TOXIKO-PATOLÓGIÁRÓL TOXIKOLÓGUSOKNAK

Átírás

1 TOXIKO-PATOLÓGIÁRÓL TOXIKOLÓGUSOKNAK DR NÉMET LÁSZLÓ Bükfürdő TOX-2017

2 ÁGENDA A halál okának meghatározása A vizsgálandó szervek listája A szerv-kimetszés standardizálása Struktúra megőrzés / fixálás/artefaktumok Szövetek kivágása A szövettani értékelés/patológiai lelet/dignitás A megbízhatóságot precizitást biztosító eljárások Patológiai nyersadat, Audit trail Patológiai elváltozások megítélése - besorolása Adverse effect Konzultáció (Peer Rewiew) és dokumentálása Patológiai vélemény / jelentés

3 A HALÁL OKÁNAK MEGHATÁROZÁSA A halál okának megállapításáért a patológus a felelős! (moribund v. halva talált). Az állat moribund-á nyilvánítása és boncolásának elrendelése, a vizsgálat vezető feladata. Világos állásfoglalásra van szükség. mi a halál oka? -anyaghatás közrejátszhatott-e? Ha a halál oka nem állapítható meg; azt is rögzíteni kell! Recommendations to Guide Determining Cause of Death in toxicity Studies Toxicologic Pathology;32: ,2004 Cause-of-Death Assignment at the National Center for Toxicological Research Toxicologic Pathology, vol. 23, 3: pp , First Published May 1, 1995.

4 PARASZONDÁZÁS

5 A VIZSGÁLANDÓ SZERVEK LISTÁJA Adrenal Gl. Harderian Gl. Pancreas Stomach Aorta Heart Parathyroid Gl. Testis Bone with B.marrow Ileum Peripheral nerve Thymus Brain Jejunum Pharynx/larynx Thyroid Gl. Carina Joint Pituitary Tounge Prostate/Seminal vesicle/coagulating gl. Trachea Cecum Kidney Colon Larynx Rectum Ureter(s) Duodenum Liver Salivary gl. (three) Urinary bladder Epididymis Lung Seminal vesicle Uterus Esophagus Lymph node(s) Skeletal muscle Vagina Extraorbital lacrimal gl. Mammary Gl. Skin Zymbal's gland Eye Nasal cavity Spinal cord (three) +Gross lesions Gallbladder Ovary Spleen +Tumors +Rout of admin.

6 A TERVEZETT BONCOLÁS LÉPÉSEI Éheztetés / anyagcsere ketrec / vizelet gyűjtés Testsúlymérés Altatás Elvéreztetés Boncolás / mintavételezés Szervsúlymérés Leltározás

7 STRUKTÚRA MEGŐRZÉS /FIXÁLÁS /FIXÁLÓ SZEREK Formalin 35-40% Fény hatására oxidálódik hangyasav keletkezik 10%-os pufferolt (neutrális) formalin (NBF)= 4% formaldehidnek felel meg A formalin a fehérjék számos oldalláncával, funkciós csoportjaival lép reakcióba. A mintához viszonyított térfogat >10-20x (fixáló csere). Minta vastagság: 24 óra alatt kb. 2-3 mm mélységben diffundál a szövetekbe eltérő szövet típusok szerint. Formalin pigment (fekete) keletkezik a véres v. nem pufferolt formalinban Davidson fixáló (szem) Módosított Davidson fixálló (here)

8 STRUKTÚRA MEGŐRZÉS /FELTÖLTÉS

9 STRUKTÚRA MEGŐRZÉS /FELTÖLTÉS / ARTEFAKTUMOK Galyatető TOX-2005

10 STRUKTÚRA MEGŐRZÉS /RÖGZÍTÉS/MINTAVÉTEL 1 2 3

11 Komponens STRUKTÚRA MEGŐRZÉS /ARTEFAKTUMOK MDF Formalin Davidson formalin 37-40% 30% 10% 2 % etanol 15% 35% jégecet 5% 10% Csapvíz/ 50% 90% 53% puffer Fixation of Testes and eyes Toxicol. Pathol.,30 No. 4: ,2002

12 STRUKTÚRA MEGŐRZÉS /ARTEFAKTUMOK FIXÁLÁS Formalin MDF Fixation of Testes and eyes Toxicol. Pathol.,30 No. 4: ,2002

13 A SZERV-KIMETSZÉS STANDARDIZÁLÁSA

14 A SZERV-KIMETSZÉS STANDARDIZÁLÁSA / RÁGCSÁLÓK IVAX GYKI KUTYA

15 A SZÖVETTANI ÉRTÉKELÉS FELTÉTELEI Tapasztalt patológus Megfelelő minőségű standard metszet készüljön Újrametszés, szükség szerint, részleges v. teljes hiány esetén Vizsg terv, teszt anyag, klinikai tünetek, testsúly tápfogyasztás, laboratóriumi eredmények ismerete. Adatrögzítő szoftver Szakkönyvek 1 STP Guideline : Best Practices Tox Pat. 32; , International Classification of Rodent Tumors Part I. The Rat; IARC SP No International Classification of Rodent Tumors The Mouse; Springer 2001 STP guides: Standardized System of Nomenclature and Diagnostic Criteria 1990

16 PATOLÓGIAI LELET (leíró, lehetőleg nem diagnosztikus) Szerv Lelet Szerkezeti alegység/ eloszlás / időben: akut-krónikus Súlyossági fok Tüdő Alveoláris makrofág aggregátumok Szubpleurális, multifokális enyhe Máj Fibrózis Áthidaló, diffuz minimális STP Guideline : Best Practices Tox Pat. 32; , 2004

17 TAGOLT KONTRA ÖSSZEVONT LELETEZÉS Krónikus Progresszív Nefropátia

18 TAGOLT KONTRA ÖSSZEVONT LELETEZÉS Krónikus Progresszív Nefropátia Széttagolt leletezés Tágult regeneratív bazofil tubulusok, megvastagodott alaphártyával, minimális Tágult tubulusok, hipertrófizált tubulus-hám, hialin cillinderek, minimális Összesített leletezés KPN1 KPN1

19 TAGOLT KONTRA ÖSSZEVONT LELETEZÉS Krónikus Progresszív Nefropátia Széttagolt leletezés A tubulushám regenerációja és hiperpláziája Megvastagodott alaphártyák Intersticiális gyulladás Hialin cillinderek Összesített leletezés KPN 4 Széttagolt leletezés Glomerulo-szklerozis Tubuláris atrófia Fibrosis Pigment tárolás Hialin cillinderek Összesített leletezés KPN 5

20 A SÚLYOSSÁGI FOK MINŐSÍTÉSE (Szemikvantitatív) Mérték Szemikvantitatív jelző Számos 0 /. normális normális normál 1 minimális néhány valami, ami már látható 0-20%-os érintettség 2 enyhe kevés nem jelentős, háttér szinten belüli 21-40%-os érintettség 3 közepes több befolyásolja a szerv funkciót, korrelálhat pl: a szersúllyal, 41-60%-os érintettség 4 kifejezett sok fontos szerep a romló szervfunkcióban, 61-80%-os érintettség 5 súlyos rengeteg Az egész szervre kierjedő %-osérintettség A SZMEBEN / JELENTÉSBEN RÖGZÍTENDŐ A HASZNÁLT DIGNITÁSI SKÁLA STP Guideline : Best Practices Tox Pat. 32; , 2004

21 STANDARD NOMENKLATURA Megbízhatóságot, precizitást biztosító eljárások. Since 2006 a global collaboration project of the major ToxPath societies, ESTP, STP, BSTP, and JSTP INHAND - International Harmonization of Nomenclature and Diagnostic criteria for lesions in rats and mice RITA (Registry of Industrial Toxicology Animal-data) Fraunhofer Institute for Toxicology and Experimental Medicine in Hannover, Germany

22 INHAND STANDARD NOMENKLATURA Megbízhatóságot, precizitást biztosító eljárások Proliferative and Nonproliferative Lesions of the; *Respiratory Tract of the Rat and Mouse. (Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 37, No. 7 *Hepatobiliary System. (Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 38, No. 7) *Urinary System. (Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 40, No. 4) *Central and Peripheral Nervous Systems. (Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 40, No. 4) *Mammary, Zymbal's, Preputial, and Clitoral Glands. (Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 40, No. 6) *Male Reproductive System. (Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 40, No. 6) *Soft Tissue, Skeletal Muscle and Mesothelium. (Journal of Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 26, No. 3) *Integument. (Journal of Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 26, No. 3) *Female Reproductive System. (Journal of Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 27, No. 3&4) *Gastrointestinal Tract, Pancreas and Salivary Glands of the Rat and Mouse. (Journal of Toxicologic Pathology, Suppl.Vol 29, No. 1) *Cardiovascular System of the Rat and Mouse. (Journal of Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 29, No. 3) *Skeletal Tissues (Bones, Joints, and Teeth). (Journal of Toxicologic Pathology, Supplement to Vol 29, No. 3 Recommendations from the INHAND Apoptosis/Necrosis Working Group. (Toxicologic Pathology 44: )

23 STANDARD NOMENKLATURA Megbízhatóságot, precizitást biztosító eljárások A MEGBÍZHATÓSÁGOT, PRECIZITÁST BIZTOSÍTÓ ELJÁRÁSOK.

24 AZ ÉRTÉKELÉS KÖVETKEZETESSÉGÉT, PRECIZITÁSÁT NÖVELŐ ELJÁRÁSOK Értékelés tudatosan, minden adat birtokában Diagnosztikai sodródás ellenszere: a célszervek, v. bizonyos léziók újraértékelése (informális) Célszervek v. bizonyos elváltozások vakon értékelése Konzultáció (informális) Peer review STP Guideline : Best Practices Tox Pat. 32; , 2004

25 PATOLÓGIAI NYERSADAT ÉS A VÁLTOZÁSOK NYOMONKÖVETÉSE (AUDIT TRAIL) VOL.21 CFR PART 58: Raw data is defined as any record (worksheet, memoranda or note) that results from an original observation in a nc. laboratory study that is necessary for the reconstruction and evaluation of the report of that study...histopathology Raw Data Is The Signed And Dated Report From The Pathologist VOL.52 NO.172: Pathologists interim notes, which are subject to frequent changes as the pathologist refines the dg. are not raw data, because they do not contribute to study reconstruction Society of Toxicologic Pathology Position on Histopathology Data Collection and Audit Trail: Compliance with 21 CFR Parts 58 and 11 Toxicologic Pathology, 32: , 2004 Pathology Raw data: Toxicologic Pathology, vol. 24, 1: pp. 147., First Published Jan 1, 1996

26 A leletek osztályozása Toxicitás elsődleges Toxicitás másodlagos Farmakológiai hatás Adaptáció, kompenzáció Kezelés módjával összefüggő Hormonális státusz Elhullás, leölés módja Szerzett Törzsben /ivarban / életkorban előforduló veleszületett (háttér, ld történelmi kontroll)

27 TOXIKUS MELLÉKHATÁS KÖVETKEZMÉNYE: hemolitikus anémiát követő vas tartalmú pigment depozició a vesetubulusokban Group / Treatment RBC HGB HCT MCV RET RET [10 12 /l] [g/l] [l/l] [fl] [%] [10 9 /l] 1 Mean 7,68 149,7 0,422 55,02 5,08 389,14 Vehicle SD 0,23 2,67 0,008 1,53 0,69 49,11 N Mean 7,55 148,3 0,421 55,78 5,86 442,03 dd mg/kg SD 0,22 6,2 0,019 2,47 0,77 56,23 N Mean 6,64 131,3 0,385 58,05 11,81 780,03 Dd mg/kg SD 0,52 8,06 0,027 2,21 2,08 116,81 N Mean 5,59 114,78 0,363 65,08 21, ,30 DD mg/kg SD 0,33 5,12 0,016 4,86 6,54 311,36 N

28 TOXIKUS MELLÉKHATÁS KÖVETKEZMÉNYE: hemolitikus anémiát követő emelkedett vérsejt-képzés a lép vörös pulpájában Kontrol Kezelt

29 HEPATOCELLULÁRIS HIPERTROFIA ADAPTÁCIÓ (ENZIMINDUKCIÓ) STP; HED Guidance 2002

30 HEPATOCELLULÁRIS CENTROLOBULÁRIS HIPERTROFIA DEXTRÁN TÁROLÁS

31 PATOLÓGIAI ELVÁLTOZÁSOK MEGÍTÉLÉSE AZ ADOTT TÖRZSBEN SPONTÁN ELŐFORDULÓ VELESZÜLETETT ELVÁLTOZÁSOK

32 AZ ADOTT TÖRZSBEN SPONTÁN ELŐFORDULÓ VELESZÜLETETT ELVÁLTOZÁSOK beagle fájdalom szindróma / idiopatikus kutya polyartheritis

33 Minipig Trombocitopénia Purpurea Dif Dg: Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome

34 VÁLTOZÁSOK a hormonális státusz következményeként

35 SZERZETT FERTŐZÉSES EREDETŰ ELVÁLTOZÁSOK Nyúl encephalitozoonosis Galyatető TOX-2005

36 A KEZELÉS OKOZTA: STRESSZ FEKÉLY A GYOMORBAN Inhalációs vizsgálat napos Levegős kontroll Hím 1/10 Erozió Nőstény 1/10 Galyatető TOX-2005

37 A KEZELÉS MÓDJÁNAK TULAJDONÍTHATÓ ELTÉRÉSEK: inhaláció

38 AZ INTRAVÉNÁS KEZELÉS MÓDJÁNAK TULAJDONÍTHATÓ ELVÁLTOZÁSOK: szőr/bőr granulóma Galyatető TOX-2005

39 KÁROS MELLÉKHATÁS / ADVERSE EFFECT Nincs teljes egyetértés az adversity, adverse effect ezért aztán a NOAEL definiciójában sem. A sok-sok definicióban közös: Olyan biokémiai vagy strukturális változás, ami rontja az életfunkciókat, gátolja a növekedést a fejlődést és csökkenti az élettartamot.

40 KONZULTÁCIÓ, AZ ÚJRAÉRTÉKELÉS Peer Review Ismételt adagolású vizsgálat Kezelési periódus / sex E2CDS_R90+60 day sc.rat kk dd Dd DD állatszám blokk T22,R Az újraértékelés tárgya: 1. Minden szerv teljes újraértékelése: VK 10%-a és a DD 10%-a, random kiválasztással 2. Az összes neoplázia és hiperplázia 3. Célszervek minden csoportból. 4. A halál okának verifikálása 5. Eltérő vélemények egyeztetése. metszet T50, R

41 A PATOLÓGIA VÉLEMÉNY / JELENTÉS Volt elhullás? Procedurális? Anyaghatás? Célszervek: Procedurális? Anyaghatás? Primér / szekunder Makroszkópos és mikroszkópos elváltozások / incidencia táblázatok Miután a célszerveket az összes dóziscsoportnál feldolgozzák; véleményezni kell: -Érintett dózis csoportok -Dózis-hatás öszzefüggés, gyakoríság / súlyosság -Ivari különbségek -Reverzibilitás Adversity: Káros/reverzibilis, káros /nem reverzibilis, / kóros/reverzibilis Kórélettani összefüggések: élőállat fázis, labor Kétes besorolhatóságú elváltozások Háttér: törzsben/ivarban/életkorban előforduló elváltozások

42 AJÁNLOTT IRODALOM