-4. ábra) kimutatta, hogy a DNS-ben az adeninnek és atiminnek, valamint a guaninnak és a citozinnak a mennyisége páronként megegyezik (A%=T%, G%=C%). Ezt az összefüggést nevezzük az első Chargaff-szabálynak. A DNS kettős hélixének szerkezetét végül Rosalind Franklinnak, James Watsonnak és Francis Cricknek sikerült megfejteni 1953-ban (1-5. ábra, 1-6. ábra), Utóbbi kettő a felfedezésért Nobel-díjat is kapott Maurice Wikins fizikussal együtt ábra ábra
16 Történeti áttekintés 1.3. ábra - Phoebus-A--Levene--Photo-by-Lo?printerFriendly=1; x-tetranucleotide_.png
17 Történeti áttekintés 1.4. ábra /img/fr_chargaff.jpg; UserPic_Large/85629/evt jpg
18 Történeti áttekintés 1.5. ábra ábra A nukleinsavak szerkezetének felfedezésén kívül más nagyon fontos felfedezések is szükségesek voltak a molekuláris biológia tudományterületének fejlődéséhez. Mindenképp említést kell tennünk Emil Fischer német kémikusról (1-7. ábra), aki a XIX. század végén és a XX. század elején igen jelentős felfedezéseket tett többek között a szénhidrátok és a fehérjék szerkezetének megismerésében. Többek között Fisher tudta először a sztereoizomereket elkülöníteni egymástól, ő szintetizált először monoszacharidokat, peptideket. 4
19 Történeti áttekintés A tudósok körében egészen a XX. század közepéig vita volt arról, hogy a tulajdonságok átörökítésében a fehérjéknek, vagy a nukleinsavaknak van-e szerepe. A többség a fehérjék örökítő szerepét támogatta. Látszólag ezt az elméletet támogatta az a tudományos megfigyelés, mely az egy gén egy enzim hipotézishez vezetett (George Beadle, Edward Tatum, 1941). Bár Fred Griffith 1928-ban híres kísérlete alapján már feltételezte, hogy az örökítőanyag nem fehérje. Kísérletében kétféle, patogén és nem patogén baktériummal fertőzött egereket. Észrevette, hogy a hővel elölt patogén baktériumok önmaguk nem pusztították el az egereket, de azokat élő, nem patogén baktériumokkal együtt injektálták, akkor az egerek elpusztultak. Ebből arra következtetett, hogy a patogén baktérium hővel történt kezelése után is megtartotta transzformáló tulajdonságát (1-8. ábra). Valódi áttörést azonban csak az 1944-ben publikált Avery MacLeod McCartykísérlet hozott. Ebben az elölt baktériumok különböző makromolekuláit (RNS, DNS, fehérje, szénhidrát, lipid) izolálták, és kiderítették, hogy csak a DNS-nek volt transzformáló aktivitása (a patogén baktériumból izolált DNS nem patogén baktériummal keverve megölte a kísérleti állatot, míg a többi összetevőnek nem volt ilyen hatása) (1-9. ábra). Egy másik, 1952-ben publikált kísérlet igazolta ezt az elméletet. A Hershey Chasekísérletben radioaktív foszforral, illetve radioaktív kénnel jelölt bakteriofágokkal fertőzött baktériumokból nyert bakteriofágok radioaktivitását vizsgálták. A kapszidok leválasztása után csak a radioaktív foszfort tartalmazó fágok által fertőzött baktériumok lettek radioaktívak. Ezzel a kísérlettel azt sikerült bizonyítani, hogy a baktériumba bejutó DNS tartalmazza a fágok szaporodásához szükséges örökítőanyagot, nem pedig a baktérium felszínén maradó, fehérjékből álló fág-kapszid (1-10. ábra) ábra ábra px-Griffith_experiment.svg.png
20 Történeti áttekintés 1.9. ábra - UserPic_Large/170191/evt jpg; _02.JPG
21 Történeti áttekintés ábra jpg;
22 Történeti áttekintés Az 1950-es évektől kezdődő több mint három évtized rengeteg új molekuláris biológiai felfedezést hozott ban felfedezték az első, DNS-polimerizációt katalizáló enzimet (E. coli DNS-polimeráz I, Arthur Kornberg) (1-11. ábra). Bár már évek óta feltételezték létezését, 1960-ban sikerült először az mrns molekulák létét bizonyítani ben történt az első áttörés a genetikai kód megfejtésében, amikor Marshall Nirenberg és munkatársai kimutatták, hogy a poliuracilt tartalmazó RNS polifenilalanin peptidet kódol. Nirenberg, majd Har Gobind Khorana segítségével sikerült a teljes, minden tripletet tartalmazó kódszótárt 1966-ig megalkotni. Kettejükkel együtt Robert Holley is Nobel-díjat kapott 1968-ban, ő az átíráshoz szükséges trns felfedezéséért (1-12. ábra). Az első restrikciós hasításért felelős enzimek jelenlétét Werner Arber fedezte fel 1962-ben, a restrikciós enzimek használatának kifejlesztéséért a molekuláris biológiában Daniel Nathansszal és Hamilton Smith-szel együtt kapott Nobel-díjat 1978-ban (1-13. ábra). Smith 1970-ben karakterizálta az első restrikciós endonukleázt, Nathans készítette el az első restrikciós térképet 1972-ben (az SV40 vírusét). Paul Berg (1-14. ábra) nevéhez fűződik az első, restrikciós endonukleázzal hasított DNS-darabok összeligálása, ezáltal az első rekombináns DNS létrehozása (1972). Herbert Boyer és Stanley Cohen (1-15. ábra) a rekombináns DNS-t már egy élőlénybe (E. coli) juttatta, ahol a genetikai anyag képes volt replikálódni, és továbbörökítődni. 8
23 Történeti áttekintés ábra ábra
24 Történeti áttekintés ábra nobel_big/1978nathans.jpg;
25 Történeti áttekintés ábra ábra - 11
26 Történeti áttekintés A molekuláris biológia ilyen gyors fejlődése megdöbbentette a tudományos világot. Most már képesek lettünk az örökítőanyag fajok közti célzott transzferére, ezáltal teljesen új, addig még nem létező tulajdonságú élőlények létrehozására. Reális veszélye látszott annak, hogy a kontrollálatlan kutatás olyan új, akár patogén organizmusok létrehozásához vezethet, amelyek súlyos, akár az egész világra kiterjedő járványok kialakulását okozhatják. Ezért vezető kutatók moratóriumot hirdettek az idegen organizmusokba ültetendő rekombináns DNS-kutatások területén, amíg általános megegyezés nem születik azokról a rendszabályokról, amelyek a kutatások további biztonságos folytatásához szükségesek februárjában Paul Berg szervezett egy konferenciát a kaliforniai Asilomarba, ahol a világ vezető kutatói megállapodtak a rekombináns DNS-technikát érintő korlátozásokról. A megállapodás kiterjedt a kutatásban használható élőlényekre, a szükséges kísérleti protokollok pontos betartására, megfelelő műszerezettségi kívánalmakra (steril fülke, alacsony nyomású laboratóriumok, veszélyes hulladékok kezelése). A kísérletek veszélyessége szempontjából négy kategóriát állítottak fel, mindegyik kategóriához megfelelő elővigyázatossági intézkedéseket rendelve. Megtiltották patogén organizmusok használatát transzgénikus kísérletekhez, és toxinok génjeinek használatát rekombináns DNS létrehozásakor. A konferencia után immár az új rendszabályok szerint folytak a kutatások ben Edwin Southern (1-16. ábra) felfedezte a DNS-szakaszok azonosítására szolgáló, hibridizáción alapuló technikát, melyet róla Southern-blotnak neveztek el. Ugyancsak 1975-ben állítottak elő először monoklonális antitesteket hibridómasejtek segítségével (Georges Köhler, Cèsar Milstein) (1-17. ábra). A következő jelentős felfedezés a DNS szekvencia-analízisének technikája volt. A két legismertebb technika párhuzamosan került kifejlesztésre, az egyik a Walter Gilbert nevéhez fűződő kémiai hasításos módszer, a másik a Frederick Sanger (1-18. ábra) nevéhez fűződő láncterminációs módszer. Bár csak ez utóbbi terjedt el széles körben, a két kutató 1980-ban Nobel díjat kapott felfedezéseiért (Paul Berggel megosztva) ban Michael Smith (1-19. ábra) készítette az első pontmutációt irányított mutagenezissel több szempontból is jelentős év volt: ekkor készült el rekombináns technológiával az első humán genomi könyvtár és az első gyógyászati célra használt rekombináns fehérje (emberi inzulin: humulin) ben Ralph Brinster és Richard Palmiter (1-20. ábra) készítették el az első, idegen gént hordozó emlősállatot, a transzgenikus egeret. Ugyanebben az évben fejeződik be az első vírus, a λ-fág teljes genomjának megszekvenálása ábra
27 Történeti áttekintés ábra - Kohler1982-copy-450x315.jpg ábra - WalterGilbert2.jpg; ein_sequence.jpg
28 Történeti áttekintés ábra ábra - ammal_the-scientist.com_ralph_brinster-large.jpg;
29 Történeti áttekintés 1985 igen jelentős dátum a molekuláris biológia történetében. KaryMullis (1-21. ábra) ekkor fejleszti ki a polimeráz láncreakción alapuló technikát (PCR), mely gyökeresen megváltoztatja a kutatási lehetőségeket. A PCR-technika segítségével DNS-szakaszok szaporíthatóak fel specifikusan, igen rövid idő alatt, igen nagy mennyiségben. Ugyanebben az évben kezdik el azt az akkor még kilátástalannak tűnő projektet, amely az emberi genom teljes bázissorrendjének megismerésére szolgál. Ehhez felhasználják az akkoriban ismert molekuláris biológiai technikák jelentős részét (restrikciós emésztés/ligálás, genomi könyvtárak készítése, PCR, Sanger-féle láncterminációs szekvenálás), és feltételezik, hogy a technikák fejlődésével a szekvenálás üteme nagyságrendekkel felgyorsul (ez valóban így is történt). Más, a kutatásokhoz használt élőlények genomjának feltérképezése vagy már elkezdődött, vagy csak ezután fog. A human genom project (HUGO) farvizén, vagy attól függetlenül sikerül megszekvenálni az első eukarióta kromoszómát (élesztő 3. kromoszóma, 1985), az első prokarióta genomot (Haemophylus influenzae (1991) ben befejezik az élesztő genomját, majd megszekvenálják az E. coli genomját, (1997), a Caenorhabditis elegans genomját (1998). Többek között az ecetmuslinca (Drosophyla melanogaster) és a házi egér (Mus musculus) genomjának szekvenciája is elkészül. Az emberi genom teljes szekvenciájának felderítése 2003-ra készül el ábra Még egy nagyon fontos, viszonylag új technikáról muszáj szót ejteni. Craig Mello és Andrew Fire (1-22. ábra) 1998-ban felfedezik az RNS-interferencia jelenségét (amiért Nobel-díjat kapnak 2006-ban). Erre a jelensége 15
30 Történeti áttekintés épül a ma általánosan elterjedt géncsendesítési technika kis inhibitoros RNS-ek (sirns-ek) felhasználásának segítségével ábra ty.jpg A molekuláris biológiai technikák napjainkban is fejlődnek. Elsősorban a műszerek fejlődésének köszönhetően ma már jó néhány munkaigényes folyamatot sikerült automatizálni; a nagy mintaszámmal dolgozó laborokban robotok sokkal gyorsabban és precízebben tudnak bizonyos részfolyamatokat elvégezni, mint az emberi munkaerő. Többek között a számítógépes adatfeldolgozás nagymértékű felgyorsulása tette lehetővé az olyan technikák kifejlődését, mint például az új generációs szekvenciaanalízis-technikák. Segítségükkel manapság egy-egy élőlény genomjának meghatározása nem évekbe, csak napokba telik. 16
31 2. fejezet - A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés A molekuláris biológia objektumai A molekuláris biológiai technikák alkalmazása során elsősorban biológiai eredetű molekulákkal foglalkozunk, mint pl. a szénhidrátok, lipidek, fehérjék és nukleinsavak Szénhidrátok A szénhidrátok közé soroljuk a mono-, oligo- és poliszacharidokat. A monoszacharidok 3 7 szénatomszámú molekulák, melyek szénen és hidrogénen kívül oxigénatomokat is tartalmaznak (összegképletük C nh 2nO n vagy ezt megközelítő). A legismertebb monoszacharidok a glukóz, fruktóz, mannóz, galaktóz. A természetben mint szállítandó tápanyag vagy a di-, oligo- vagy poliszacharidok építőköveként van jelen. Két monoszacharid összekapcsolódva diszacharidot alkot. Legismertebb képviselői a maltóz, szacharóz, laktóz, cellobióz. Biológiai rendszerekben elsősorban mint táplálék vagy ozmotikum játszanak szerepet, de megjelennek poliszacharidok lebomlásának köztes termékeként is. A mono- és diszacharidok többsége édes ízű, ezért ezeket cukroknak is hívjuk. Néhány monoszacharid összekapcsolódásával keletkeznek az oligoszacharidok. Önállóan nagyon ritkán fordulnak elő, legtöbbször fehérjékhez vagy membrán-lipidekhez kötődnek, módosítva azok élettani sajátosságait. A poliszacharidok nagyon sok monoszacharid építőkőből szintetizálódott polimerek, melyek elsősorban strukturális építőelemként vagy tartaléktápanyagként vannak jelen az élőlényekben. Legfontosabb képviselőik a cellulóz, glikogén, amilóz, amilopektin (2-1. ábra) ábra - 17
32 A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés Lipidek A lipidek (zsírok, olajok) fizikai tulajdonságaikban különböznek a többi makromolekulától. Részben, vagy teljesen hidrofób vegyületek, polimereket nem képeznek. Hidrofób tulajdonságuk a bennük lévő nyílt vagy gyűrűs, hosszú szénhidrogénláncoktól eredeztethető. A nyílt láncúak közül a legegyszerűbbek a zsírsavak, melyek lebontásával (oxidálásával) a sejtek igen jelentős mennyiségű energiához tudnak jutni. A telített és a telítetlen zsírsavak fontos alkotóelemei a triglicerideknek (tartaléktápanyag) és a foszfolipideknek 18
33 A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés (sejtmembrán-alkotó). A gyűrűs lipidek közül a legismertebbek a szteránvázas vegyületek és az eikozanoidok. A szteránváz négy egymáshoz kapcsolódó gyűrűből áll, melyekről különböző oldalláncok erednek. A legismertebb szteránvázas vegyület a koleszterin, mely fontos sejtmembrán-alkotó. A koleszterinből képződhetnek az epesavak és fontos szteroid hormonok is. A koleszterin zsírsavval képzett koleszterin-észterek formájában is szállítódhat vagy tárolódhat a sejtekben. Az eikozanoidok hosszú zsírsavból (arachidonsav) képződnek, egy gyűrűt tartalmaznak. Legismertebb képviselőik a prosztaglandinok, leukotriének, tromboxánok. Szerepük a sejtek közötti kommunikációban van (2-2. ábra) ábra Fehérjék Az élő szervezetek tulajdonságainak döntő részét a bennük lévő fehérjék igen változatos felépítése teszi lehetővé. A változatos felépítés alapja a fehérjék alapegységeinek eltérő szerkezetében keresendő. Ezek az alapegységek az aminosavak. A Föld összes élőlényében mindössze huszonháromféle aminosav építi fel a fehérjéket, amelyekből húszféle minden élőlényben előfordul. Ezek a proteogén aminosavak az amino- és a karboxicsoportot összekötő szénatomhoz kapcsolódó oldalláncokban különböznek egymástól. Az aminosavak polimerizációja során létrejött polipeptidlánc az oldalláncok tulajdonságainak következtében feltekeredik, és jellegzetes struktúrát alkot, az adott polipeptidláncra kizárólagosan jellemző tulajdonságokkal (2-3. ábra). Az így létrejött fehérjék részt vesznek a sejtek és a sejtalkotók strukturális felépítésében, és szinte kizárólag fehérjékhez köthető az élőlényekben végbemenő biokémiai reakciók katalízise. Gyakran a feltekeredett fehérjék más fehérjékkel kapcsolódnak, fehérje-komplexeket hozhatnak létre. A komplexek létrejötte fontos előfeltétele lehet a fehérjék megfelelő működésének. 19
34 A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés 2.3. ábra Nukleotidok, nukleinsavak A nukleotidok olyan vegyületek, amelyek alapvetően három különböző jellegű részből állnak: egy gyűrűs monoszacharidból (pentózból), egy aromás szerves bázisból, és egy vagy több foszfát-csoportból (2-4. ábra). A pentóz alkotórész lehet ribóz vagy dezoxiribóz. Nukleotidok találhatóak a nukleinsavakban, de szerepelhetnek koenzimként, prosztetikus csoportként, vagy energiatároló molekulaként is. A nukleotidok polimerizációjával keletkeznek a nukleinsavak. A polimerizáció során pentóz-foszfát lánc keletkezik, amelyről szerves bázisok ágaznak le. A ribonukleinsavakban (RNS) adenin, guanin, citozin és uracil bázisok találhatóak, a dezoxiribonukleinsavakban (DNS) az uracil helyett timin van. Az RNS egyszálú, többféle funkciója lehetséges. Az mrns-ek kódolják a fehérjék aminosav-szekvenciáját. A trns-ek szállítják az aminosavakat a fehérjeszintézis helyére, és felelősek a kódok felismeréséért (2-5. ábra). Az rrns-ek a fehérjeszintézis komplexeiben, a riboszómákban találhatóak, ott strukturális és katalitikus funkciókat töltenek be. Számos más fontos funkcióhoz is szükségesek RNS-molekulák, például a splicinghoz, más RNS-ek éréséhez, telomérek szintéziséhez, génregulációhoz stb. 20
35 A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés A DNS antiparalel kettős szálat alkot, a szemben lévő szálak bázisai között hidrogénhíd (H-híd) kötések teremtik meg a kapcsolatot szigorúan meghatározott módon: adeninnel szemben mindig timin, guaninnal szemben mindig citozin található; előbbi kettő 2 db, utóbbi kettő 3 db H-híddal kapcsolódik egymáshoz (2-6. ábra). A DNS szerepe az információ tárolásában és továbbörökítésében van ábra ábra ábra
36 A molekuláris biológia objektumai, összefüggései, kísérleti tervezés A molekuláris biológia összefüggései A molekuláris biológia nem egy teljesen különálló tudományág, más tudományágakkal szorosan összefügg, átfed. A molekuláris biológiai technikák alkalmazásával vizsgált makromolekulák sem önmagukban léteznek a természetben, élő rendszerek (sejtek, szövetek) alkotóelemei. Ez az alfejezet ezeket az összefüggéseket tárgyalja; röviden összefoglaljuk a makromolekulák (elsősorban a nukleinsavak és a fehérjék) keletkezését, sejtben betöltött szerepüket, és szót ejtünk a molekuláris biológiával rokon tudományterületekről Sejtek Az élőlények alapegysége a sejt. A sejteket kívülről sejtmembrán határolja, mely egy kettős foszfolipid-réteg, benne integráns fehérjemolekulákkal. A membránon belül található viszkózus állományt nevezzük citoplazmának. A citoplazma legnagyobb részét víz alkotja, de nagy mennyiségben találhatóak benne fehérjeés RNS-molekulák. A prokarióta sejtekben nincsenek sejtszervecskék, a DNS-állomány nincs elválasztva a citoplazmától. Az eukarióta sejtekben már találunk sejtszervecskéket, melyeket szintén foszfolipid kettős membrán határol. A DNS itt a sejtmagban található. Az eukarióta sejtek sejtmembránjában foszfolipideken és fehérjéken kívül egy másik fajta lipid, koleszterin is található. A sejtmagon kívül számos más sejtszervecske is található az eukarióta sejtekben: mitokondriumok, endoplazmás retikulum (ER), Golgi-készülék, lizoszómák, peroxiszómák. Növényi sejtekre jellemző organellumok a színtestek (plasztisz) és a vakuólum (2-7. ábra). A mitokondriumok és a színtestek valamikor önálló prokarióta élőlények voltak, saját DNSállománnyal rendelkeznek ábra
Molekuláris biológiai technikák
Molekuláris biológiai technikák Wunderlich Lívius A Molekuláris biológiai technikák jegyzet igyekszik átfogó képet adni a jövő tudományának, a molekuláris biológiának a módszertanáról. A technikák elméleti
A nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk.
Nukleinsavak Szerkesztette: Vizkievicz András A nukleinsavakat először a sejtek magjából sikerült tiszta állapotban kivonni. Innen a név: nucleus = mag (lat.), a sav a kémhatásukra utal. Azonban nukleinsavak
NUKLEINSAVAK. Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag
NUKLEINSAVAK Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag RNS = Ribonukleinsav DNS = Dezoxi-ribonukleinsav A nukleinsavak
12/4/2014. Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció. 1952 Hershey & Chase 1953!!!
Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció 1859 1865 1869 1952 Hershey & Chase 1953!!! 1879 1903 1951 1950 1944 1928 1911 1 1. DNS szerkezete Mi az örökítő anyag? Friedrich Miescher
Géntechnológia és fehérjemérnökség
Géntechnológia és fehérjemérnökség Szerkesztette: Nyitray László Alexa Anita (12. és 13. fejezet) Fodor Krisztián (3. és 9. fejezet) Garai Ágnes (4. és 5. fejezet) Glatz Gábor (6. és 7. fejezet) Radnai
Az élő szervezetek felépítése I. Biogén elemek biomolekulák alkotóelemei a természetben előforduló elemek közül 22 fordul elő az élővilágban O; N; C; H; P; és S; - élő anyag 99%-a Biogén elemek sajátosságai:
Genetika. Tartárgyi adatlap: tantárgy adatai
Genetika Előadás a I. éves Génsebészet szakos hallgatók számára Tartárgyi adatlap: tantárgy adatai 2.1. Tantárgy címe Genetika 2.2. Előadás felelőse Dr. Mara Gyöngyvér, docens 2.3. Egyéb oktatási tevékenységek
Poligénes v. kantitatív öröklődés
1. Öröklődés komplexebb sajátosságai 2. Öröklődés molekuláris alapja Poligénes v. kantitatív öröklődés Azok a tulajdonságokat amelyek mértékegységgel nem, vagy csak nehezen mérhetők, kialakulásuk kevéssé
Géntechnológia és fehérjemérnökség
Géntechnológia és fehérjemérnökség elektronikus-jegyzet szerzők: Az ELTE Biokémiai Tanszék Munkaközössége Alexa Anita (12. és 13. fejezet), Fodor Krisztián (3. és 9. fejezet), Garai Ágnes (4. és 5. fejezet),
A bioinformatika gyökerei
A bioinformatika gyökerei 1944: Avery a transforming principle a DNS 1952: Hershey és Chase perdöntő bizonyíték: a bakteriofágok szaporodásakor csak a DNS jut be a sejtbe 1953: Watson és Crick a DNS szerkezete
AZ ÉLET KÉMIÁJA... ÉLŐ ANYAG SZERVEZETI ALAPEGYSÉGE
AZ ÉLET KÉMIÁJA... ÉLŐ ANYAG SZERVEZETI ALAPEGYSÉGE A biológia az élet tanulmányozásával foglalkozik, az élő szervezetekre viszont vonatkoznak a fizika és kémia törvényei MI ÉPÍTI FEL AZ ÉLŐ ANYAGOT? HOGYAN
A biokémia alapjai. Typotex Kiadó. Wunderlich Lívius Szarka András
A biokémia alapjai Wunderlich Lívius Szarka András Összefoglaló: A jegyzet elsősorban egészségügyi mérnök MSc. hallgatók részére íródott, de hasznos segítség lehet biomérnök és vegyészmérnök hallgatók
A nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk.
Nukleinsavak Szerkesztette: Vizkievicz András A nukleinsavakat először a sejtek magjából sikerült tiszta állapotban kivonni. Innen a név: nucleus = mag (lat.), a sav a kémhatásukra utal. Azonban nukleinsavak
CHO H H H OH H OH OH H CH2OH HC OH HC OH HC OH CH 2
4. Előadás ukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak Történeti háttér Savas karakterű anyagok a sejtmagból 1869-71 DS a sejtmag fő komponense F. Miescher (Svájc) 1882 Flemming: Chromatin elnevezés Waldeyer:
MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI A SZÉNHIDRÁTOK 1. kulcsszó cím: SZÉNHIDRÁTOK
Modul cím: MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI A SZÉNHIDRÁTOK 1. kulcsszó cím: SZÉNHIDRÁTOK A szénhidrátok általános képlete (CH 2 O) n. A szénhidrátokat két nagy csoportra oszthatjuk:
BIOKÉMIA. Simonné Prof. Dr. Sarkadi Livia egyetemi tanár.
BIOKÉMIA Simonné Prof. Dr. Sarkadi Livia egyetemi tanár e-mail: sarkadi@mail.bme.hu Tudományterületi elhelyezés Alaptudományok (pl.: matematika, fizika, kémia, biológia) Alkalmazott tudományok Interdiszciplináris
SZÉNHIDRÁTOK. Biológiai szempontból legjelentősebb a hat szénatomos szőlőcukor (glükóz) és gyümölcscukor(fruktóz),
SZÉNHIDRÁTOK A szénhidrátok döntő többségének felépítésében három elem, a C, a H és az O atomjai vesznek részt. Az egyszerű szénhidrátok (monoszacharidok) részecskéi egyetlen cukormolekulából állnak. Az
BIOGÉN ELEMEK Azok a kémiai elemek, amelyek az élőlények számára létfontosságúak
BIOGÉN ELEMEK Azok a kémiai elemek, amelyek az élőlények számára létfontosságúak A több mint száz ismert kémiai elem nagyobbik hányada megtalálható az élőlények testében is, de sokuknak nincsen kimutatható
5. Molekuláris biológiai technikák
5. Molekuláris biológiai technikák DNS szaporítás kémcsőben és élőben. Klónozás, PCR, cdna, RT-PCR, realtime-rt-pcr, Northern-, Southernblotting, génexpresszió, FISH 5. Molekuláris szintű biológiai technikák
Nukleinsavak. Szerkezet, szintézis, funkció
Nukleinsavak Szerkezet, szintézis, funkció Nukleinsavak, nukleotidok, nukleozidok 1869-ben Miescher a sejtmagból egy savas természetű, lúgban oldódó foszfortartalmú anyagot izolált, amit később, eredetére
A felépítő és lebontó folyamatok. Biológiai alapismeretek
A felépítő és lebontó folyamatok Biológiai alapismeretek Anyagforgalom: Lebontó Felépítő Lebontó folyamatok csoportosítása: Biológiai oxidáció Erjedés Lebontó folyamatok összehasonlítása Szénhidrátok
A molekuláris biológia eszközei
A molekuláris biológia eszközei I. Nukleinsavak az élő szervezetekben Reverz transzkripció replikáció transzkripció transzláció DNS DNS RNS Fehérje DNS feladata: információ tárolása és a transzkripció
Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén
Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén Dr. Dallmann Klára A molekuláris biológia célja az élőlények és sejtek működésének molekuláris szintű
A szénhidrátok az élet szempontjából rendkívül fontos, nélkülözhetetlen vegyületek. A bioszféra szerves anyagainak fő tömegét adó vegyületek.
Szénhidrátok Szerkesztette: Vizkievicz András A szénhidrátok az élet szempontjából rendkívül fontos, nélkülözhetetlen vegyületek. A bioszféra szerves anyagainak fő tömegét adó vegyületek. A szénhidrátok
A géntechnológia genetikai alapjai (I./3.)
Az I./2. rész (Gének és funkciójuk) rövid összefoglalója A gének a DNS információt hordozó szakaszai, melyekben a 4 betű (ATCG) néhány ezerszer, vagy százezerszer ismétlődik. A gének önálló programcsomagként
transzláció DNS RNS Fehérje A fehérjék jelenléte nélkülözhetetlen minden sejt számára: enzimek, szerkezeti fehérjék, transzportfehérjék
Transzláció A molekuláris biológia centrális dogmája transzkripció transzláció DNS RNS Fehérje replikáció Reverz transzkriptáz A fehérjék jelenléte nélkülözhetetlen minden sejt számára: enzimek, szerkezeti
sejt működés jovo.notebook March 13, 2018
1 A R É F Z S O I B T S Z E S R V E Z D É S I S E Z I N E T E K M O I B T O V N H C J W W R X S M R F Z Ö R E W T L D L K T E I A D Z W I O S W W E T H Á E J P S E I Z Z T L Y G O A R B Z M L A H E K J
DNS-szekvencia meghatározás
DNS-szekvencia meghatározás Gilbert 1980 (1958) Sanger 3-1 A DNS-polimerázok jellemzői 5'-3' polimeráz aktivitás 5'-3' exonukleáz 3'-5' exonukleáz aktivitás Az új szál szintéziséhez kell: templát DNS primer
BIOGÉN ELEMEK MÁSODLAGOS BIOGÉN ELEMEK (> 0,005 %)
BIOGÉN ELEMEK ELSŐDLEGES BIOGÉN ELEMEK(kb. 95%) ÁLLANDÓ BIOGÉN ELEMEK MAKROELEMEK MÁSODLAGOS BIOGÉN ELEMEK (> 0,005 %) C, H, O, N P, S, Cl, Na, K, Ca, Mg MIKROELEMEK (NYOMELEMEK) (< 0,005%) I, Fe, Cu,
Dr. Mandl József BIOKÉMIA. Aminosavak, peptidek, szénhidrátok, lipidek, nukleotidok, nukleinsavak, vitaminok és koenzimek.
Dr. Mandl József BIOKÉMIA Aminosavak, peptidek, szénhidrátok, lipidek, nukleotidok, nukleinsavak, vitaminok és koenzimek Semmelweis Kiadó Semmelweis Orvostudományi Egyetem Orvosi Vegytani, Molekuláris
CHO H H H OH H OH OH H CH2OH CHO OH H HC OH HC OH HC OH CH 2 OH
4. Előadás ukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak Történeti háttér Savas karakterű anyagok a sejtmagból 1869-71 DS a sejtmag fő komponense nuclein Friedrich Miescher (Svájc, 1844-1895) 1970: FM Insitute
Fehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia
Fehérje expressziós rendszerek Gyógyszerészi Biotechnológia Expressziós rendszerek Cél: rekombináns fehérjék előállítása nagy tisztaságban és nagy mennyiségben kísérleti ill. gyakorlati (therapia) felhasználásokra
A gyakorlat elméleti háttere A DNS molekula a sejt információhordozója. A DNS nemzedékről nemzedékre megőrzi az élőlények genetikai örökségét.
A kísérlet megnevezése, célkitűzései: DNS molekula szerkezetének megismertetése Eszközszükséglet: Szükséges anyagok: színes gyurma, papírsablon Szükséges eszközök: olló, hurkapálcika, fogpiszkáló, cérna,
A géntechnológiát megalapozó felfedezések
2010. december BIOTECHNOLÓGIA Rova tvezető: Dr. Heszky László akadémikus A géntechnológia genetikai alapjai c. I. fejezet 1-5. részében azokat a tudományos eredményeket mutattuk be, melyek bizonyítják,
I. A sejttől a génekig
Gén A gének olyan nukleinsav-szakaszok a sejtek magjainak kromoszómáiban, melyek a szervezet működését és növekedését befolyásoló fehérjék szabályozásához és előállításához szükséges információkat tartalmazzák.
Gyógyszerrezisztenciát okozó fehérjék vizsgálata
Gyógyszerrezisztenciát okozó fehérjék vizsgálata AKI kíváncsi kémikus kutatótábor 2017.06.25-07.01. Témavezetők : Telbisz Ágnes, Horváth Tamás Kutatók : Dobolyi Zsófia, Bereczki Kristóf, Horváth Ákos Gyógyszerrezisztencia
Nanotechnológia. Nukleinsavak. Készítette - Fehérvári Gábor
Nanotechnológia Nukleinsavak Készítette - Fehérvári Gábor Bevezető A nukleinsavak az élő anyag alapvetően fontos komponensei. Meghatározó szerepet töltenek be az átöröklésben, a fehérjék szintézisében
TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301)
Biokémia és molekuláris biológia I. kurzus (bb5t1301) Tematika 1 TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301) 0. Bevezető A (a biokémiáról) (~40 perc: 1. heti előadás) A BIOkémia tárgya
GÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ
GÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ Génklónozás Bármilyen klónozási eljárás célja, hogy egy ún. klónt, azaz tökéletesen egyforma szervezetek csoportját állítsák elő. Néhány növény, egyszerűen dugványozással
Hamar Péter. RNS világ. Lánczos Kornél Gimnázium, Székesfehérvár, 2014. október 21. www.meetthescientist.hu 1 26
Hamar Péter RNS világ Lánczos Kornél Gimnázium, Székesfehérvár, 2014. október 21. 1 26 Főszereplők: DNS -> RNS -> fehérje A kód lefordítása Dezoxy-ribo-Nuklein-Sav: DNS az élet kódja megkettőződés (replikáció)
Géntechnológia és fehérjemérnökség
Géntechnológia és fehérjemérnökség elektronikus-jegyzet szerzők: Az ELTE Biokémiai Tanszék Munkaközössége Alexa Anita (12. és 13. fejezet), Fodor Krisztián (3. és 9. fejezet), Garai Ágnes (4. és 5. fejezet),
TÉMAKÖRÖK. Ősi RNS világ BEVEZETÉS. RNS-ek tradicionális szerepben
esirna mirtron BEVEZETÉS TÉMAKÖRÖK Ősi RNS világ RNS-ek tradicionális szerepben bevezetés BIOLÓGIAI MOLEKULÁK FEHÉRJÉK NUKLEINSAVAK DNS-ek RNS-ek BIOLÓGIAI MOLEKULÁK FEHÉRJÉK NUKLEINSAVAK DNS-ek RNS-ek
2. Sejtalkotó molekulák II. Az örökítőanyag (DNS, RNS replikáció), és az öröklődés molekuláris alapjai (gén, genetikai kód)
2. Sejtalkotó molekulák II. Az örökítőanyag (DNS, RNS replikáció), és az öröklődés molekuláris alapjai (gén, genetikai kód) 2.1 Nukleotidok, nukleinsavak Információátadás (örökítőanyag) Információs egység
Human genome project
Human genome project Pataki Bálint Ármin 2017.03.14. Pataki Bálint Ármin Human genome project 2017.03.14. 1 / 14 Agenda 1 Biológiai bevezető 2 A human genome project lefolyása 3 Alkalmazások, kitekintés
Tel: ;
BIOLÓGIA ALAPJAI (BMEVEMKAKM1; BMEVEMKAMM1) Előadói: Dr. Bakos Vince, Kormosné Dr. Bugyi Zsuzsanna, Dr. Török Kitti, Nagy Kinga (BME ABÉT) Előadások anyaga: Dr. Pécs Miklós, Dr. Bakos Vince, Kormosné Dr.
BIOMOLEKULÁK KÉMIÁJA. Novák-Nyitrai-Hazai
BIOMOLEKULÁK KÉMIÁJA Novák-Nyitrai-Hazai A tankönyv elsısorban szerves kémiai szempontok alapján tárgyalja az élı szervezetek felépítésében és mőködésében kulcsfontosságú szerves vegyületeket. A tárgyalás-
Engedélyszám: 18211-2/2011-EAHUF Verziószám: 1. 2460-06 Humángenetikai vizsgálatok követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai
1. feladat Ismertesse a gyakorlaton lévő szakasszisztens hallgatóknak a PCR termékek elválasztása céljából végzett analitikai agaróz gélelektroforézis során használt puffert! Az ismertetés során az alábbi
Klinikai kémia. Laboratóriumi diagnosztika. Szerkesztette: Szarka András. Írta: Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem Semmelweis Egyetem
Klinikai kémia Laboratóriumi diagnosztika Szerkesztette: Szarka András Írta: Szarka András (1-8, 11-15. fejezet) Keszler Gergely (9, 10. fejezet) Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem Semmelweis
MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI A LIPIDEK 1. kulcsszó cím: A lipidek szerepe az emberi szervezetben
Modul cím: MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI A LIPIDEK 1. kulcsszó cím: A lipidek szerepe az emberi szervezetben Tartalék energiaforrás, membránstruktúra alkotása, mechanikai
TestLine - Biogén elemek, molekulák Minta feladatsor
TestLine - iogén elemek, molekulák iogén elemek, szervetlen és szerves molekulák az élő szervezetben. gészítsd ki a mondatot! aminocsoportja kondenzáció víz ún. peptidkötés 1. 1:48 Normál fehérjék biológiai
BIOLÓGIA ALAPJAI (BMEVEMKAKM1; BMEVEMKAMM1) Előadói: Dr. Bakos Vince, Kormosné Dr. Bugyi Zsuzsanna, Dr. Török Kitti, Nagy Kinga (BME ABÉT)
BIOLÓGIA ALAPJAI (BMEVEMKAKM1; BMEVEMKAMM1) Előadói: Dr. Bakos Vince, Kormosné Dr. Bugyi Zsuzsanna, Dr. Török Kitti, Nagy Kinga (BME ABÉT) Előadások anyaga: Dr. Pécs Miklós, Dr. Bakos Vince, Kormosné Dr.
DNS-számítógép. Balló Gábor
DNS-számítógép Balló Gábor Bevezetés A nukleinsavak az élő szervezetek egyik legfontosabb alkotórészei. Ezekben tárolódnak ugyanis az öröklődéshez, és a fehérjeszintézishez szükséges információk. Bár a
2. Sejtalkotó molekulák II. Az örökítőanyag (DNS, RNS replikáció), és az öröklődés molekuláris alapjai (gén, genetikai kód)
2. Sejtalkotó molekulák II. Az örökítőanyag (DNS, RNS replikáció), és az öröklődés molekuláris alapjai (gén, genetikai kód) 2.1 Nukleotidok, nukleinsavak Információátadás (örökítőanyag) Információs egység
neutrális zsírok, foszfolipidek, szteroidok karotinoidok.
Lipidek A lipidek/zsírszerű anyagok az élőlényekben előforduló, változatos szerkezetű szerves vegyületek. Közös sajátságuk, hogy apoláris oldószerekben oldódnak. A lipidek csoportjába tartoznak: neutrális
Fehérjeszerkezet, és tekeredés
Fehérjeszerkezet, és tekeredés Futó Kinga 2013.10.08. Polimerek Polimer: hasonló alegységekből (monomer) felépülő makromolekulák Alegységek száma: tipikusan 10 2-10 4 Titin: 3,435*10 4 aminosav C 132983
A replikáció mechanizmusa
Az öröklődés molekuláris alapjai A DNS megkettőződése, a replikáció Szerk.: Vizkievicz András A DNS-molekula az élőlények örökítő anyaga, kódolt formában tartalmazza mindazon információkat, amelyek a sejt,
Farmakológus szakasszisztens Farmakológus szakasszisztens 2/34
-06 Farmakológus szakasszisztens feladatok A 0/007 (II. 7.) SzMM rendelettel módosított /006 (II. 7.) OM rendelet Országos Képzési Jegyzékről és az Országos Képzési Jegyzékbe történő felvétel és törlés
A szénhidrátok döntő többségének felépítésében három elem, a C, a H és az O atomjai vesznek részt. Az egyszerű szénhidrátok (monoszacharidok)
SZÉNHIDRÁTOK A szénhidrátok döntő többségének felépítésében három elem, a C, a H és az O atomjai vesznek részt. Az egyszerű szénhidrátok (monoszacharidok) részecskéi egyetlen cukormolekulából állnak. Az
Az élő anyagot felépítő kémiai elemek
BIOKÉMIA SZAKMAI INFORMÁCIÓTARTALOM Az élő anyagot felépítő kémiai elemek 1. Elsődleges biogén elemek (a sejtek tömegének 99 %-át adják). Makro elemek Másodlagos biogén elemek (0,005-1%-ban fordulnak elő
A cukrok szerkezetkémiája
A cukrok szerkezetkémiája A cukrokról,szénhidrátokról általánosan o o o Kémiailag a cukrok a szénhidrátok,vagy szacharidok csoportjába tartozó vegyületek. A szacharid arab eredetű szó,jelentése: édes.
Nukleinsavak építőkövei
ukleinsavak Szerkezeti hierarchia ukleinsavak építőkövei Pirimidin Purin Pirimidin Purin Timin (T) Adenin (A) Adenin (A) Citozin (C) Guanin (G) DS bázisai bázis Citozin (C) Guanin (G) RS bázisai bázis
BIOLÓGIA HÁZIVERSENY 1. FORDULÓ BIOKÉMIA, GENETIKA BIOKÉMIA, GENETIKA
BIOKÉMIA, GENETIKA 1. Nukleinsavak keresztrejtvény (12+1 p) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 1. A nukleinsavak a.-ok összekapcsolódásával kialakuló polimerek. 2. Purinvázas szerves bázis, amely az
POSZTTRANSZLÁCIÓS MÓDOSÍTÁSOK: GLIKOZILÁLÁSOK
POSZTTRANSZLÁCIÓS MÓDOSÍTÁSOK: GLIKOZILÁLÁSOK Dr. Pécs Miklós Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudomány Tanszék 1 Glikozilálás A rekombináns fehérjék
Szénhidrátok. Szénhidrátok. Szénhidrátok. Csoportosítás
Szénhidrátok Definíció: Szénhidrátok Polihidroxi aldehidek vagy ketonok, vagy olyan vegyületek, melyek hidrolízisével polihidroxi aldehidek vagy ketonok keletkeznek. Elemi összetétel: - Mindegyik tartalmaz
Kun Ádám. Növényrendszertani, Ökológiai és Elméleti Biológiai Tanszék, ELTE MTA-ELTE-MTM Ökológiai Kutatócsoport. Tudomány Ünnepe,
Kun Ádám Növényrendszertani, Ökológiai és Elméleti Biológiai Tanszék, ELTE MTA-ELTE-MTM Ökológiai Kutatócsoport Tudomány Ünnepe, 2016.11.22. Miskolc Kun Ádám: A víz szerepe az élet keletkezésében. Tudomány
A tananyag felépítése: A BIOLÓGIA ALAPJAI. I. Prokarióták és eukarióták. Az eukarióta sejt. Pécs Miklós: A biológia alapjai
A BIOLÓGIA ALAPJAI A tananyag felépítése: Környezetmérnök és műszaki menedzser hallgatók számára Előadó: 2 + 0 + 0 óra, félévközi számonkérés 3 ZH: október 3, november 5, december 5 dr. Pécs Miklós egyetemi
Biológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek
Biológus MSc Molekuláris biológiai alapismeretek A nukleotidok építőkövei A nukleotidok szerkezete Nukleotid = N-tartalmú szerves bázis + pentóz + foszfát N-glikozidos kötés 5 1 4 2 3 (Foszfát)észter-kötés
DNS replikáció. DNS RNS Polipeptid Amino terminus. Karboxi terminus. Templát szál
DNS replikáció DNS RNS Polipeptid Amino terminus Templát szál Karboxi terminus Szuper-csavarodott prokarióta cirkuláris DNS Hisztonok komplexe DNS hisztonokra történő felcsvarodása Hiszton-kötött negatív
A BIOTECHNOLÓGIA ALKALMAZÁSI LEHETŐSÉGEI A GYÓGYSZERKUTATÁSBAN
Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 A BIOTECHNOLÓGIA
a III. kategória (11-12. évfolyam) feladatlapja
2009/2010. tanév I. forduló a III. kategória (11-12. évfolyam) feladatlapja Versenyző neve:... évfolyama: Iskolája : Település : Felkészítő szaktanár neve:.. Megoldási útmutató A verseny feladatait nyolc
4. Előadás. Nukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak
4. Előadás ukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak Történeti háttér Savas karakterű anyagok a sejtmagból 1869-71 DS a sejtmag fő komponense nuclein Friedrich Miescher (Svájc, 1844-1895), izolálás 1970: FM
RNS-ek. 1. Az ősi RNS Világ: - az élet hajnalán. 2. Egy már ismert RNS Világ: - a fehérjeszintézis ben résztvevő RNS-ek
RNS-ek RNS-ek 1. Az ősi RNS Világ: - az élet hajnalán 2. Egy már ismert RNS Világ: - a fehérjeszintézis ben résztvevő RNS-ek 3. Egy újonnan felfedezett RNS Világ: - szabályozó RNS-ek 4. Transzkripció Ősi
NÖVÉNYGENETIKA. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP /1/A
NÖVÉNYGENETIKA Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010 A citológia és a genetika társtudománya Citogenetika A kromoszómák eredetét, szerkezetét, genetikai funkcióját,
A T sejt receptor (TCR) heterodimer
Immunbiológia - II A T sejt receptor (TCR) heterodimer 1 kötőhely lánc lánc 14. kromoszóma 7. kromoszóma V V C C EXTRACELLULÁRIS TÉR SEJTMEMBRÁN CITOSZÓL lánc: VJ régió lánc: VDJ régió Nincs szomatikus
A NÖVÉNYI SEJT FELÉPÍTÉSE
A NÖVÉNYI SEJT FELÉPÍTÉSE A növényi sejt alapvetően két részre tagolható: 1. sejttest v. protoplaszt: citoplazma, sejtmag, színtestek, mitokondriumok 2. sejtfal PROTOPLASZT az életfolyamatok színtere benne
Szénhidrátok monoszacharidok formájában szívódnak fel a vékonybélből.
Vércukorszint szabályozása: Szénhidrátok monoszacharidok formájában szívódnak fel a vékonybélből. Szövetekben monoszacharid átalakítás enzimjei: Szénhidrát anyagcserében máj központi szerepű. Szénhidrát
CIÓ A GENETIKAI INFORMÁCI A DNS REPLIKÁCI
A GENETIKAI INFORMÁCI CIÓ TÁROLÁSA ÉS S KIFEJEZŐDÉSE A DNS SZERKEZETE Két antiparalel (ellentétes lefutású) polinukleotid láncból álló kettős helix A két lánc egy képzeletbeli közös tengely körül van feltekeredve,
3. A w jelű folyamat kémiailag kondenzáció. 4. Ebben az átalakulásban hasonló kémiai reakció zajlik le, mint a zsírok emésztésekor a vékonybélben.
FEHÉRJÉK 1. Fehérjék bioszintézisére csak az autotróf szervezetek képesek. Széndioxidból, vízből és más szervetlen anyagokból csak autotróf élőlények képesek szerves vegyületeket előállítani. Az alábbi
(1) A T sejtek aktiválása (2) Az ön reaktív T sejtek toleranciája. α lánc. β lánc. V α. V β. C β. C α.
Immunbiológia II A T sejt receptor () heterodimer α lánc kötőhely β lánc 14. kromoszóma 7. kromoszóma 1 V α V β C α C β EXTRACELLULÁRIS TÉR SEJTMEMBRÁN CITOSZÓL αlánc: VJ régió β lánc: VDJ régió Nincs
NANOTECHNOLOGIA 6. előadás
NANOTECHNOLOGIA 6. előadás A plazmid: Ha meg akarjuk ismerni egy fehérje működését, akkor sokat kell belőle előállítanunk. Ezt akár úgy is megtehetjük, hogy a kívánt géndarabot egy baktérumba ültetjük
BIOLÓGIA ALAPJAI. Anyagcsere folyamatok 2. (Felépítő folyamatok)
BIOLÓGIA ALAPJAI Anyagcsere folyamatok 2. (Felépítő folyamatok) A molekuláris biológiai alapjai DNS replikáció RNS transzkripció Fehérje szintézis (transzláció) (Az ábrák többsége Dr. Lénárd Gábor Biológia
Az örökítőanyag. I. A tulajdonságokat meghatározó örökítőanyag/információ átadható/ transzformálható.(fred Griffith kísérlet, 1928.
Az örökítőanyag I. A tulajdonságokat meghatározó örökítőanyag/információ átadható/ transzformálható.(fred Griffith kísérlet, 1928.) Kísérlet: Tüdőgyulladást okozó pneumococcus baktériumok vizsgálata. S
3. Sejtalkotó molekulák III. Fehérjék, enzimműködés, fehérjeszintézis (transzkripció, transzláció, poszt szintetikus módosítások)
3. Sejtalkotó molekulák III. Fehérjék, enzimműködés, fehérjeszintézis (transzkripció, transzláció, poszt szintetikus módosítások) 3.1 Fehérjék, enzimek A genetikai információ egyik fő manifesztálódása
A BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI
A BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI Műszaki menedzser MSc hallgatók számára Előadó: 2 + 0 + 0 óra, félévközi számonkérés 3 ZH: március 06?, április 10?, május 02?. dr. Pécs Miklós egyetemi docens
TRANSZPORTFOLYAMATOK A SEJTEKBEN
16 A sejtek felépítése és mûködése TRANSZPORTFOLYAMATOK A SEJTEKBEN 1. Sejtmembrán elektronmikroszkópos felvétele mitokondrium (energiatermelõ és lebontó folyamatok) citoplazma (fehérjeszintézis, anyag
Kromoszómák, Gének centromer
Kromoszómák, Gének A kromoszóma egy hosszú DNS szakasz, amely a sejt életének bizonyos szakaszában (a sejtosztódás előkészítéseként) tömörödik, így fénymikroszkóppal láthatóvá válik. A kromoszómák két
A biotechnológia alapjai A biotechnológia régen és ma. Pomázi Andrea
A biotechnológia alapjai A biotechnológia régen és ma Pomázi Andrea A biotechnológia fogalma Alkalmazott biológia A fogalom állandó változásban van A biológia és a biotechnológia közötti különbség a méretekben
Klónozás: tökéletesen egyforma szervezetek csoportjának előállítása, vagyis több genetikailag azonos egyed létrehozása.
Növények klónozása Klónozás Klónozás: tökéletesen egyforma szervezetek csoportjának előállítása, vagyis több genetikailag azonos egyed létrehozása. Görög szó: klon, jelentése: gally, hajtás, vessző. Ami
Molekuláris genetikai vizsgáló. módszerek az immundefektusok. diagnosztikájában
Molekuláris genetikai vizsgáló módszerek az immundefektusok diagnosztikájában Primer immundefektusok A primer immundeficiencia ritka, veleszületett, monogénes öröklődésű immunhiányos állapot. Családi halmozódást
A glükóz reszintézise.
A glükóz reszintézise. A glükóz reszintézise. A reszintézis nem egyszerű megfordítása a glikolízisnek. A glikolízis 3 irrevezibilis lépése más úton játszódik le. Ennek oka egyrészt energetikai, másrészt
Az RNS-interferencia és távlatai
Sipiczki Mátyás Az RNS-interferencia és távlatai Genetika és genom-projektek A modern biológia egyik leggyorsabban és leglátványosabban fejlődő területe a genetika, az a tudomány, amely az öröklődés mechanizmusát
Szervrendszerek szintje. Szervek szintje. Atomok szintje. Sejtek szintje. Szöveti szint. Molekulák szintje
Egyed szintje Ökoszisztéma Szervrendszerek szintje Szervek szintje Szöveti szint Sejtek szintje Atomok szintje Molekulák szintje TARTALOM: 1. Molekuláris biológiai/genetikai technikák 2. A genomika technikái
Johann Gregor Mendel Az olmüci (Olomouc) és bécsi egyetem diákja Brünni ágostonrendi apát (nem szovjet tudós) Tudatos és nagyon alapos kutat
10.2.2010 genmisk1 1 Áttekintés Mendel és a mendeli törvények Mendel előtt és körül A genetika törvényeinek újbóli felfedezése és a kromoszómák Watson és Crick a molekuláris biológoa központi dogmája 10.2.2010
BIOLÓGIA ALAPJAI. Sejttan. Anyagcsere folyamatok 1. (Lebontó folyamatok)
BIOLÓGIA ALAPJAI Sejttan Anyagcsere folyamatok 1. (Lebontó folyamatok) (Az ábrák egy része Dr. Lénárd Gábor Biológia 11. c. könyvéből való) Dr. Bakos Vince 2017/18. ősz 1 Prokarióták és eukarióták Karyon
Transzgénikus állatok előállítása
Transzgénikus állatok előállítása A biotechnológia alapjai Pomázi Andrea Mezőgazdasági biotechnológia A gazdasági állatok és növények nemesítése új biotechnológiai eljárások felhasználásával. Cél: jobb
Osztályozó vizsgatételek. Kémia - 9. évfolyam - I. félév
Kémia - 9. évfolyam - I. félév 1. Atom felépítése (elemi részecskék), alaptörvények (elektronszerkezet kiépülésének szabályai). 2. A periódusos rendszer felépítése, periódusok és csoportok jellemzése.
BIOLÓGIA VERSENY 10. osztály 2016. február 20.
BIOLÓGIA VERSENY 10. osztály 2016. február 20. Kód Elérhető pontszám: 100 Elért pontszám: I. Definíció (2x1 = 2 pont): a) Mikroszkopikus méretű szilárd részecskék aktív bekebelezése b) Molekula, a sejt
Folyadékkristályok; biológiai és mesterséges membránok
Folyadékkristályok; biológiai és mesterséges membránok Dr. Voszka István Folyadékkristályok: Átmenet a folyadékok és a kristályos szilárdtestek között (anizotróp folyadékok) Fonal, pálcika, korong alakú
Ellenanyag reagensek előállítása II Sándor Noémi
Ellenanyag reagensek előállítása II 2019.03.04. Sándor Noémi noemi.sandor@ttk.elte.hu Ellenanyagok módosítása 1. Kémiai módosítás Részleges redukció láncok közötti diszulfid hidak megszűnnek, szabad SH
A baktériumok (Bacteria) egysejtű, többnyire pár mikrométeres mikroorganizmusok. Változatos megjelenésűek: sejtjeik gömb, pálcika, csavart stb.
BAKTÉRIUMOK A baktériumok (Bacteria) egysejtű, többnyire pár mikrométeres mikroorganizmusok. Változatos megjelenésűek: sejtjeik gömb, pálcika, csavart stb. alakúak lehetnek. A mikrobiológia egyik ága,