Alkalmazott biokémia, transzgénikus organizmusok TRANSZGENIKUS NYÚL ELŐÁLLITÁSA ÉS ALKALMAZÁSI TERÜLETEI

Hasonló dokumentumok
TRANSZGENIKUS NYÚL ELŐÁLLITÁSA ÉS ALKALMAZÁSI TERÜLETEI. BŐSZE ZSUZSANNA MTA Doktora MEZŐGAZDASÁGI BIOTECHNOLÓGIAI KUTATÓKÖZPONT 2013

TRANSZGENIKUS NYÚL ELŐÁLLITÁSA HUMÁN BETEGSÉGMODELL CÉLJÁBÓL BŐSZE ZSUZSANNA 2013

Összefoglaló - Transzgénikus állatok

Transzgénikus állatok előállítása

LENTIVÍRUS ALAPÚ TRANSZGENEZIS ÉS A SLEEPING BEAUTY TECHNOLÓGIA ALKALMAZÁSA

Doktori értekezés tézisei

Alkalmazott transzgénikus állattechnológiák

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

A preventív vakcináció lényege :

Dr. Kacskovics Imre ELTE, Immunológiai Tanszék

Fehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia

LENTIVÍRUS ALAPÚ TRANSZGENEZIS ÉS A SLEEPING BEAUTY TECHNOLÓGIA ALKALMAZÁSA

Mit tud a genetika. Génterápiás lehetőségek MPS-ben. Dr. Varga Norbert

Lele Zsolt. MTA Kísérleti Orvostudományi Kutatóintézet

SZENT ISTVÁN EGYETEM Állattenyésztés-tudományi Doktori Iskola

Transzgénikus. nikus állatok. Transzgénikus nikus minden olyan állat, melynek genomja emberi közremk bejuttatott DNS-t t tartalmaz.

Humán alkalikus foszfatázt termelő transzgenikus nyulak előállítása lentivírus géntranszferrel OTKA T Zárójelentés

Az X kromoszóma inaktívációja. A kromatin szerkezet befolyásolja a génexpressziót

A T sejtes immunválasz egy evolúciós szempontból váratlan helyzetben: Szervtranszplantáció

Kromoszómák, Gének centromer

SZENT ISTVÁN EGYETEM Állattenyésztés-tudományi Doktori Iskola TRANSZGÉNIKUS ÁLLATMODELL ELŐÁLLÍTÁSA ÉS JELLEMZÉSE HOSSZÚ QT SZINDRÓMA VIZSGÁLATÁRA

Doktori értekezés tézisei. Az FcRn transzgén állatok humorális immunválaszát befolyásoló T sejtek és antigén bemutató sejtek funkcionális vizsgálata

Egy Polycomb Response Element (PRE) in situ vizsgálata Drosophila melanogaster-ben génkonverzió segítségével. Kozma Gabriella

Többgénes jellegek. 1. Klasszikus (poligénes) mennyiségi jellegek. 2.Szinte minden jelleg több gén irányítása alatt áll

Genom editálás: Zn-finger nukleázok, Talen, CRISPR- Cas9 rendszerek. Hiripi László Mezőgazdasági Biotechnológiai Kutatóközpont

A SZARVASMARHA IgG TRANSZPORTER FcRn RECEPTOR EXPRESSZIÓJÁNAK VIZSGÁLATA IN VIVO TRANSZGÉNIKUS EGÉRMODELLBEN

TÉMAKÖRÖK. Ősi RNS világ BEVEZETÉS. RNS-ek tradicionális szerepben

GYÓGYHATÁSÚ FEHÉRJÉK TERMELTETÉSE HÁZIÁLLATOK TEJÉBEN

Populációgenetikai. alapok

Rekombináns Géntechnológia

Ellenanyag reagensek előállítása II Sándor Noémi

Antiszenz hatás és RNS interferencia (a génexpresszió befolyásolásának régi és legújabb lehetőségei)

5. Molekuláris biológiai technikák

A GM-élelmiszerekre vonatkozó véleményünk sertésen és lazacon

DNS replikáció. DNS RNS Polipeptid Amino terminus. Karboxi terminus. Templát szál

OTKA ZÁRÓJELENTÉS

AZ IS30 BAKTERIÁLIS INSZERCIÓS ELEM CÉLSZEKVENCIA VÁLASZTÁSÁNAK MOLEKULÁRIS TÉNYEZŐI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI SZABÓ MÓNIKA

2005. évi OTKA zárójelentés: T AG2 Vezető kutató: Dr. Kovács András

Hamar Péter. RNS világ. Lánczos Kornél Gimnázium, Székesfehérvár, október

Mangalica specifikus DNS alapú módszer kifejlesztés és validálása a MANGFOOD projekt keretében

A felgyorsult fehérje körforgás szerepe a transzlációs hibákkal szembeni alkalmazkodási folyamatokban

Transzgénikus növények előállítása

Ph.D. Tézis. Új módszerek a transzgénes egér technológiában. Dr Bélteki Gusztáv

A T sejt receptor (TCR) heterodimer

A géntechnológia genetikai alapjai (I./3.)

I. A sejttől a génekig

TRANSZGENIKUS BIOMARKER ZEBRADÁNIÓ (DANIO RERIO) VONALAK ALKALMAZÁSÁNAK LEHETŐSÉGEI AZ ÖKOTOXIKOLÓGIÁBAN

TRANSZGENIKUS BIOMARKER ZEBRADÁNIÓ (DANIO RERIO) VONALAK POTENCIÁLIS ALKALMAZÁSA A TOXIKOLÓGIÁBAN

A HUMÁN GENOM PROJEKT Sasvári-Székely Mária* Semmelweis Egyetem, Orvosi Vegytani, Molekuláris Biológiai és Pathobiokémiai Intézet

Molekuláris biológiai technikák

(1) A T sejtek aktiválása (2) Az ön reaktív T sejtek toleranciája. α lánc. β lánc. V α. V β. C β. C α.

A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben

VÁLASZ DR. HUSVÉTH FERENC PROFESSZOR ÚRNAK, AZ MTA DOKTORÁNAK OPPONENSI

Molekuláris terápiák

A BIOTECHNOLÓGIA ALKALMAZÁSI LEHETŐSÉGEI A GYÓGYSZERKUTATÁSBAN

A molekuláris biológia eszközei

A BIZOTTSÁG 2009/120/EK IRÁNYELVE

TDK lehetőségek az MTA TTK Enzimológiai Intézetben

Immunológia alapjai előadás MHC. szerkezete és genetikája, és az immunológiai felismerésben játszott szerepe. Antigén bemutatás.

Klónozás: tökéletesen egyforma szervezetek csoportjának előállítása, vagyis több genetikailag azonos egyed létrehozása.

Transzgenikus technikák a neurobiológiában. általános fogalmak

Immunológia alapjai. 10. előadás. Komplement rendszer

Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén

Az adenovírusok morfológiája I.

MODELLORGANIZMUSOK GENETIKÁJA. Drosophila melanogaster, muslica (borlégy)

Az ADA2b adaptor fehérjéket tartalmazó hiszton acetiltranszferáz komplexek szerepének vizsgálata Drosophila melanogaster-ben

HAPMAP Nemzetközi HapMap Projekt. SNP GWA Haplotípus: egy kromoszóma szegmensen lévő SNP mintázat

Génátvitel magasabb rendű állatokba elméleti megfontolások, gyakorlati eredmények és génterápiás lehetőségek

Tartalmi vonatkozások. 1. A témaválasztás korszerűsége és tudományos jellege

A génterápia genetikai anyag bejuttatatása diszfunkcionálisan működő sejtekbe abból a célból, hogy a hibát kijavítsuk.

Élő metapneumovírus vakcina fejlesztése tojóállományok részére: ártalmatlansági és hatékonysági vizsgálatok. Hajdúszoboszló, június 2-3.

A NYÚL KAPPA-KAZEIN GÉN JELLEMZÉSE, ÉS TERMELTETÉSÉNEK HATÁSA TRANSZGÉNIKUS ÁLLATOKBAN

transzláció DNS RNS Fehérje A fehérjék jelenléte nélkülözhetetlen minden sejt számára: enzimek, szerkezeti fehérjék, transzportfehérjék

SZENT ISTVÁN EGYETEM Állattenyésztés-tudományi Doktori Iskola

Fehérje interakciók az ecetmuslica telomerének retrotranszpozonjain. Takács Sándor

A szamóca érése során izolált Spiral és Spermidin-szintáz gén jellemzése. Kiss Erzsébet Kovács László

11. Dr. House. Biokémiai és sejtbiológiai módszerek alkalmazása az orvoslásban

A kromoszómák kialakulása előtt a DNS állomány megkettőződik. A két azonos információ tartalmú DNS egymás mellé rendeződik és egy kromoszómát alkot.

Őssejt specifikus markerek és mikrorns-ek expressziójának vizsgálata egér és nyúl embriókban, embrionális őssejtekben. Gócza Elen

Immunológia 4. A BCR diverzitás kialakulása

Orvosi Genomtudomány 2014 Medical Genomics Április 8 Május 22 8th April 22nd May

Reproduktív funkciók 1. Androgén hormonok

A TATA-kötő fehérje asszociált faktor 3 (TAF3) p53-mal való kölcsönhatásának funkcionális vizsgálata

AZ IMMUNRENDSZER VÁLASZAI A HPV FERTŐZÉSSEL KAPCSOLATOS KÉRDÉSEINKRE RAJNAVÖLGYI ÉVA DE OEC Immunológiai Intézet

A géntechnikák alkalmazási területei leltár. Géntechnika 3. Dr. Gruiz Katalin

Nemzeti Akkreditáló Hatóság. BŐVÍTETT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAT /2014 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

Két kevéssé ismert humán ABCG fehérje expressziója és funkcionális vizsgálata: ABCG1 és ABCG4 jellemzése

Biológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek

A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének

Molekuláris genetikai vizsgáló. módszerek az immundefektusok. diagnosztikájában

11. Dr. House. Biokémiai és sejtbiológiai módszerek alkalmazása az orvoslásban

Az IgG homeosztázisban résztvevő szarvasmarha FcRn génregulációs és funkcionális elemzése transzgenikus egérmodelleken

CzB Élettan: a sejt

CISZTÁS FIBRÓZIS GYÓGYÍTHATÓ?!

In vivo szövetanalízis. Különös tekintettel a biolumineszcens és fluoreszcens képalkotási eljárásokra

4. A humorális immunválasz október 12.

Növényi sejtek által előállított monoklonális antitesttöredékek jellemzése

Az ellenanyagok orvos biológiai alkalmazása

Egy új, a szimbiotikus gümőfejlődésben szerepet játszó ubiquitin ligáz funkcionális jellemzése

Biológiai módszerek alkalmazása környezeti hatások okozta terhelések kimutatására

Átírás:

Alkalmazott biokémia, transzgénikus organizmusok TRANSZGENIKUS NYÚL ELŐÁLLITÁSA ÉS ALKALMAZÁSI TERÜLETEI BŐSZE ZSUZSANNA MTA Doktora NAIK-MEZŐGAZDASÁGI BIOTECHNOLÓGIAI KUTATÓINTÉZET 2016

TÖRTÉNETI ÁTTEKINTÉS Eredet az egyik legkésőbben háziasított állatfaj, őse az üregi nyúl (Oryctogalus cuniculus) az üregi nyúl az utolsó jégkorszak után terjedt el Spanyolországból, részben oly módon hogy királyi vadas parkokba telepítették Klasszikus alkalmazási területei fiziológia vizsgálatok pl. vérkeringés, vérnyomás, toxicítás vizsgálatok pl. gyógyszerek tesztjei ellenanyag termelés Korábban:értékes szarvasmarha embriók szállítása Gyakorlati alkalmazás hús, szőrme és angóra fonal hobby állat

Transzgenikus nyúl előállítása mikroinjektálássalsematikus ábra Donor nőstény Petevezető Embriótartó pipetta DNS Előmag mikroinjektálás Embrióbeültetés Álvemhes nőstény PCR analízis Southern analízis

TRANSZGENIKUS NYÚL ELŐÁLLÍTÁSA MIKROINJEKTÁLÁSSAL Hormon kezelések: Donorok 6x FSH (follikulusz stimuláló hormon) vagy 1xPMSG (pregnant mare serum gonadotropin) HCG (+ 2x termékenyít Recipiensek-álvemhessé tétel HCG (humán coriogonadotropin) vagy GnRH (gonadotropin releasing hormon) vagy vazektomizált himmel párosítás Embrió transzfer sebészeti vagy laparoszkópos eljárással Módszer hatékonysága 1-2% transzgénikus alapító/ injektált és beültetett embrió

A transzgén előmag mikroinjektálásával kapott véletlenszerű transzgén beépülés és a célzott génbeépítés összehasonlítása /pl CRISPR/CAS-al/ Hagyományos előmag mikroinjektálással random, véletlenszerű transzgén beépülést tudunk elérni, sem a beépülés helyét sem a fej-farok tandem beépült transzgén kópiaszámot nem tudjuk befolyásolni

PLAZMID ALAPÚ TRANSZGÉN ELVI SZERKEZETE IRES (internal ribosomal entry site) = vírus eredetű DNS szekvencia, amely lehetővé teszi a transzláció iniciációját a mrns 5 CAP-tól függetlenül

PLAZMID ALAPÚ TRANSZGÉN ELVI SZERKEZETE

Transzgén kópiaszám meghatározás Southern analízissel

Fényképalbum szerző: Bősze Zsuzsanna

Transzgenikus nyúl előállítása mikroinjektálással

EMBRIOTRANSZFER MIKROINJEKTÁLÁS

Problémák a hagyományos mikroinjektálással:a véletlenszerűen beintegrálódó transzgén kromoszómális környezete által okozott változások a transzgén kifejeződésében-pozíció effektust eredményeznek

Véletlenszerűen integrálódott transzgénre ható távoli szabályozó elemek http://futuresoft.org/mar-wiz

Megoldás:a pozíció hatás kivédése nagy méretű kromoszóma darabok bejuttatásával

A sejtmagban a gének expressziós doménekbe szerveződnek

centromer FLT3LG FCGRT FcRn génje 64496 69296 74096 78896 83696 88496 93296 98096 102896 107365 telomer MAR helyek keresése az IgG kötő FcRn régióban http://www.futuresoft.org/mar-wiz/

BAC TRANSZGENIKUS EGÉRMODELL LÉTREHOZÁSA Az IgG kötő FcRn szerepe a transzcitosisban és az IgG katabolizmusában vizsgálatára Bender és mtsai. Transgen Res. 16:613-27. 2007. Rojas and Apodaca 2002. Nat Rev Mol Cell Biol Ghetie and Ward. 2002. Immunol Res.

BAC transzgenezis előnyei Integrációs helytől független, kópiaszámfüggő génkifejeződés. Az endogén génnel megegyező szövet- és fejlődésspecifikus kifejeződés függetlenül attól, hogy milyen más emlősből származik a transzgén. Alkalmas a géntől nagy távolságban elhelyezkedő szabályozó elemek vizsgálatára.

MM 1 2 3 4 5 6 7 8 9# 14# 19# BAC 1. BAC 128E04 5 vég 2. FLT3LG 3. LOC53916 4. FCGRT -lánc kódoló gén 5. LOC522073 6. LOC511234 7. LOC511253 8. BAC 128E04 3 vég BAC128E04: 107 kb 6000 12000 18000 24000 30000 36000 42000 48000 54000 59696 64496 69296 74096 78896 83696 88496 93296 98296 102896 107365 centromer R E L A T I V E P O S I T I O N ( B a s e P a i r s ) FLT3LG LOC539196 FCGRT LOC522073 LOC 511234 LOC511235 telomer

Ct value Ct value Kópiaszám meghatározása Real-Time PCR-rel QPCR_b_actin QPCR_bFcRn 36 32 35 34 Slope: -3.75 ± 0.27 R2: 0.989 31 30 Slope: -3.16 ± 0.19 R2: 0.992 33 32 31 30 29 28 27 29 26 28 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 logq 25 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 logq #line gene Ct 14 19 Absolute quantity of gene in sample (AGN) Absolute quantity of cell number in sample (ACN) bfcrn copy number (ACNb- FcRn/ACN) Estimated copy number of bfcrn transgene in a diploid hemizygous animal Mouse -actin 31,01 3760,49 1880,248 bfcrn 28,86 3852,48 2,04 2 Mouse -actin 30,89 4075,44 2037,722 bfcrn 27,05 10468,18 5,13 5 14# vonal heterozigóta: 2 kópia homozigóta: 4 kópia 19# vonal heterozigóta: 5 kópia homozigóta: 10 kópia

denzitás denzitás B. Kópiaszám függő expresszió kimutatása lu n g live r n e w b o rn in te stin e A. Western blot 500 bp (tüdő szövetből) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 Northern blot (máj szövetből) 1 2 3 4 5 6 C. 25000 WT 20000 b o v # 1 4 h e ho * ** # 1 9 h e ho totalrna bfcrn B. 15000 10000 * 1 2 3 4 5000 1. +K (B4 sejtvonal) 2. FVB/N egér 0 kópia C. 3. 14# 2 kópia 4. 19# 5 kópia 25000 20000 15000 10000 5000 0 0 1 WT bovine 2 23 4 4 5 510 6 integrált bfcrn gének száma 1. FVB/N egér 0 kópia 2. Szarvasmarha 2 kópia 3. 14# 2 kópia heterozigóta 4. 14# 4 kópia homozigóta * 5. 19# 5 kópia heterozigóta 6. 19# 10 kópia homozigóta * ** tota bf

A laboratóriumi nyulat poliklonális ellenanyag termelésre használják világszerte

Percent remaining (%) days; AVG SEM Total IgG (mg/ml) SEM IgG védelem az FcRn transzgenikus nyúlban A B Half-life of C Elimination of OVA-spec IgG in vivo rabbit IgG 100 50 TG (+/+) WT 10 8 6 4 2 * 15 10 5 Total IgG * 10 7 Time (days) 14 0 WT TG (+/+) 0 WT TG (+/+)

LENTIVÍRUS VEKTOR MINT ALTERNATÍVA A HAGYOMÁNYOS ELŐMAG INJEKTÁLÁSNAK A retrovírusok családjába tartozó lentivírusok viszonylag nagy mennyiségű genetikai információt /7-8kb/ képesek bejuttatni az emlős sejtek genomjába. Lentivírusok például a HIV, SIV, Caprine arthritis encephalitis virus, Equine infectious anemia virus A retrovírusok között egyedülálló tulajdonságuk hogy nem osztódó sejtekben is képesek replikálódni. Az utóbbi évek kutatási eredményei alapján az egyik leghatékonyabb génszállító vektorokká fejlődtek

A lentivírus életciklusa, és ennek felhasználása a transzgenezisben Vírus összeszerelés Belép a vírus a sejtbe Emlőssejt kromoszóma Transzport a membránhoz DNS kópia létrejötte Transzláció DNS 2. szála kialakul RNS átírás Beépülés a kromoszómába,vagy cirkularizáció

ALTERNATÍV MÓDSZER A MIKRONJEKTÁLÁSHOZ: LENTIVIRUS VEKTOROKKAL TÖRTÉNŐ TRANSZGÉN BEVITEL

HARMADIK GENERÁCIÓS LENTIVÍRUS VEKTOROK ELŐÁLLÍTÁSA

A LENTIVÍRUS VEKTOR TERMELÉSE 1. Köpenyfehérjét kódoló plazmid (vesicular stomatitis virus:vsvg) 2. Virális enzimeket kódoló plazmid (integráz, reverz transzkriptáz, polimeráz) 3. Integrálódó transzfer plazmid (itt GFP-vel), integrációt segítő ön-inaktiváló LTRs (SIN-LTR), central polypurine tract (cppt), erős promóter (CAG) LTR cppt CAG GFP WPRE LTR 293T sejtvonal (majomvese) Titer meghatározás Töményítés (UC)

A PRONUKLEUSZ MIKROINJEKTÁLÁS ÉS SZUBZONÁLIS LENTIVÍRUS TRANSZDUKCIÓ MÓDSZER ÖSSZEHASONLÍTÁSA (Fassler R. EMBO Reports 5. 28. 2004.)

Zöld jelzőgént kifejező Balb/c egér előállítása lentivírus transzgenezissel Bősze Zs. és munkatársai-kvell K. (Pécsi Egyetem) Transgen Res. 19:105-12. 2010.

Lentivírus transzgenezis más gazdasági állatokon Jelentőség: géncsendesítés lentivírussal történő shrns bevitellel- lehetőség háziállatok mint betegségmodellek hatékony létrehozására Háziállatfajok ahol már sikeresen alkalmazták: sertés, szarvasmarha, csirke Hoffmann et al. (2003); McGrow et al. 2004; Whitelaw et al. 2004, Hiripi et al. 2010.

LENTIVÍRUS TRANSZGENEZIS ÖSSZEHASONLÍTÁSA A MIKROINJEKTÁLÁSSAL ÖSSZEHASONLÍTOTT TULAJDONSÁGOK MIKROINJEKTÁLÁS TRANSZGÉN MÉRETHATÁR 50 KB (PLAZMID) 8 KB LENTIVÍRUS TRANSZDUKCIÓ EMBRIÓ TÚLÉLÉS ALACSONY MAGAS 70% TRANSZGENIKUS UTÓDOK ARÁNYA INTEGRÁLÓDOTT TRANSZGÉN KÓPIASZÁM 1-2-5-10 % /FAJTÓL FÜGGŐEN/ ÁTLAGOSAN 1-5 (50) KONKATAMER EGY HELYRE 20-100% EGY HELYRE MINDIG CSAK 1 DE TÖBB HELYRE IS BEÉPÜLHET

Zöld jelzőgént kifejező transzgenikus nyúl lentivírus transzgenezissel Hiripi és mtsai. Transgenic Res. 2010

EGFP EXPRESSZÁLLÓ LENTVÍRUS TRANSZGENIKUS EMBRIÓK ÉS NYÚL

LENTIVÍRUS TRANSZGENIKUS UTÓD 14 napos p.c. embrió A,B: nem transzgenikus C,D: transzgenikus embrió A B C D

hasnyál bőr szív tüdő máj vese lép kisagy A fehérje kimutatása a különböző szövetekben Western hibridizációval mindhárom csíravonal eredetű szövetbe képes beépülni, de véletlenszerűen SIV7 JKK SIV9 JKK SIV6 JT SIV9 BT Mezoderm=máj, vese, endoderm=tüdő, hasnyálmirigy, ectoderm=bőr

Transzgénikus technikák és hatékonyságuk nyúlban BAC transzgenezis Lentivírusos transzgenezis Hatékonyság 1-6 % 20-60 % Kapacitás >2 Mb <10 kb Integráció random random Integráció formája konkatamer egyedi Expresszió 50 % 60-90 % Örökítés +++++ +

TRANSZPOZONOK MINT ALTERNATÍV LEHETŐSÉG AZ ELŐMAG MIKROINJEKTÁLÁSOS TRANSZGENEZISRE Mozgó genetikai elemek; képesek áthelyeződni (transzponálódni) a genomban, megváltoztatni helyüket egy kromoszómán belül, vagy átugorni egy másik kromoszómára. Ha egy mozgó genetikai elem egy génbe épül be, akkor annak mutációját okozhatja (a spontán mutációk jelentős részét transzpozonok okozzák) Genom 5%-a fehérjét kódoló, a többi 95% fehérjét nem kódoló régió korábban ezt hulladék DNS-nek nevezték, mivel azt gondolták, hogy nincs funkciója mára már tudjuk, hogy ezek a régiók tartalmaznak -többek között: - transzpozonokat - szabályozó régiókat 43

Transzpozonok általános jellemzői 2 csoportra osztják a transzpozonokat: - autonóm: kódolja a transzpozáz enzimet is - nem-autonóm: hiányzik a transzpozáz gén Transzpozáz aktivitással rendelkezhet RNSmolekula és fehérje is. Nem-autonóm transzpozonokkal hozható létre stabil transzgenezis Rövid idejű fenntartására transzpozáz mrns injektálását alkalmazzák. 44

YFP YFP Működési mechanizmus YFP - transzpozáz - genom

3,5 napos YFP-t expresszáló blasztociszta Transzgénikus blasztociszta

Kimosott embriók Beültetett embriók Recipiens/ ellések Transzgén utódok/ összes Transzgénikus vonalak 644 472 25/10 40 % 7/46 15 % 4 Alapítók F1 generációs TG utódok

AZ ALKALMAZOTT MÓDSZEREK ELŐNYEI ÉS HÁTRÁNYAI BAC transzgenezis Lentivírusos transzgenezis SB transzpozon rendszer Hatékonyság 1-6 % 20-60 % 15 % Kapacitás >2 Mb <10 kb <6 kb Integráció random random random (TA) Integráció formája konkatamer egyedi egyedi Expresszió 80-100 % 60-90 % 100 % Örökítés +++++ + ++++

ÚJGENERÁCIÓS MÓDSZEREK TRANSZGÉNIKUS NYÚL ELŐÁLLÍTÁSRA Mesterséges kromoszóma /BAC/ mikroinjektálása Lentivírus transzdukcióval először hoztunk létre GFP-TR-nyulat Transzpozon/ sleeping beauty/ mediált transzgén beépülés először hoztunk létre Venus-TR-nyulat Célzott génkiütéssel létrehozott TR nyúl-mo-on először- CRISPR/CAS- 2016 Bender és mtsai. Transgenic Res. 2007;16(5):613-27. Hiripi és mtsai. Transgenic Res. 2010, 19(5):799-808 Catunda és mtsai. PlosOne 2012. 7(1):e28869. Katter és mtsai. FASEB J. 2013 Mar;27(3):930-41. Ivics és mtsai. Nat Protoc. 2014 Apr;9(4):794-809.

TRANSZGENIKUS NYULAK FELHASZNÁLÁSI TERÜLETEI BIOFARMING GYÓGYHATÁSÚ FEHÉRJÉK VAGY PEPTIDEK TERMELTETÉSE GÉNMÓDOSÍTOTT ÁLLATOK TEJÉBEN HUMÁN BETEGSÉGEK MODELLÁLLATAI LIPID ANYAGCSERE ÉS ÉRELMESZESEDÉS SZÍVNAGYOBBODÁSSAL JÁRÓ KÓRESETEK SZÍVRITMUS ZAVAROK

FONTOS WEB HELY Az első transzgenikus nyúltejben termelt rekombináns humán fehérje a Ruconest forgalomba került PHARMING http://www.pharming.com/ Ruconest is a recombinant human C1 esterase inhibitor approved for the treatment of angioedema attacks in patients with HAE in the USA, Israel, all 28 EU countries plus Norway, Iceland and Liechtenstein Transgenic Production Technology Platform (TPTP) Pharming can produce complex therapeutic proteins in the mammary glands of rabbits or cattle and purify the protein from milk for its therapeutic application.

GFP Bunny transzgenikus állatok ihlette művészeti alkotások

http://www.ekac.org/lepus.constellation.h tml The five lagoglyphic interstellar messages transmited to the Lepus Constellation, 2009. These five lagoglyphic messages were transmitted towards the Lepus Constellation (below Orion) on March 13, 2009 from Cape Canaveral, Florida. Based upon its stellar characteristics and distance from Earth, Gamma Leporis (part of the constellation Lepus) is considered a high-priority target for NASA's Terrestrial Planet Finder mission. The transmission was accomplished through satellite broadcasting equipment and a parabolic dish antenna. Lepus Constellation [Gamma Leporis star] is 29 light-years from Earth. Kac's messages will arive in 2038.