Mycobacteria Growth Indicator Tube, OADC Enrichment, PANTA Antibiotic Mixture

BBL Mycobacteria Growth Indicator Tube, OADC Enrichment, PANTA Antibiotic Mixture 8809501JAA(02) 2015-05 HASZNÁLATI JAVASLAT A BBL Mycobacteria Growth Indicator Tube (mycobaktérium-szaporodás jelző cső), szükség esetén a BBL OADC Enrichment (dúsítóval) és a BBL PANTA Antibiotic Mixture (antibiotikum-keverékkel) együtt használva, a mycobaktériumok detektálására és kimutatására szolgál. Felhasználható emésztett és dekontaminált klinikai mintákhoz (kivétel vizelet) és steril testnedvekhez (kivétel vér). Magyar ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT 1985 és 1992 között a Mycobacterium tuberculosis (MTB) fertőzések száma 18%-kal nőtt. Tuberkulózisban évente hozzávetőlegesen 3 millió ember hal meg világszerte; így ez a fertőző betegségek között az egyik vezető halálok. 1 1981 és 1987 között az AIDS esettanulmányok szerint, az AIDS-es betegek 5,5%-a disszeminált, nem tuberkulotikus mycobaktérium fertőzésben, pl. MAC-ben (Mycobacterium avium) szenvedett. 1990-re a disszeminált, nem tuberkulotikus mycobakteriális fertőzések növekedésével a kumulatív gyakoriság 7,6%-ra nőtt. 2 Ezenkívül a TBC újbóli felbukkanása, valamint a többszörösen gyógyszerrezisztens TBC is egyre több gondot okoz. A betegség elterjedéséért (MDR-TB esetek) a hosszú ideig tartó szaporítás, azonosítás és jelentés miatt, részben a laboratóriumok is felelősek. 3 A U.S. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) ajánlása alapján a laboratóriumoknak a mycobaktériumok diagnosztizálására rendelkezésre álló leggyorsabb teszteket kell alkalmazniuk. Az ajánlás szerint a mycobaktérium tenyészetek előállításához tanácsos mind folyékony, mind szilárd tápközeget használni. 3 Az Mycobacteria Growth Indicator Tube 4 ml módosított Middlebrook 7H9 Broth tápleves alapot tartalmaz. 4,5 A teljes tápközeg, amely tartalmaz 0,5 ml OADC dúsítót és 0,1 ml PANTA antibiotikum-keveréket, a mycobaktériumok tenyésztéséhez egyik leggyakrabban használt folyékony tápközeg. A klinikai minták minden típusa, tüdő és nem tüdő eredetű minták (kivéve a vért és a vizeletet) felhasználhatók az csövek használatával történő hagyományos elsődleges izoláláshoz. 6 A feldolgozott mintával egy csövet inokulálunk, inkubáljuk, és az inkubálást követő második naptól kezdve hosszúhullámú UV-fény segítségével naponta leolvassuk. A cső pozitivitása esetén körülbelül 10 4 10 7 CFU/mL mycobaktérium van jelen. AZ ELJÁRÁS MŰKÖDÉSI ELVE A 16 x 100 mm-es, gömbölyű végű cső aljában egy szilikonba ágyazott fluoreszcens vegyület található. A fluoreszcens vegyület érzékeny a táplevesben oldott oxigénre. A kiindulási oldott oxigén mennyiség gátolja a vegyület emisszióját, ezért csak alacsony fluoreszcencia mérhető. Később az aktívan lélegző mikroorganizmusok elfogyasztják az oxigént, így a fluoreszcencia 365 nm UV transzilluminátor vagy hosszúhullámú UV-fény (Wood-lámpa) segítségével megfigyelhető lesz. A szaporodást a tápközegben látható inhomogén turbiditás, illetve kis szemcsék vagy pelyhek is jelezhetik. A tápközeg a mycobaktériumok gyors szaporodásához elengedhetetlen anyagokból áll. Az olajsavat a tuberkulózis bacilus használja fel, és fontos szerepe van a mycobaktériumok metabolizmusában. Az albuminnak védő szerepe van: megköti a szabad zsírsavakat, amelyek toxikusak lehetnek a Mycobacterium fajokra nézve, és ezzel segíti a kimutatást. A dextróz energiaforrásul szolgál. A kataláz lebontja a tápközegben esetleg megtalálható toxikus peroxidázokat. A befertőződés mértéke csökkenthető, ha a BBL OADC dúsítóval kombinált BBL Base alapot a klinikai mintával való inokulálás előtt a BBL PANTA Antibiotic Mixture keverékkel egészítik ki. REAGENSEK A BBL Mycobacteria Growth Indicator Tube tartalma: 110 µl fluoreszcens indikátor és 4 ml tápleves. Az indikátor Tris 4,7-difenil-1,10-fenantrolin ruténium-klorid pentahidrátot tartalmaz szilikongumi alapon. A csövek 10%-os CO 2 -dal vannak töltve; kupakjuk polipropilénből készült. Megközelítő tartalom* 1 liter tisztított vízre vonatkoztatva Módosított Middlebrook 7H9 Broth tápleves alap... 5,9 g Kazein-pepton... 1,25 g A BBL OADC 15 ml Middlebrook OADC dúsítót tartalmaz. Megközelítő tartalom* 1 liter tisztított vízre vonatkoztatva Szarvasmarha albumin... 50,0 g Kataláz... 0,03 g Dextróz... 20,0 g Olajsav... 0,6 g A BBL PANTA palack liofilizált antimikrobiális hatóanyagok keverékét tartalmazza. Megközelítő tartalom* liofilizált PANTA palackonként Polymixin B... 6000 egység Trimethoprim... 600 µg Amphotericin B... 600 µg Azlocillin... 600 µg Nalidixsav... 2400 µg *Úgy beállítva és/vagy kiegészítve, hogy megfeleljen a teljesítménykövetelményeknek. Használati utasítás: Egy palack liofilizált BBL PANTA antibiotikum-keveréket keverjen össze 3 ml steril desztillált vagy ioncserélt vízzel. Figyelmeztetések és óvintézkedések: In vitro diagnosztizáláshoz. A mintákban patogén mikroorganizmusok (pl. Hepatitis B vírus és HIV vírus) lehetnek jelen. Minden vérrel vagy más testnedvvel fertőzött tételt a Universal Precautions 1,2 előírásai szerint kell kezelni. 1

A Mycobacterium tuberculosis tenyészetekkel való munka Biosafety Level (BSL) 3 szintű gyakorlatot, elszigetelt felszerelést és berendezést igényel. 6 Használat előtt minden csövet meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, illetve befertőződésre utaló nyom. Az alkalmatlannak látszó vagy fluoreszcenciát mutató csöveket használat nélkül ki kell dobni. A leejtett csöveket óvatosan meg kell vizsgálni. Ha a cső megsérült, ki kell dobni. A fluoreszcenciavizsgálat során viseljen UV-védőszemüveget, és kizárólag hosszúhullámú (365 nm) megvilágítást használjon. NE HASZNÁLJON RÖVIDHULLÁMÚ UV-FÉNYT A CSÖVEK LEOLVASÁSÁHOZ! Kidobás előtt minden inokulált csövet autoklávozzon! Reagensek tárolása: BBL Mycobacteria Growth Indicator Tube csövek Kézhezvétel után tárolja 2 25 C-on. NE FAGYASSZA LE! Fénytől védendő. A táplevesnek tisztának és színtelennek kell lennie. Ha a tápleves zavaros, ne használja fel. A címke útmutatója szerint tárolt csöveket a lejárati idő vége előtt még inokulálni lehet, és utána 8 hétig inkubálhatók. BBL OADC Kézhezvétel után tárolja sötét helyen, 2 8 C-on. Kerülni kell a lemezek megfagyását, illetve túlmelegedését. közvetlenül a használat előtt nyissa fel! Fénytől védendő. BBL PANTA Antibiotic Mixture Kézhezvétel után a liofilizált palackokat tárolja 2 8 C-on. Az összekeverést követően a PANTA keverék 72 órán keresztül használható fel 2 8 C hőmérsékleten tárolva, illetve legfeljebb 6 hónapig -20 C fokon vagy annál alacsonyabb hőmérsékleten tárolva. Felolvasztás után a PANTA keveréket azonnal fel kell használni. A fel nem használt adagot dobja ki. A MINTÁK GYŰJTÉSE ÉS KEZELÉSE Minden mintát a CDC, a Clinical Microbiology Procedures Handbook, valamint a saját laboratóriumi szabvány műveleti leírás előírásai szerint kell összegyűjteni és szállítani. 6,8 EMÉSZTÉS, DEKONTAMINÁCIÓ ÉS KONCENTRÁLÁS A különböző testrészekből vett mintákat az csőbe való inokulálás előtt a következőképpen kell preparálni: KÖPET: A mintákat a CDC Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory fejezetében előírt NALC-NaOH módszer szerint kell kezelni. 6 Alternatívaként használhatja még a mycobaktériumos minták kezeléséhez való BBL MycoPrep készletet is. (Lásd: Kiszerelések ). GASZTRIKUS MINTÁK: A mintákat a köpethez hasonló módon kell dekontaminálni. Ha a minta térfogata meghaladja a 10 ml-t, centrifugálással koncentrálja a mintát. Az üledéket oldja fel 5 ml steril vízben, majd dekontaminálja. Ha a minta túl sűrű vagy nyálkás, adjon hozzá egy kevés (50 100 mg) NALC-port. Dekontaminálás után, az cső inokulálása előtt újból koncentrálja a mintát. TESTNEDVEK (agy-gerincvelői folyadék, szinoviális folyadék, pleurális folyadék stb.): Azok a minták, amelyeket aszeptikus módon vettek le, és várhatóan nincs bennük más baktérium, dekontaminálás nélkül is felhasználhatók az inokuláláshoz. Ha a minta térfogata meghaladja a 10 ml-t, centrifugálással (3000 x g) koncentrálja azt 15 percig. A felülúszót távolítsa el. Inokulálja az csövet az üledékkel. Azokat a mintákat, amelyek várhatóan más baktériumokat is tartalmaznak, dekontaminálni kell. SZÖVETMINTÁK: A szövetmintákat a CDC Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory fejezetében leírtak szerint kell kezelni. 6 SZÉKLET: Szuszpendáljon 1 g bélsarat 5 ml Middlebrook Broth táplevesben. A szuszpenziót 5 másodpercig vortexelje. A mintákat a CDC Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory fejezetében előírt NALC-NaOH módszer szerint kell kezelni. 6 ELJÁRÁS Szállított anyagok: BBL Mycobacteria Growth Indicator Tube csövek, 4 ml, 25-ös és 100-as csomagolásban, vagy BBL OADC, 6 palack, 15 ml, vagy BBL PANTA Antibiotic Mixture, 6 liofilizált palack (lásd: Kiszerelések ). Szükséges, de nem szállított anyagok: Falcon márkájú 50 ml-es centrifugáló cső, 4% nátrium-hidroxid, 2,9% nátrium-citrát oldat, N-acetil-L-cisztein por, foszfát puffer ph 6,8, vortex mixer, 37 C-os inkubátor, 1 ml-es steril pipetták, steril transzfer pipetták, UV transzilluminátor (365 nm) vagy Wood-lámpa hosszúhullámú égővel vagy fekete fénnyel, 0,4% nátrium-szulfit oldat (az eljárás menetét lásd alább), BBL Middlebrook and Cohn 7H10 Agar, BBL MycoPrep, BBL Middlebrook 7H9 Broth (lásd: Kiszerelések ) vagy más mycobakteriális agar vagy tojás alapú tápközeg, szövethomogenizáló vagy steril tampon, BBL Normal Saline (lásd: Kiszerelések ), mikroszkóp és a lemezek festéséhez szükséges anyagok, 100 µl-es és 500 µl-es pipetták, az ezekhez való pipettahegyek, 5% juhvéres agar lemez, Eye Guard Spectacles (UVP #UVC-303, San Gabriel, CA) szemvédők, tuberkulocid fertőtlenítőszer. Az csövek inokulálása: 1. Címkézze fel az csövet a minta számával. 2. Tekerje le a kupakot, és aszeptikusan adjon hozzá 0,5 ml OADC dúsítót. 3. Aszeptikusan adjon hozzá 0,1 ml összekevert PANTA antibiotikum-keveréket. A jobb eredmények eléréséhez az OADC dúsítót és a PANTA antibiotikum-keveréket közvetlenül a mintával való inokulálás előtt tegye a csőbe. 4. Adjon hozzá 0,5 ml-t a fentiek szerint elkészített, koncentrált mintaszuszpenzióból. Ezenkívül tegyen egy csepp mintát (0,1 ml) egy 7H10 agar lemezre (vagy más szilárd mycobaktérium táptalajra, illetve tojás alapú tápközegre). MEGJEGYZÉS: A 0,5 ml-nél nagyobb térfogatú minta növelheti a kontaminációt vagy más nemkívánatos módon befolyásolhatja a csövek teljesítményét. 5. Gondosan zárja vissza a csövet, és alaposan keverje össze. 2

6. A csöveket 37 C hőmérsékleten kell inkubálni. Azon minták esetében, amelyekben másféle inkubációs feltételeket igénylő mycobaktériumokat sejtenek, egy második cső is inokulálható, és az a megfelelő hőmérsékleten (pl. 30 C vagy 42 C) inkubálható. Az inokuláció és az inkubáció történjen a megfelelő hőmérsékleten. Azon minták esetében, amelyekben Mycobacterium haemophilum jelenléte sejthető, hemin forrást kell biztosítani a csőben az inokuláláskor, és a csövet 30 C hőmérsékleten kell inkubálni. Aszeptikusan helyezzen egy BBL Taxo Differentiation Discs X korongot minden olyan csőre, amelyhez a minta inokulálása előtt hemint adtak (lásd: Kiszerelések ). 7. Az inkubálást követő második naptól kezdve naponta olvassa le a csöveket, A csövek leolvasása című, alábbi eljárás szerint. Fluoreszcencia negatív és pozitív kontroll csövek készítése: A pozitív és negatív kontrollcsövek kizárólag a fluoreszcencia kimutatására szolgálnak, a tápközeg teljesítményének megállapítására nem használhatók. Pozitív kontroll csövek: 1. Öntse ki a tápközeget egy nem inokulált csőből. 2. Címkézze fel a csövet pozitív kontrollként, és írja fel rá a dátumot. 3. Készítsen 0,4%-os nátrium-szulfit oldatot (100 ml steril desztillált vagy ioncserélt víz és 0,4 g nátrium-szulfit). A fel nem használt adagot dobja ki. 4. Adjon 5 ml nátrium-szulfit oldatot a csőbe, tegye vissza és húzza meg a kupakot, majd felhasználás előtt legalább 1 órán át hagyja állni a csövet szobahőmérsékleten. 5. A pozitív kontroll csöveket többször is fel lehet használni. Ha a pozitív kontroll csöveket szobahőmérsékleten tárolják, akár négy hétig is használhatók. Negatív kontroll cső: Kontrollként egy fel nem nyitott, nem inokulált csövet kell használni. A csövek leolvasása: 1. Az eredmények helyes értelmezéséhez egy negatív és egy pozitív kontroll használata szükséges. 2. Vegye ki a csöveket az inkubátorból. Helyezze a csöveket ultraibolya fénybe egy pozitív és egy inokulálatlan (negatív) kontroll cső mellé. Lehetőleg egyszerre csak egy állvány tartalmát (4*10 cső) helyezze az ultraibolya fénybe. MEGJEGYZÉS: A fluoreszcencia vizsgálatakor viseljen UV-védőszemüveget. A normál szobai megvilágítás a legmegfelelőbb. A csövek leolvasását ne végezze napfényes vagy elsötétített helyiségben. 3. Szabad szemmel állapítsa meg, melyek azok az csövek, amelyek erős fluoreszcenciát mutatnak. A fluoreszcenciát a cső aljában látszó élénk narancssárga szín mutatja, amely a felülúszóban is visszatükröződhet. Ekkor az adott csövet ki kell venni az állványból, és össze kell hasonlítani a pozitív és negatív kontroll csővel. A pozitív kontrollnak erős fluoreszcenciát (nagyon élénk narancssárga színt) kell mutatnia. A negatív kontrollnak csak nagyon gyengén vagy egyáltalán nem szabad fluoreszkálnia. Ha az cső fluoreszcenciája inkább a pozitív kontrolléhoz hasonlítható, akkor a cső pozitív. Ha a fluoreszcencia inkább a negatív kontrollhoz hasonlít, akkor a cső negatív. A szaporodást a tápközegben látható inhomogén turbiditás, illetve kis szemcsék vagy pelyhek is jelezhetik. 4. A pozitív csövek esetében saválló festést kell végezni. A kenetre negatív csövek esetén meg kell vizsgálni a bakteriális szennyeződés lehetőségét. Az azonosításhoz és a gyógyszer-érzékenységi tesztekhez a továbboltást a BBL csövekből kell elvégezni. 5. A negatív csöveket továbbra is naponta le kell olvasni nyolc héten keresztül, vagy a mintától és a laboratóriumi gyakorlattól függően akár hosszabb ideig is. A leolvasás ütemezése ettől eltérő is lehet. Ha néhány napig, például hétvégén, kimarad a csövek leolvasása, azzal eltolódhat a pozitív csövek detektálása; ez azonban nem befolyásolja a tápközeg hatékonyságát. A csövek kidobása előtt szabad szemmel egyenként meg kell vizsgálni a turbiditás vagy kis szemcsék jelenlétét. A negatív csöveket nem lehet újra felhasználni. Ha mycobakteriális szaporodás sejthető, kövesse a Preparálás egy pozitív csőből című alábbi eljárást. Fertőzött csövek újra preparálása: Fertőzött csövek újra dekontaminálhatók és újra koncentrálhatók ugyanazzal az eljárással, ahogy a mintát először is kezelték. 1. Öntse a kontaminálódott cső tartalmát egy 50 ml-es műanyag centrifugacsőbe. 2. Adjon 5 ml NALC-NaOH-oldatot a centrifugacsőbe. Szorítsa a kupakot a csőre, majd vortexelje a csövet 5 20 másodpercig. 3. Hagyja a csövet 15 20 percig állni. Ne kezelje 20 percnél tovább. 4. Adjon a csőbe 35 ml 6,8 ph-értékű steril foszfát puffert. Tegye vissza a kupakot, és keverje össze a cső tartalmát. 5. Koncentrálja a mintát centrifugában 3000 x g sebességen, 15 percig. 6. Óvatosan öntse le a felülúszót. Szuszpendálja újra az üledéket steril 6,8 ph-értékű foszfát pufferrel egy steril Pasteur-pipetta segítségével. 7. 0,5 ml-nyi szuszpenzióval inokuláljon egy új csövet. Felhasználói minőségellenőrzés: A minőség-ellenőrzési vizsgálatokat a vonatkozó helyi, állami és/vagy szövetségi jogszabályoknak és akkreditációs követelményeknek, illetve a laboratórium standard minőség-ellenőrzési eljárásainak megfelelően kell elvégezni. A megfelelő minőségellenőrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni az érvényes CLSI előírásokat és a CLIA szabályzatot. A minőség-ellenőrzési tanúsítványok a BD webhelyén találhatók. A minőség-ellenőrzési tanúsítványok felsorolják a teszt-mikroorganizmusokat, beleértve a CLSI M22-A3 szabvány (Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media) által leírt ATCC tenyészeteket. 9 MEGJEGYZÉS: A Middlebrook 7H9 tápleves (kiegészített) a CLSI M22-A3 alapján mentesül a felhasználói minőség-ellenőrzés alól. 9 3

EREDMÉNYEK A tenyészet-pozitív minták a látható fluoreszcencia, inhomogén turbiditás, illetve kis szemcsék vagy pelyhek jelenléte alapján azonosíthatók az inokulált csőben. A pozitív csöveket tovább kell oltani, és saválló kenetet kell készíteni. A pozitív saválló kenet eredmény azt jelenti, hogy a csőben feltételezhetően élő mikroorganizmusok vannak. Preparálás egy pozitív csőből: MEGJEGYZÉS: Minden lépést biológiai biztonsági fülkében kell elvégezni. a) Vegye le az csövet az állványról. b) Egy steril transzfer pipetta segítségével a festések elkészítéséhez (saválló és gram-festés) vegyen ki mintát a cső aljából (megközelítően 0,1 ml-t). c) Vizsgálja meg a keneteket és a preparátumokat. Az elsődleges eredményeket csak a saválló festés eredményeinek ismeretében adja ki. Ha a saválló baktériumkenet pozitív, oltsa át szilárd tápközegre, és a következő jelentést írja: szaporodás pozitív, saválló baktériumkenet pozitív, azonosítás függőben. Ha nem saválló baktériumok vannak jelen, a következő jelentést írja: Szaporodás pozitív, saválló baktériumkenet pozitív, fertőzött. Ha mikroorganizmus nem található, nincs jelenthető eredmény. Oltsa tovább a táplevest a vér agar lemezre és a mycobakteriális tenyészet tápközegbe; ismételje meg a kenetet fehérje hozzáadásával, hogy az inokulum megfelelően odatapadjon a lemezhez. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Az csőben a mycobaktériumok detektálása függ a mintában található mikroorganizmusok számától, a mintavétel módjától, a páciens tényezőitől (pl. mutat-e tüneteket), a korábbi kezelésektől és a minta preparálásától. Ajánlott az N-acetil-L-cisztein nátrium-hidroxidos (NALC-NaOH) vagy az oxálsavas dekontaminálási módszert alkalmazni. Más dekontaminációs módszereket a BBL tápközeggel összefüggésben nem vizsgáltak. Az emésztő-dekontamináló oldatok káros hatással lehetnek a mycobaktériumokra nézve. A telepmorfológiát és színt csak szilárd táptalajon lehet meghatározni. A mycobaktériumok savállósága változhat a törzs, a tenyészet kora és más változók függvényében. A mikroszkopikus morfológia állandóságát a BBL tápközeggel kapcsolatban még nem vizsgálták. Egy saválló kenet pozitív csövet az azonosításhoz és a gyógyszer-érzékenységi tesztek elvégzéséhez, mind szelektív, mind nem szelektív mycobakteriális tápközegre tovább lehet oltani. A pozitívnak tűnő csövek más, nem mycobaktérium fajokat is tartalmazhatnak. A nem mycobaktérium fajok elnyomhatják a mycobaktériumokat. Az ilyen csöveket újra kell dekontaminálni és tenyészteni. A pozitívnak tűnő csövek egy vagy több mycobaktérium fajt is tartalmazhatnak. A gyorsabban szaporodó mycobaktériumoknál hamarabb alakulhat ki pozitív fluoreszcencia, mint a lassabban szaporodóknál, ezért a mintában található összes mycobaktérium pontos azonosításához rendkívül fontos a pozitív csövek továbboltása. A 0,5 ml-nél nagyobb térfogatú minta növelheti a kontaminációt vagy más nemkívánatos módon befolyásolhatja az csövek működését. Az tápleves tápanyaggazdagsága és nem szelektív volta miatt, igen fontos a lehetséges befertőződések minimalizálása végett az előírt emésztési/dekontaminálási módszereket betartani. Az eljárási utasítások betartása elengedhetetlen a mycobaktériumok optimális azonosításához. A PANTA antibiotikum-keverék használata, bár alkalmazása minden nem-steril minta esetében szükséges, némely mycobaktériumot gátolhat. Végső továbboltást klinikai vizsgálatokban rutinszerűen nem végeztek. Így a tényleges fals negatív arány (amely azt az csövet jelenti, amely a nyolchetes inkubálási szakaszban negatív maradt, tovább lett oltva, és abban mycobakteriális organizmus tenyészett ki) jelen pillanatban nem határozható meg. Oltásos tenyésztési vizsgálatot végeztek 23 (ATCC és vad törzsek) mycobaktérium faj bevonásával; a használt inokulum sűrűsége 10 3 10 5 CFU/mL volt. Az cső a következő fajokat ismerte fel pozitívként: M. africanum M. gordonae* M. nonchromogenicum M. terrae M. avium Complex* M. haemophilum M. phlei M. triviale M. chelonae* M. intracellulare M. scrofulaceum M. tuberculosis* M. flavescens* M. kansasii* M. simiae* M. vaccae M. fortuitum* M. malmoense M. smegmatis M. xenopi* M. gastri M. marinum M. szulgai *Az cső klinikai bevizsgálása során detektált fajok. Klinikai vizsgálatok során kimutattak mycobaktériumot légúti mintákból, gasztrikus mintákból, szövetekből, székletből és vér kivételével steril testnedvekből; mycobaktériumok más testnedvekből való kimutatását nem vizsgálták. 4

VÁRT ÉRTÉKEK 1 A BBL System rendszeren pozitív klinikai vizsgálati minták detektálási idejének gyakorisági megoszlása a következő ábrán látható. 30 25 20 15 10 5 0 TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK A BBL Mycobacteria Growth Indicator Tube csövet hat klinikai helyszínen vizsgálták, amelyek között mind közegészségügyi laboratóriumok, mind akut kórházi kezelési osztályok szerepeltek, földrajzilag elkülönülő helyszíneken. A vizsgált populációban voltak HIV-fertőzöttek, legyengült immunrendszerű betegek és szervátültetésen átesett betegek is. A BBL csöveket a BACTEC 460TB radiometrikus rendszerrel, a BBL SEPTI-CHEK AFB Mycobacteria Culture System rendszerrel, és a mycobaktériumoknak klinikai mintákból (kivéve vérből és vizeletből) való detektálására és kimutatására használt hagyományos szilárd táptalajos tenyésztéssel hasonlították össze. A vizsgálat alatt összesen 2801 mintát vizsgáltak meg. A forrás szerint vizsgált minták eloszlása a következő volt: légzőszervi (78%), gyomor (0,4%), testnedv (9,8%), szövet (7,0%), széklet (2,5%), egyéb (2,4%). en 318 minta volt pozitív, amelyek a vizsgálat során detektált 330 izolátumból származott. A 330 izolátum közül 253 (77%) a BBL csövek segítségével, 260 (79%) a BACTEC 460TB és a BBL SEPTI-CHEK AFB segítségével, és 219 (66%) a hagyományos szilárd táptalaj segítségével lett detektálva. A BBL csöveknél a fals pozitív arány 0,5% volt ( fluoreszcens, AFB jelenléte nélkül) A BBL csövek az izolátumok 3,7%-át nem detektálták, amelyeket a referencia rendszerek közül egy vagy több detektált (BACTEC 460TB, BBL SEPTI-CHEK AFB vagy hagyományos szilárd táptalaj). Míg ez a százalék a detektálások jelentős csökkenését mutatja, nem utal valós fals negatív meghatározásra (lásd Az eljárás korlátai című szakaszt). Egy második tápközeg, ahogy azt korábban javasoltuk, növeli a mycobakteriális mikroorganizmusok detektálásának valószínűségét. A BBL csövek esetében az átlagos áttörési fertőzésarány 9,7% volt. BACTEC HELYSZÍNEK 2. táblázat - Mycobaktérium pozitív izolátumok kimutatása a klinikai vizsgálatok során Izolátumszám Teljes izolátumszám BACTEC BACTEC MTB 113 91 2 98 7 92 6 MAC 99 76 9 86 13 57 3 M. kansasii 5 2 0 5 1 4 0 M. fortuitum 9 5 3 3 1 5 3 M. chelonae 2 0 0 2 1 1 0 M. xenopi 2 0 0 2 2 0 0 M. simiae 1 1 0 1 0 0 0 M. gordonae 11 4 1 4 1 9 5 M. flavescens 2 1 0 2 1 0 0 mycobaktérium 244* 180* 15* 203 27 168 17 *MEGJEGYZÉS: Ez az adat nem tartalmaz 14 kizárólag izolátumot. Feltételezett azonosítást végeztek az ID végső igazolása nélkül. 5

SEPTI-CHEK HELYSZÍNEK 3. táblázat - Mycobaktérium pozitív izolátumok kimutatása a klinikai vizsgálatok során Izolátumszám Teljes izolátumszám SEPTI-CHEK SEPTI-CHEK MTB 30 25 1 29 2 26 0 MAC 34 26 5 28 2 25 0 M. kansasii 1 1 1 0 0 0 0 M. gordonae 2 2 2 0 0 0 0 ÖSSZES MYCO 67* 54* 9* 57 4 51 0 *MEGJEGYZÉS: Ez az adat nem tartalmaz 5 kizárólag izolátumot. Feltételezett azonosítást végeztek az ID végső igazolása nélkül. KISZERELÉSEK Kat. Sz. Leírás 245111 BD BBL Mycobacteria Growth Indicator Tubes, 4 ml, 25 cső/doboz. 245113 BD BBL Mycobacteria Growth Indicator Tubes, 4 ml, 100 cső/doboz. 245116 BD BBL OADC, 15 ml, 6 palack/doboz. Minden palack 25 csőhöz elegendő. 220908 BD BBL Lowenstein-Jensen Medium Slants, 10-es csomagban (20 x 148 mm-es csövek kupakkal). 220909 BD BBL Lowenstein-Jensen Medium Slants, 100-as csomagban (20 x 148 mm-es csövek kupakkal). 240862 BD BBL MycoPrep Specimen Digestion/Decontamination Kit, tíz 75 ml-es üveg NALC-NaOH oldat és 5 csomag foszfát puffer. 240863 BD BBL MycoPrep Specimen Digestion/Decontamination Kit, tíz 150 ml-es üveg NALC-NaOH oldat és 10 csomag foszfát puffer. 245114 BD BBL PANTA Antibiotic Mixture, liofilizált, 6 palack/doboz. Minden palack 25 csőhöz elegendő. 220959 BD BBL Middlebrook and Cohn 7H10 Agar Slants, 100/doboz. 295939 BD BBL Middlebrook 7H9 Broth, 8 ml, 10 cső/csomag. 221818 BD BBL Normal Saline, 5 ml, 10-es csomag. 221819 BD BBL Normal Saline, 5 ml, 100/doboz. 231729 BD BBL Taxo Differentiation Discs X, 50 korongos kazetta. IRODALOMJEGYZÉK 1. Bloom, B.R., and C.J.L. Murray. 1992. Tuberculosis: commentary on a reemergent killer. Science 257:1055-1064. 2. Horsburg Jr., C.R. 1991. Mycobacterium avium complex infection in the acquired immunodeficiency syndrome. N. Engl. J. Med. 324:1332-1338. 3. Tenover, F.C., et al. 1993. The resurgence of tuberculosis: Is your laboratory ready? J. Clin. Microbiol. 31:767-770. 4. Cohn, M.L., R.F. Waggoner, and J.K. McClatchy. 1968. The 7H11 medium for the cultivation of mycobacteria. Am. Rev. Resp. Dis. 98:295-296. 5. Youmans, G.P. 1979. Cultivation of mycobacteria, the morphology and metabolism of mycobacteria, p. 25-35. Tuberculosis. W.B. Saunders Company, Philadelphia. 6. Kent, P.T., and G.P. Kubica. 1985. Public health mycobacteriology: A guide for the level III laboratory. USDHHS, Centers for Disease Control, Atlanta. 7. Bloodborne pathogens. Code of Federal Regulations, Title 29, Part 1910.1030, Federal Register 1991, 56:64175-64182. 8. Isenberg, Henry D. 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. Műszaki szerviz BD Diagnostics: Az Amerikai Egyesült Államokon kívül vegye fel a kapcsolatot a BD képviseletével, vagy munkatársainkkal a www.bd.com/ds címen. 6

Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / Katalogo numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС In vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання Do not reuse / Не използвайте отново / Nepoužívejte opakovaně / Ikke til genbrug / Nicht wiederverwenden / Μην επαναχρησιμοποιείτε / No reutilizar / Mitte kasutada korduvalt / Ne pas réutiliser / Ne koristiti ponovo / Egyszer használatos / Non riutilizzare / Пайдаланбаңыз / Tik vienkartiniam naudojimui / Nelietot atkārtoti / Niet opnieuw gebruiken / Kun til engangsbruk / Nie stosować powtórnie / Não reutilize / Nu refolosiţi / Не использовать повторно / Nepoužívajte opakovane / Ne upotrebljavajte ponovo / Får ej återanvändas / Tekrar kullanmayın / Не використовувати повторно Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA Benex Limited Pottery Road, Dun Loaghaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2015 BD 7