Coombs technika és alkalmazása Kompatibilitási vizsgálatok Type and screen módszer. Dr. Fődi Éva OVSZ Szegedi Regionális Vérellátó Központ

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Coombs technika és alkalmazása Kompatibilitási vizsgálatok Type and screen módszer. Dr. Fődi Éva OVSZ Szegedi Regionális Vérellátó Központ"

Szebasztián Fodor
5 évvel ezelőtt
Látták:

1 Coombs technika és alkalmazása Kompatibilitási vizsgálatok Type and screen módszer Dr. Fődi Éva OVSZ Szegedi Regionális Vérellátó Központ

2 Szerológiai kompatibilitás a recipiens savójában nem mutatható ki ellenanyag a donor vörösvérsejt antigénjei ellen A kompatibilitási vizsgálat elemei: Laboratóriumi vércsoport-meghatározás ennek része: AB0 meghatározás RhD meghatározás Ellenanyagszűrés pozitív ellenanyagszűrés esetén az ellenanyag azonosítása, sz.e. további vizsgálatok DAT vizsgálat Laboratóriumi keresztpróba

3 Vércsoport antitestek

4 Vércsoport antitestek

5 IgG típusú (irreguláris) antitestek Inkomplett antitest, nem képes direkt agglutináció kiváltására! 2 nehéz, 2 könnyű lánc Szekunder immunválasz Inkomplett, meleg típusú antitest Átjut a placentán

6 IgG típusú (irreguláris) antitest 2 nehéz és 2 könnyű láncból áll Szekunder immunválasz során termelődik Nem képes direkt agglutináció kiváltására Inkomplett antitest Meleg típusú (37 C-on reagál inkubáció!) Átjut a placentán magzati vörösvérsejtekhez képes kötődni

7 IgG antitest Segédantitest Antigén-antitest kötődés megtörténik, de ahhoz, hogy kialakuljon a rácsszerkezet, és szemmel látható reakciót kapjunk, egy segédantitestre/speciális közegre van szükség.

8 Inkomplett antitestek (IgG) kimutatására alkalmas közegek LISS (alacsony ionerősségű közeg): növeli a sejtfelszínt, csökkenti az elektromos kettős réteget a vvt-k között, közelebb hozza a sejteket, gyorsítja az antitestek kötődését Proteolitikus enzimek (papain, bromelin): csökkentik a sejtfelszín negatív töltését, egyes antigéneket szabaddá tesznek (Rh, Kidd), másokat elroncsolnak (MNS, Duffy) AHG/Coombs technikák (direkt, indirekt): antihumán-globulint alkalmazunk az antigén-antitest kötődés kimutatására

9 Direkt és indirekt Coombs technika DAT= direkt antiglobulint teszt vagy direkt Coombs teszt: a vvt-k antitest/komplement fedettségének kimutatása IAT= indirekt antiglobulin teszt vagy indirekt Coombs teszt: a savó inkomplett antitestjeinek (IgG) kimutatása (ellenanyagszűrés, ellenanyagazonosítás, laboratóriumi keresztpróba)

11 Coombs reagens Anti-humán-globulint (AHG) tartalmaz ún. segédantitest, amely az inkomplett antitestek jelenlétének kimutatását szolgálja Előállítása régen heteroantitest termeltetésével, napjainkban monoklonális úton történik A teszt elméleti alapja Moreschi nevéhez (1908) fűződik, de Coombs és munkatársai alkalmazták először a gyakorlatban 1945-ben (nyulakba oltott humán eredetű immunglobulin, mely heteroantitest (AHG) termelését váltotta ki)

12 Coombs reagens és gélkártya Csöves technika makromódszer Oszlopagglutinációs technika - mikromódszer

13 Ellenanyagszűrés Indirekt Coombs technika Célja a beteg savójában lévő IRREGULÁRIS antitestek kimutatása (normális körülmények között NEM KELL jelen lenniük korábbi immunizáció révén termelődnek) a legtöbb IgG típusú Mivel IgG típusúak, nem képesek direkt agglutinációra, a kimutatásukhoz speciális közeg, ill. technika szükséges

14 Ellenanyagszűrés Gélkártyán, oszlopagglutinációs technikával 2 közegben: LISS/Coombs és enzim közeg Mindkét közegben 3 3, ismert antigén tulajdonságú, 0-ás tesztsejtekkel dolgozunk

15 LISS/Coombs közeg Enzimkezelt közeg A tesztsejtek papainnal vannak előkezelve. A sejtek LISS-ben vannak reszuszpnedálva, a kártya anti-igg+c3d-t tartalmaz. 50 μl tesztsejt + 25 μl beteg savó Antigén túlsúly 15 min inkubáció 37 C-on Centrifugálás IP IIP P= papainnal kezelt sejtek IIIP I II III

17 Antigén táblázat a gyártó mellékeli a tesztsejtekhez (csak a lejárati időig van érvényben) Enzimes közegben nem adnak reakciót, az enzim elroncsolja ezeket az antigéneket.

18 Ellenanyag azonosítása Pozitív ellenanyagszűrés esetén végezzük 11 tagú, 0-ás panelsejtekkel történik a sejtek antigén tulajdonsága ismert Gélkártyán oszlopagglutinációs technikával (mikromódszer), de csöves technikával is történhet (makromódszer) Szintén 2 közegben LISS/Coombs és enzim (vagy egyes Vérellátókban csak abban a közegben, ahol az ellenanyagszűrés pozitív lett)

19 LISS/COOMBS közeg AB RhD pozitív DAT negatív

20 Papainizált közeg

21 anti-fya

22 LISS/COOMBS közeg 0 RhD negatív DAT negatív

23 Papainizált közeg

24 anti-e

25 Rh fenotípus

26 Ellenanyag azonosítás Az azonosított antitest lehet allo- vagy autoantitest Antigénvizsgálat! Leggyakrabban az Rh rendszerbeli antitesteket mutatjuk ki Rh fenotípus meghatározás történik Irreguláris antitest minden transzfúzió után megjelenhet Antitestek kimutathatósága változó vannak évekig perzisztáló antitestek vannak olyanok, amik gyakran eltűnnek a keringésből: pl. Jk (Kidd) rendszer antitestjei

27 Ellenanyag azonosítás Az egyszer azonosított ellenanyag bekerül az OVSZ informatikai rendszerébe minden beteg egyedi azonosítóval rendelkezik, TAJ szám alapján keresünk Az antitest specificitásának megfelelő antigénre negatív vért kell biztosítani a betegnek szerológiai kompatibilitás! Ha az idők során el is tűnik a korábban azonosított antitest (vagyis nem tudjuk kimutatni), attól a transzfúziós utasítás nem változik memóriasejtek képződnek a secunder immunválasz során!

28 DAT (Direkt Coombs) vizsgálat Direkt Coombs technika: célja a vvt-k antitesttel és/vagy komplementtel való fedettségének kimutatása A beteg vvt szuszpenzióját mérjük egy oszlopba (egy kártyán 6 beteg DAT vizsgálata végezhető)

29 Minőségi DC ha a DAT pozitív

30 DAT pozitivitás Transzfúziós szövődmény UHB= újszülöttkori hemolitikus betegség (az újszülött vvt-i fedettek az anya által termelt antitesttel) Autoimmun betegségek pl.: AIHA= autoimmun hemolitikus anaemia Gyógyszer indukálta (pl.: terhesség alatt szedett Dopegyt vagy DIHA= gógyszert indukálta hemolitikus anaemia)

31 DAT pozitivitás Transzfúziós szövődmény esetén:

32 DAT pozitivitás Negatív ellenanyagszűrés mellett ++++ erősségű DAT pozitivitás arra utal, hogy nincs a savóban szabadon lévő, kimutatható antitest, mert mind rákötődött a vörösvérsejtekre pl.: anti-d okozta UHB esetén

33 Anti-D okozta UHB - esetismertetés Anya vércsoportja: 0 Rh negatív Terhesgondozás során anti-d antitestet azonosítottak, kis titerben (a titer és a magzati károsodás között nincs arányosság) Szülést követően az újszülött vércsoport meghatározása során a következő eredményeket kapták: Újszülött vércsoportja 0 Rh negatív ellenanyagszűrés negatív DAT ++++

34 Anti-D okozta UHB - esetismertetés Valóban 0 RhD negatív az újszülött vércsoportja??? Az újszülött vörösvérsejtjei az anya által termelt anti-d antitesttel fedettek, ezért ++++ erősségű a DAT vizsgálat Szabadon lévő anti-d antitest az újszülött savójában nincs, ezért negatív az ellenanyagszűrés Az újszülött RhD pozitív, de mivel az anti-d antitest elfedi a D antigént, így az RhD meghatározás során fals negatív eredményt kaptak

35 Laboratóriumi keresztpróba A kompatibilitás része választott vörösvérsejt készítmény igénylése esetén a recipiens savójával és a donor vörösvértestjeivel végzett indirekt Coombs technika Beteg savója + donor vvt-i LISS-ben hígítva 37 C-on inkubáció 15 percig Coombs közegű kártyán végezzük Pozitív reakció a vvt készítmény nem kompatibilis Negatív reakció a vvt készítmény kompatibilis

36 Laboratóriumi keresztpróba Tartalmaz-e a recipiens savója olyan ellenanyagot a donor vörösvérsejt antigénjeivel szemben, amit esetleg az ellenanyagszűrés nem mutatott ki ha az antitest kis gyakoriságú antigének ellen irányul, a tesztsejtek csak elvétve hordozzák az adott antigént, és nincsenek is tipizálva ezekre az antigénre.

37 Keresztpróba: Az első 3 oszlopban 1-1 donor vvt szuszpenzió + beteg savója 4. helyen AK: autokontroll beteg saját vvt-i+saját savója DAT poz a beteg!

38 Laboratóriumi keresztpróba Érvényességi idő: a mintavétel időpontjától kezdődik 72 óra Transzfúzió után érvényét veszti

39 Laboratóriumi keresztpróba DAT pozitivitás mellett Zavarhatja a laboratóriumi keresztpróbát, a vérválasztást megnehezíti nem tudunk a beteg számára kompatibilis vvt készítményt biztosítani A transzfúziós utasítást MINDIG vegyük figyelembe, és tartsuk be Megjegyzés rovat : fontos információkat tartalmazhat!

40 Vércsoport-szerológiai lelet Az eredményeket tartalmazza: AB0, RhD, ellenanyagszűrés, DAT, ill. további vizsgálatok eredményeit Transzfúziós javaslat: megjelöli, hogy a beteg milyen antigénekre negatív vérkészítménnyel transzfundálható, felhívja a figyelmet a fokozott kockázattal járó transzfúzióra vagy ha csak vitális indikáció esetén javasolt a beavatkozás.

43 Szükséges-e a keresztpróba? Miért igen? Miért nem? A beteg savója itt találkozik ténylegesen a donor vvt-kel (in vitro modellezzük a transzfúziót) Negatív ellenanyagszűrés mellett a pozitív keresztpróbák előfordulása 1/30000 Ha a szűrősejtek nem tartalmazzák a beteg savójában lévő anitestnek megfelelő antigént, vagy nincsenek tipizálva... Primer immunizációt nem lehet kivédeni

44 Keresztpróba/transzfúzió aránya

45 Type and screen Racionálisabb vérkészlet felhasználás érdekében vezették be (+ felesleges munka, költségek csökkentése) Igénylése vércsoport vagy vérválasztást igénylő lapon megjegyzés rovatban: type and screen Olyan esetben alkalmazható, ahol a transzfúzió valószínűsége 50%-nál kisebb szegedi viszonylatban elsősorban ortopédiai, urológiai elektív műtétek esetén igénylik

46 Type and screen Feltételei: Laboratóriumi vércsoport meghatározás (AB0, RhD, ellenanyagszűrés, DAT) Ellenanyagszűrésnek és DAT vizsgálatnak negatívnak kell lennie Nem rendelkezik a beteg olyan lelettel, ami választott vérkészítményt ír elő 3 hónapon belül nem volt immunizáló tényező (terhesség, transzfúzió, transzplantáció)

47 Type and screen Amennyiben mégis sor kerül a transzfúzióra, lehetőség szerint keresztpróba vizsgálatot végzünk a transzfúziót megelőzően vagy azzal párhuzamosan

48 Köszönöm a figyelmet!

Hasonló dokumentumok

Bevezetés a vércsoport-szerológiai vizsgálatokba

Bevezetés a vércsoport-szerológiai vizsgálatokba dr. Fődi Éva OVSZ Szegedi Regionális Vérellátó Központ 2018. január Mivel foglalkozik a vércsoportszerológia? Vércsoport szerológiai kompatibilitás: Kompatibilitás: