Biokonjugátumok. Hudecz Ferenc

HTML
DOWNLOAD

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Biokonjugátumok. Hudecz Ferenc"

Zsombor Pap
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Biokonjugátumok udecz Ferenc

2 Előzmények 1) Fehérjék szerkezet hatás összefüggéseinek kutatása (1925 umner, J.B., Graham V.A.: The nature of insoluble crease Proc oc Exp Biol Med (1925) Melyik aminosav (oldallánc) kell és melyik nem kell a hatás megmaradásához lcott,.., Fraenkel-onrat,.: pecific group reagents for proteins hem ev (1947) erriot,.m.: eactions of nativ proteins with chemical reagents Adv Prot hem (1947)

3 2) zerkezet vizsgálat Fehérjék -terminális meghatározások 3 3 F λ = 254 nm λ s = 360 nm 2 2 λ e = 480 nm zekvencia meghatározás (1956) 2 l Edman, P., Begg, G.: A protein sequenator Eur J Biochem 1 80 (1967) op.: -21 o Aminosav meghatározás (1960) Moore,., tein, W..: hromatographic determination of amino acids Methods in Enzymol (1963) λ s = 340 nm λ e = 455 nm

4 zénhidrátok E. Fischer 1884 edukáló monoszacharidok 2 fenil-hidrazin D-Glükóz Glükóz-1-fenilhidrazon 2 fenil-hidrazin Glükóz fenil-oszazon

5 zénhidrátok eakció oxo-csoporttal 10 mm átrium-perjodát β-d-mannóz részlet - kötés hasadása poliszacharid láncban aldehid részlet oxidálásával oxo-csoport előállítása hidroxil-csoportból

6 ukleinsavak Maxam, A.M., Gilbert, W : A new method for sequencing DA PA (1977) ( 3 ) a) 0.1 M l b) p 7, 100 o anger, F. et al. PA (1977) mith, L.M. et al. ature (1986)

7 hromatide fluoreszcein-12-dutp szerkezete (-7604) ( 2 ) 5 P - P - 3 a + P -

8 2) Biopolimerek kimutatása sejtben, szövetben Fehérjék jelölése radioaktív izotóppal Li,..: Iodination of tyrosine groups in serum albumin and pepsin JA (1945) I 131 I 3 - I 2 + I - I I + + I - Tyr is I I - I I

9 natowich, D.J. et al.: The preparation and labeling of DTPA-coupled albumin Int J Appl adiat Isot (1982) 2 amin tartalmú molekula DTPA - -

10 Fehérjék jelölése biotinnal Bayer, E.A., Wilehek, M.: The use of avidin-biotin complex Methods Biochem Anal 26 1 (1980) haiet, L., Wolf, F.J.: The properties of streptavidin, a biotin-binding protein produced by streptomyces Arch Biochem Biophys (1964) Green,.M.: Avidin Adv Protein hem (1975) 2 K a = M -1 op.: o * 4 D-Biotin [exahidro-2-oxo-1-tieno[3,4-d]imidazol-4-pentánsav]

11 Biopolimerek jelölése fluorofórokkal McKinney,. et al. Factors affecting the rate of reaction of fluorescein isothiocyanat with serum proteins J Immunol (1964) amin tartalmú molekula - - Fluoreszcein izotiocianát Tiourea kötés létrehozása

12 2) Affinitás kromatográfia Bethell, G.. et al. A novel method of activation of cross-linked agarose with 1,1 -carbonyldiimidazol which gives a matrix for affinity chromatography J Biol hem (1979) 2 2 Br L 2 L 2 2

13 Gyógyszerkutatás Analitika (kémiai, orvosi) Protein: hatás-szerkezet Elválasztástechnika zerkezet vizsgálat Definíció 1. Mindkét komponens aktív 2. Kovalens kötés 3. Lehet több komponens is

14 Megközelítési lehetőségek 1. A partnerek mérete Kicsi kicsi Kicsi nagy agy nagy 2. A kötés jellege Közvetlen 2 Közvetett 2 spacer

15 3. A kötés típusa avamid - P karbonsav szulfonsav foszforamidát avészter - P karbonsav foszforsav 3 avanhidrid P P P karbonsav foszforsav vegyes

16 idrazon Aldehid + hidrazon chiff bázis Aldehid + amin Éter 2 2 Alkohol

17 Karbamát 2 2 Alkohol zekunder amin 2 2 Amin + aldehid (-glikozid) 2 + aril-halogenid Izourea 2 2 Amin Izotiourea 2 2 Amin

18 Tioéter 2 2 Tiol 2 Tioészter 2 Tiol Diszulfid 2 2 Tiol 2 Diazo Azid X I

19 1. Példa: kicsi kicsi, közvetlen, anhidrid kötés Firefly lumineszcencia 1 L 2 L 2 + ATP-Mg + ATP L 2 AMP 2 luciferáz enzim 3 proton elvonás - LAMP konformáció változás AMP P + hν LAMP

20 1. Példa P P ATP P Luciferáz P 3' 1' 1 4 Mg 2+ 3' 1' ADP D (-) luciferin (L 2 ) Luciferil-adenilát oxiluciferin Adenilsav "Karbonsav" andidrid

21 2. Példa: kicsi nagy, közvetlen, amid kötés Liposzoma haptén konjugátum P 3 PE liposzóma Foszfatidil etanolamin

22 2. Példa P + GAFA 3 ED 1-etil-3-(3-dimetil-aminopropil)karbodiimid GAFA 3 P ED GAFA Ac 2 GAFA Ac

23 3. Példa: nagy nagy, közvetett,diszulfid kötés Immunotoxin konjugátum 1. lépés: védett - csoport kiépítése az ellenanyag molekulán (Ab + PDP amidkötés) 2. lépés: szabad - csoport létrehozása a toxin alegységben (--- kötés hasítása, DTT) 3. lépés: az partner reakciója a védett tartalmú komponenssel (AB-P + Toxin- diszulfid kötés)

24 3. Példa arlsson, J. et al. Biochem J (1978) 2 + PDP aktivált antitest amino csoportot tartalmazó PDP antitest leland W. Biochemistry (1964) A lánc DTT B lánc Toxin molekula A és B alegységgel B lánc A lánc edukció, szabad tiol csoportok keletkezése Piridin-2-tion λ = 343 nm Immunotoxin képződés diszulfid híddal

25 1 (, P) 1 észter tioészter amid 1 Térkép éter karbamát 4 1 anhidrid hidrazid oxidáció azid 2 diazo 2 3 hidrazon 2 2 redukció 2 chiff bázis

26 Térkép 5 (Ar) szekunder amin 5 amid (, P) chiff-bázis izourea izotiourea tioéter diszulfid híd 1) ogyan lehet funkciós csoportot kiépíteni? (-, -, -, -, - 2 ) 2) ogyan lehet funkciós csoportot eltüntetni?

Hasonló dokumentumok

Célcsoportok. + Ser, -NH 2. + (N-glikozid) α(n), Lys. etanol amin. + Ser, -COOH/-PO(OH) 2 Glu, Asp. zsírsavak. + primer, szekunder (O-glikozid)

Célcsoportok. + Ser, -NH 2. + (N-glikozid) α(n), Lys. etanol amin. + Ser, -COOH/-PO(OH) 2 Glu, Asp. zsírsavak. + primer, szekunder (O-glikozid) élcsoportok Funkciós csoport Fehérjék zénhidrátok ukleinsavak Lipidek 2 α(), Lys (glikozid) er, etanol amin /P() 2 α(), Glu, Asp 5 er, zsírsavak er, Thr primer, szekunder (glikozid) szekunder 3 glicerin,