Szinoviális szarkómák patogenezisében szerepet játszó szignálutak jellemzése szöveti multiblokk technika alkalmazásával Fónyad László 1, Moskovszky Linda 1, Szemlaky Zsuzsanna 1, Szendrői Miklós 2, Sápi Zoltán 1 1 Semmelweis Egyetem, 1sz. Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet, Budapest 2 Semmelweis Egyetem, Ortopédiai Klinika, Budapest
Háttér Célkitűzés Anyag, Módszer Eredmények, Következtetések A szinoviális Szignálutak jellemzése TMA szöveti Nagyobb vizsgálat szarkómákról általában multiblokk technika részeredményei ezek Mit tudunk a Van e kiemelt fontosságú 50 eset receptor tirozin kinázok betegségről szignálút, ami felelős lehet IHC RAS-AKT-mTOR szignálút Tisztázatlan kérdések a tumor kialakulás és FISH p4ebp1 és a PTEN növekedés tekintetében kivételével, nem találtunk Van e eltérés a jellemző különbséget a transzlokált transzlokációt t(x;18) és a transzlokációt nem hordozó, illetve nem hordozó tumorok esetében hordozó esetek szignálút aktivitási profilja között?
Háttér Szinoviális szarkóma 10% a rosszindulatú lágyrész tumoroknak végtagokon (ízületek közelében) fiatal felnőttek Ismeretlen hisztogenezis (tumors of uncertain differentiation) Formái: Bifázisos Monofázisos Fibrózus Epitheliális Rosszul differenciált (kereksejtes)
Háttér Immunhisztokémia jellemzők Vimentin ~100% EMA and Keratin-pan ~97% at least focal TLE1 ~100% SYT-protein ~90%? S100 ~35% BCL2 ~100% CD99 ~70% β-katenin ~95%? CD34 ~0% Vimentin Keratin-pan EMA TLE1 CD34
Háttér Genetikai jellemzők t(x;18)(p11.2;q11.2) SYT krsz.18. SSX1,SSX2, SSX4 krsz.x. SYT-SSX kiméra gén és fehérje Onkogén hatás ABL SYT-SSX1 RT-PCR ABL SYT-SSX2 18q11.2 break apart FISH
Célkitűzés Tanulmányunk célja, annak felderítése, hogy a SS kialakulása és növekedése során milyen szignálutak játszanak szerepet, közöttük meghatározhatóak e olyanok, melyek kiemelt fontossággal bírnak, illetve annak vizsgálata, hogy a transzlokációt hordozó és nem hordozó tumorokban van e eltérés a fenti szignálutak aktivitásában.
Szignálutak jellemzése Anyag, Módszer 50 eset (8 bifázisos, 35 monofázisos, 7 rosszul differenciált) Minták formalin fixáltak, paraffinba ágyazottak TMA-blokkokat terveztünk (TMA-Master - 3DH) A mintákon IHC és FISH - t(x;18) break apart próbát végeztünk. (Vysis, Abbott) Szöveti multiblokk technika
Anyag, Módszer felhasznált antitestek EGFR (mb)- Ventana -1:200 FGFR (pl)- LabVision -1:200 IGFR (mb)- Chemicon -1:400 VEGFR (pl)- LabVision -1:300 PDGFR-A (mb)- Neomarkers -1:200 RAS (nu)- LabVision -1:2000 PTEN (nu)- LabVision -1:100 pakt(pl)- CellSignTech -1:100 p4ebp1 (pl)-cellsigntech-1:100 pp70s6 (nu)-dako-1:100 ps6 (pl)-cellsigntech-1:100 praf (pl)- CellSignTech -1:200 pmapk (pl)- CellSignTech -1:100 Wnt-1 (pl, nu)- LabVision -1:50 APC (pl)- LabVision -1:300 b-cat (nu)- LabVision -1:100 NF-kB (pl, nu)- LabVision -1:600 MDM2 (pl, nu))- LabVision -1:100 CyclinA (nu)- LabVision -1:150 CyclinD1 (nu)- LabVision -1:200 P21 (nu)- LabVision -1:100 P27 (nu, pl)- LabVision -1:200 CDK2 (nu, pl)- LabVision -1:150 P16 (nu, pl)- LabVision -1:200
Anyag, Módszer minták kiértékelése A metszeteket (IHC, FISH) digitalizáltuk: MiraxScan (3DH) Kiértékelés: MiraxViewer (3DH) Séma: IHC negatív:-3%, #:4-10% ##:11-40% ###: 41%- Csak a jelzett sejtalkotók pozitivitását vettük figyelembe (előző ábra) FISH Break apart szignál szétválás
Eredmények, Következtetések összesítő táblázat TABLE 1. Immunhistochemical profile of 50 synovial sarcoma cases Positive cases (%) Strong positive cases (%) Positivity in the t(x;18) negative cases (n=11/50) (%) Positivity in the t(x;18) positive cases (n=39/50) (%) Receptor Tyrosine Kinases RAS-AKT-mTORpathway ERFR 86 50 73 90 FGFR 66 6 45 << 69 IGFR 30 2 27 31 VEGFR 100 38 100 100 PDGFR-A 100 62 100 100 RAS (H-, K-, N) 100 62 100 100 PTEN 88 48 64 <<< 95 pakt 64 0 45 69 p4ebp1 52 4 90 >>> 42 pp70s6k 100 76 100 100 ps6 58 0 80 >> 53 WNT-pathway WNT 100 49 100 100 APC 72 0 73 72 b-cat 74 17 55 << 81
Eredmények, Következtetések RAS-AKT-mTOR tirozin kinázok kifejezett aktivitása (EGFR, VEGFR, PDGFR) a RAS-AKT-mTOR szignálút további aktiválását okozza
Eredmények, Következtetések SS-ák kialakulásában számos szignálút játszik szerepet Ezek közül az egyik legaktívabb a RAS-AKT-mTOR út A transzlokáció pozitív és negatív esetek között tapasztalt nagyfokú hasonlóság alapján feltételezzük, hogy a fúziós gén és terméke, a fúziós fehérje csak a tumorkialakulás kezdeti folyamataiban játszik szerepet, a későbbi progresszió során kisebb jelentőséggel bír.
hogyan tovább? Fúziós gén blokkolása mikrorns technikával Proliferációs vizsgálat vonalakon Egérbe oltás
tervezett vizsgálatok sejtvonalakon SYT MiRNS SSX
Köszönöm a figyelmet! Szinoviális szarkómák patogenezisében szerepet játszó szignálutak jellemzése szöveti multiblokk technika alkalmazásával Fónyad László fonyadla@gmail.com 1 Semmelweis Egyetem, 1sz. Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet, Budapest 2 Semmelweis Egyetem, Ortopédiai Klinika, Budapest