ÉLELMISZERJOGI KONFERENCIA október Balatonfüred, Hotel Silver Resort****superior. Copyright Dr. Szigeti Tamás

Átírás

1 ÉLELMISZERJOGI KONFERENCIA október Balatonfüred, Hotel Silver Resort****superior Copyright Dr. Szigeti Tamás

2 Balatonfüred, Hotel Silver Resort,

3 Balatonfüred, október 15. Food & Agro Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata Szigeti Tamás János WESSLING Hungary Kft. Hotel Silver Resort, Balatonfüred, Zákonyi Ferenc u. 4.

4 WESSLING Hungary Kft. Budapest, Fóti út 56.

5 A WESSLING cégcsoport számokban 1983: cégalapítás, Altenberge, Németország 1992: cégalapítás Budapesten, 2015: Magyarország, 280 munkatárs, 2,9 milliárd Ft forgalom 23 éve piacvezető pozíció 10 országban 18 laboratórium, 30 iroda >1200 munkatárs Teljes cégcsoportban: >70 millió üzleti forgalom

6 Szakmai politikánk Független laboratóriumok Életünk minősége szakértelmünk egy jobb életminőség szolgálatában Vállalati vezérlő elv: QSHE filozófia: Quality Safety Health Environment Kifogástalan környezet, élelmiszer és gyógyszer minőség Doppingmentes sport - egészséges sportolók Elemzés Tanácsadás Tervezés 1983 óta

7 Laboratóriumaink és irodáink földrajzi elhelyezkedése Németország: Altenberge Berlin Bochum Bréma Darmstadt Drezda Halle/Saale Hamburg Hannover Ingelheim Köln Mannheim München Münster Spremberg Stuttgart Walldorf Franciaország: Lyon Párizs Olaszország: Bologna Lengyelország: Krakkó Posen Varsó Románia: Bukarest Marosvásár-hely Oroszország: Moszkva Svájc: Bern Magyarországon: Budapest és Gödöllő (BIOMI) Európán kívül: Kína (Shaghai)

8 Elemzés, tanácsadás, tervezés Környezeti vizsgálatok Talajvizsgálat Vízvizsgálat Levegővizsgálat Hulladékvizsgálat Üzemi, telephelyi felmérések Jártassági vizsgálatok szervezése (QualcoDuna) Élelmiszer- és takarmányvizsgálatok Analitikai vizsgálat Mikrobiológiai vizsgálat Molekuláris biológiai v. Érzékszervi vizsgálat Non-food termékek vizsg. Csomagolóanyagok vizsg. Gyógyszervizsgálatok Doppinganalitika Menedzsmentszolgáltatások, szaktanácsadás Kutatás-fejlesztés Oktatás, felnőttképzés Társadalmi aktivitások Együttműködés a médiával

9 Néhány fontosabb, akkreditált vizsgálati terület Gyógyszerészeti vizsgálatok Csomagolóanyagok vizsgálata Környezetvédelmi vizsgálatok Takarmányok vizsgálata Zöldségfélék, gyümölcsök vizsgálata Halászati termékek vizsgálata Kozmetikai ipar termékeinek vizsgálata (non-food) Hús- és tejipari vizsgálatok Gabonafélék, műtrágyák vizsgálata

10 Allergia

11 Néhány másodperc etimológia (Tóthfalusi, 2005) αλλεργεία = eltérő működés αλλε = másképp εργoν = cselekvés, ténykedés

12 Allergének listája Glutént tartalmazó gabona (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut) Rákfélék és azokból készült termékek Tojás és abból készült termékek Halak és azokból készült termékek (néhány kivétellel; halenyvek) Földimogyoró és abból készült termékek Szójabab és abból készült termékek, kivéve a finomított szójabab olaj és zsír stb. (kivételek: E és D vitamin-készítmények) 7. Tej és abból készült termékek beleértve a laktózt (néhány kivétel van) 8. Diófélék (mandula, mogyoró, dió, kesudió, pekándió, pisztácia, queenslandi dió) 9. Zeller és abból készült termékek 10. Mustár és abból készült termékek 11. Szezámmag és abból készült termékek 12. Kén-dioxid és szulfitok 13. Csillagfürt és abból készült termékek 14. Puhatestűek és abból készült termékek

13 Allergének 1/5 Glutént tartalmazó gabonák (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut) Rákfélék és azokból készült termékek Tojás és az abból készült termékek

14 Allergének 2/5 Halak és az azokból készült termékek néhány kivétellel (halenyvek) Földimogyoró és az abból készült termékek Szójabab és az abból készült termékek, (kivéve a finomított szójabab olaj és zsír, E és D vitaminok)

15 Allergének 3/5 Tej és abból készült termékek beleértve a laktózt (néhány kivétel van) Diófélék, azaz mandula, mogyoró, dió, kesudió, pekándió, pisztácia, queenslandi dió Zeller és abból készült termékek

16 Allergének 4/5 Mustár és az abból készült termékek Szezámmag és abból készült termékek Kén-dioxid: SO2

17 Allergének 5/5 Csillagfürt és az abból készült termékek Puhatestűek és abból készült termékek

18 Analitika Semper eadem Mindig ugyanúgy

19 Allergének listája 1. Glutént tartalmazó gabona (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut) Határérték: 20 mg/kg 2. Rákfélék és azokból készült termékek 3. Tojás és abból készült termékek 4. Halak és azokból készült termékek (néhány kivétellel; halenyvek) 5. Földimogyoró és abból készült termékek 6. Szójabab és abból készült termékek, kivéve a finomított szójabab olaj és zsír stb. (kivételek: E és D vitaminok) 7. Tej és abból készült termékek beleértve a laktózt (néhány kivétel van) 8. Diófélék (mandula, mogyoró, dió, kesudió, pekándió, pisztácia, queenslandi dió) 9. Zeller és abból készült termékek 10. Mustár és abból készült termékek 11. Szezámmag és abból készült termékek 12. Kén-dioxid és szulfitok Határérték: 10 mg/kg, illetve 10 mg/l 13. Csillagfürt és abból készült termékek 14. Puhatestűek és abból készült termékek

20 Allergének vizsgálati lehetőségei 1/3 Allergének Glutén Allergiát kiváltó anyagok Fehérjék (gliadin, glutenin) Fehérje (parvalbumin) Rákfélék Hisztamin Tojás Fehérjék (ovalbumin, ovomukoid, lizozim stb.) Fehérje (parvalbumin) Halak Hisztamin Fehérjék (arachin és még >80 féle Földimogyoró egyéb fehérje) Analízis lehetőségei Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS GC-MS, LC-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS GC-MS, LC-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS

21 Allergének vizsgálati lehetőségei 2/3 Allergének Allergiát kiváltó anyagok Fehérjék (lektinek) Szójabab Fehérjék (fito-ösztrogének) Tej Fehérjék (β-laktoblobulin, egyéb globulinok és albuminok, kazein,) Diófélék Fehérjék (11S és 75 globulinok, leguminek stb.) Zeller Fehérjék (Api-g aminosav, profilin) Mustár Fehérje (Sin-a-1) Analízis lehetőségei Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS GC-MS, LC-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS

22 Allergének vizsgálati lehetőségei 3/3 Allergének Allergiát kiváltó anyagok Analízis lehetőségei Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Szezámmag Fehérjék, olaj Kéndioxid SO2 Sektrofotometria, titrimetria Csillagfürt Fehérjék (34.5 kda konglutin β Lup1, 20 kda konglutin α Lup 2) Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Puhatestűek Hisztamin GC-MS, LC-MS Fehérjék Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Puhatestűek ELISA: Enzyme Linked Immune Sorbent Assay; SEC: Size Exclusion Chrom., ELFO: Electrophoresis, TLC: Thin Layer Chrom., SPRS: Surface Plasmon Resonance Spectroscopy, RT-PCR: Real Time Polymerase Chain Reaction, MALDI-TOF-MS: Matrix Aided Laser Desorption Ionisation - Time Of Flight Mass Spectroscopy

23 Keresztszennyezések: Végzetes hal-fehérjék sütőolajban Fatal food- induced anaphylaxis. Yunginger JW, Sweeney KG, Sturner WQ, Giannandrea LA, Teigland JD, Bray M, Benson PA, York JA, Biedrzycki L, Squillace DL, et al (1988) JAMA 260:1450-2

24 Keresztszennyezések: Garnélarák-fehérjék sütőolajban Transfer of Shrimp Allergens to Other Foods Through Cooking Oil? S.B. Lehrer, L. Kim, T. Rice, J. Saidu, J. Bell, R. Martin., Journal of Allergy and Clinical Immunology Volume 119, Issue 1.

25 Keresztszennyezések: Végzetes mogyoró nyomok Anafilaxiás sokkot egyetlen morzsányi mogyoró is okozhat az arra rendkívül érzékeny egyéneknél!

26 Mérni kell, évről-évre nagyobb érzékenységgel Kimutatási határ Új adatok eddig nem ismert összetevőkről Aggodalmak Kockázatelemzés Vizsgálati igények Mérési bizonytalanság Vizsgálati díjak Évek

27 Egy egyszerű mérési módszer

28 Kén-dioxid és szulfitok S O O

29 Szulfittartalom MSZ EN :1999 Desztillációval A vizsgálat a szedőben összegyűjtött folyadék kénsav-tartalmának titrálásával végződik. SO2 + H2O = H2SO3 H2SO3 + H2O2 = H2SO4 + H2O H2SO4 + 2NaOH = Na2SO4 + 2H2O Monier-Williams készülék

30 Kevésbé egyszerű mérési módszerek

31 Hisztamin biogén amin halakból, sajtokból, borokból Hisztamin

32 Tejcukor laktóz (galaktóz + glükóz diszacharid) Laktóz

33 Tejcukor laktóz elválasztása HPLC technikával Kromatogram Laktóz Kolonna Detektor

34 Nagyméretű molekulák vizsgálata

35 Profilin-aktin sejt-vázfehérje komplex és a Bet-v-1 Profilin zellerből Bet-v-1 nyírfából Aktin Bet-v-1 allergén fehérje a fehér nyír (Betula verrucosa) pollenjéből erős keresztreakciót ad a zeller Api-g-1 fehérjéjével hasonló hozzá)

36 Halak és rákok jellemző allergén fehérjéi EF-kéz-motivumú fehérje parvalbumin halakból és rákokból

37 Β-laktoglobulin a tej leg-allergizálóbb fehérjéje

38 Az α-gliadin láncának szerkezete 1/3 Immun-módosító hatás CXCR3-IL-8 felszabadító hatás cukorbeteg egyéneknél Citotoxikus hatás Zonulinfelszabadító hatás

39 Az α-gliadin láncának szerkezete 2/3 CXCR3 A CXCR3 kemokin protein a T-limfociták és az NK-sejtek (Natural Killer) aktivációja, során, illetve néhány epitetiális sejtben expresszálódik; Szabályozni képes a leukociták képződését és pusztulását; Elősegíti a Th1 sejtek érését, szerepet játszik a sebgyógyulásban is; a T-limfociták a fehérje antigének felismerésére specializálódott sejtek, amelyek a csontvelőt elhagyva a thymusban (csecsemőmirigyben) érnek be; A limfociták másik csoportja egyéb limfoid szövetekbe vándorolva B limfocitákká alakul; Minden B sejt egy bizonyos ellenanyag termelésére van programozva; A Th (T helper) sejtek általában a külső térből bekerülő fehérjék bomlásából képződő peptideket ismerik fel; A T sejtek összehangolják a szervezet immunreakcióit és közvetlenül is megtámadják a szervezet normálistól eltérő működésű sejtjeit.

40 Az α-gliadin láncának szerkezete 3/3 ÉVIK szám

41 48 vájulatos ELISA lemez (ELISA plate)

42 A vájulatokhoz kötött antitestek specifikusak A polisztirol lemezhez antitesteket ( Y ) kötnek, amelyek specifikusan képesek kötődni a vizsgálandó mintában keresett antigénhez. Pl. gliadinhoz, tejfehérjéhez, mogyoró-fehérjéhez stb. Y

43 Szendvics típusú ELISA működési elve Y A minta antigén részecskéje A mintához utólag kötődő antitest A mintához adott szubsztrát megváltozott U A mintához adott szubsztrát Az antitesthez kötődő reaktív molekula, pl. enzim Y A lemezhez kötött antitest A polisztirolból készült ELISA lemez egyik vájulata

44 Glutén mentesség Gluténmentes: <20 mg/kg glutén Fontos: a mentesség fogalma nem jelent nulla gluténtartalmat: Mentes 0

45 Codex Committee Measurement Analyses and Sampling

46 Analitika Semper eadem Mindig ugyanúgy Az analitikai munka egyik alapszabálya: A vizsgálatokat mindig ugyanúgy, azonos körülmények között kell végezni Kérdés: Ez a feltétel általánosan teljesül, pl. a glutén kimutatására szolgáló, különböző gyártmányú ELISA kitek használata esetén?

47 A különböző ELISA kitek különböző helyen reagálhatnak A különböző epitópokon zajló antigén-antitest reakciók (R5 és G12 módszerek) érzékenység tekintetében nem szükségszerűen azonosak.

48 Surface Plasmon Resonance Spectroscopy - SPRS Egy új, érzékeny immunkémiai és optikai elven működő analitikai lehetőség: SPRS: Surface Plasmon Resonance Spectroscopy Immunkémiai elve hasonló az ELISA-hoz.

49 Surface Plazmon Resonance Spectroscopy - SPRS Prizma Elektromágnes es hullámok Y Y Y Y Y Y Y Y Fémlemez (arany) Dielektrikum Mintatér Rögzített antitestek

50 Surface Plazmon Resonance Spectroscopy - SPRS Visszavert fénysugár Beeső fénysugár Y Y Y Y Y Y Y Y

51 Surface Plazmon Resonance Spectroscopy - SPRS Y Y Y Y Y Y Y Beeső fénysugár Y

52 Új lehetőség a makomolekulák analitikai vizsgálatára

53 MALDI-TOF-MS Matrix Aided LASER Desorption Ioniosation Time Of Flight Mass Spectrometry

54 A MALDI-TOF-MS saválló acél mintatartó lemeze

55 A MALDI-TOF-MS saválló acél mintatartó lemeze közelről

56 A MALDI-TOF-MS saválló acél mintatartó lemeze rajzon

57 A mátrix: α-ciano-4-hidroxi-fahéjsav Hullámhossz (nm)

58 A MALDI-TOF-MS lézer impulzus

59 A MALDI-TOF-MS lényegében egy igen pontos stopper

60 A MALDI-TOF-MS repülési csövének sematikus ábrája A technikával a nagymolekulájú vegyületek is jó hatásfokkal vizsgálhatók. Pl.: Hormonok, Allergének, Hosszú szénláncú szénhidrogének, Fehérje-szénhidrát komplexek, Mikroorganizmusok fehérjéi. t1 m1 t3 m3 t2 m2 Az eszköz főként jelenlét/hiány vizsgálatára alkalmas. t4 m4

61 Élelmiszervizsgálati közlemények száma

62 A megújult Élelmiszervizsgálati közlemények számai március június március október június december szeptember 30.

63 A megújult Élelmiszervizsgálati közlemények Nyomtatott Elektronikus: Magyar és angol nyelvű A4 méretű Évente 4 szám március 31. június 30. október 1. december 31.

64 Ahol megszabadulhatunk a pollenallergiától Korčula Köszönöm megtisztelő figyelmüket és türelmüket!

65

66