!HU000008042T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 042 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 008942 (22) A bejelentés napja: 2004. 06. 10. (96) Az európai bejelentés bejelentési száma: EP 20070008942 (97) Az európai bejelentés közzétételi adatai: EP 1820494 A2 2007. 08. 22. (97) Az európai szabadalom megadásának meghirdetési adatai: EP 1820494 B1 2010. 01. 13. (51) (2006.01) A61K 9/14 (2006.01) A61K 31/565 (2006.01) A61K 31/57 (2006.01) A61P 5/30 (2006.01) (30) Elsõbbségi adatok: 477939 P 2003. 06. 13. US (72) Feltalálók: Savoir, John Claude, Coyoacán D.F. 04100 (MX); Angeles Uribe, Juan, Nezahualcoyotl 57000 (MX) (73) Jogosult: Skendi Finance, Ltd., Road Town, Tortola (VG) (74) Képviselõ: dr. Pethõ Árpád, DANUBIA Szabadalmi és Jogi Iroda Kft., Budapest (54) Ösztradiolból és koleszterinbõl álló mikrorészecskék (57) Kivonat A találmány tárgyát ösztradiolból és koleszterinbõl álló mikrogömbök képezik, amelyek eredményesen alkalmazhatók fogamzásgátló és hormonpótló terápiás gyógyászati kiszerelésekben. A kiszereléseket nyújtott vagy késleltetett kibocsátás elérésének megfelelõen állítják elõ, és kb. négyhetente vagy ritkábban történõ beadást tesznek lehetõvé. HU 008 042 T2 A leírás terjedelme 26 oldal (ezen belül 15 lap ábra) Az európai szabadalom ellen, megadásának az Európai Szabadalmi Közlönyben való meghirdetésétõl számított kilenc hónapon belül, felszólalást lehet benyújtani az Európai Szabadalmi Hivatalnál. (Európai Szabadalmi Egyezmény 99. cikk (1)) A fordítást a szabadalmas az 1995. évi XXXIII. törvény 84/H. -a szerint nyújtotta be. A fordítás tartalmi helyességét a Magyar Szabadalmi Hivatal nem vizsgálta.
1 HU 008 042 T2 2 A találmány szerinti megoldás leírása Jelen szabadalmi bejelentés igényli a 60/477,939 sorozatszámú, 2003. június 13¹án benyújtott ideiglenes bejelentés elsõbbségét, és az EP 04736545.7 számú európai szabadalmi bejelentés megosztott bejelentése. A találmány tárgyát ösztradiolból és koleszterinbõl álló mikrogömbök képezik, amelyek eredményesen alkalmazhatók fogamzásgátló és hormonpótló terápiás gyógyászati kiszerelésekben. A kiszereléseket nyújtott vagy késleltetett kibocsátás elérésének megfelelõen állítjuk elõ, és kb. négyhetente vagy ritkábban történõ beadást tesznek lehetõvé. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A találmány háttere A petefészek/menstruációs ciklus összetett esemény, amelyet ösztrogénben gazdag follikuláris fázis, majd az ovuláció után progeszteronban gazdag sárgatestfázis jellemez. Mindkét fázis kb. 14 napig tart, aminek eredményeként a menstruációk közötti idõtartam kb. 28 nap. Az endometrium szövete reagál a hormonszintbeli változásokra. A menstruáció kezdete az új menstruációs ciklus elindulását jelzi, annak elsõ napjaként számolják. Körülbelül 5 7 nap alatt az elõzõ petefészek/menstruációs ciklus során kifejlõdött és proliferálódott felsõ endometriális hámrétegek leválnak, mivel a termékenyüléssel nem járó menstruációs ciklusban a sárgatest regressziója a progeszteronszekréció csökkenéséhez vezet. A petefészekben fokozatosan végbemenõ tüszõérés a vérkeringésben lévõ ösztrogén mennyiségének fokozódásához vezet, ami újra endometriális proliferációt indít el. A domináns petefészektüszõ megrepedése a ciklus közepén, általában a menstruációs ciklus 12. és 16. napjai között következik be, a tüszõ túlnyomórészt ösztrogénforrásból túlnyomórészt progeszteronforrássá (sárgatestté) válik. A progeszteron vérbeli koncentrációjának növekedése az addig proliferálódó endometriumot szekréciós fázisúvá alakítja, amelyben a korábban az endometriális mirigyeket vagy szerveket kialakító szövetproliferáció azonnal abbamarad. Ha az ovulált petesejt életképes módon termékenyül és folytatja progresszív embrionális osztódását, a szekréciós endometrium és az embrió kölcsönhatásának eredményeként bekövetkezik a beágyazódás, ami a termékenyítést követõ 6 8 nappal veszi kezdetét. A terhesség létrejöttét eredményezõ implantáció során az embrió elõször a szekréciós fázisban lévõ endometriumhoz tapad, majd befészkeli magát a hámba és humán choriogonadotropin (HCG) termelésébe kezd. A HCG elõsegíti a sárgatest mûködésének meghosszabbodását, így annak progeszterontermelése fokozott marad és a termékeny ciklusban nem jön létre menstruáció. Így alakul ki a terhesség. A nem termékeny menstruációs ciklusban a progeszteron vérbeli koncentrációjának csökkenése az endometriális szövet leválását eredményezi. Ez a következõ menstruációs ciklus kezdetét jelzi. Mivel az endometrium proliferációja készíti fel a méhet a küszöbön álló terhességre, a méhbeli környezetet befolyásoló hormonok manipulációja fogamzásgátló hatást eredményezhet. Így például ismert, hogy az ösztrogének visszacsatolásos gátlás útján csökkentik a follikulusstimuláló hormon szekréciójának mennyiségét. Meghatározott körülmények között az ösztrogének szintén negatív visszacsatolás útján gátolhatják a luteinizáló hormon szekrécióját is. Természetes körülmények között a cirkuláló ösztrogén mennyiségében az ovulációt megelõzõen kialakuló csúcs közvetlenül az ovuláció elõtt megfigyelhetõ és ovulációhoz vezetõ gonadotrop hormon hullámcsúcsot indukál. Nagy mennyiségû ösztrogén (feltehetõen az implantáció megakadályozásán keresztül) meggátolhatja a termékenyülést. A progesztinek is fogamzásgátló hatásúak lehetnek. Az endogén progeszteron felelõs az endometriumban a terhesség alatt kialakuló változásokért, valamint a nyakcsatorna és a hüvely sejtjeiben és szöveteiben megfigyelhetõ ciklikus átalakulásokért. A progesztinadagolás hatására a nyakcsatornabeli nyák sûrûvé, tapadóssá és sejtdússá válik, ami ismereteink szerint gátolja a spermiumok továbbhaladását. A progesztin adagolása gátolja továbbá a luteinizáló hormon szekrécióját és emberben meggátolja az ovulációt. A piacon jelenleg számos fogamzásgátló készítmény érhetõ el, amelyek több általános típusba sorolhatók. Ezek közül az elsõt egyfázisú kiszereléseknek nevezik. Az egyfázisú kiszerelések állandó mennyiségû ösztrogént vagy progesztint tartalmaznak. Az egyfázisú tablettákkal kapcsolatos kellemetlen mellékhatások megjelenése a tabletta ösztrogén és progeszterontartalma közötti egyensúlytól függ. Például viszonylag dominánsan progesztintartalmú tabletta esetében a kiszerelés idõvel az ösztrogén- és progeszteronreceptorok számának egyidejû csökkenéséhez vezet. Ez, amint az várható, alulstimulált vagy atrófiás endometriumot eredményez, aminek következtében a gyenge epithelizáció miatt a tablettamentes idõszakban amenorrhoea vagy áttörõ vérzés vagy pecsételés jelentkezhet. Másrészt a viszonylag domináns ösztrogéntartalmú készítmény hosszú ideig tartó használata sérülékeny stromával rendelkezõ endometrium proliferációját eredményezheti, aminek pecsételés vagy áttörõ vérzés lehet az eredménye. A háromfázisúnak nevezett új készítmények változó mennyiségû ösztrogént és progesztint tartalmaznak; a legtöbb esetben viszonylag állandó mennyiségû ösztrogént, valamint a ciklus során fokozatosan növekvõ mennyiségû progesztint foglalnak magukban. Ez az ösztrogén- és progesztinadagolási mintázat a (tabletta)csomag használatának elején viszonylagos ösztrogéntúlsúlyú, a vége felé pedig fokozódó progesztagénaktivitású kiszerelést eredményez. Ezen tabletták alkalmazásakor az endometriális stabilitás kedvezõbben alakulhat, mivel a csomag használatának kezdetén az ösztrogénaktivitás egyaránt indukálja az ösztrogén- és progeszteronreceptorokat, ami a csomag használatának vége felé érzékennyé teszi az endometriumot a progesztin növekvõ mennyiségére. A progesztinaktivitás tömöttebb, stabilabb endometriális stromát eredmé- 2
1 HU 008 042 T2 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 nyez, bár a csomag adagolásának vége felé a viszonylag hosszú ideig tartó progesztinhatás alatt ez is az ösztrogén- és progeszteronreceptorok számának és aktivitásának csökkenéséhez vezethet. Az ilyen típusú kiszerelésekkel kapcsolatos jelentõs probléma a csomag kezdetén a szteroidok alacsony dózisa, ami miatt ezek a tabletták ki vannak téve a gyógyszer-interakciók hatásának, vagy adagolásuk elmaradása következtében áttöréses ovuláció alakulhat ki. A csomag használatának kezdete az áttöréses ovuláció szempontjából kritikus idõszak, mivel a felhasználó 7 napos gyógyszermentes idõszakon van túl, amely során elkezdõdhetett a tüszõfejlõdés. Az áttöréses ovuláció még a terhesség elmaradása esetén is elégtelen ciklusszabályozást eredményez. A 17¹ -ösztradiol (E 2 ) az emberben kimutatható leghatékonyabb természetes ösztrogén, a petefészek legfontosabb szekrécióterméke. A szervezetben könnyen ösztronná (E) oxidálódik, ami ösztrollá hidratálható. Ezek az átalakítások fõleg a májban mennek végbe, ahol az E és az ösztradiol szabadon átalakulhatnak egymásba. Mindhárom természetes ösztrogén glükuronid vagy szulfát alakjában vízoldékony komplexekben a vizelettel ürül nagyszámú egyéb, kevésbé lényeges rokon vegyülettel együtt. Széles körben ismert, hogy mikronizált E 2 szájon át történt beadását követõen a cirkuláló ösztrogén mennyiségének növekedése a kevésbé aktív E 1 alaknak köszönhetõ, amelynek koncentrációcsúcsa az E 2 -ének sokszorosa. Az E 2 E 1 -gyé és azt követõen egyéb metabolitokká történõ átalakulása a bélbõl történõ felszívódás és a májon való áthaladás közben következik be. Ez az erõteljes metabolizmus nagymértékben korlátozza a szájon át adott természetes ösztrogének és észtereik hatékonyságát. Korlátozott per os hatékonyságuk miatt az E 2 és észterei beadása általában intramuszkuláris injekcióban történik. A progeszteron (P4) az aktív természetes progesztin a sárgatestben, a placentában és a mellékvesekéregben fordul elõ. Az E2¹höz hasonlóan a P4 szájon át történõ beadása a bélhámban és a májban bekövetkezõ gyors metabolizmusa miatt nem hatékony, ezért arra csak intramuszkuláris úton kerül sor. Korlátozott orális hatékonyságuk miatt ezen természetes nõi nemi hormonok orális fogamzásgátlókban történõ alkalmazását a szakemberek nem tartják kívánatosnak. Helyettük fogamzásgátlási célú szintetikus ösztrogének és progesztinek elõállítására és alkalmazására koncentrálnak. A szintetikus származékok a menopauza, fenyegetõ vetélés stb. kezelésében is átvették a természetes anyagok helyét. A szintetikus származékok azonban nagyobb eséllyel okoznak toxikus mellékhatásokat, mint a viszonylag biztonságos endogén hormonok. A természetes hormonok kémiai módosításai fokozott orális aktivitást biztosítanak ugyan, de számos különféle nemkívánatos mellékhatást is elõidézhetnek. Így például a természetes hormonok szintetikus származékai nemkívánatos módon stimulálják a máj proteinszintézisét (a trombózishajlam fokozódását okozhatják), és a természetes nemi hormonokkal szemben diabetogén hatásuk van. A szintetikus ösztrogén például gyorsan felszívódik a gyomorból és a bélrendszerbõl. Mivel könnyen metabolizálódik, gyorsan felszívódik a vékonybél nyálkahártyájáról és/vagy gyors kémiai változásokon megy át. Ennek köszönhetõen a biohasznosulásban nagy egyedi változatosság alakulhat ki. Mindemellett a szintetikus ösztradiolok adagolása egyes xenobiotikumok nemkívánatos feldúsulásához vezethet, illetve ezek ismerten rákkeltõ tulajdonságokkal bírnak. A szintetikus progesztinek is nemkívánatos mellékhatásokkal rendelkeznek, ilyenek pl. a maszkulinizáció, a koleszterin¹, triglicerid- és nagy sûrûségû lipoproteinszintre gyakorolt kedvezõtlen hatásuk. A szintetikus progesztinek emellett vízretenciót és depressziót okozhatnak. A szintetikus hormonális fogamzásgátló kezelésben részesülõ pácienseket érintõ egy további nemkívánatos mellékhatás a természetes hormontermelés csökkenése/megszûnése. Sok páciens esetében a hormonális egyensúly nemkívánatos felborulása alakul ki a beadott szintetikus hormonok fogamzásgátló hatásának köszönhetõ ovulációelmaradás következtében. Nemcsak fogamzásgátló hatású, hanem hormonpótlásra is alkalmas mennyiségben beadható endogén hormonokat tartalmazó gyógyászati kiszerelések leírását tartalmazza a WO 2004/110408 számú nemzetközi közzétételi irat, illetve a 04736545.7 számú EP szabadalmi bejelentés, a jelen szabadalmi leírás szülõ (parent) bejelentése. Ezek a kiszerelések ösztradiolt és progeszteront tartalmaznak. Az US 6528094 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat többek között stabilan tárolható gyógyászati készítményeket ismertet, amelyek 1:1 moláris arányban ösztradiol és koleszterin keveréket tartalmaznak. Az aktív hatóanyagot szabályozott és késleltetett módon kibocsátó, stabilan tárolható ösztradiolkiszerelésekre van szükség. A találmány szerinti megoldás összefoglalása A találmány tárgyát kb. 1:1 arányban ösztradiolt és koleszterint tartalmazó mikrogömbök képezik, amelyek ösztradiolkioldódási rátája (EDR) 6% vagy az alatti. A mikrogömbök kifejezés magában foglalja a mikrorészecskéket, mikrokapszulákat, liposzómákat és hasonlókat. Az ösztradiolkioldódási ráta (EDR) 0,3 vegyesszázalék poli(oxi-etilén)-szorbitán-monooleát (Tween 80 ) USP tisztított vizes oldatában 24 óra alatt 37 C¹on, standard nyomáson oldott ösztradiol mennyiségét adja meg. Az alacsony EDR-rel rendelkezõ részecskék elõállítása elõsegíti a hormonpótló terápiára (HRT) szolgáló, nagyon alacsony koncentrációjú ösztradiolt tartalmazó gyógyászati kiszerelés elõállítását. Az ábrák rövid leírása 1. ábra: az ösztradiol átlagos plazmaprofilja aritmetikus skálán. 3
1 HU 008 042 T2 2 2. ábra: a progeszteron átlagos plazmaprofilja aritmetikus skálán. 3A. ábra: ösztradiol-koleszterin (40:60) mikrogömbök kristályosítás elõtt készült röntgendiffraktogramja (összehasonlító példa). 3B. ábra: ösztradiol-koleszterin (40:60) mikrogömbök kristályosítás után készült röntgendiffraktogramja (összehasonlító példa). 4. ábra: ösztradiol-koleszterin (60:40) mikrogömbök oldódási profilja US 6528094 B1 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat szerinti eljárással végzett szilárd fázisú kristályosítást követõen (összehasonlító példa). 5. ábra: A típusú kristályosítási folyamat (2. példa), illetve B típusú kristályosítási folyamat (3. példa) szerint elõállított ösztradiol-koleszterin (1:1) mikrogömbök oldódási profiljainak összehasonlítása. 6. ábra: B folyamat szerint elõállított ösztradiolkoleszterin (1:1) mikrogömbök DSC¹je. 7. ábra: a B kristályosítási folyamat szerint elõállított, a fogamzásgátlási klinikai vizsgálatban felhasznált ösztradiol (E); valamint ösztradiol-koleszterin (1:1), (1:2) és (1:3) mikrogömbök oldódási profiljainak összehasonlítása. 8. ábra: a B kristályosítási folyamat szerint elõállított ösztradiol (E); valamint ösztradiolkoleszterin (1:1), (1:2) és (1:3) mikrogömbök idõ függvényében ábrázolt ösztradiol-plazmaprofiljainak összehasonlítása. 9. ábra: a B kristályosítási folyamat szerint elõállított ösztradiol (E); ösztradiol-koleszterin (1:1), (1:2) és (1:3), valamint 9 mg ösztradiol- és 400 mg progeszterontartalmú mikrogömbök idõ függvényében ábrázolt ösztradiol-plazmaprofiljainak összehasonlítása. 10. ábra: a B kristályosítási folyamat szerint elõállított ösztradiol (E); ösztradiol-koleszterin (1:1), (1:2) és (1:3), valamint 9 mg ösztradiol- és 400 mg progeszterontartalmú mikrogömbök idõ függvényében ábrázolt progeszteron-plazmaprofiljainak összehasonlítása. 11. ábra: A típusú, B típusú vagy C típusú kristályosítási folyamat szerint elõállított ösztradiol-koleszterin (1:1) mikrogömbök oldódási profiljainak összehasonlítása. 12. ábra: C folyamat szerint elõállított ösztradiolkoleszterin (1:1) mikrogömbök DSC¹je. 13. ábra: C folyamat szerint elõállított ösztradiolkoleszterin (1:1) mikrogömbök röntgendiffraktogramja. 14. ábra: C folyamat szerint elõállított ösztradiolkoleszterin (1:1) mikrogömbök röntgendiffraktogramja. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A találmány elõnyös megvalósítási módjainak részletes bemutatása A találmány tárgyát kb. 1:1 moláris arányban ösztradiolt és koleszterint tartalmazó, kb. 6%¹os vagy az alatti EDR-értékkel rendelkezõ mikrogömbök elõállítása képezi. Egy progeszteron mikrogömböket, valamint ösztradiol- és koleszterintartalmú mikrogömböket tartalmazó gyógyászati kiszerelés megbízható fogamzásgátló hatásúnak bizonyult (lásd 1. példa, B jelû vizsgált anyag, lentebb). Az ösztradioltartalmú parenterális fogamzásgátló-kiszerelések ismert gyengéje a vizes oldatokban mutatott nagymértékû oldódásuk. Az ösztradioltartalmú mikrogömbök kiszerelésére a mikrogömbök gyártás utáni kezelésével vagy hõkezelésével kerülhet sor. Ennek során elõször kialakítják a mikrogömbök kívánt nagyságát és alakját, majd szabályozott környezetben kezelési vagy hõkezelési lépésnek teszik ki õket, ezután szárításukra és/vagy kinyerésükre kerül sor. A kezeléstõl függõen az elõállított EC mikrogömbök ösztradiolkioldódási rátája (EDR) vizes oldatban 24 óra alatt 6% vagy alacsonyabb érték. Amint azt korábban említettük, az alacsony EDR-rel rendelkezõ részecskék elõállítása elõsegíti a hormonpótló terápiára (HRT) szolgáló, nagyon alacsony koncentrációjú ösztradiolt tartalmazó gyógyászati kiszerelés elõállítását. Az ilyen alacsony koncentrációjú készítmények jól alkalmazhatók a menopauza elsõ öt évében HRT¹re szoruló páciensek esetében. Ezen túlmenõen az alacsony EDR-értékkel rendelkezõ kiszerelések lehetõséget biztosítanak a ritkább, vagy kevésbé gyakran ismétlõdõ gyógyszerbeadást tartalmazó kezelési rend alkalmazására. A találmány szerinti megoldásban a találmány szerinti kiszerelések beadására ritkán, havonta egyszer vagy akár kéthavonta kerül sor. Az ilyen alacsony rátájú ösztradiolkioldódást mutató részecskékkel végzett röntgendiffrakciós vizsgálatok alapján a részecskék félkristályos készítményt alkotó molekulaaggregátumok, amelyekben amorf és kristályos komponens egyaránt megfigyelhetõ. Elõnyösnek tekintett alacsony EDR-értékû készítmények azok, amelyeknél az ösztradiol kb. 45% és kb. 65% közötti mennyiségben amorf komponensbõl, illetve kb. 35% és kb. 55% közötti mennyiségben kristályos komponensbõl áll. Elõnyösen a részecskék kb. 50 60%¹a amorf komponens és kb. 40 50%¹a kristályos komponens. Még elõnyösebben, a részecskék kb. 55%¹a amorf komponens és kb. 45%¹a kristályos komponens. Ezen alacsony EDR-értékû készítmények kiszerelésére ösztradiol és koleszterin 1:1 moláris arányú keverékét alkalmazzák. Anélkül, hogy elköteleznénk magunkat bármely elképzelés vagy tudományos alapelv mellett, azt gondoljuk, hogy a csökkent oldhatóság és az alacsonyabb kioldódási profil az amorf komponens és a kristályos komponens molekuláris aggregátumon vagy molekuláris elegyen belüli irányultságától függ. Ennek megfelelõen úgy gondoljuk, hogy a részecske külsõ felülete fõként az amorf komponensbõl áll, így az ösztradiolmole- 4
1 HU 008 042 T2 2 kulák orientációjából eredõen a molekula túlnyomórészt hidrofób része irányul az oldószer felé, aminek köszönhetõen a részecskék vízben alapvetõen oldhatatlanná válnak. Különösen említést érdemelnek a 14. ábrán bemutatottal alapvetõen megegyezõ röntgenkrisztallográfiás spektrummal rendelkezõ mikrogömbök. Az ösztradiol elõnyösen 17 -ösztradiol. A 17 -ösztradiol megnevezés magában foglal bármely, gyógyászati szempontból elfogadható, ösztrogénhatással rendelkezõ 17¹ -ösztradiol alakot, például ilyen az ösztra-1,3,5(10)-trién-3,17- -diol, amelynek képlete a következõ, vagy annak egy észtere. A 17¹ -ösztradiol természetes forrásokból nyerhetõ ki vagy szintetikusan állítható elõ. A 17¹ -ösztradiol találmány szerinti megoldásban alkalmazható észterei például a 3¹monoészterek, például az ösztradiol-benzoát és az ösztradiol-3-acetát; a 17¹monoészterek, mint például az ösztradiol-ciponát, az ösztradiol-17- propionát, az ösztradiol-17-acetát, az ösztradiol-17- heptanoát (az ösztradiol-enentát), az ösztradiol-17-undekanoát (az ösztradiol-undecilát) és az ösztradiol-17- valerát; valamint a 3,17-diészterek, mint például az ösztradiol-dipropionát és az ösztradiol-diacetát stb., valamint mindezek kombinációi. A lassú kibocsátású ösztradiolrészecskék kiszerelése során ösztradiolt és koleszterint 1:1 moláris arányban elegyítünk, a készítményt kívánt méretû és alakú részecskékké alakítjuk, majd emelt hõmérsékleten hosszú ideig oldószerrel telített atmoszférába helyezzük, ezt követõen pedig a részecskéket emelt hõmérsékleten megszárítjuk. A találmány egy megvalósítási módjában az elõállított részecskéket az oldószerrel telített atmoszférába helyezés elõtt 12 óráig vagy tovább alacsony relatív páratartalmú (RH) atmoszférába helyezzük. A részecskék kiszerelése mikrogömb alakban történik. A 15%¹os vagy az alatti EDR-értékkel rendelkezõ mikrogömbök kiszerelése a következõképpen történhet: alapvetõen 1:1 moláris arányban ösztradiolt és koleszterint tartalmazó részecskéket állítunk elõ, ahol egyik vagy mindkettõ amorf vagy polimorf alakban fordul elõ; a részecskéket legalább 12 órán át kb. 25%¹os vagy alacsonyabb relatív páratartalmú (RH) atmoszférának tesszük ki, majd kb. 50 C és kb. 65 C hõmérsékleten legalább 48 órán át acetonnal és vízzel telített atmoszférába helyezzük, majd kb. 24 órán át vagy tovább kb. 35 C és kb. 50 C közötti hõmérsékleten szárítjuk, az így nyert részecskék EDR-értéke 24 óra alatt kevesebb mint kb. 15 tömegszázalék. Elõnyösebben, az eljárás során alapvetõen ösztradiolt és koleszterint tartalmazó részecskéket állítunk 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 elõ, ahol egyik vagy mindkettõ amorf vagy polimorf alakban fordul elõ; a részecskéket kb. 24 órán át alacsony relatív páratartalmú (RH) atmoszférának tesszük ki, majd kb. 60 C hõmérsékleten legalább 72 órán át acetonnal és vízzel telített atmoszférába helyezzük, ezután kb. 42 órán át kb. 45 C hõmérsékleten szárítjuk, majd kinyerjük a részecskéket, amelyek ösztradiolkioldódási rátája vizes oldatban 24 óra alatt kevesebb mint kb. 6 tömegszázalék. A légkört telítõ aceton és víz relatív koncentrációi kb. 65 mol% és kb. 80 mol% közötti, illetve kb. 20 mol% és kb. 35 mol% közötti. Elõnyösen, az aceton relatív koncentrációja kb. 70 mol% és kb. 75 mol% közötti, a víz relatív koncentrációja pedig kb. 25 mol% és kb. 30 mol% közötti. A két komponens koncentrációja legelõnyösebben kb. 72 mol% aceton és kb. 28 mol% víz. Az alacsony relatív páratartalmú környezet RH¹értéke kb. 25% vagy az alatti, elõnyösen pedig 20% vagy kevesebb. Alternatív módon, kb. 20% vagy alacsonyabb EDRértékû részecskék kiszerelése történhet úgy, hogy egymás után acetont/vizet tartalmazó atmoszférának, illetve etanolt/vizet tartalmazó atmoszférának tesszük ki azokat. Az eljárás során (a) alapvetõen ösztradiolt és koleszterint kb. 1:1 moláris arányban tartalmazó részecskéket állítunk elõ, ahol egyik vagy mindkettõ amorf vagy polimorf alakban fordul elõ; (b) a részecskéket acetonnal és vízzel telített atmoszférába helyezzük; (c) a (b) lépést legalább egyszer, elõnyösen kétszer megismételjük; (d) a részecskéket etanollal és vízzel telített atmoszférába helyezzük; (e) megszárítjuk a részecskéket; majd (f) kinyerjük a részecskéket, amelyek ösztradiolkioldódási rátája vizes oldatban 24 óra alatt kevesebb mint kb. 20 tömegszázalék. Ebben az alternatív eljárásban a részecskéket elõnyösen kb. kettõ és kb. öt közötti egymást követõ alkalommal tesszük ki aceton/víz keverék gõzeinek, legalább 12 órán át, kb. 20 C 40 C közötti hõmérsékleten. Elõnyösen, az aceton/víz kezelést három egymást követõ alkalommal végezzük kb. 24 órán át, kb. 30 C¹on. Az aceton/víz keverék relatív koncentrációit a fentiekben ismertettük (bár a kb. 95 mol% aceton és kb. 10 mol% víz koncentráció szintén említést érdemel); az etanol/víz keverékben pedig az etanol relatív koncentrációja kb. 95 mol% és kb. 99 mol% közötti, a vízé pedig kb. 5 mol% és kb. 1 mol% közötti. A részecskék szárítására kb. 40 C és kb. 50 C közötti hõmérséklet, elõnyösen kb. 45 C¹os hõmérséklet alkalmas elõnyösen 24 órás vagy hosszabb idõtartamban, elõnyösen kb. 36 órán át. Az itt és fentebb említett szárítási lépések vákuumban vagy levegõn egyaránt elvégezhetõk. Elõnyösebben, az alternatív eljárás során alapvetõen ösztradiolt és koleszterint kb. 1:1 moláris arányban tartalmazó részecskéket állítunk elõ, ahol egyik vagy mindkettõ amorf vagy polimorf alakban fordul elõ; a részecskéket kb. 30 C¹on 24 óráig három egymást követõ alkalommal acetonnal és vízzel telített atmoszférába helyezzük; a részecskéket kb. 30 C¹on kb. két 5
1 HU 008 042 T2 2 óráig etanollal és vízzel telített atmoszférába helyezzük; kb. 45 C¹on kb. 42 óra alatt megszárítjuk a részecskéket; majd kinyerjük azokat, amely kinyert részecskék ösztradiolkioldódási rátája vizes oldatban 24 óra alatt kevesebb mint kb. 20 tömegszázalék. A találmány szerinti mikrogömbök ösztradioltartalma elõnyösen félkristályos vagy kompozit alakú, ahol kb. 50 60% az amorf és kb. 40 50% a kristályos alak aránya. A találmány különösen elõnyös megvalósítási módjaiban az ösztradiol kb. 55%¹a amorf, kb. 45%¹a pedig kristályos alakú. A találmány szerinti alacsony EDR-értékû ösztradiol/koleszterin részecskéket progeszteronnal kombinálva havonta vagy ritkábban alkalmazható, alacsony dózisú ösztradiolkiszerelések nyerhetõk. Egy gyógyászati készítmény tartalmazhat például kb. 5 mg és kb. 15 mg közötti mennyiségû 17¹ -ösztradiolból és koleszterinbõl álló kb. 1:1 moláris arányú keveréket, továbbá kb. 200 és kb. 500 mg közötti mennyiségû, vagyis kb. 300 és kb. 400 mg közötti mennyiségû progeszteront, ahol a 17¹ -ösztradiol és a progeszteron tömegaránya kb. 1:40; és ahol a 17¹ -ösztradiol félkristályos alakban van jelen, ami kb. 50 60% közötti mennyiségû amorf és kb. 40 50% közötti mennyiségû kristályos alakból tevõdik össze, a kiszerelés EDR-értéke pedig 6% vagy kevesebb. A gyógyászati kiszerelés elõállítható ösztradiol/koleszterin mikrogömbök és egy progesztin, elõnyösen progeszteron részecskéinek kombinálásával. A progesztinrészecskék elõnyösen mikrogömbök. A részecskék tartalmazhatnak továbbá adalék anyagokat és vivõanyagokat, például síkosítószereket, puffereket, stabilizálószereket stb. Mindezeken túl a részecskék parenterális beadás céljából vivõanyagban szuszpendálhatók. Ezek a kiszerelések fogamzásgátló hatásúak és hatékonyan alkalmazhatók havi egyszeri vagy akár kéthavonta történõ parenterális beadást tartalmazó hormonpótlási összeállításokban. A kiszerelés beadására elõnyösen intramuszkuláris injekcióban kerül sor. A progeszteron megnevezés a preg-4-ene-3,20- dionra utal, amelynek a képlete a következõ: és a természetes forrásokból származó, valamint a szintetikusan elõállított progeszteront egyaránt magában foglalja. A találmány egy további szempontjával összhangban egy gyógyászati kiszerelés ösztrogén mikrogömböket tartalmazó vizes készítményt tartalmazhat. A mikrogömbök átmérõje elõnyösen kb. 25 m éskb. 105 m közötti, elõnyösebben kb. 35 m és kb. 75 m közötti. A kiszerelés injekciós fecskendõvel történõ parenterális beadásra alkalmassá tétele érdekében a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 mikrogömböket elõnyösen egyéb ágensekkel, vivõanyagokkal és kötõanyagokkal keverik össze. Gyógyászati kiszerelések fogamzásgátlás és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyiségben tartalmazhatják ösztrogén- [pl. 17¹ -ösztradiol (E2)] tartalmú mikrogömbök és progesztin- [pl. progeszteron (P4)] tartalmú mikrogömbök vizes szuszpenzióját, ahol az ösztrogéntartalmú mikrogömbök koleszterint is magukban foglalnak, illetve a progesztin mikrogömbök is tartalmazhatnak további endogén szteroidokat, például koleszterint. A kiszerelésben az E2 és a P4 mindegyike fogamzásgátlás és hormonpótlás szempontjából egyaránt hatékony mennyiségben van jelen. Így ha az E2 és a P4 nincsenek is jelen ugyanazon mikrogömbben, a kiszerelés mindegyiküket hatékony mennyiségben tartalmazza. Ennek megfelelõen különösen említést érdemel az a kiszerelés, amelyben 17¹ -ösztradiol és koleszterin keveréke mikrogömbökben van jelen, a progeszteron pedig elkülönülve, különálló mikrogömbökben foglal helyet. Emlõsre, közelebbrõl nõivarú emberre vonatkozóan 17¹ -ösztradiol és progeszteron esetében a fogamzásgátlás szempontjából és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyiség meghatározás alatt 17¹ ösztradiolt és progeszteront kb. 1:40 tömegarányban tartalmazó kiszerelést értünk. A tömegarány elõnyösen kb. 9:400. A dózisegység kifejezés alatt egy páciensben legalább egy teljes menstruációs ciklus során hatékony fogamzásgátló és hormonpótló terápia megvalósításához elegendõ mennyiséget értünk. A 17¹ -ösztradiol és a progeszteron fogamzásgátlás szempontjából és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyiségei a szintetikus hormonnal végzett fogamzásgátló terápiákkal gyakran összefüggõ nemkívánatos mellékhatások lényeges mértékû minimalizálása és/vagy megszüntetése érdekében szabályozott módon adhatók be a páciensnek. Ezen gyógyszerbeadás célpontja elõnyösen reproduktív éveiben járó nõivarú emlõs, itt használatos másik megnevezéssel termékeny nõ. Az egyidejû fogamzásgátló és hormonpótló hatás elérésére szolgáló eljárás során egy páciensnek találmány szerinti 17¹ -ösztradiol-tartalmú mikrogömböt és adott esetben progeszteron mikrogömböket tartalmazó gyógyászati kiszerelés beadására kerül sor. A kiszerelés elõnyösen az említett mikrogömböket folyékony vivõanyagban tartalmazó diszperzió vagy szuszpenzió. A kiszerelés a 17¹ -ösztradiolt, és ha jelen van, a progeszteront fogamzásgátlás szempontjából hatékony mennyiségben és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyiségben tartalmazza. Nõk esetében a 17¹ -ösztradiol hatékony mennyisége kb. 9 mg, míg a progeszteron hatékony mennyisége kb. 400 mg. A találmány szerinti mikrogömbökben jelen lévõ koleszterin az ösztrogénágenshez képest inert és biológiai folyadékokban, például vérben lényegesen csökkent mértékû oldhatósággal rendelkezik. Amint azt fentebb részletesebben kifejtettük, az aktív hatóanyag alapvetõen állandó kioldódási rátája az aktív hatóanya- 6
1 HU 008 042 T2 2 gok hosszú idõn keresztül zajló, szabályozott kibocsátását teszi lehetõvé. A hosszú idõtartam elõnyösen legalább egy menstruációs ciklust foglal magában és nõ esetében legalább kb. 4 hétig tart. Az E2 és a P4 fogamzásgátlás szempontjából hatékony és hormonpótlás szempontjából hatékony, egyidejû fogamzásgátló és hormonpótló hatás kiváltására alkalmas mennyiségeinek alkalmazására kerül sor. Közelebbrõl, a fogamzásgátló hatás tekintetében az E2 és P4 hatékony mennyisége az a mennyiség, amely képes a kezelt páciens hipotalamuszára és hipofízisére hatva meggátolni a normál petefészek-funkció fenntartásához szükséges gonadotrop hormonok felszabadulását. Emellett az E2 és a P4 hormonpótlás szempontjából hatékony mennyisége az a mennyiség, amely alapvetõen elegendõ az említett hormonok az ovuláció megszûnésével csökkent és/vagy megszûnt endogén termelésének helyettesítéséhez. Az E2 és a P4 fogamzásgátlás szempontjából hatékony és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyisége elõnyösen az a mennyiség, ami nõivarú emberben lehetõvé teszi a kívánt hatás elérését, dózisegység alapon kb. 5 mg és kb. 15 mg ösztradiol és/vagy kb. 200 és 500 mg közötti, vagyis kb. 300 és kb. 500 mg közötti mennyiségû progeszteron, elõnyösebben kb. 9 mg 17¹ -ösztradiol és kb. 400 mg progeszteron. A hormontartalmú mikrogömböket tartalmazó találmány szerinti kiszerelések a bennük foglalt hormonok szabályozott, elõre meghatározott és reprodukálható beadását teszik lehetõvé. A hormonok szabályozott kibocsátása szempontjából fontosak a mikrogömbök különféle fizikokémiai jellemzõi. Közelebbrõl, a mikrogömbök oldhatósága, mérete és polimorf összetétele lényeges hatást gyakorol a kibocsátás ütemére. Például minél nagyobb a mikrogömb átmérõje, annál tovább tart, míg a hormonszint a kimutathatósági határérték alá csökken. A találmány szerinti mikrogömbök átmérõje elõnyösen kb. 25 m és kb. 125 m közötti, elõnyösebben kb. 35 m és kb. 105 m közötti, legelõnyösebben pedig kb. 35 m és kb. 75 m közötti. Ismert, hogy a természetes E2 hormon (valamint a természetes P4 hormon) szájon át beadva metabolikusan lebomlik. Ennek megfelelõen a találmány szerinti kiszerelés pácienseknek történõ beadása elõnyösen parenterálisan, elsõdlegesen intramuszkuláris injekcióban történik. A természetes hormonszintek biztosításának célja fogamzásgátló hatás biztosítása hormonpótló hatás egyidejû biztosítása mellett. Mindezeken túl a találmány szerinti gyógyászati kiszerelések elõsegítik az egészséges, kb. 28±3 napos havi menstruációs ciklus kialakulását. A találmány elõnyös megvalósítási módjaiban a találmány szerinti kiszerelések páciensnek történõ injekciós beadására havonta kerül sor, megfelelõ injekciózási módon, például 18 vagy 20 G méretû injekciós tû alkalmazásával. A gyógyászati kiszerelések fogamzásgátlás szempontjából hatékony mennyiségû és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyiségû ösztrogén és progeszteron keveréket tartalmazhatnak elnyújtott 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 vagy késleltetett kibocsátású kiszerelésben. A késleltetett vagy elnyújtott kibocsátású kiszerelések kb. négyhetes intervallumokban hatékonyan adagolhatók a fogamzásgátló hatás vagy a hormonpótló hatás köztes idõszakokban történõ elvesztése nélkül. Az ilyen késleltetett kibocsátású kiszerelésekben az ösztrogén koleszterinnel keverve található meg, és adott esetben a progesztin is a beadás helyén lévõ biológiai folyadékokban csökkent oldhatósággal bíró vivõanyaggal, excipienssel vagy kötõanyaggal keverten van jelen. A koleszterin biológiai folyadékokban, például vérben az ösztrogénekhez vagy progesztinekhez képest lényegesen gyengébb oldhatósággal rendelkezik, ezzel gyengíti az említett aktív ágensek kioldódását, ezáltal késlelteti a véráramba történõ kibocsátásukat. A késleltetett kibocsátású mikrogömb készítmények elõállításához további tanácsok kaphatók az 5360616, az 5512303, az 5633014, az 5643604, valamint a 6287693 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratokból. A 6287693 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat szilárd fázisú kristályosítási folyamatot tesz közzé, amelyben kevert morfológiájú anyagokból álló készítményt kívánt nagyságú és alakú részecskékké alakítanak, majd a részecskék egy vagy több oldószer magas atmoszferikus koncentrációjának való kitételével az egyes összetevõk legstabilabb polimorf alakjává kristályosítanak a részecskék méretbeli/alakbeli jellegzetességeinek elvesztése nélkül. Az így nyert formált kristályos részecskék stabilan tárolhatók, vagyis becsomagolva száraz anyagként vagy porként vagy vizes vivõanyagbeli szuszpenzióként hosszú ideig (pl. legalább egy hónapig) tárolhatók a kívánt méretbeli/alakbeli jellemzõk elvesztése nélkül. Mivel a szilárd fázisú kristályosítási folyamat nagy tisztaságot és stabilitást eredményez, a mikrogömbrészecskék további hordozóanyagok, pufferek, stabilizálószerek, tartósítószerek és biocidek hozzáadásával vagy anélkül is elõállíthatók. A kívánt mérettel és alakkal rendelkezõ részecskék elõállításának képessége különösen elõnyös abból a szempontból, hogy konzisztens vagy akár egyöntetû részecskenagyság és ¹méret biztosítását teszi lehetõvé, ami viszont megkönnyíti a beadást (pl. injekciós fecskendõvel), valamint az aktív hatóanyag szabályozott, elõre meghatározott oldódását és kibocsátását teszi lehetõvé. A találmány szerinti kiszerelések bármely hagyományos beadási módon beadhatók. Elõnyösnek tekintett beadási mód a parenterális beadás, még elõnyösebb az intramuszkuláris (IM) injektálás. Parenterális beadás esetében elõnyös, ha a kiszerelés folyadék, amely lehet akár oldat vagy keverék, pl. szuszpenzió. A kiszerelés a fenti mikrogömböket elõnyösen vizes vivõanyagban szuszpenzióként tartalmazza. Adott esetben a kiszerelés elõállítható a beadás elõtt vivõanyaggal elkeverendõ porként is. A találmány ezen megvalósítási módjaiban a gyógyászati kiszerelés készlet részeként csomagolható és hozható kereskedelmi forgalomba. Egy ilyen készlet egy vagy több adagban a következõket tartalmazhatja: (1) az aktív 7
1 HU 008 042 T2 2 anyagot tartalmazó port vivõanyagokkal, adalék anyagokkal, pufferekkel, tartósítószerekkel stb. együtt; (2) egy vagy több adag folyékony vivõanyagot, amely adott esetben puffereket, tartósítószereket és/vagy biocideket is tartalmaz; és (3) injekciós eszközt, például injekciós fecskendõt, elõnyösen 18 vagy 20 G méretû tût tartalmazó fecskendõt. A találmány szerinti kiszerelések beadásának egy további lehetséges módja a transzdermális beadás. Drogok transzdermális beadása különféle módokon végezhetõ el, így például por injektálásával biolisztikus úton, ahol a részecskék gázzal vagy egyéb módon felgyorsítva jutnak át a bõrön. Erre a megközelítési módra példa a 6168587 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat, amelynek címe: Tû nélküli fecskendõ, amely részecskebeadás céljára szuperszonikus gázáramot alkalmaz, illetve a 6475181 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat, amelynek címe Drogrészecske-beadás. A fentiekhez hasonló transzdermális beadás megvalósítható passzívabb módon is, például hosszabb ideig a bõrre helyezett ragadós tapaszokkal. Ilyen tapaszokat ismertet a 6149935 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat, amelynek címe: Szilárd mátrixrendszer transzdermális drogbeadás céljára. A találmány szerinti gyógyászati kiszerelésekkel bármely emlõs, így pl. emberszabású, kutya, macska, juh, ló, sertés, szarvasmarha vagy egér szervezet hatékonyan kezelhetõ. A páciens elõnyösen emberszabású szervezet, még elõnyösebben nõnemû ember. A különbözõ emlõsök esetében az adott ösztrogén és progesztin, valamint azok mennyisége egyaránt változhat. A találmány szerinti, mikrogömböt tartalmazó kiszerelések bármely megfelelõ eljárás segítségével elõállíthatók. A találmány egy elõnyös megvalósítási módjában a mikrogömbök elõállítása során az E2¹t felmelegítik, majd gyorsan lehûtik, aminek eredményeként a mikrogömbök megfelelõen kristályosodnak. A kristályosodás után a kapszulák részecskeméret-alapú szûréssel gyûjthetõk be. Általánosságban, a nagyobb méretû mikrogömbök csökkentik a hormon maximális koncentrációját és az annak eléréséhez szükséges idõt. Mindemellett a nagyobb méretû mikrogömbök növelik a hormonabszorpció felezési idejét is. Fogamzásgátló/hormonpótló terápia céljára készlet hozható létre. A készlet fogamzásgátlás szempontjából hatékony mennyiségû és hormonpótlás szempontjából hatékony mennyiségû 17¹ -ösztradiolt és progeszteront magában foglaló gyógyászati kiszerelést tartalmazhat. A készlet tartalmazhat egy vagy több további összetevõt, így pl. a steril por alakjában biztosított mikrogömbökbõl homogén szuszpenzió helyreállítására szolgáló vizes vivõanyagot tartalmazó steril ampullát is. Mindemellett a készletben helyet kaphatnak a kiszerelés beadására szolgáló eszközök, így pl. intramuszkuláris injekciózás céljából 18 és/vagy 20 G tûvel ellátott fecskendõk is. Az elõre csomagolt por kiszerelés vizes vivõanyagban reszuszpendálható. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A találmány egy elõnyös megvalósítási módjában a vizes vivõanyag 3,0 ml vizes vivõanyagot tartalmazó steril ampullából származik. A mikrogömbök szuszpendálására alkalmazott elõnyös vizes vivõanyag összetétele a következõ: Metil-paraben NF 4,11 mg Propil-paraben NF 0,45 mg Mannit NF 144,mg Karboxi-metil-cellulóz-nátrium, USP, alacsony viszkozitású 2,25 mg Poliszorbát 80 NF 0,60 mg Víz injekcióhoz USP 3,00 mg Átlagosan képzett szakember számára nyilvánvaló, hogy az ilyen vizes vivõanyagok összetétele és relatív koncentrációja nem kritikus a találmány szerinti megoldás szempontjából, ennek megfelelõen a találmány szerinti megoldás elõnyeinek és alkalmazásának lényeges mértékû megváltoztatása vagy csökkentése nélkül mindkettõ módosítható. A helyreállítás a homogén szuszpenzió eléréséig tartó erõteljes rázással valósítható meg. Az így kapott szuszpenzió elõnyösen pl. a gluteális régióba adott mély intramuszkuláris injekcióval adható be. Az elsõ adagot az utolsó menstruáció kezdetétõl számított öt napon belül kell beadni. Az ezt követõ adagokat 28±3 naponta kell beadni. A beadás megkönnyítése és komfortérzet biztosítása érdekében a következõ adagokat váltott gluteális régiókba lehet adni. Az ösztrogént és progesztint tartalmazó kiszerelések hatékony hormonpótlási elõnyöket biztosítanak. Mivel ezek a kiszerelések természetes körülmények között elõforduló hormonokból készülnek, ezen kiszerelések beadása visszaállítja vagy kiegészíti a reprodukciós korban lévõ nõivarú emlõsben egyébként is termelt, természetes körülmények között elõforduló hormonok mennyiségét. Az orálisan beadva aktív, szintetikus hormonokat tartalmazó hagyományos fogamzásgátlók nem rendelkeznek ilyen hormonpótlással kapcsolatos elõnyökkel. Úgy véljük, hogy átlagosan képzett szakember további magyarázat nélkül, a fentiekben leírtak és a következõ illusztrációs célú példák segítségével képes a találmány szerinti kiszerelések elõállítására és alkalmazására és a találmány szerinti eljárások gyakorlatba vételére. A következõ munkapéldák ennek megfelelõen a találmány elõnyös megvalósítási módjait, illetve a gyakorlatba vételére szolgáló eljárásokat illusztrálják, semmilyen módon nem jelentik a találmány korlátozását és a jelen bejelentés hatókörén kívüli, összehasonlító példákat is tartalmaznak. 1. példa Progeszteron mikrogömbök és ösztradiol mikrogömbök különbözõ kombinációi, valamint különbözõ ösztradiol-koleszterin aránnyal rendelkezõ mikrogömbök biohasznosulásának megállapítására szolgáló, nyulakon végzett farmakokinetikai vizsgálat Ezt a vizsgálatot a progeszteront (P) és 17¹ -ösztradiolt (E) tartalmazó vizsgálati készítmények farmakoki- 8
1 HU 008 042 T2 2 netikai profiljának megállapítása érdekében végeztük. A prospektív és összehasonlító vizsgálatot új¹zélandi fajtájú baknyulakon végeztük. A vizsgálati minták az 5360616 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratban bemutatott folyamatot követve elõállított, majd a 6528094 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat szerint kristályosított progeszteron mikrogömbök+ösztradiol (E) mikrogömbök vagy ösztradiol és koleszterin (EC) mikrogömbök vizes szuszpenzióból álltak. A vizsgált készítmények a következõk voltak. Vizsgált készítmény A B C D Összetétel P mikrogömbök (ME)+E ME P ME+(1:1) ösztradiol koleszterin ME P ME+(2:1) ösztradiol koleszterin ME P ME+(3:1) ösztradiol koleszterin ME A vizes szuszpenziókat intramuszkuláris (IM) injekcióban adtuk be. Mindegyik nyúl 133 mg progeszteront és 3 mg ösztradiolt kapott. A 0. idõpontban (adagolás elõtt), majd azután 1, 2, 4 és 9 órával, majd 2 14 nap között mindennap, majd 14 28 nap között minden másnap vérmintákat vettünk. Az így nyert mintákat progeszteron és ösztrogén jelenléte szempontjából radioimmun vizsgálati eljárással (RIA) vizsgáltuk. A plazmaprofilokból a következõ farmakokinetikai paramétereket számítottuk ki: a görbe alatti terület a végtelenig (AUC_INF), a görbe alatti terület az utolsó mintavételi idõpontig (ABC0_t), maximális plazmakoncentráció (C max. ),ac max. eléréséhez szükséges idõ, felezési idõ (t 2 ), eliminációs állandó (Ke), és átlagos tartózkodási idõ (MRT). A kapott eredményeket az egyes csoportok közötti bármely eltérés szempontjából statisztikailag elemeztük. Az ösztradiol esetében, amint az alábbi táblázatban is látható, a számított paraméterek tekintetében az elemzés ugyan nem mutatott ki statisztikailag szignifikáns mértékû (p<0,05) eltérést az egyes csoportok paraméterei között, de az egyes csoportok MRT-értékei között különbségek voltak, mivel az (1:1) EC ME (B vizsgált anyag) esetében az MRT majdnem kétszer olyan hosszú volt, mint az E mikrogömbök (A vizsgálati anyag) esetében. Vizsgálati anyag A B C D MRT 4,56±1,05 8,33±2,61 5,01±0,55 6,40±2,27 (nap) CV 23,3 31,3 11 35,5 n 4 4 4 4 A progeszteron esetében a számított paraméterekben nem volt statisztikailag lényeges mértékû különbség a csoportok között, bár az egyes számított paraméterek esetében variabilitás volt megfigyelhetõ. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Grafikus elemzés A négy vizsgált készítmény esetében az ösztradiol és progeszteron átlagos plazmaprofilját az 1. és a 2. ábrán mutatjuk be. Az ösztradiol és a progeszteron esetében kapott eredmények alapján, bár a statisztikai elemzés nem mutatott ki különbséget a csoportok között, a plazmaprofilok grafikus elemzése (1. ábra) eltérõ viselkedésrõl árulkodott. Elképzelhetõ, hogy ez az alacsony mintaszám következménye volt. 2. példa (összehasonlító) 49% 17¹ -ösztradiol és 51% koleszterin keverékébõl készült mikrogömbök Ez az összehasonlító példa a 6528094 B1 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat 7. példája (más megnevezéssel A típusú kristályosítási folyamat ) szerinti részecske-elõállítással analóg. Az ösztradiol/koleszterin mikrogömböket progeszteron mikrogömbökkel kombinálva az elõbbi 1. példa szerinti B vizsgálati anyagnak megfelelõ gyógyászati kiszerelés hozható létre. A keverék mikrogömbjeit az összetevõk összeolvasztásával, majd, akárcsak a tiszta anyagok esetében, cseppekké porlasztásával és mikrogömbökké dermesztésével állítottuk elõ. A mikrogömbök kezdetben nagyarányú amorf tartalommal rendelkeztek. Amikor a mikrogömböket kb. 7 literes tartályba helyeztük és 24 órán át 30 C¹on porózus cellulóz anyagban tartott 8 ml etanol gõzeinek tettük ki, a kezdetben amorf mikrogömbök a gõz jelenlétében teljes mértékben kristályosodtak. A mikrogömböket 24 órán át 60 C¹on vákuumban szárítottuk, a mikrogömbökbeli reziduális etanolmennyiség 0,01% alatt volt. A mikrogömbök stabilitásának elbírálása érdekében nem kristályosított (csak megolvasztott és dermesztett) mikrogömböket és találmány szerinti mikrogömböket elkülönítve 40 C¹os vizes oldatba helyeztük, majd 82 nap után fénymikroszkóppal vizsgáltuk. A fénymikroszkópos megfigyelések alapján a találmány szerint kristályosított mikrogömbök vízbe helyezve stabilak maradtak, míg a nem kristályosított mikrogömbök nem. A kristályosított mikrogömbök USP tisztított vízben lévõ 0,01% Poliszorbát 80 oldatban 40 C¹on 82 napig, vagy nyulaknak intramuszkulárisan injektálva 14 napig morfológiailag stabilak maradtak. A 3. ábra az EC (40:60) mikrogömbök kristályosítás elõtti és utáni röntgen diffraktogramját tartalmazza, a 4. ábra pedig az ennek megfelelõ kioldódási profilt mutatja be (az ösztradiol 74%¹a oldódott 24 óra alatt 0,3% Tween 80 vizes oldatában). 3. példa (összehasonlító) Módosított kristályosítási folyamat 24 óra alatt 20% kioldódást mutató EC ME elõállítására ( B típusú kristályosítási folyamat ) A fenti 2. példának megfelelõ ösztradiol-koleszterin (1:1) mikrogömböket állítottunk elõ. A magas amorf tartalommal rendelkezõ mikrogömböket aceton és víz gõzeinek tettük ki (95 mol% ace- 9
1 HU 008 042 T2 2 ton; 5 mol% víz) három egymást követõ 24 órás idõtartamban 30 C¹on. Az egyes szakaszok között a hermetikusan zárt konténereket kinyitottuk és a tartalmukat levegõn megszárítottuk, a maradék oldószereket eltávolítottuk, majd az ösztradiol-mikrogömböket a következõ gõzkezelésnek tettük ki. A részecskéket ezután vákuumban 42 óráig 45 C¹on melegítettük (kiszárítottuk) (kb. 12,2 Hg inch). A fentiek szerint kapott részecskék kb. 20% átlagos EDR-értéket adtak. Lásd az 5. ábrát. 4. példa Ultraalacsony kioldódású ösztradiol-koleszterin mikrogömbök elõállítására szolgáló kristályosítási folyamat ( C típusú kristályosítási folyamat ) A 2. példában bemutatott folyamat szerint ösztradiol-koleszterin mikrogömböket állítottunk elõ. A részecskéket 24 óráig alacsony relatív páratartalmú körülmények között tároltuk. A részecskéket 72 óráig 60 C¹on aceton és víz gõzeinek tettük ki (72 mol% aceton; 28 mol% víz). A részecskéket ezután 42 óráig 45 C¹on melegítettük (kiszárítottuk). Az így nyert részecskék esetében az ösztradiol kioldódása standard hõmérséklet és nyomás mellett 0,3% poli(oxi-etilén)-szorbitán-monooleát (Tween 80) vizes oldatában 24 óra alatt 5% volt. 5 10 15 20 25 A 11. ábra az e példa szerinti részecskék kioldódási profilját tartalmazza a 2. és a 3. példa szerinti részecskékével összehasonlítva. A 12. ábra az ezen példa szerinti részecskék DSC profilját mutatja be. A 13. és a 14. ábrák a 4. példában elõállított részecskék röntgendiffraktogramjai. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Mikrogömbök, amelyek 1:1 mólarányban ösztradiolból és koleszterinbõl állnak, és EDR-értékük 6%¹os vagy alacsonyabb. 2. Az 1. igénypont szerinti mikrogömbök, amelyek röntgenkrisztallográfiás spektruma a 14. ábrán bemutatottal alapvetõen megegyezik. 3. Az 1. igénypont szerinti mikrogömbök, amelyekben az ösztradiol félkristályos formában van jelen, ahol az ösztradiol 50 60%¹a amorf és 40 50%¹a kristályos. 4. Az 1. igénypont szerinti mikrogömbök, amelyekben az ösztradiol félkristályos formában van jelen, ahol az ösztradiol 55%¹a amorf és 45%¹a kristályos. 5. Az 1. igénypont szerinti mikrogömbök, amelyekben az ösztradiol 17¹ -ösztradiol. 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20