KORONGOK ANTIBIOTIKUM-ÉRZÉKENYSÉG VIZSGÁLATÁHOZ 50 KORONGOT TARTALMAZÓ PATRON ANTIMIKROBIÁLIS SZEREKKEL SZEMBENI ÉRZÉKENYSÉG VIZSGÁLATA 1- KLINIKAI JELENTŐSÉG A korongokat arra használjuk, hogy korongdiffúziós módszerrel, félkvantitatív módon értékeljük a gyorsan növő baktériumok és számos nehezen kezelhető species antimikrobiális szerekkel szembeni in vitro érzékenységét. A módszer a WHO (1) által publikált standard eljáráson alapul, amelyet a CLSI/NCCLS (2) és a CA-FSM (3) egyezményes szabványként átvett (és rendszeresen felülvizsgál). Az antibiotikum érzékenységi vizsgálatokat és kiértékelési módokat érintő változásokról az aktuális CLSI/NCCLS (2), CA- FSM (3), és BSAC (4) kiadványokból tájékozódhatnak. 2- ALAPELV Megadott koncentrációjú antimikrobiális szerrel impregnált korongokat helyezünk megfelelő közeg (A) felületére, amelyet előzőleg a vizsgálandó baktériumtörzs tiszta és friss tenyészetéből készített kalibrált inokulummal (A) oltottunk be. Inkubálás (A) után megvizsgáljuk a Petri-csészéket, s lemérjük a korongok körül mutatkozó gátlási zónát, és összehasonlítjuk a megfelelő antimikrobiális szerre megadott kritikus értékkel (A), hogy meghatározhassuk a klinikai érzékenységi kategóriát (rezisztens, mérsékelten érzékeny, érzékeny). A gátlási zóna átmérője arányos a vizsgált baktériumtörzs érzékenységével. (A) A CLSI/NCCLS (2) CA-FSM (3), és BSAC (4) aktuális ajánlásai szerint. 3- KISZERELÉS A Bio-Rad korongok 6,5 mm átmérőjűek, elsőrendű minőségű, pontos koncentrációjú mikroba-ellenes szerekkel impregnált szűrőpapírból készültek. A korongok egyértelműen azonosíthatók a korong mindkét oldalára nyomtatott 1-3 betűs kódjaik alapján (l. 1. táblázat). A Bio-Rad korongokat nedvszívó anyag kíséretében vízálló tartályba zárt, 50 korongot tartalmazó patronokban szállítjuk. 1. táblázat: Bio-Rad korongok antibiotikum érzékenység vizsgálatához KORONG RÖVIDÍTÉS KISZERELÉS KÓDSZÁM TARTALMA Amikacin 30 µg AN 66148 Amoxicillin 2 AMX 66138 Amoxicillin + klavulánsav 20 / AMC 66178 Ampicillin AM 66128 Ampicillin + szulbaktám 10 / SAM 67018 Azithromycin 1 AZM 67008 Aztreonam 30 µg ATM 66928 Bacitracin 10 UI B 66158 Carbenicillin 100 µg CB 100 66198 Cefaclor 30 µg CEC 30 67498 Cefalexin 30 µg CN 66208 Cefamandol 30 µg MA 66238 Cefazolin 30 µg CZ 66258 Cefepim 30 µg FEP 66098 Cefixim CFM 5 67588 CFM 10 66418 Cefoperazon 7 CFP 75 67618 30 µg CFP 30 66298 Cefoperazone + Sulbactam 75 + 30 µg SCF 105 66734 Cefotaxim 30 µg CTX 66368 Cefotetan 30 µg CTT 66428 Cefoxitin 30 µg FOX 66228 Cefpirom 30 µg CPO 66468 Cefpodoxim CPD 66918 Cefprozil 30 µg CPR 66488 Cefsulodin 30 µg CFS 66288 Ceftazidim 30 µg CAZ 66308 Ceftibuten 30 µg CTB 30 67638 Ceftriaxon 30 µg CRO 66188 Cefuroxim 30 µg CXM 66358 Cephalothin 30 µg CF 66218 Chloramphenicol 30 µg C 66278 1
KORONG RÖVIDÍTÉS KISZERELÉS KÓDSZÁM TARTALMA Ciprofloxacin CIP 68648 Clarithromycin 1 CLR 67058 Clindamycin 2 µg CM 66328 Colistin CS 10 67268 50 µg CS 50 66348 Doripenem DORI 10 67348 Doxycyclin 30 µg DO 66388 Ertapenem ETP 10 67518 Erythromycin 1 E 66448 Flumequin 30 µg UB 68918 Fosfomycin 50 µg FOS 50 66458 200 µg FOS 200 67658 Fusidinsav FA 66518 Gentamicin GM 66608 15 μg/10 UI GM 66548 Gentamicin (magas dózis) 120 µg GEN 120 67598 500 µg GEN 500 66578 Imipenem IPM 66568 Isepamicin 30 µg ISP 66838 Kanamycin 30 µg K 66618 Kanamycin (magas dózis) 1mg KAN 66628 Latamoxef (Moxalactam) 30 µg MOX 66698 Levofloxacin LVX 66858 Lincomycin 1 L 66678 Linezolid 30 µg LZD 30 67388 Mecillinam MEC 66768 Meropenem MEM 67048 Metronidazol 4 µg MTR 68908 Mezlocillin 7 MZ 66708 Minocyclin 30 µg MNO 66728 Moxifloxacin MXF 5 67098 Mupirocin MUP 67088 Nalidixsav 30 µg NA 68618 Neomycin 30 UI N 66748 Netilmicin 30 µg NET 66758 Nitrofurantoin 300 µg FT 68678 Nitroxolin 20 µg NI 68778 Norfloxacin NOR 10 66338 NOR 5 68238 Ofloxacin OFX 68938 Oxacillin 1 µg OX1 66888 OX 66848 Oxolinisav OA 68628 Pefloxacin 5 μg PEF 68228 Penicillin 6 µg/10 IU P 67218 Pipemidin sav 20 µg PI 68638 Piperacillin 100 µg PIP100 67228 7 PIP 75 67258 Piperacillin + tazobaktám 100 / TZP 110 67238 75 / TZP 85 66498 Polymixin 300 UI PB 67248 Pristinamycin 1 PT 67278 Quinupristin-Dalfopristin 1 QD 15 67528 Rifampicin RA 5 66648 30 µg RA 30 67308 Sparfloxacin SPX 66538 Spectinomycin 100 µg SPT 68798 Spiramycin 100 µg SP 67378 Streptomycin S 67418 Streptomycin (magas dózis) 300 µg STR 300 67608 500 µg STR 500 67428 Szulfonamidok 300 µg SSS 300 67578 200 µg SSS 200 68408 Teicoplanin 30 µg TEC 68948 Telithromycin 1 TEL 15 67538 Tetracyclin 30 µg TE 67448 2
KORONG RÖVIDÍTÉS KISZERELÉS KÓDSZÁM TARTALMA Ticarcillin 7 TIC 67458 Ticarcillin + klavulánsav 75 / TCC 67468 Tigecycline 1 TGC 15 67398 Tobramycin TM 67488 Trimethoprim + Szulfamethoxazol 1.25 / 23.7 SXT 68898 Trimethoprim TMP 68888 Vancomycin 30 µg VA 68928 A korongok CLSI/NCCLS szerinti antibiotikum tartalmát félkövér betűkkel szedtük. 4- TÁROLÁS A szavatossági idő csak a sértetlen patronban, és a gyártó utasításai szerint tárolt korongokra érvényes. A szavatossági idő és a gyártási sorozat száma a csomagoláson olvasható (a patronon és a tartályán). A korongokat tartalmazó patronokat tartályaikban kell tárolni +2-8 C között, száraz helyen. Kinyitás előtt hagyni kell, hogy a tartály felvegye a szobahőmérsékletet (18-30 C). A korongok felhelyezése után a felhasználatlan patronokat tegyük vissza +2-8 C közötti hőmérsékletre. Ne használjunk lejárt szavatosságú korongokat. Ne használjunk olyan korongokat, melyek patronját több mint 8 órán át szobahőmérsékleten (18-30 C) hagytuk, anélkül, hogy megbizonyosodnánk róla, hogy minősége megfelel-e még a kívánalmaknak (5). Ha a patront korongfelhelyezés után a korongadagolóban hagyjuk, akkor azt +2-8 C között kell tárolni, száraz helyen, úgy, hogy benne legyen a nedvszívó anyag. A korongadagolóba helyezett felnyitott patronban található - és az ajánlásnak megfelelően nedvszívóval tárolt - korongok stabilitása szokványos körülmények között még 6 hétig igazoltan megmarad, kivéve a jelzéssel ellátott antibiotikum korongokat, melyek esetében a hetekben kifejezett stabilitás a jelzés belsejében van feltüntetve.. 5- SZÜKSÉGES, DE NEM SZÁLLÍTOTT ANYAGOK korongadagoló: 6-7 korong kódszám 50294 12-16 korong kódszám 50295 táptalaj (a CLSI/NCCLS (2), CA-SFM (3), ill. BSAC (4) aktuális előírásai szerint) reagensek baktériumtörzsek minőségellenőrzéshez 0,5 MacFarland egységnek megfelelő denzitású kontroll az antibiotikum érzékenység korongdiffúziós módszerrel történő vizsgálatához szükséges laboratóriumi eszközök. 6- KEZELÉSI ÉS MUNKAVÉDELMI ELŐÍRÁSOK Tartsuk be az aktuális ajánlásokban foglalt utasításokat (CLSI/NCCLS (2), CA-FSM (3), BSAC (4) ). Mindig tartsuk be a mikrobiológiai veszélyek elleni védelmet szolgáló lépéseket és biztonsági előírásokat. Felhasználás után sterilezzük a tenyészeteket és az összes elszennyeződött eszközt. 7- HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ Minták: a korongokat nem szabad közvetlenül a biológiai mintákból kiinduló vizsgálatokban felhasználni. Lásd: inokulum készítése tiszta, friss tenyészetekből, aktuális ajánlások (CLSI/NCCLS (2), CA-FSM (3), vagy BSAC (4) ). Az antibiotikum érzékenységi vizsgálat és az eredményeinek kiértékelése során támaszkodjunk a CLSI/NCCLS (2), CA- FSM (3), vagy BSAC (4) ajánlásaira: a CLSI/NCCLS (2), a CA-FSM (3), vagy BSAC (4) standard technikákat javasol az inokulum elkészítéséhez, a Petri-csészék beoltásához, a korongok kiválasztásához és elhelyezéséhez, az inkubálási hőmérséklethez és időhöz. A GLP ajánlásait is folyamatosan be kell tartani. 8- KIÉRTÉKELÉS Pontosan mérjük le az észlelt gátlási zónák átmérőjét, s vessük össze az aktuális ajánlásokban (CLSI/NCCLS (2), CA-FSM (3), vagy BSAC (4) ) feltüntetett kritikus átmérőkkel. Minden egyes mikroorganizmushoz rendeljünk hozzá a megfelelő klinikai kategóriát (mérsékelten érzékeny, érzékeny vagy rezisztens), a mért átmérő és a vizsgált antibiotikumhoz tartozó kritikus átmérő függvényében. 9- TELJESÍTMÉNY / A TERMÉK MINŐSÉGELLENŐRZÉSE Az antibiotikum korongok aktivitását rendszeresen ellenőrizzük az alábbi törzsek segítségével: Escherichia coli ATCC 25922 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 Enterococcus faecalis ATCC 33186 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Haemophilus infuenzae ATCC 49247 Clostridium perfringens ATCC 13124 Clostridium sporogenes ATCC 19404 3
2. táblázat mutatja a korongdiffúziós módszer egyes referenciatörzsekre elfogadott gátlási átmérőit. Korong tartalma Standard Minőségellenőrzés során elfogadott zónaátmérő határértékek (mm) E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 ATCC 49247 Amikacin 30 µg CLSI 19-26 20-26 18-26 Amoxicillin 2 Belső 19-25 Amoxicillin + Clavulanic CLSI 20/ Acid 18-24 28-36 Ampicillin CLSI 16-22 27-35 Ampicillin + Sulbactam 10/ CLSI 19-24 29-37 Azithromycin 1 CLSI 21-26 Aztreonam 30 µg CLSI 28-36 23-29 Bacitracin 10 UI Belső 17-22 Carbenicilin 100 µg CLSI 23-29 18-24 Cefaclor 30 µg CLSI 23-27 27-31 Cefalexin 30 µg Belső 18-23 25-30 Cefamandole 30 µg CLSI 26-32 26-34 Cefazolin 30 µg CLSI 21-27 29-35 Cefepime 30 µg CLSI 31-37 23-29 24-30 Cefixime Belső 26-30 Cefixime CLSI 23-27 Cefoperazone 30 µg Belső 26-30 21-25 21-25 Cefoperazone 7 CLSI 28-34 24-33 23-29 Cefoperazone + Belső 75/30 µg Sulbactam 27-33 23-30 Cefotaxime 30 µg CLSI 29-35 25-31 18-22 Cefotetan 30 µg CLSI 28-34 17-23 Cefoxitin 30 µg CLSI 23-29 23-29 Cefpirome 30 µg Belső 29-35 26-32 23-29 Cefpodoxime CLSI 23-28 19-25 Cefprozil 30 µg CLSI 21-27 27-33 Cefsulodin 30 µg Belső 20-28 25-32 Ceftazidime 30 µg CLSI 25-32 16-20 22-29 Ceftibuten 30 µg CLSI 27-35 Ceftriaxone 30 µg CLSI 29-35 22-28 17-23 Cefuroxime 30 µg CLSI 20-26 27-35 Chloramphenicol 30 µg CLSI 21-27 19-26 Ciprofloxacin CLSI 30-40 22-30 25-33 Clarithromycin 1 CLSI 26-32 Clindamycin 2 µg CLSI 24-30 Colistin CLSI 11-17 11-17 Colistin 50 µg CA-SFM 17-22 Doripenem CLSI 28-35 33-42 29-35 Doxycycline 30 µg CLSI 18-24 23-29 Ertapenem CLSI 29-36 13-21 Erythromycine 1 CLSI 22-30 Flumequine 30 µg Belső 25-31 Fosfomycin 50 µg CA-SFM 24-35 Fosfomycin 200 µg CLSI 22-30 25-33 Fusidic acid CA-SFM 29-34 Gentamicin CLSI 19-26 19-27 16-21 Gentamicin 10 UI CA-SFM 22-26 24-28 16-22 Imipenem CLSI 26-32 20-28 Isepamicin 30 µg Belső 21-26 17-23 16-23 Kanamycin 30 µg CLSI 17-25 19-26 Levofloxacin CLSI 29-37 25-30 19-26 Lincomycin 1 CA-SFM 25-29 Linezolid 30 µg CLSI 25-32 4
Minőségellenőrzés során elfogadott zónaátmérő határértékek (mm) Korong Standard E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae tartalma ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 ATCC 49247 Mecillinam CLSI 24-30 Meropenem CLSI 28-34 29-37 27-33 Mezlocillin 7 CLSI 23-29 19-25 Minocycline 30 µg CLSI 19-25 25-30 Moxalactam 30 µg CLSI 28-35 18-24 17-25 Moxifloxacin CLSI 28-35 28-35 17-25 Mupirocin Belső 18-26 Nalidixic Acid 30 µg CLSI 22-28 Neomycin 30 UI Belső 17-23 18-27 Netilmicin 30 µg CLSI 22-30 22-31 17-23 Nitrofurantoin 300 µg CLSI 20-25 18-22 Nitroxolin 20 µg Belső 20-26 Norfloxacin Belső 27-34 13-23 17-24 Norfloxacin CLSI 28-35 17-28 22-29 Ofloxacin Belső 25-32 21-28 14-20 Oxacillin CA-SFM 27-34 Oxacillin 1 µg CLSI 18-24 Oxolinic Acid Belső 22-30 Pefloxacin CA-SFM 29-35 26-29 Penicillin 6 µg CLSI 26-37 Pipemidic Acid 20 µg Belső 22-30 Piperacillin 100 µg CLSI 24-30 25-33 Piperacillin 7 Belső 24-33 Piperacillin + Tazobactam 75/ Belső 22-29 24-31 24-33 Piperacillin + Tazobactam 100/ CLSI 24-30 27-36 25-33 Polymixin 300 UI CLSI 13-19 Pristinamycin 1 CA-SFM 27-32 Quinupristin-Dalfopristin 1 CLSI 21-28 19-24 15-21 Rifampicin CLSI 26-34 Rifampicin 30 µg CA-SFM 34-39 Sparfloxacin CLSI 30-38 27-33 21-29 Spectinomycin 100 µg Belső 19-25 Spiramycin 100 µg Belső 18-26 Streptomycin CLSI 12-20 14-22 Sulfonamides 300 µg CLSI 24-34 Sulfonamides 200 µg Belső 17-27 Teicoplanin 30 µg CLSI 15-21 Telithromycin 1 CLSI 27-33 17-23 Tetracycline 30 µg CLSI 18-25 24-30 Ticarcillin 7 CLSI 24-30 21-27 Ticarcillin + Clavulanic CLSI 75/ Acid 24-30 29-37 20-28 Tigecycline 1 CLSI 20-27 20-25 23-29 Tobramycin CLSI 18-26 19-29 19-25 Trimethoprim CLSI 21-28 19-26 Trimethoprim + 1,25/23,75 CLSI Sulfamethoxazole µg 23-29 24-32 Vancomycin 30 µg CLSI 17-21 Határértékek (belső standardok): Gentamicin 120 μg: E. faecalis ATCC 33186 (16-23 mm) Streptomycin 300 μg: E. faecalis ATCC 33186 (14-20 mm) Gentamicin 500 μg: S. aureus ATCC 25923 (30-34 mm), E. faecalis ATCC 29212 (18-28 mm) Kanamycin 1 mg: S. aureus ATCC 25923 ( 14 mm), E. faecalis ATCC 29212 ( 10 mm) Streptomycin 500 μg: S. aureus ATCC 25923 (24-28 mm), E. faecalis ATCC 29212 (14-25 mm) Metronidazol 4 μg: Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC 19404 15 mm. Cefoperazone + Sulbactam 75/30µg : E. coli ATCC 35218 (24-30 mm) 5
A HTM növekedésserkentő hatásának ellenőrzésére további kontrolltörzsnek javasolt a Haemophilus influenzae ATCC 10200. Annak ellenére, hogy bizonyos béta-laktám vegyületekre nincs megbízható korongdiffúziós értékelési kritérium a S. pneumoniae esetében, mégis kontrolltörzsként a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 törzs javasolt minden Streptococcus species korongdiffúziós érzékenységi vizsgálatához. Spectinomycin korongok ellenőrzéséhez a Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 javasolt. Az elfogadható átmérő 23-29 mm (NCCLS). Az oxacillin korongok hatóanyag tartalmának lebomlása a legjobban a Staphylococcus aureus ATCC 25923 kontrolltörzzsel mérhető fel. Az elfogadható átmérő 18-24 mm. 10- A GYÁRTÓNÁL FOLYÓ MINŐSÉGELLENŐRZÉS Minden termékünk minőségellenőrző rendszer keretén belül készült, a nyersanyag átvételétől kezdve a termék forgalmazásáig. Minden egyes gyártási sorozat minőségét ellenőrizzük, és csak akkor hozzuk forgalomba, ha az megfelel az előre felállított kritériumoknak. Minden sorozat gyártási és minőségellenőrzési jegyzőkönyve megtalálható a Bio-Radnál. 11- AZ ALKALMAZÁS KORLÁTAI A klinikai kategóriák (rezisztens, mérsékelten érzékeny, érzékeny) csak egy milliméternyi szórást mutatnak, ami szokványos hibahatárnak számít a laboratóriumi gyakorlatban. A 2. táblázatban fel nem tüntetett egyéb antimikrobás szereket is használhatunk. A velük végzett érzékenységi vizsgálatokat asszerint kell kiértékelni, hogy tapasztaltunk-e határozott gátlási zónát, vagy sem, és csak kvalitatívnak tekinthető az eredmény a kvantitatív zónaértékek hivatalos felállításáig. A zónaátmérőket fel kell jegyezni. A teszt megbízhatósága nemcsak a korongok aktivitásán múlik, hanem olyan tényezőkön is, mint például hogy megfelelő inokulumot és kontrolltörzset használtunk-e, megfelelő volt-e a táptalaj, és korábban ellenőriztük-e, illetve helyesen tároltuk-e. A leletet, mint minden egyéb laboratóriumi eredményt nem szabad egyetlen vizsgálat eredményére alapozni, hanem a klinikai adatok összességét, valamint a biokémiai, citológiai és immunológiai eredményeket egyaránt figyelembe kell venni. 12- HIVATKOZÁSOK 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1992. Technical report series 822. W-H.O., Geneva. 2. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2000. Approved standard M2-A7. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity tests, 7th ed. NCCLS, Wayne, Pa. 3. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2002. NCCLS document M100-S12. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity testind, 12th informational, Wayne, Pa. 4. Comité de l antibiogramme. 2002. French Society of Microbiolgoy. 5. V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues, Etude de la stabilité des disques antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th interdisciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, dec.3/4 1998. (1) WHO : World Health Organization (Egészségügyi Világszervezet) (2) CLSI/NCCLS : Clinical and Laboratory Standards Institute / National Committee for Clinical Laboratory Standards (Klinikai és Laboratóriumi Standardizációs Intézet / Nemzeti Klinikai Laboratóriumi Standardizációs Bizottság) (3) CA-SFM : Comité de l Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (Francia Mikrobiológiai Társaság Antibiogram Bizottsága) (4) BSAC: British Society for Antimicrobial Therapy (Brit Antimikrobiális Terápia Társaság) Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 11/2009 6