Egy mucin glikoprotein immunfelismerése. Uray Katalin

HTML
DOWNLOAD

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Egy mucin glikoprotein immunfelismerése. Uray Katalin"

Benjámin Biró
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Egy mucin glikoprotein immunfelismerése Uray Katalin MA-ELE Peptidkémiai Kutatócsoport 211. december 9.

2 Mucin glikoproteinek A mucus (nyálka) alkotórészei estcsatornák, mirigyek, belső szervek hámszövetei termelik Légutak, emésztő- és urogenitális rendszer, nyál Funkció: Hámfelület védelme a kiszáradástól mikroorganizmusoktól fizikai/kémiai ártalmaktól Nagy molekulatömeg > 2 kda A gének és fehérjék ismétlődő szakaszokból állnak Magas hr és/vagy Ser tartalom => O-glikozileződés > 5 %

3 Mucinok a rosszindulatú megbetegedésekben Mucintermelő szövetekből kiinduló karcinómák => Mucinok rendellenes termelődése Szövetidegen mucin últermelődés Rendellenes glikoziláció umormarkerek

4 A mucin szénhidrát-oldalláncainak felépülése Egészséges esetben umoros GalNAc GlcNAc Gal Fuc Sziálsav Podolsky 1985, J Biol Chem 26, 8262

5 Új fehérje- és szénhidrátepitópok megjelenése Sn SLe x Le x Podolsky 1985, J Biol Chem 26, 8262

6 Új fehérje- és szénhidrátspecifikus ellenanyagok termelődése Sn SLe x Le x Podolsky 1985, J Biol Chem 26, 8262

7 MUC2 glikoprotein Gasztrointesztinális szekretált mucin vékony- és vastagbél Ismétlődő szakasz (~ x): 1 PPIVPPPGQ 23 ~ 8% glikoziláció Gum et al 1989 J Biol Chem 264:648 MAb 996 monoklonális ellenanyag Durrant et al 1994 Eur J Cancer 3A:355

8 A MUC2 glikoprotein ismétlődő szakaszának epitópszerkezete MAb 996 ellenanyag epitópja: Minimális epitóp: 18 PGQ 22 Optimális epitóp: PPGQ 22 Uray et al 1998 J Pept Sci 4, 319 P I P P Q P G I V P P Uray et al 1999, Arch Biochem Biophys 361, 65

9 Az epitópszerkezet pontosabb megismerése módosított epitóppeptidek segítségével D-aminosav szubsztitúció Glikoziláció P G Q Az egyes aminosavak szerepe a kötődésben

10 Inhibition Inhibíciós % Inhibition % N-terminális D-aminosav szubsztitúció hatása a MAb 996 kötődésre PPGQ ppgq ptpgq ptpgq ptptgq Natív peptid 1 D 2 D 3 D 4 D,1,1, Peptide concentration (mmol/l) Peptide Peptidkoncentráció concentration (mmol/l) (mm) Uray et al 2 Arch Biochem Biophys 378, 25

11 Peptid % Inhibition Inhibíciós % Peptid % D-aminosav szubsztitúció az N- és C-terminális lebegő régióban: 3-3 D-amino acids Kötődés a MAb 996 ellenanyaghoz N-terminális D-aminosavak: Stabilitás szérumban Peptide Peptidkoncentráció concentration (mm) (mm) PPGQP PPGQtpt tptpgqp tptpgqtpt ime Idő (óra) (hour) Idő (óra) C-terminális D-aminosavak: Stabilitás lizoszóma kivonatban ugyi et al 25, PNAS 12, Idő (perc) ime Idő (óra) (min)

12 Inhibition Inhibíciós % Peptid % D-aminosav szubsztitúció az N-terminális lebegő régióban: 1-3 D-aminosav Kötődés a MAb 996 ellenanyaghoz N-terminális D-amino savak: Stabilitás szérumban Peptide Peptidkoncentráció concentration (mm) PPGQtpt tppgqtpt tppgqtpt tptpgqtpt Idő ime (óra) (hour) Idő (óra) ugyi et al 25, PNAS 12, 418 Stabilitás lizoszóma kivonatban

13 Peptid % Inhibition Inhibíciós % Peptid % D-aminosav szubsztitúció a C-terminális lebegő régióban: 1-3 D-amino acids Kötődés a MAb 996 ellenanyaghoz Stabilitás szérumban tptpgqp tptpgqpt tptpgqpt tptpgqtpt Idő (óra) Idő (óra) Stabilitás lizoszóma kivonatban Peptide Peptidkoncentráció concentration (mm) ugyi et al 25, PNAS 12, ime Idő (min) (óra) Idő (perc)

14 D-aminosavakkal szubsztituált peptidek térszerkezete NMR spektroszkópia alapján tptpgqpt PPGQP őke et al 27 BBRC 358, 739 tppgqtpt

15 Peptid % Inhibíciós Inhibition % Peptid % D-aminosav szubsztitúció az N- és C-terminális lebegő régióban: 1-1 D-aminosav Kötődés a MAb 996 ellenanyaghoz Részleges stabilitás szérumban N-terminális D-aminosavakkal Peptide Peptidkoncentráció concentration (mm) PPGQP PPGQPt tppgqp tppgqpt Idő (óra) Stabilitás lizoszóma kivonatban C- terminális D-aminosavakkal 25 ugyi et al 25, PNAS 12, ime (min) Idő (óra) Idő (perc)

16 D-aminosav szubsztitúció hatása PPGQP MAb 996 kötődés Szérum stabilitás Lizoszóma stabilitás tppgqpt Hatékony ellenanyag kötődés, részleges stabilitás tppgqtpt Hatékony ellenanyag kötődés, proteázokkal szembeni stabilitás

17 A MUC2 epitóp peptid glikozilezése PPGQ 22 P(GalNAcα) PGQ 22 PP(GalNAcα) GQ 22 PPG(GalNAcα) Q 22 P(GalNAcα) P(GalNAcα) G(GalNAcα) Q 22 Inazu & Mizuno, Noguchi Institute, Japan

18 Inhibíciós % Inhibition % Glikoziláció hatása a MAb 996 kötődésre 8 IC 5 (μm) PPGQ 22 PPGQ P(GalNAcα) PGQ 22 P(GalNAc)PGQ PP(GalNAcα) GQ 22 PP(GalNAc)GQ PPG(GalNAcα) Q 22 PPG(GalNAc)Q P(GalNAc)P(GalNAc)G(GalNAc)Q P(GalNAcα) P(GalNAcα) G(GalNAcα) Q > > Peptidkoncentráció (mm) Peptide concentration (mmol/l) PPGQ 22

19 Az epitóp egyes aminosavjainak szerepe a MAb 996 ellenanyag kötődésben 19 X G 2 X PXGQ PXQ PYGQ PWGQ PVGQ PYQ PWQ PVQ W PGQ PSGQ PQ PSQ S PRGQ PRQ PQGQ PPGQ PNGQ P PQQ PPQ PNQ P PMGQ PLGQ PMQ PLQ PKGQ PIGQ PHGQ PKQ PIQ PHQ I PGGQ PGQ PFGQ PEGQ PDGQ PCGQ PAGQ PFQ PEQ PDQ PCQ PAQ E D A OD(45) OD(45) Variábilitás megengedett Pro-szubsztitúció gyengíti a kötődést Savas és nagy térkitöltésű aminosavak nagymértékben gyengítik a kötődést

20 Az epitóp egyes aminosavjainak szerepe a MAb 996 ellenanyag kötődésben 21 X Q 22 X PGXQ PGX PGYQ PGWQ PGVQ PGQ PGSQ PGRQ PGQQ PGPQ PGNQ PGMQ PGLQ PGKQ PGIQ PGHQ PGGQ PGFQ PGEQ PGDQ PGCQ PGAQ L G S A 1 2 OD(45) PGY PGW PGV PG PGS PGR PGQ PGP PGN PGM PGL PGK PGI PGH PGG PGF PGE PGD PGC PGA V M L I E 1 2 OD(45) Csak a Ser (részben Ala, Gly, Leu) helyettesítheti a natív hr-t Hasonló méretű, apoláros aminosavak és Glu helyettesítheti a Gln-t

21 Az epitóp magjában a Gly 2, hr 21 és Gln 22 bármilyen helyettesítése csökkent ellenanyag kötődést okoz A hr 19 helyettesítése növelheti az ellenanyag felismerést hr 19 glikozilációja is növelheti az ellenanyag felismerést 18 P G Q 22 N M V F K I S A P S A G L L I M V E

22 Az epitópszerkezet megismerése módosított epitóppeptidekkel D-aminosav szubsztitúció: MAb 996 kötődés + stabilitás Glikoziláció: PPGQ 22 Lehetőség aktív specifikus immunterápiára P G Q Peptid ellenanyag kölcsönhatás megismerése Az egyes aminosavak szerepe a kötődésben

23 Köszönetnyilvánítás Medzihradszky-Schweiger Hedvig Bősze Szilvia Kiskó Mária Schlosser Gitta Mák Marianna Hollósi Miklós Majer Zsuzsa Vass Elemér Mike Price CRC, University of Nottingham ugyi Regina őke Orsolya oshiyuki Inazu Mamoru Mizuno OKA E EACR Soros CRC

Hasonló dokumentumok

Glükoproteinek (GP) ELŐADÁSVÁZLAT ORVOSTANHALLGATÓK RÉSZÉRE

Glükoproteinek (GP) ELŐADÁSVÁZLAT ORVOSTANHALLGATÓK RÉSZÉRE SZTE ÁOK Biokémia Intézet összeállította: dr Keresztes Margit Jellemzők - relative rövid oligoszacharid láncok ( 30) (sok elágazás) (1-85% GP