2.6.13. NEM STERIL TERMÉKEK MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATA: VIZSGÁLAT MEGHATÁROZOTT MIKROORGANIZMUSOKRA

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 1 07/2009:20613 2.6.13. NEM STERIL TERMÉKEK MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATA: VIZSGÁLAT MEGHATÁROZOTT MIKROORGANIZMUSOKRA 1. BEVEZETÉS Az alábbiakban leírt vizsgálatok lehetővé teszik az adott körülmények között kimutatható, meghatározott mikroorganizmusok távollétének vagy korlátozott jelenlétének megállapítását. A vizsgálatok kialakításának fő szempontja az volt, hogy egy adott anyagról vagy termékről megállapítható legyen: megfelel-e a mikrobiológiai minőségre megállapított követelménynek. Amennyiben a vizsgálatokat ebből a célból végezzük, az előírt mintaszámot is figyelembe véve az alábbi útmutatások szerint járunk el, és az eredményeket a következők szerint értelmezzük. Más mikrobiológiai eljárások, például automatizált módszerek is használhatók, amennyiben igazolták, hogy egyenértékűek a Gyógyszerkönyvben leírt módszerrel. 2. ÁLTALÁNOS ELJÁRÁSOK A mintákat a 2.6.12 általános fejezetben leírtak szerint készítjük elő. A termék esetleges antimikrobás hatását adott esetben amennyire lehetséges meg kell szüntetni vagy semlegesíteni kell, a 2.6.12. általános fejezetben leírtak szerint. Amennyiben a mintaelőkészítésnél felületaktív anyagokat használunk, úgy a 2.6.12 általános fejezetben leírtak szerint igazolni kell, hogy a mikroorganizusokra nem toxikusak és az inaktiválószerekkel nem összeférhetetlenek. 3. A TÁPTALAJOK MIKROORGANIZMUS-NÖVEKEDÉST ELŐSEGÍTŐ ÉS GÁTLÓ TULAJDONSÁGAI, A VIZSGÁLAT ALKALMASSÁGA ÉS A NEGATÍV KONTROLLOK Meg kell állapítani, hogy a vizsgálat alkalmas-e mikroorganizmusok kimutatására a vizsgálandó termék jelenlétében. A módszer alkalmasságát újra igazolni kell, ha a

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 2 módszerben vagy a termékben olyan változás történik, amely befolyásolhatja a vizsgálat eredményét. 3-1. REFERENCIATÖRZSEK KÉSZÍTÉSE A referenciatörzsek stabilizált szuszpenzióit használjuk vagy az alábbiak szerint referenciatörzseket készítünk. Oltócsíra-tenyészetet fenntartó módszereket (oltócsíra-rendszerek) alkalmazunk, oly módon, hogy a beoltáshoz használt életképes mikroorganizmusok az oltócsíra-törzstételhez képest legfeljebb 5 átoltásból származzanak. 3-1-1. Aerob mikroorganizmusok. Az egyes baktérium referenciatörzseket különkülön folyékony szója-kazein on vagy szója-kazein-agar on 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. A Candida albicans referenciatörzset külön Sabouraud-glükóz-agar on vagy folyékony Sabouraud-glükóz on 20 25 C-on 2 3 napig inkubáljuk. Staphylococcus aureus pl. ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 vagy NBRC 13276; Pseudomonas aeruginosa pl. ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 vagy NBRC 13275; Escherichia coli pl. ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 vagy NBRC 3972; Salmonella enterica ssp. enterica typhimurium szerotípus, pl. ATCC 14028, vagy más lehetőségként Salmonella enterica ssp. enterica abony szerotípus, pl. NBRC 100797, NCTC 6017 vagy CIP 80.39; Candida albicans pl. ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 vagy NBRC 1594. A szuszpenziók készítéséhez nátrium-klorid pepton tompítóoldatot (ph 7,0) vagy foszfát tompítóoldatot (ph 7,2) használunk. A szuszpenziókat 2 órán belül, illetve, ha 2 8 C-on tároltuk, 24 órán belül felhasználjuk. 3-1-2. Clostridiumok. Például a Clostridium sporogenes következő törzseit használhatjuk: ATCC 11473 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) vagy ATCC 19404 (NCTC 532 vagy CIP 79.03) vagy NBRC 14293. A clostridiumreferenciatörzset anaerob körülmények között, clostridiumokhoz készült megerősített on 30 35 C-on 24 48 órán át szaporítjuk. A vizsgálati beoltásra a Cl. sporogenes vegetatív sejtjei friss szuszpenziójának készítése és azt követő hígítása alternatívájaként stabil spóraszuszpenzió is használható. A stabil szuszpenzió 2 8 C-on egy megfelelően igazolt időtartamon belül eltartható. 3-2. NEGATÍV KONTROLL

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 3 A vizsgálati körülmények ellenőrzésére negatív kontroll vizsgálatot végzünk, melynek során a vizsgálandó készítmény helyett a választott hígítófolyadékot alkalmazzuk. Ebben mikroorganizmus-növekedés nem következhet be. Negatív kontrollt a 4. részben leírt vizsgálatok során is használunk. Azokat az eseteket, amikor a negatív kontrollok nem megfelelő eredményt adnak, ki kell vizsgálni. 3-3. TÁPTALAJOK MIKROORGANIZMUS-NÖVEKEDÉST ELŐSEGÍTŐ ÉS GÁTLÓ TULAJDONSÁGAI A kész ok, valamint a szárított ból vagy az összetevőiből készített ok minden gyártási tételét vizsgáljuk. A 2.6.13.-1. táblázat szerint ellenőrizzük a releváns ok megfelelő tulajdonságait. 2.6.13.-1. táblázat A ok mikroorganizmus-növekedést elősegítő, gátló és jelző tulajdonságai Táptalaj Tulajdonság Referenciatörzs Vizsgálat epeálló Gram-negatív baktériumokra Mossel-féle folyékony dúsító enterobaktériumokhoz Kristályibolya-neutrálvörösepesavas-agar glükózzal Szaporodás-serkentő Gátló Szaporodás-serkentő + jelző E. coli P. aeruginosa S. aureus E. coli P. aeruginosa Vizsgálat Escherichia coli-ra MacConkey-féle folyékony MacConkey-féle agar- Szaporodás-serkentő Gátló Szaporodás-serkentő + jelző E. coli S. aureus E. coli Vizsgálat Salmonella-ra Rappaport Vassiliadis-féle folyékony Salmonella-dúsító Szaporodás-serkentő Salmonella enterica ssp. enterica typhimurium szerotípus vagy Salmonella enterica ssp. enterica abony szerotípus Gátló S. aureus

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 4 Xilóz-lizin-dezoxikolát-agar Szaporodás-serkentő + jelző Salmonella enterica ssp. enterica typhimurium szerotípus vagy Salmonella enterica ssp. enterica abony szerotípus Vizsgálat Pseudomonas aeruginosa-ra Cetrimid-agar Szaporodás-serkentő Gátló P. aeruginosa E. coli Vizsgálat Staphylococcus aureus-ra Mannit-nátrium-klorid Szaporodás-serkentő + jelző Gátló S. aureus E. coli Vizsgálat clostridiumokra Megerősített clostridiumokhoz Szaporodás-serkentő Cl. sporogenes Columbia-agar Szaporodás-serkentő Cl. sporogenes Vizsgálat Candida albicans-ra Sabouraud-glükóz folyékony Sabouraud-glükóz-agar Szaporodás-serkentő Szaporodás-serkentő + jelző C. albicans C. albicans A mikroorganizmus-növekedést elősegítő tulajdonság vizsgálata folyékony ok esetén: a megfelelő adott mennyiségét kisszámú (legfeljebb 100 CFU) megfelelő mikroorganizmussal beoltjuk. A beoltott t a megadott hőmérsékleten legfeljebb a vizsgálatban megadott legrövidebb időtartamig inkubáljuk. A mikroorganizmus-növekedés tisztán látható legyen, és mértéke hasonló legyen a egy korábban vizsgált és előzetesen jóváhagyott gyártási tételéhez. A mikroorganizmus-növekedést elősegítő tulajdonság vizsgálata szilárd ok esetén: a felszíni szélesztéses módszert alkalmazzuk. A lemezeket kisszámú megfelelő mikroorganizmussal (legfeljebb 100 CFU) beoltjuk, és a megadott hőmérsékleten legfeljebb a vizsgálatban megadott legrövidebb időtartamig inkubáljuk. A mikroorganizmus-növekedés hasonló mértékű legyen a egy korábban vizsgált és előzetesen jóváhagyott gyártási tételéhez. A gátló tulajdonság vizsgálata folyékony vagy szilárd ok esetén: a megfelelő t a megfelelő mikroorganizmus legalább 100 CFU mennyiségével beoltjuk. A okat a megadott hőmérsékleten legalább a vizsgálatban megadott leghosszabb időtartamig inkubáljuk. Mikroorganizmusszaporodás ne legyen megfigyelhető. A jelző tulajdonság vizsgálata: a felszíni szélesztéses módszert alkalmazzuk. A lemezeket kisszámú megfelelő mikroorganizmussal (legfeljebb 100 CFU) beoltjuk,

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 5 és a megadott hőmérsékleten annyi ideig inkubáljuk, ami a vizsgálatban megadott legrövidebb és leghosszabb időtartam közé esik. A mikroorganizmus-telepeknek küllemüket és jelző reakciójukat tekintve hasonlónak kell lenniük a egy korábban vizsgált és előzetesen jóváhagyott gyártási tételéhez. 3-4. A VIZSGÁLATI MÓDSZER ALKALMASSÁGA A mintaelőkészítést minden egyes vizsgálandó termék esetében a 4. rész megfelelő pontjában előírtak szerint végezzük. Az egyes referenciatörzseket keverés közben adjuk az előírt hoz. A referenciatörzseket egyenként oltjuk be. A beoltott vizsgálati készítményben a mikroorganizmusok legfeljebb 100 CFU-nak megfelelő mennyiségét alkalmazzuk. A vizsgálatot a 4. rész megfelelő pontja szerint végezzük; a legrövidebb előírt inkubálási időt alkalmazzuk. A megadott mikroorganizmusokat a 4. részben előírt jelző reakciókkal kell kimutatni. Amennyiben a termék bármilyen antimikrobás hatással rendelkezik, a vizsgálati módszert módosítani kell [lásd a 2.6.12 általános cikkely 4-5-3. pontját]. Amennyiben nem semlegesíthető az adott termék antimikrobás aktivitása a vizsgálandó mirkoorganizmussal szemben, úgy azt kell feltételezni, hogy a gátolt mikroorganizmus nem lesz jelen a termékben. 4. A TERMÉKEK VIZSGÁLATA 4-1. EPEÁLLÓ GRAM-NEGATÍV BAKTÉRIUMOK 4-1-1. Mintaelőkészítés és inkubálás. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termék legalább 1 g-jának tízszeres hígításából mintát készítünk, azzal az eltéréssel, hogy hígítófolyadékként szója-kazein folyékony t használunk. Az összekeverést követően a mintát 20 25 C-on annyi ideig inkubáljuk, amely elegendő a baktériumok újraélesztéséhez, szaporodásukhoz azonban nem (általában 2, de legfeljebb 5 óra). 4-1-2. Vizsgálat mikroorganizmus távollétére. Hacsak nincs más előírás, a termék 4-1-1. szerint készített, 1 g-nak megfelelő térfogatát enterobaktériumok dúsítására szánt Mossel-féle ba oltjuk. A beoltott t 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha telepek nem fejlődnek ki.

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 6 4-1-3. Kvantitatív vizsgálat. 4-1-3-1. Kiválasztás és átoltás. A 4-1-1. szerint készített terméket és/vagy annak rendre 0,1, 0,01 és 0,001 g (vagy 0,1, 0,01 és 0,001 ml) terméket tartalmazó hígításait megfelelő mennyiségű enterobaktériumok dúsítására szánt Mossel-féle ba oltjuk. A beoltott t 30 35 C-on 24 48 órán át inkubáljuk. Ezt követően a tenyészeteket egyenként glükóztartalmú kristályibolya-neutrálvörösepesavas-agar lemezre oltjuk át. A lemezeket 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. 4-1-3-2. Értékelés. A telepek megjelenése pozitív eredményt jelent. Feljegyezzük a termék legkisebb pozitív és a legnagyobb negatív eredményt adó mennyiségét. A 2.6.13.-2. táblázat alapján meghatározzuk a valószínű baktériumszámot. 2.6.13.-2. táblázat Az eredmények értékelése Az egyes termékmennyiségek esetén kapott eredmények 0,1 g vagy 0,1 ml 0,01 g vagy 0,01 ml 0,001 g vagy 0,001 ml Valószínű baktériumszám 1 g termékre vonatkoztatva + + + >10 3 + + >10 2 és <10 3 + >10 és <10 2 <10 4-2. ESCHERICHIA COLI 4-2-1. Mintaelőkészítés és inkubálás. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termék legalább 1 g-jának tízszeres hígításából mintát készítünk. A minta 10 ml-ét vagy 1 g, ill. 1 ml terméknek megfelelő mennyiségét megfelelő mennyiségű (a 3-4. pont szerint vizsgált) szója-kazein folyékony ba oltjuk. Az összekeverést követően a beoltott t 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. 4-2-2. Kiválasztás és átoltás. A tartály összerázását követően 1 ml szója-kazein folyékony t 100 ml MacConkey-ba viszünk át, és a keveréket 42 44 C-on 24 48 órán át inkubáljuk. Ezt követően Mac Conkey-agar-lemezre átoltva, a lemezt 30 35 C-on 18 72 órán át inkubáljuk. 4-2-3. Értékelés. A telepek megjelenése E. coli lehetséges jelenlétére utal. Az eredményt azonosítási vizsgálatokkal erősítjük meg.

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 7 A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha telepek nem jelennek meg, vagy ha az azonosítási vizsgálatok negatív eredményt adnak. 4-3. SALMONELLA 4-3-1. Mintaelőkészítés és inkubálás. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termékből mintát készítünk. A minta 10 g, ill. 10 ml terméknek megfelelő mennyiségét megfelelő mennyiségű (a 3-4. pont szerint vizsgált) szója-kazein folyékony ba oltjuk. Az összekeverést követően a beoltott t 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. 4-3-2. Kiválasztás és átoltás. 10 ml szója-kazein folyékony t 10 ml Salmonella dúsítására szánt Rappaport Vassiliadis-ba viszünk át, és a keveréket 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. Ezt követően xilóz-lizindezoxikolát-agar ra átoltást végzünk, majd a lemezeket 30 35 C-on 18 48 órán át inkubáljuk. 4-3-3. Értékelés. Jól fejlett, vörös, esetleg fekete centrummal rendelkező telepek megjelenése Salmonella lehetséges jelenlétére utal. Az eredményt azonosítási vizsgálatokkal erősítjük meg. A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha a leírt küllemű telepek nem jelennek meg, vagy ha az azonosítási vizsgálatok negatív eredményt adnak. 4-4. PSEUDOMONAS AERUGINOSA 4-4-1. Mintaelőkészítés és inkubálás. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termék legalább 1 g-jának tízszeres hígításából mintát készítünk. A minta 10 ml-ét vagy 1 g, ill. 1 ml terméknek megfelelő mennyiségét megfelelő mennyiségű (a 3-4. pont szerint vizsgált) szója-kazein folyékony ba oltjuk. Amennyiben transzdermális tapaszokat vizsgálunk, a minta 2.6.12 általános cikkelyben ( B. A harmonizált módszer 4-5-1. pont) leírtak alapján készült, 1 tapasznak megfelelő térfogatát steril membránszűrőn szűrjük, majd 100 ml szója-kazein folyékony ba visszük. Az összekeverést követően a beoltott t 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. 4-4-2. Kiválasztás és átoltás. Az átoltás cetrimid-agar-lemezre történik. Az inkubálás hőmérséklete 30 35 C, időtartama 18 72 óra. 4-4-3. Értékelés. A telepek megjelenése P. aeruginosa lehetséges jelenlétére utal. Az eredményt azonosítási vizsgálatokkal erősítjük meg.

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 8 A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha a telepek nem jelennek meg, vagy ha az azonosítási vizsgálatok negatív eredményt adnak. 4-5. STAPHYLOCOCCUS AUREUS 4-5-1. Mintaelőkészítés és inkubálás. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termék legalább 1 g-jának tízszeres hígításából mintát készítünk. A minta 10 ml-ét vagy 1 g, ill. 1 ml terméknek megfelelő mennyiségét megfelelő mennyiségű (a 3-4. pont szerint vizsgált) szója-kazein folyékony ba oltjuk. Amennyiben transzdermális tapaszokat vizsgálunk, a minta 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján készült 1 tapasznak megfelelő térfogatát steril membránszűrőn szűrjük, majd 100 ml szója-kazein folyékony ba visszük. Az összekeverést követően a beoltott t 30 35 C-on 18 24 órán át inkubáljuk. 4-5-2. Kiválasztás és átoltás. Az átoltás mannit-nátrium-klorid-agar-lemezre történik. Az inkubálás hőmérséklete 30 35 C, időtartama 18 72 óra. 4-5-3. Értékelés. Sárga/fehér, sárga zónával körülvett telepek megjelenése S. aureus lehetséges jelenlétére utal. Az eredményt azonosítási vizsgálatokkal erősítjük meg. A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha a leírt küllemű telepek nem jelennek meg, vagy ha az azonosítási vizsgálatok negatív eredményt adnak. 4-6. CLOSTRIDIUMOK 4-6-1. Mintaelőkészítés és hőkezelés. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termék legalább 2 g-jának vagy 2 ml-ének tízszeres hígításából (legalább 20 ml térfogatú) mintát készítünk. A kapott mintát két, legalább 10 ml térfogatú részre osztjuk, amelyek közül az egyiket 10 percig 80 Con melegítjük, majd gyorsan lehűtjük, a másikat viszont nem melegítjük. 4-6-2. Kiválasztás és átoltás. A két részre osztott mintaoldat mindkét részéből legalább 10-10 ml-t vagy 1 g, illetve 1 ml vizsgálandó terméknek megfelelő mennyiséget megfelelő mennyiségű (a 3-4. pont szerint vizsgált) clostridiumokhoz készült megerősített ba oltunk. A okat anaerob körülmények között 30 35 C-on 48 órán át inkubáljuk, majd Columbia-agar ra átoltást végzünk, amelyet ismét 30 35 C-on 48 órán át inkubálunk. 4-6-3. Értékelés. Endospórás vagy endospóráktól mentes, negatív kataláz-reakciót adó anaerob pálcák telepeinek megjelenése clostridiumok jelenlétére utal. Az eredményt azonosítási vizsgálatokkal erősítjük meg.

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 9 A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha a leírt küllemű telepek nem jelennek meg, vagy ha az azonosítási vizsgálatok negatív eredményt adnak. 4-7. CANDIDA ALBICANS 4-7-1. Mintaelőkészítés és inkubálás. A 2.6.12 általános cikkelyben leírtak alapján a vizsgálandó termékből mintát készítünk. A minta 10 ml-ét vagy legalább 1 g, ill. 1 ml terméknek megfelelő mennyiségét 100 ml Sabouraud-glükóz folyékony ba oltjuk. Az összekeverést követően a beoltott t 30 35 C-on 3 5 napig inkubáljuk. 4-7-2. Kiválasztás és átoltás. Az átoltás Sabouraud-glükóz-agar-lemezre történik. Az inkubálás hőmérséklete 30 35 C, időtartama 24 48 óra. 4-7-3. Értékelés. Fehér telepek megjelenése C. albicans lehetséges jelenlétére utal. Az eredményt azonosítási vizsgálatokkal erősítjük meg. A termék megfelel a vizsgálat követelményének, ha a leírt küllemű telepek nem jelennek meg, vagy ha az azonosítási vizsgálatok negatív eredményt adnak. A fejezet következő része tájékoztató jellegű. 5. AJÁNLOTT OLDATOK ÉS TÁPTALAJOK A következő oldatok és ok alkalmasnak bizonyultak a mikrobiológiai szennyezésekre előírt gyógyszerkönyvi vizsgálatokhoz. Más ok is használhatók, ha alkalmasságukat előzetesen igazoltuk. Tompító törzsoldat. Egy -es mérőlombikban 34 g kálium-dihidrogénfoszfátot 500 ml tisztított vízben oldunk. Az oldat ph-ját nátrium-hidroxiddal 7,2 ± 0,2-re állítjuk be, majd térfogatát tisztított vízzel -re egészítjük ki. Homogenizálást követően a tompítóoldatot tartályokba töltjük, sterilezzük és 2 8 C-on tároljuk. Foszfát tompítóoldat (ph 7,2). A tompító törzsoldatot tisztított vízzel 1:800 V/V arányban elegyítjük. Az oldatot sterilezzük. pepton tompítóoldat (ph 7,0) Kálium-dihidrogén-foszfát Dinátrium-hidrogén-foszfát-dihidrát 3,6 g 7,2 g; 0,067 M foszfáttal egyenértékű 4,3 g

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 10 Pepton (hús- vagy kazeinpepton) 1,0 g Az oldatot autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Szója-kazein folyékony Kazeinpepton (pankreász-hidrolizátum) Szójapepton (papain-hidrolizátum) Dikálium-hidrogén-foszfát Glükóz-monohidrát 17,0 g 3,0 g 2,5 g 2,5 g A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 7,3 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Szója-kazein-agar Kazeinpepton (pankreász-hidrolizátum) Szójapepton (papain-hidrolizátum) 1 1 A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 7,3 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Sabouraud-glükóz-agar Glükóz Állati szövet (pepszin-hidrolizátum) és kazeinpepton (pankreász-hidrolizátum) 1:1 arányú elegye 40,0 g 1 A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 5,6 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Burgonya-glükóz-agar

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 11 Burgonyafőzet Glükóz 200 g 20,0 g 1 A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 5,6 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Sabouraud-glükóz folyékony Glükóz Állati szövet (pepszin-hidrolizátum) és kazeinpepton (pankreász-hidrolizátum) 1:1 arányú elegye 20,0 g A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 5,6 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Mossel-féle folyékony dúsító enterobaktériumok vizsgálatához Zselatin (pankreász-hidrolizátum) Glükóz-monohidrát Szárított marhaepe Kálium-dihidrogén-foszfát Dinátrium-hidrogén-foszfát-dihidrát Brillantzöld 20,0 g 2,0 g 8,0 g 15 mg A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 7,2 ± 0,2 legyen. A t 100 C-on 30 percig melegítjük, majd késedelem nélkül lehűtjük. Kristályibolya-neutrálvörös-epesavas-agar glükózzal Élesztőkivonat Zselatin (pankreász-hidrolizátum) Epesavas sók Glükóz-monohidrát 3,0 g 7,0 g 1,5 g

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 12 Neutrálvörös Kristályibolya 1 30 mg 2 mg A ph-ját úgy állítjuk be, hogy melegítés után 25 C-on mért értéke 7,4 ± 0,2 legyen. A t forrásig melegítjük. Autoklávban nem szabad hevíteni. MacConkey-féle folyékony Zselatin (pankreász-hidrolizátum) Laktóz-monohidrát Szárított marhaepe Brómkrezolbíbor 20,0 g 10 mg A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 7,3 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. MacConkey-agar Zselatin (pankreász-hidrolizátum) Pepton (hús- és kazeinpepton) Laktóz-monohidrát Epesavas sók Neutrálvörös Kristályibolya 17,0 g 3,0 g 1,5 g 13,5 g 30,0 mg 1 mg A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 7,1 ± 0,2 legyen. A t állandó rázogatás közben 1 percen át forraljuk, majd autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Rappaport Vassiliadis-féle folyékony dúsító Salmonella-hoz Szójapepton Magnézium-klorid-hexahidrát 4,5 g 29,0 g

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 13 Dikálium-foszfát Kálium-dihidrogén-foszfát Malachitzöld 8,0 g 0,4 g 0,6 g 0,036 g Az oldást enyhe melegítés mellett végezzük. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük, 115 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten. A melegítést és az autoklávozást követően a ph-ja 25 C-on mérve 5,2 ± 0,2 legyen. Xilóz-lizin-dezoxikolát-agar Xilóz L-lizin Laktóz-monohidrát Szacharóz Élesztőkivonat Fenolvörös Nátrium-dezoxikolát Nátrium-tioszulfát Ammónium-vas(III)-citrát 3,5 g 7,5 g 7,5 g 3,0 g 80 mg 13,5 g 2,5 g 6,8 g 0,8 g A ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke melegítés után 25 C-on 7,4 ± 0,2 legyen. A t forrásig melegítjük, majd 50 C-ra lehűtve Petri-csészékbe osztjuk szét. Autoklávban nem szabad melegíteni. Cetrimid-agar Zselatin (pankreász-hidrolizátum) Magnézium-klorid Kálium-szulfát Cetrimid 20,0 g 1,4 g 0,3 g 13,6 g

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 14 Glicerin 10,0 ml A t rázogatás közben forrásig melegítjük és egy percig ezen a hőmérsékleten tartjuk; ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on mérve 7,2 ± 0,2 legyen. A t végül autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Mannit-nátrium-klorid-agar Kazeinpepton (pankreász-hidrolizátum) Állati szövet (pepszin-hidrolizátum) Marhahúskivonat D-mannit Fenolvörös 1,0 g 7 1 0,025 g A t rázogatás közben egy percig forraljuk; ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on mérve 7,4 ± 0,2 legyen. A t végül autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Folyékony megerősített clostridiumokhoz Marhahúskivonat Pepton Élesztőkivonat Oldható keményítő Glükóz-monohidrát Cisztein-hidroklorid Nátrium-acetát 3,0 g 1,0 g 0,5 g 3,0 g 0,5 g Az agart duzzasztjuk, majd folyamatos keverés közben forrásig melegítve oldjuk. Amennyiben szükséges, a ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés

2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.5. 15 után 25 C-on 6,8 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük. Columbia-agar Kazeinpepton (pankreász-hidrolizátum) Húspepton (pepszin-hidrolizátum) Szívpepton (pankreász-hidrolizátum) Élesztőkivonat Kukoricakeményítő (gélképző-képességtől függően) 3,0 g 1,0 g 10,0 1 Az agart duzzasztjuk, majd folyamatos keverés közben forrásig melegítve oldjuk. Amennyiben szükséges, a ph-ját úgy állítjuk be, hogy értéke sterilezés után 25 C-on 7,3 ± 0,2 legyen. A t autoklávban, validált ciklus alkalmazásával sterilezzük, majd 45-50 C-ig hagyjuk lehűlni. A hoz szükség esetén 20 mg gentamicinbázisnak megfelelő mennyiségű gentamicinszulfátot adunk, majd Petri-csészékbe osztjuk szét.