BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials

Átírás

1 BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials Magyar HASZNÁLATI JAVASLAT A BACTEC Standard/10 Aerobic/F (dúsított emésztett szója-kazein tápleves CO 2 -vel) típusú BACTEC tenyésztõpalackok aerob vérkultúrákhoz használandók. Elsõsorban az aerob mikroorganizmusok (baktériumok és élesztõk) vérbõl való kvalitatív kitenyésztésére és kimutatására használandó a BACTEC fluoreszcens sorozatához tartozó készülékekkel. ÖSSZEFOGLALÁS ÉS MAGYARÁZAT A vizsgálandó mintával egy vagy több palackot inokulálni kell, majd a palackokat inkubálás és idõszakos leolvasás céljából a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékbe kell helyezni. Minden palack egy kémiai érzékelõt tartalmaz, amely kimutatja a mikroorganizmusok szaporodása következtében termelt CO 2 - szintnövekedést. A készülék 10 percenként ellenõrzi az érzékelõ fluoreszcenciájának növekedését, amely egyenes arányban van a jelenlévõ CO 2 mennyiségével. A pozitív leolvasási eredmény azt jelenti, hogy a palackban feltételezhetõen élõ mikroorganizmusok vannak. A kimutatás csak azokra a mikroorganizmusokra vonatkozik, melyek képesek szaporodni egy meghatározott típusú táptalajban. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE Ha a BACTEC palack tesztinokulátumában mikroorganizmusok találhatók, akkor CO 2 képzõdik, miközben azok metabolizálják a palackban található szubsztrátokat. Az emelkedõ CO 2 -koncentráció következtében a palack érzékelõ megemelkedett fluoreszcenciáját a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék mérni képes. A BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék a CO 2 növekedés mennyiségének és sebességének elemzése alapján határozza meg, hogy pozitív-e a csõ, azaz a tesztminta tartalmaz-e élõ mikroorganizmusokat. REAGENSEK A BACTEC Standard/10 Aerobic/F tenyésztõpalackok az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazzák: Összetevõk listája (WTR) Tisztított víz...40 ml (SCB) Emésztett szója-kazein tápleves...3,0% m/v (YEX) Élesztõkivonat...0,3% m/v (ATD) Emésztett állati szövet...0,01% m/v (SCR) Szacharóz...0,1% m/v (HEM) Hemin...0,0005% m/v (MEN) Menadion...0,00005% m/v (PXH) Piridoxal HCl (B 6 -vitamin)...0,001% m/v (SBC) Nátrium bikarbonát...0,04% m/v (SPS) Nátrium polianetol-szulfonát...0,035% m/v Valamennyi BACTEC tápközeg hozzáadott CO 2 -ot tartalmaz. Figyelmeztetések és óvintézkedések In vitro diagnosztizáláshoz. A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai minták patogén mikroorganizmusokat, köztük hepatitis vírusokat és Emberi immunhiány vírust (Human Immunodeficiency Virus; HIV) tartalmazhatnak. Minden vérrel, ill. más testnedvvel fertõzött egységet a Szokványos óvintézkedéseket 1-4 elõírásai szerint, ill. az intézet irányelvei szerint kell kezelni. Használat elõtt minden palackot meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, befertõzõdésre vagy károsodásra utaló nyom. A nyilvánvalóan károsodott, illetve befertõzõdött palackokat - melyek szivárognak, homályosak, tartalmuk elszínezõdött (sötétebb), a gumikupak beszívódott vagy kidudorodik - ne használja fel. A fertõzött palackban túlnyomás uralkodhat. Ha a befertõzõdött palackokat közvetlenül használja vérvételhez, a befertõzõdött tápközeg visszafolyhat a beteg vénájába. A palack fertõzöttsége nem mindig nyilvánvaló. Közvetlen vérvétel során végig kísérje figyelemmel a folyamatot annak érdekében, hogy semmilyen anyag se folyhasson vissza a beteg szervezetébe. Bizonyos esetekben elõfordulhat, hogy az üveg nyaka megreped, vagy a kupak lepattintása, illetve munka közben letörik. Ezen kívül ritkán elõfordulhat, hogy a palackok nem lettek kellõen lezárva. A palackok tartalma mindkét esetben kifröccsenhet, illetve szivároghat. Ha a palackokat már inokulálta, a kicsepegett és kiszivárgott anyaggal bánjon óvatosan, mivel azok fertõzõ organizmusokat vagy anyagokat tartalmazhatnak. Kidobás elõtt minden inokulált palackot autoklávozással sterilizáljon. Továbboltáshoz, festéshez stb.-hez való pozitív tenyészapalackok: A mintavétel elõtt ki kell engedni a mikrobiális metabolizmus során gyakran képzõdõ gázt. Amennyiben lehetséges, a mintavételt biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ védõöltözékben (beleértve a kesztyût és maszkot) kell elvégezni. A továbboltásról további információk az Eljárás címû szakaszban találhatók. Hogy a tenyésztõ palackok inokulálása alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon rögzített tûjû fecskendõket, illetve biztonságosan rögzített Luer-Lok hegyeket. Tárolási útmutató A BACTEC palackok kézhezvételkor használatra készek, további feloldás, illetve hígítás már nem szükséges. Tárolás 2 25 C hõmérsékleten, száraz, napfénytõl védett helyen. PP105JAA 2008/01 MINTÁK GYÛJTÉSE A befertõzõdés elkerülése végett a mintavételhez használjon aszeptikus technikákat. A minta ajánlott térfogata 8 10 ml. A BACTEC palackokat tanácsos közvetlenül a betegágynál inokulálni a mintával. A mintavételhez leggyakrabban egy Luer-Lok heggyel ellátott 10 vagy 20 ml-es fecskendõt használnak. A mintavételhez optimális esetben Vacutainer Needle Holder-t és Vacutainer Blood Collection Set-et, Vacutainer Safety-Lok Blood Collection Set-et vagy más pillangótû készletet kell használni. Ha tût és vérvételi csõrendszert (közvetlen vérvétel) használ, a mintavétel kezdete után fokozott figyelemmel kísérje végig a vér folyásának irányát. A palackban lévõ vákuum általában meghaladja a 10 ml-t, ezért a felhasználónak a palack címkéjén lévõ 5 ml-es jelek segítségével ellenõriznie kell a levett minta mennyiségét. Ha a kívánt 8 10 ml-t sikerült levenni, a további áramlást a csõ elszorításával, és a vérvételi készlet BACTEC palackból való kihúzásával kell megállítani. 3 ml-es térfogatú minták is felhasználhatók, ilyenkor azonban a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében. Az inokulált BACTEC palackot a lehetõ legrövidebb idõn belül a laboratóriumba kell juttatni. ELJÁRÁS Távolítsa el a BACTEC palack tetejérõl a levehetõ kupakot, majd vizsgálja meg az üveget különös tekintettel a repedésekre, a befertõzõdésre, a túlzott homályosságra, a mûanyag kupak beszívódására, illetve kidudorodására. Ha bármilyen hibát észlel, NE HASZNÁLJA FEL a palackot. Inokulálás elõtt törölje le a gumikupakot alkohollal (jódtartalmú fertõtlenítõ szer használata NEM javallott). Aszeptikus módon fecskendezzen vagy engedjen közvetlenül a palackba,

2 palackonként 8 10 ml mintát. Amennyiben 3 4 ml-nyi mintát használ, a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében (lásd Az eljárás korlátai). Az inokulált aerob palackokat inkubálás és monitorozás céljából a lehetõ legrövidebb idõn belül be kell tenni a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékébe. Ha a palackot nem helyezi idõben a készülékbe, és a palackban jól láthatóan elindult a szaporodás, akkor a palackot ne tesztelje BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékben, hanem oltsa tovább, készítsen Gram-festést, és tekintse a palackot feltehetõen pozitívnak. A készülékben elhelyezett palackokat a készülék automatikusan, a teszt protokoll idõtartama alatt 10 percenként teszteli. A pozitív palackokat a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék felismeri, és pozitívnak minõsíti (lásd a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatóját). Az üvegen belül található érzékelõ nem mutat szemmel látható különbséget a pozitív vagy negatív palackokban, ennek ellenére a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék ki tudja mutatni a fluoreszcenciában bekövetkezett változásokat. Amennyiben a tesztperiódus végére egy negatív BACTEC Standard/10 Aerobic/F palack szemmel láthatóan pozitívvá válik (azaz a vér barnává válik, a gumikupak kidudorodik, a vér nagyon sötét és/vagy hemolizált), tenyéssze tovább, készítsen gram-festést, és tekintse feltehetõen pozitívnak. A pozitív palackokat tovább kell oltani, és gram-festett kenetet kell készíteni. Az esetek többségében a mikroorganizmusok láthatóvá válnak, és az orvossal az elõzetes eredményeket lehet közölni. BACTEC palackban lévõ folyadékból szelektív táptalajra továbboltott kultúrák hozhatók létre, illetve elõzetes, közvetlen gyógyszerérzékenységi teszt is végezhetõ. Továbbtenyésztés: Továbboltás elõtt helyezze a palackot álló helyzetbe, és takarja le a a palack kupakját egy alkoholos törlõvel. A palackban uralkodó túlnyomás megszüntetésére szúrjon egy megfelelõ szûrõvel (vagy vattacsomóval) ellátott tût az alkoholos törlõn át a palack kupakjába. A tût a nyomás csökkentése után, a továbboltáshoz való minta kivétele elõtt el kell távolítani. A tû beszúrását és kihúzását egyenes irányú mozdulatokkal kell elvégezni, és kerülni kell a tekerõ mozdulatokat. A maximális izolátum hozamhoz, a negatív tenyészeteket ellenõrizze festéssel és/vagy továbboltással, mielõtt a mintákat negatívnak értékelné, és kidobná. MINÕSÉGELLENÕRZÉS A minõségellenõrzés követelményeit az alkalmazható helyi, állami, illetve szövetségi szabályok vagy akkreditációs elõírásai, valamint laboratóriumuk szabványos minõségellenõrzési eljárásai szerint kell megállapítani. A megfelelõ minõség-ellenõrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni az érvényes CLSI (korábban NCCLS) elõírásokat és a CLIA szabályzatot. A lejárati idõ után NE HASZNÁLJA FEL a tenyésztõ palackokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a tenyészpalackokat, melyeken bármilyen sérülés vagy repedés látszik. Az ilyen palackokat a megfelelõ módon dobja ki. A Quality Control Certificate (Minõségellenõrzési tanúsítvány) minden tápközeg dobozban megtalálható. A Minõségellenõrzési tanúsítvány felsorolja a teszt mikroorganizmusokat, beleértve az CLSI standard, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media fejezetében leírt ATCC tenyészeteket is. 5 Az érzékelés idõtartama ezen táptalaj esetén a Minõségellenõrzési tanúsítványban felsorolt valamennyi mikroorganizmus esetében 72 óra: Streptococcus pyogenes ATCC Escherichia coli ATCC Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC Candida albicans ATCC Neisseria meningitidis ATCC Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC *CLSI törzs A BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékek minõség-ellenõrzésérõl a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatójában olvashat további információkat. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Befertõzõdés Ügyeljen arra, hogy a mintavétel alatt és az inokulálás során a BACTEC palackok ne fertõzõdjenek be. A bertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai eredménynek. A meghatározást a felhasználónak kell elvégeznie olyan tényezõk alapján, mint a kimutatott mikroorganizmus típusa, ugyanannak a mikroorganizmusnak a gyakorisága több tenyészetben, a beteg kórelõélete, stb. SPS-érzékeny mikroorganizmusok kimutatása vérmintákból Mivel a vér semlegesíteni képes az SPS toxicitását, SPS-érzékeny mikroorganizmusok (pl. egyes Neisseria fajok) esetében az optimális vérmennyiség (8 10 ml) elõsegíti ezen mikroorganizmusok kimutatását. Bizonyos érzékeny mikroorganizmusok, pl. egyes Haemophilus fajok különleges növekedési faktorokat (pl. NAD vagy V-faktor) igényelnek, melyeket a vérminta biztosít. Amennyiben a vérminta mennyisége 3,0 ml vagy annál kevesebb, ezen mikroorganizmusok kimutatásához a megfelõ szuplementet kell hozzáadni a tápközeghez. Tápanyagkiegészítésként BACTEC FOS Fastidious Organism Supplement használható. Nem élõ organizmusok A tenyésztõ tápközegekbõl készített gram-festett kenetek kis számú, nem élõ mikroorganizmust tartalmazhatnak, melyek a tápközeg összetevõibõl, a festékbõl, az immerziós olajból, az üveg tárgylemezekrõl, illetve az inokuláláshoz használt mintából származhatnak. Ezen kívül a betegtõl származó mintában lehetnek olyan mikroorganizmusok, melyek nem szaporodnak a tenyésztéshez vagy továbbtenyésztéshez használt tápközegben. Az ilyen mintákat szükség esetén a megfelelõ speciális tápközegben kell továbbtenyészteni. 6 A Streptococcus pneumoniae kimutatása Aerob tápközegben az S. pneumoniae általában szemmel láthatóan és a gép által is pozitív, de bizonyos esetekben a Gram-festés, valamint a rutinszerû továbbtenyésztés során sem találhatók mikroorganizmusok. Amennyiben egy anaerob palackot is inokuláltak, ez a mikroorganizmus gyakran kimutatható az anaerob palack aerob továbbtenyésztésével, mivel errõl a mikroorganizmusról többször leírták már, hogy anaerob körülmények között is jól szaporodik. 7 Általános szempontok Az izolátumok optimális kimutatásához 8 10 ml vér szükséges. Ennél kisebb vagy nagyobb térfogat kedvezõtlenül befolyásolhatja a kimutatást és/vagy az érzékelés idõtartamát. A vér tartalmazhat antimikrobiotikumokat vagy egyéb olyan gátló anyagokat, melyek lelassítják, vagy megakadályozzák a mikroorganizmusok szaporodását. Amennyiben a mintában olyan mikroorganizmusok vannak jelen, amelyek nem termelnek elég CO 2 -ot ahhoz, hogy a rendszer kimutassa, illetve a szignifikáns szaporodás még a készülékbe helyezés elõtt megtörtént, fals negatív eredmény születhet. Magas fehérvérsejtszám esetében fals pozitív eredmény születhet. 2

3 VÁRT EREDMÉNYEK ATCC és vad mikroorganizmus-törzsek használatával tenyésztéses vizsgálatokat végeztek tenyésztõpalackonként CFU tartalmú inokulumokkal. A következõkben a BACTEC Standard/10 Aerobic/F Medium tápközegben öt (5) napos idõszak alatt pozitívnak talált mikroorganizmusok listája látható. Acinetobacter anitratus Cryptococcus neoformans Proteus mirabilis Staphylococcus epidermidis Acinetobacter lwoffii Enterobacter cloacae Providencia stuartii Streptococcus pneumoniae Alcaligenes faecalis Enterococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pyogenes (A csoport) Candida (Torulopsis) glabrata Escherichia coli Salmonella typhimurium Xanthomonas maltophilia Candida albicans Haemophilus influenzae Serratia marcescens Corynebacterium J-K Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus TELJESÍTMÉNYJELLEMZÕK Egy klinikai vizsgálatban összehasonlították a BACTEC Standard/10 Aerobic/F vérkultúra tápközeget a BACTEC Standard Aerobic/F vérkultúra tápközeggel. Összesen párosított palackot értékeltek. Fals pozitív palackot nem találtak. A vizsgálat alatt három fals negatív BACTEC Standard/10 Aerobic/F vérkultúra palackot azonosítottak. A fals negatív eredmények rátája 0,2%. Összesen 113 mikroorganizmust mutattak ki. A kimutatott izolátumokat tápközegek szerint csoportosítva az 1. táblázat tartalmazza. Ezek közül 76 (67,3%) bizonyult klinikailag szignifikánsnak. A 76 klinikailag szignifikáns izolátum közül 53-at (69,7%) mindkét tápközegben kimutattak, 8-at (10,5%) csak a BACTEC Standard/10 Aerobic/F vérkultúra tápközeggel mutattak ki, míg 15-öt (19,7%) csak a BACTEC Standard Aerobic/F vérkultúra tápközeggel mutattak ki. A csak a BACTEC Standard/10 Aerobic/F vérkultúra tápközeggel való kimutatás és a csak a BACTEC Standard Aerobic/F vérkultúra tápközeggel való kimutatás között statisztikailag szignifikáns különbséget nem találtak. A BACTEC Standard/10 Aerobic/F vérkultúra tápközeg átlagos kimutatási ideje 20,4 óra, míg a BACTEC Standard Aerobic/F vérkultúra tápközeg átlagos kimutatási ideje 21,5 óra. 1. táblázat: Klinikai tanulmány izolátumainak kimutatása - Tápközeg fajtája Mikrooganizmus CSAK Standard/10 Aerobic/F-ben kimutatva CSAK Standard Aerobic/F-ben kimutatva MINDKETTÕBEN kimutatva GRAM NEGATÍVAK GRAM POZITÍVAK ÉLESZTÕ A klinikai bevizsgálás alatt BACTEC Standard/10 Aerobic/F-fel kimutatott mikroorganizmusok listája: Candida albicans Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Candida tropicalis Haemophilus influenzae Staphylococcus aureus Streptococcus fajok Citrobacter diversus Klebsiella pneumoniae Staphylococcus koag. negatív Enterobacter aerogenes Morganella morganii Staphylococcus haemolyticus Enterococcus faecalis Proteus mirabilis Streptococcus constellatus KISZERELÉSEK Kat. sz. Leírás BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials, 50 palackos kiszerelés IRODALOMJEGYZÉK: 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.) Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:

4 4

5 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland U.S.A BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, FOS, Vacutainer, Luer-Lok and Safety-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.