Sürgıs vérválasztási igények: egyidejőleg jelen lévı antitestek tipizálása. DiaMed ID-antigén profil I-II-III kártyák használatának tapasztalatai Gergicsné Simonyi Gabriella, Izsák Péterné, Dr. Kálmán Flóra, Dr. Gyulai Ildikó
I. Bevezetés Sürgısségi vérválasztási igény esetén ellenanyaggal rendelkezı betegnél gyakran nehéz helyzet elıtt áll a Vérellátó Vércsoport-szerológiai Laboratóriuma.
Olyan esetet mutatunk be, ahol a vizsgálat során több, egyidejőleg jelen lévı vércsoport-szerológiailag fontos antitest azonosítását kellett sürgısséggel elvégezni, hogy ennek alapján megfelelı antigén tulajdonságú donorvért tudjunk biztosítani.
A betegek vértranszfúzióját megelızıen kompatibilitási vizsgálatsorozatot kell a Vérellátó szerológiai laboratóriumának elvégezni.
Transzfúzió elıtti laboratóriumi vizsgálatok:
- Laboratóriumi ABO és RhD vércsoport meghatározások: A vörösvérsejtek ABO és RhD antigéntulajdonságának és a savóban lévı reguláris anti-a és anti-b ellenanyagok meghatározásán alapul. Idıigénye: kb. 15 perc.
- Vércsoportszerológiai ellenanyagszőrés: Klinikailag jelentıs irreguláris antitestek kimutatása és azonosítása ismert antigéntulajdonságú tesztvörösvérsejtekkel Vizsgálat idıigénye: 30-40 perc.
Amennyiben az ellenanyagszőrés eredménye pozitív, az antitest azonosítást el kell végezni, a betegnek választott, célantigénre nézve negatív készítményt kell adni. Az ellenanyag azonosítási vizsgálat idıigénye: 30-40 perc.
-Direct Coombs vizsgálat: A vörösvérsejtek felszínéhez kötött antitesteket (és/vagy komplementet) kimutató eljárás Idıigénye: 15 perc.
- Kompatibilitási vizsgálat utolsó lépése: Választott vörösvérsejtkészítmény laboratóriumi keresztpróbája Idıigénye: 30-40 perc.
Amint a felsorolt vizsgálati idıkbıl érzékelhetı, egy problémamentes negatív eredményő ellenanyag vizsgálatnál is a vérválasztás idıigénye 1,5-2 óra. Klinikailag jelentıs antitest esetén a megfelelı antigén tulajdonságú vérkészítmény választása több órát, esetenként 1 napot is igénybe vehet.
Az elıadásban tárgyalt esetnél több antitest együttes jelenléte miatt az ellenanyagok azonosítását többféle tesztsejt panellel kellett elvégezni.
A vizsgálatokat és értékelést azonban jelentısen fel lehet gyorsítani a DiaMed gyártmányú antigén-profil I-II-III kártyák használatával: behatárolható,hogy milyen specificitású antitestek jöhetnek számításba:
Elızetes keresztpróbás válogatás során kapott negatív illetve pozitív keresztpróbájú donorvér és a vizsgált vérminta antigén tulajdonságainak ismerete segít az antitestek meghatározásában.
Metodikák A vércsoportszerológiai vizsgálatoknál antigén-antitest reakciót vizsgálunk. Módszerek: Hagyományos csöves technika: alacsony ionerısségő oldat alkalmazásával, amely az antitest kötıdés erısségét megnöveli.
Oszlopagglutináció: DiaMed géltecnika: az agglutinátum centrifugálást követıen a gél felszínén marad, a szabad sejtek a géloszlop aljára süllyednek.
Az antitest szőrés és azonosítás mindkét módszer esetében többféle gyártmányú tesztsejt-szőrı illetve panelsor alkalmazásával történhet.
Differenciál adszorpció: A savóban lévı antitesteket szét kell választani, külön-külön kiemelni a savóból. Ez az eljárás az adszorpció: az egyes antitesteket a specificitásuknak megfelelı antigéntulajdonságú vörösvérsejtekkel adszorbeáljuk ki a savóból, majd a savóban megmaradó antitest(ek)et vizsgáljuk.
Elúció: Az abszorbeálásra használt vörösvérsejttel megkötött antitesteket elúció után azonosítjuk ( Direct-Coombs pozitív sejtrıl leeluáljuk a megkötött antitesteket, az antigén-antitest komplex nem kovalens kötéseinek megbontásával).
Esetismertetés M.J-né 65 éves nıbeteget nem ismert tumor és anemizálódás okán többször transzfundálták elıbb választatlan, majd lázas transzfúziós szövıdményt követıen választott vörösvérsejt koncentrátumokkal.
Újabb transzfúziós szövıdmény (masszív haemoglobinuria, icterus) fellépte után a beteget a BKMÖ- Kórházába (Kecskemét) szállították, ahol a tervezett kemoterápiás kezelés miatt a kezelıorvos sürgısséggel 2 E választott vörösvérsejt koncentrátumot igényelt.
A sürgısségi ellátásra való tekintettel az alábbi (néhány órát <3-4> igénybe vevı) protokoll alapján sikerült 2 E kompatibilis vörösvérsejt koncentrátumot biztosítani a négy, ezek közül két ritka vércsoportrendszerbeli antitesttel rendelkezı beteg számára.
Vércsoportszerológia vizsgálatok részletesen: 1. Beteg vércsoportja: A Rh(D): pozitív Rh-fenotípusa: CcDee C w -antigén: negatív, Kell-antigén: negatív 2. Direct Coombs: negatív 3. Ellenanyagszőrés: pozitív (LISS/AGT és enzimes közegben)
4. Ellenanyag azonosítás: Az azonosítást oszlopagglutinációs módszerrel indítottuk, minden tesztsejt 4 erısséggel reagált LISS/AGT és enzimes közegben egyaránt. A reakció Coombs-os és enzimes közegben reagáló aspecifikus pánalloantitestre utalt.
Csöves, 3 lépcsıben leolvasott panelsornál (OVSZ panel) LISS közegben 37 C-on anti-kell mutatható ki. Másik tesztpanellel (BIOTEST) csöves módszernél enzimatizált sejtekkel 37 Con anti-e mutatható ki nyomokban.
Csöves reakciókkal anti-kell és anti-e, valamint ismeretlen specificitású Coombs-os alloantitesteket mutattunk ki.
5. Következı lépés: kompatibilis vér keresése keresztpróbás válogatással: 24 E Rh-fenotípus és Kell-antigén azonos vvs. conc-ból 1E, majd további keresztpróbás válogatásnál 2E vvs. conc. bizonyult kompatibilisnek.
Elvégeztük a kompatibilis vörösvérsejt koncentrátumok és a beteg antigén tulajdonságainak vizsgálatát DiaMed antigén profil I-II-III kártyákkal
Kp b Jk a Jk b M N S s Fy a Fy b Beteg vvs. - - Donor vvs. 10202699 - - - - X.pr: neg 10202802 X.pr: neg - - - 10201650 - - - x.pr:neg 10201655 X.pr: poz -
Látható, hogy a beteg és mindhárom kompatibilis E és Kell-antigén negatív vörösvérsejt koncentrátum Jk a és Fy b antigén tulajdonsága megegyezik: negatív.
Az antigén tulajdonságok ismeretében a szóba jöhetı antitestek: Anti-Kell jelenléte (BIOTEST csöves panel) bizonyított Anti-E jelenléte (OVSZ csöves panel) bizonyított Anti-Jk a jelenléte (antigén profil vizsgálatok alapján) valószínősíthetı Anti-Fy b jelenléte (antigén profil vizsgálatok alapján) valószínősíthetı
Transzfúziós javaslat sürgısségi ellátáshoz Transzfúzió esetén választott, Kell, E, Jk a, Fy b antigénre nézve negatív vörösvérsejt koncentrátum adása javasolt.
Feltételezett/kimutatott antitestek jelenlétének bizonyítása
Differenciál adszorpcióval és elúcióval: (idıigény: kb. 1 munkanap) a feltételezett anti-jk a és anti-fy b antitestek jelenlétét igazoltuk, ami a sürgısségi ellátás transzfúziós javallatát alátámasztotta.
Transzfúziós igény A beteg transzfúziós igénye 10-14 naponként 1-3E vörösvérsejt koncentrátum. A transzfúzió biztosítása a célantigénekre negatív, elızetesen kivizsgált donorok vérkészítményével történt.
A beteg számára kompatibilis vér gyakorisága: 1000 donorból 6 fı, azaz 6, ami a kezelıorvossal és a donorokkal való szoros együttmőködést kívánt a transzfúziós igény ellátásához.
Összefoglalás Az antigén profil kártyákkal történı antigén tulajdonságok meghatározása igen gyors: 3 kártyával 16 antigén határozható meg 20-25 perc alatt.
A módszer használatának elınye: Antitest azonosítás során szóba jövı alloantitestek behatárolása a vérválasztási idıt lerövidíti. Segítséget nyújt a differenciál adszorpciós vizsgálat tervezéséhez. Korlátja: Direct-Coombs pozitív mintáknál nem használható.
Köszönöm a megtisztelı figyelmet!