QUANTA Lite TM Ribosome P 708600 In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas

QUANTA Lite TM Ribosome P 708600 In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas Javasolt alkalmazás QUANTA Lite TM Ribosome P egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA) a Ribosoma P antitestek szemikvantitatív kimutatására humán szérumban. A Ribosoma P antitesteknek a jelenléte felhasználható a klinikai adatokkal és más laboratóriumi vizsgálatok eredményével együtt kiegészítő adatként a szisztémás lupus erythematosus (SLE) és a rokon kötőszöveti betegségek diagnózisának felállítása során. A teszt összegzése és magyarázata Antinuclearis antitestek (ANA) a kötőszöveti betegségek széles körében megtalálhatók, és mint ilyenek, szenzitív szűrőmódszerként szolgának. 1 Míg az ANA teszt kiváló szűrő módszer SLE esetében (a negatív eredmény gyakorlatilag kizárja az aktív SLE diagnózisát) 2, specifikusnak semmiféle értelemben nem nevezhető. Az ANA pozitív mintákat rendszerint specifikus másodlagos vizsgálatok változatos sorával tesztelik az autoantitest profil meghatározása céljából. A cytoplasma ribosomáival reagáló autoantitestek erősen specifikusak SLE-re, és az Sm és dsdna antitestekhez hasonlóan marker antitesteknek tekinthetők. 3 HEp-2 sejt szubsztráton végzett immunfluorescens eljárással a ribosoma antitestek finom granuláris cytoplasmatikus fluorescenciát mutatnak. 4 Ezek az antitestek megtalálhatók az SLE betegek megközelítőleg 12%-ában 5,6 és lupusos psychosis esetek 90%-ában. 7 A legtöbb betegben, akikben a lupus psychosis és ribosoma antitestek együtt fordulnak elő, az antitest titer több, mint ötszörös növekedését észlelték a betegség aktív fázisai előtt és alatt. 7 Az anti ribosoma-p antitestek 3 foszfoprotein - P 0, P 1, és P 2 - ellen irányulnak, amelyek az eukaryota ribosomák nagyobb, 60S' alegységén találhatók. A robosomalis antigént az utóbbi időben nagyon alaposan karakterizálták, és több tanulmány jelent meg a rekombináns ribosoma P 8 vagy egy szintetikus karboxylterminális 22 aminosavból álló peptid 9,10 használatával. Ez a lineáris felépítésű determináns peptid közös és ugyanakkor a fő epitop a 3 különböző ribosoma foszfoproteinben. 10 Olyan tanulmányok, amelyekben a szintetikus 22 aminosavból álló C-terminális peptidet tartalmazó ELISA módszerrel végeztek, a tesztet jól használhatónak találták neurologiai lupus eseteiben 9,10 és nem találkoztak olyan ellentmondásos eredményekkel, mint ami előfordult rekombináns ribosoma P használata esetében 11 és amit valószínűleg az antigén preparátumban maradt bakteriális eredetű szennyeződések okoztak. A ribosoma ellenes antitestek kimutatására a vizsgáló módszerek széles skáláját alkalmazták, többek között az Ouchterlony kettős immundiffúziós eljárást, RIA módszert, és főként az indirect immunfluorescenciát. Az immunofluorescens technika téves negatív eredményt adhat interferáló antitestek jelenléte miatt, és téves pozitív is lehet, más, nem-ribosoma cytoplasma antigénnel szembeni reaktivitás esetén. A jól difiniált szintetikus peptid használata egy érzékeny, specifikus és reprodukálható assay kifejlesztéséhez vezetett. Az ebben a tesztben alkalmazott ELISA technika szenzitív, specifikus és objektív, kényelmesen használható mind nagy, mind pedig kis számú minta vizsgálatára. A módszer elve Szintetikus Ribosoma P antigént kötötték mikrotiter lemez mérőedénykéinek falához olyan körülmények között, ami képes az antigén natív állapotát megőrizni. Az előhígított kontrollokat és a hígított beteg-mintákat az egyes különálló mélyedésekbe töltjük, ahol a mintában esetleg jelen lévő Ribosoma P antitestek kikötődnek az edény falához rögzített antigénekhez. A nem kötődött mintát mosással eltávolítjuk, és minden egyes mélyedésbe enzimmel kapcsolt anti-humán IgG konjugátumot adunk. A második inkubáció lehetővé teszi az enzimmel jelzett anti-humán IgG számára, hogy a vizsgált mintából származó, az első inkubáció során lekötött antitesthez kapcsolódjon, ha volt ilyen. Miután az enzimmel jelölt anti-humán IgG felesleget mosással eltávolítottuk, a rögzítve maradt enzim aktivitását kromogén szubsztrát hozzáadásával és a kialakult szín intenzitásának mérésével határozzuk meg. A tesztet spektrofotometriás módszerrel lehet értékelni úgy, a betegek mintáival kapott szín intenzitását lemérjük, és a kontrollokéhoz hasonlítjuk. 1

Reagensek 1. Polisztirén mikrotiter ELISA lemez, tisztított Ribosoma P antigénnel fedve (12-1 x 8 mérőhely), tartókerettel, szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba csomagolva 2. ELISA Negatív Kontroll, 1 üveg puffer, tartósító anyagokat és humán szérumot tartalmaz, amelyben nincsenek humán Ribosoma P antigén ellenes antitestek, előhígítva, 1.2mL 3. Ribosoma P ELISA Low Positive (mérsékelten pozitív kontroll), 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum Ribosoma P ellenes antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 4. Ribosoma P ELISA High Positive (erősen pozitív kontroll), 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum Ribosoma P ellenes antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 5. HRP Minta Diluens, 1 üveg rózsaszínre festve, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel, Tween 20, protein stabilizátorok és tartósító anyagok, 50mL 6. HRP mosó koncentrátum, 1 üveg 40x-es koncentrátum pirosra színezett, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel és Tween 20, 25mL. A hígítási javaslatok a Módszer szakaszban találhatók. 7. HRP IgG Konjugátum, (kecske), anti-humán IgG, 1 üveg kék színűre színezett, puffert, protein stabilizátorokat és tartósító anyagokat tartalmaz, 10mL 8. TMB Kromogén, 1 üveg, stabilizátorokat tartalmaz, 10mL 9. HRP Stop (leállító) oldat, 0.344M kénsav, 1 üveg színtelen, 10mL Veszélyforrások 1. FIGYELEM: Ez a termék olyan kémiai anyagot (0.02% chloramphenicol) tartalmaz a mintahígítóban, kontrollokban és a konjugátumban, amelyet California államban rákkeltőként tartanak nyilván. 2. Az összes humán eredetű anyagot, amelyeket a kontrollok előállítása során felhasználtak ehhez a termékhez, ellenőrizték és negatívnak találták HIV, HBsAg, és HCV ellenes antitestekre nézve az FDA által jóváhagyott módszerekkel. Semmilyen teszt módszer nem tud azonban tökéletes biztonságot nyújtani arra nézve, hogy a termék mentes HIV, HBV, HCV vírusoktól, vagy más fertőző ágensektől. Éppen ezért, a Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontroll, a Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll és az ELISA Negatív Kontroll potenciálisan fertőző anyagként kezelendő. 12 3. Nátrium azidot alkalmaztak az oldatok stabilizálására. A nátrium azid méreg, és lenyelve, vagy szemen, bőrön keresztül felszívódva toxikus lehet. A nátrium azid ezen kívül ólom vagy réztartalmú vízvezeték csövekkel reakcióba léphet, robbanásveszélyes fém-azid komplexet képezve. Ha a reagensek maradványait a vízvezeték rendszeren keresztül távolítja el, öblítse a medencét nagy mennyiségű vízzel az azid lerakódás megakadályozása céljából. 4. A HRP konjugátum egy híg mérgező/korrozív vegyszert tartalmaz, ami nagy mennyiségben elfogyasztva toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 5. A TMB Kromogén irritáló anyagot tartalmaz, ami belélegezve, lenyelve, vagy a bőrön keresztül felszívódva veszélyes lehet. A sérülések megelőzése érdekében kerülje az anyag belélegzését, elfogyasztását illetve a bőrre, szembe jutását. 6. A HRP Stop oldat hígított kénsav oldat. Ne tegye ki bázisok, fémek vagy más olyan anyagok hatásának, amelyek savakkal reakcióba lépnek. A kénsav mérgező és maró anyag, lenyelve toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 7. Használjon megfelelő személyi védőeszközöket a kitben található reagensekkel végzett műveletek során. 8. A kicsöppenő reagenseket azonnal fel kell takarítani. A hulladékok eltávolítása folyamán tartsa be az összes szövetségi, állami és helyi környezetvédelmi előírást. Az analitikai hibák megelőzését célzó figyelmeztetések 1. Ez a termék in vitro diagnosztikai alkalmazásra készült. 2. A rendszer egyes elemeinek helyettesítése más termékekkel az eredményeket meghamisíthatja. 3. Nem tökéletes vagy hatástalan mosás, és a folyadék elégtelen eltávolítása az ELISA csíkok edénykéiből nem megfelelő reprodukálhatóságot és/vagy magas hátteret okozhat. 4. Ennek a tesztnek az adaptációja automatikus mintakezelési rendszerek és más folyadék-kezelő eszközök használatához, teljes egészében vagy részleteiben, a teszt eredményeinek eltérését okozhatja attól, amit manuális módszerrel nyertek. Minden laboratóriumnak a saját felelőssége az általa alkalmazott automatizált rendszer validálása annak érdekében, hogy az eredmények 2

elfogadható tartományon belül legyenek. 5. A teszt működését változatos tényezők befolyásolhatják. Ilyenek lehetnek a reagensek induló hőmérséklete, a környezeti hőmérséklet, a pipettázási technika pontossága és reprodukálhatósága, a mosás és a folyadék-maradványoknak az ELISA lemez edénykéiből történő eltávolításának az alapossága, az eredmények mérésére használt fotométer, és az assay kivitelezése során alkalmazott inkubációs idők tartama. Nagy gondot kell fordítani a következetességre annak érdekében, hogy a kapott eredmények megbízhatóak és reprodukálhatóak legyenek. 6. Javasoljuk, hogy a vizsgálat kivitelezése során szigorúan kövesse a protokollt. 7. A mikrotiter csíkokat és a szárító betéteket tartalmazó visszazárható tasakok tökéletlen lezárása az antigén degradációját és a teszt precizitásának romlását okozza. 8. A HRP konjugátumnak bizonyos idő-intervallumban két vagy több alkalommal történő használata ugyanabból az üvegből, elfogadhatatlanul alacsony abszorbancia értékeket eredményezhet. Fontos a HRP konjugátum kezelésére vonatkozó előírások pontos betartása az ilyen problémák megelőzése érdekében. 9. A HRP konjugátum kémiai szennyeződése következhet be az eszközök és műszerek nem megfelelő tisztítása miatt. Általánosan használt laboratóriumi vegyszerek, mint például a formalin, fehérítő szerek, alkohol vagy detergensek maradványai a HRP konjugátum lebomlását okozzák bizonyos idő után. Kémiai tisztítószerek vagy fertőtlenítő szerek használata után a készülékeket és eszközöket alaposan le kell öblíteni. Tárolási körülmények 1. A kit valamennyi reagensét tárolja 2-8 C között. Nem szabad fagyasztani a terméket. A reagensek az előírásoknak megfelelően kezelve és tárolva a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. 2. A fel nem használt, antigénnel bevont mikrotiter csíkokat a szárítóbetéttel együtt biztonságosan vissza kell zárni a fóliatasakba, és 2-8 C között kell tárolni. 3. A hígított mosópuffer 2-8 C között tartva 1 hétig használható. A minta vétele és kezelése Ez az eljárás szérum minták vizsgálatára alkalmas. A vizsgálandó mintákhoz azidot vagy más tartósító anyagokat adni nem ajánlott, mert ezek torzíthatják az eredményeket. Mikrobiológiai szempontból szennyezett, hőkezelt, vagy látható csapadékot, szilárd részecskéket tartalmazó minta nem használható. Kerülje az erősen hemolizált vagy lipémiás minták használatát. Levétel után a szérumot az alvadéktól el kell választani. Az NCCLS Document H18-A3 a minták tárolására a következő körülményeket javasolja: 1) Ne tartsa a mintákat 8 óránál hosszabb ideig szobahőmérsékleten. 2) Ha a vizsgálat nem végezhető el 8 órán belül, tartsa a mintákat hűtve, 2-8 C között. 3) Ha a teszt nem végezhető el 48 órán belül, vagy a minták szállítására van szükség, fagyassza és tárolja a mintákat -20 C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten. A fagyasztott mintákat a kiolvasztás után és vizsgálat előtt alaposan fel kell keverni. A teszt kivitelezése A kitben rendelkezésre álló anyagok 1 Ribosoma P ELISA mikrotiter lemez, (12-1 x 8 mérőhely), tartókerettel 1 1.2mL ELISA Negatív Kontroll, előhígítva 1 1.2mL Ribosoma P ELISA Low Positive (mérsékelten pozitív kontroll) előhígítva 1 1.2mL Ribosoma P ELISA High Positive (erősen pozitív kontroll) előhígítva 1 50mL HRP Minta Diluens 1 25mL HRP Wash (mosó) Koncentrátum, 40x es koncentráció 1 10mL HS HRP IgG Konjugátum, (kecske), anti-humán IgG 1 10mL TMB Kromogén 1 10mL HRP Stop Oldat, 0.344M Kénsav További szükséges anyagok a kiten kívül Mikropipetták 5, 100, 200-300, és 500µL beméréséhez Egyszer használatos mikropipetta-hegyek Tesztcsövek a betegek mintáinak hígításához, 4mL térfogattal 3

Desztillált vagy ionmentesített víz 1L-es edény a HRP mosó koncentrátum hígításához Mikrotiter lemez leolvasó az OD mérésére 450nm-en (és 620nm-en a két hullámhosszon történő leolvasáshoz) Módszer Mielőtt hozzákezd 1. Várjon, míg a minták és a reagensek elérik a szobahőmérsékletet (20-26 o C) és mindegyiket jól keverje meg. 2. Hígítsa a HRP mosó koncentrátumot 1:40 arányban, úgy, hogy a HRP mosó koncentrátumos üveg tartalmát 975 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez adja. Ha nem kerül a teljes lemez egyszerre feldolgozásra, kisebb mennyiséget is lehet hígítani: minden 16 felhasználandó mérőhely számára adjon 2 ml koncentrátumot 78 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez. A hígított puffer egy hétig stabil 2 8 C között tartva. 3. Készítsen minden egyes beteg-mintából 1:101 arányú hígítást a következő módon: adjon 5µL mintát 500µL HRP minta diluenshez. A hígított mintákat 8 órán belül fel kell használni. NE HÍGÍTSA a Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontrollt, a Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontrollt, és az ELISA negatív kontrollt. 4. A Ribosoma P antitestek jelenlétének vagy hiányának tapasztalati egységekben történő meghatározása céljából használjon mind a három kontroll teszteléséhez két-két mérőhelyet, és a betegek mintának lemérésére egy vagy két mérőhelyet. Javasoljuk a betegek mintáiból is a párhuzamos (duplikált) meghatározásokat. A módszer kivitelezése 1. VALAMENNYI REAGENSNEK EL KELL ÉRNIE A SZOBA HŐMÉRSÉKLETÉT (20-26 C) A VIZSGÁLAT MEGKEZDÉSE ELŐTT. Helyezze a szükséges számú mérőedénykét/csíkot a keretbe. A fel nem használt csíkokat haladéktalanul tegye vissza a szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba, és zárja vissza a tasakot biztonságosan, hogy a mérőhelyek minimális ideig legyenek kitéve a párásodás veszélyének. 2. Pipettázzon 100µL-t az előhígított Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontrollból, a Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontrollból, az ELISA negatív kontrollból és a hígított beteg-mintákból a mérőedénykékbe. Fedje be a lemezeket, és inkubálja 30 percig szobahőmérsékleten, sima vízszintes felületen. Az inkubációs idő az utolsó minta bemérése után kezdődik. 3. Mosás: Gondosan szívja le minden egyes mérőedényke tartalmát. Adjon 200-300µL hígított HRP mosó puffert minden egyes mérőhelyhez, majd ezt is szivassa ki. Ismételje az eljárást még kétszer, így végezzen el összesen három mosást. Fordítsa a lemezt nyílásokkal lefelé, és egy nedvszívó felületen finoman ütögetve távolítsa el tökéletesen az utolsó mosás után visszamaradt nedvesség nyomait az edénykékből. Nagyon fontos, hogy az edénykék minden egyes mosási lépés után tökéletesen ki legyenek ürítve. A leszíváskor tartsa be a minta felvitelekor alkalmazott sorrendet. 4. Adjon 100μL HRP IgG Konjugátumot minden egyes mérőhelyhez. A konjugátumot az eredeti reagens üvegből aszeptikus körülmények között és a helyes laboratóriumi eljárásnak megfelelően kell kivenni. Csak annyi konjugátumot vegyen ki az üvegből, amennyire a teszt kivitelezéséhez szüksége van. A POTENCIÁLIS MIKROBIOLÓGIAI ÉS/VAGY KÉMIAI SZENNYEZŐDÉS ELKERÜLÉSE ÉRDEKÉBEN SOHA NE TÖLTSE VISSZA A FEL NEM HASZNÁLT KONJUGÁTUMOT AZ ÜVEGBE. Inkubálja a lemezt 30 percig, mint a 2-ik lépésben. 5. Mosás: Ismételje a 3 lépést. 6. Adjon 100µL TMB kromogént minden egyes edénykébe, és inkubálja sötét helyen 30 percig szobahőmérsékleten. 7. Adjon 100µL HRP Stop oldatot minden mérőhelyre. Tartsa be a HRP Stop oldat adagolása alkalmával ugyanazt a tempót és sorrendet, amit a TMB kromogén bemérésekor használt. Óvatosan ütögesse meg ujjával a lemez oldalát, az edénykék tartalmának alapos összekeverése céljából. 8. Olvassa le minden egyes mérőhely abszorbancia (OD) értékét a reakció leállítását követő egy órán belül, 450 nm-en. Ha bikromatikus leolvasást igényel, referencia hullámhossznak a 620nm használható. 4

Minőség-ellenőrzés 1. A Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontroll, a Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll és az ELISA negatív kontroll minden egyes beteg-minta sorozattal együtt kell fusson, hogy ellenőrizhető legyen, hogy az összes reagens és az eljárás végrehajtása is kifogástalan volt a teszt kivitelezése folyamán. 2. Ne feledje, hogy mivel a Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontroll, a Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll és az ELISA negatív kontroll előhígítva kerülnek forgalomba, ezek nem kontrollálják a minta hígításával kapcsolatos előkészítési folyamatot. 3. Kiegészítő kontrollok vizsgálata is végezhető a helyi, állami és/vagy szövetségi rendelkezések, vagy az akkreditációs testületek ajánlásainak vagy elvárásainak megfelelően. Alkalmas kiegészítő kontroll szérum készíthető kevert humán szérum minták szétosztásával, és < -20 C-on történő tárolásával. 4. Annak érdekében, hogy a teszt eredményeit érvényesnek tekinthessük, valamennyi, alább felsorolt kritériumnak teljesülnie kell. Ha ezek közül bármelyik nem teljesül, a tesztet érvénytelennek kell tekinteni, és az eljárást meg kell ismételni. a. Az előhígított Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll abszorbanciája nagyobb kell, hogy legyen, mint az előhígított Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontroll abszorbanciája, és ez nagyobb kell legyen, mint az előhígított ELISA negatív kontroll abszorbanciája. b. Az előhígított Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll abszorbanciája 1.0-nél nagyobb kell legyen, míg az előhígított ELISA negatív kontroll abszorbanciája nem lehet nagyobb 0.2-nél. c. A Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontroll abszorbanciája több, mint kétszerese kell legyen az ELISA negatív kontroll abszorbanciájának, vagy legyen nagyobb, mint 0.25 d. Az ELISA negatív kontroll és a Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll a reagensek minőségének lényeges eltérését kontrollálja. A Ribosoma P ELISA erősen pozitív kontroll használata nem garantálja a precizitást a teszt küszöbértékének közelében. e. A megfelelő QC eljárásokra vonatkozó további információkat az NCCLS Document C24-A2 tartalmazza, ennek tanulmányozása ajánlott. Az eredmények kiszámítása Először határozza meg a párhuzamos minták OD értékeinek átlagát. Ezután minden egyes minta reaktivitása meghatározható olyan módon, hogy a minta OD átlagát elosztjuk a Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontroll OD átlagával. A kapott eredményt szorozzuk a Ribosoma P ELISA mérsékelten pozitív kontrollt tartalmazó üveg címkéjén feltüntetett egység mérőszámával. Minta OD Minta eredménye = x Ribosoma P ELISA mérs. Poz. Kontr. (egység) Ribosoma P ELISA mérs. Poz. Kontr. OD (egység) A reaktivitás és a mintában lévő antitestek mennyisége között nem-lineáris kapcsolat van. Miközben a beteg antitest koncentrációjának növekedése és csökkenése a reaktivitás ezzel összefüggő növekedésében és csökkenésében mutatkozik meg, a változás nem lesz arányos (azaz, például a koncentráció kétszeresére nő, de a reaktivitás nem lesz kétszeres). Ha a beteg antitest koncentrációjának ennél pontosabb meghatározására van szükség, a beteg mintájának sorozatos hígítását kell tesztelni, és azt az utolsó hígítást tekintjük a beteg antitest titer értékének, ami még a tesztben pozitív eredményt adott. Az eredmények értelmezése Az ELISA assay a kivitelezési technikára nagyon érzékeny módszer, és képes a beteg-populációk között lévő igen kis különbségek érzékelésére. Az alábbi adatok csak tájékoztatásra szolgálnak. Minden laboratóriumban meg kell határozni a saját referencia tartományokat, az aktuálisan használt technikával, kontrollokkal, eszközökkel, és a vizsgált beteg populációra jellemző módon, a helyi eljárási szabályoknak megfelelően. A minta besorolása lehet negatív, gyengén pozitív, mérsékelten pozitív és erősen pozitív az alábbi táblázat szerint: 5

Egység Negatív < 20 Gyengén pozitív 20 39 Mérsékelten pozitív 40 80 Erősen pozitív >80 1. A pozitív eredmény arra utal, hogy a mintában Ribosoma P antitestek vannak, és felveti a szisztémás lupus erythematosus vagy rokon kötőszöveti betegség fennállásának lehetőségét. 2. A negatív eredmény arra utal, hogy a betegnek nincs Ribosoma P antitestje, vagy annak koncentrációja nem éri el a teszt kimutathatósági küszöbét. 3. Javasoljuk, hogy a laboratórium által kiadott értékelés tartalmazza az alábbi megállapítást: Az itt következő eredmény az INOVA QUANTA Lite TM Ribosome P ELISA kit használatával keletkezett. Más gyártók tesztjével kapott Ribosoma P eredmények ettől eltérőek lehetnek, váltakozva nem használhatók. A közölt IgG érték nagyságrendje nem vethető össze egy végpont-titer értékkel. A módszer korlátai 1. Immunkomplexek és más immunglobulin aggregátumok jelenléte a mintában a nem-specifikus kötődés mértékét növelheti, és a teszt téves pozitivitását okozhatja. 2. Nem minden SLE betegségben szenvedő páciens mintája pozitív Ribosoma P antitestekre. 3. Nem minden neurológiai problémával járó SLE betegségben szenvedő páciens mintája pozitív Ribosoma P antitestekre. 4. Vannak olyan közlemények, melyek szerint a Ribosoma P antitestek oncentrációja növekedhet vagy csökkenhet a betegség felléngolása illetve remissiója idején, és a therápia befolyásolja a titert. 5. Az eredményeket a klinikai adatok és más szerológiai tesztek eredményével együtt kell értékelni. 6. Az assay működési jellemzői a szérumtól eltérő anyagok vizsgálatára nincsenek meghatározva. Várható értékek A QUANTA Lite Ribosoma P ELISA teszt alkalmasságát a Ribosoma P antitestek detektálására egy kereskedelmi forgalomban lévő INOVA Diagnostics indirekt immunfluorescens módszerrel történt összehasonlítás segítségével határozták meg. Az immunfluorescens eljárás eredményét pozitívnak tekintették, ha finom granuláris cytoplasmatikus fluorescencia látszott a HEp-2 sejt szubsztráton, és negatívnak, ha nem volt megfigyelhető fluorescencia. Referencia tartomány Nyolcvanhét normál mintát vizsgáltak. A normál populáció körülbelül 90%-a nőkből állt, az életkoruk 18-69 év volt. Mind a 87 minta teljesen negatív volt a QUANTA Lite Ribosome P teszttel. A legerősebb minta reaktivitása 10 egység volt, a többi minta reaktivitása nagyrészt 2 és 6 egység közé esett. A pozitív küszöbérték 20 egység. Relatív szenzitivitás és specificitás A referencia laborba küldött mintákat tesztelték ribosoma antitestekre a QUANTA Lite Ribosome P ELISA kittel és immunfluorescens módszerrel HEp-2 sejteken. Az eredmények: ELISA + - + 11 2* Relatív Szenzitivitás 84.6% HEp-2 Relatív Specificitás 100% - 0 20 Relatív Hatékonyság 93.9% *Mindkét minta negatív volt Western blot technikával vizsgálva. 6

Klinikai Szenzitivitás és Specificitás Páciens csoport N. Ribosoma P poz.minták (%) Egészségesek 122 0 Nem-ribosoma 56 0 cytoplasma antitestek SLE 75 15 (20.0%) SLE (neurologiai tünetekkel) 38 10 (26.3%) SLE (neurologiai tünetek nélkül) 19 0 SLE (neurologiai tünetek, 57 57 (100%) ribosoma pozitív HEp-2 és/vagy western blot módszerrel) Kereszt-reaktivitás Különböző autoantitesteket nagy titerrel tartalmazó szérumokat vizsgáltak. Ezekben a mintákban az alábbi specifikus antitestek voltak megtalálhatók: Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1, simaizom (ASMA), M-2 mitochondriumok (AMA) valamint szerin proteáz-3 (PR-3), myeloperoxidáz (MPO), és gliadin. Mindegyik minta negatív lett a QUANTA Lite Ribosome P ELISA kittel vizsgálva. A legerősebb reaktivitás 6 egység volt, a minták többségében 2-3 egységet mértek. A teszt küszöbértéke 20 egység. Precizitás és reprodukálhatóság Az assay precizitását és reprodukálhatóságát egy negatív, egy gyengén pozitív és egy erősen pozitív minta hat paralell vzsgálatával határozták meg, négy különálló sorozatban megismételve. Az átlagos reaktivitás az erősen pozitív mintában 113.7 egység volt, a gyengén pozitív minta átlaga 25.1 és a negatív 2.72 volt. Az alábbiakban összefoglalva láthatók a sorozatok standard deviációi és variációs együtthatói az egyes minták esetében. Negatív Erősen pozitív Gyengén pozitív SD CV SD CV SD CV Általános 0.42 15.2% 5.09 4.5% 0.83 3.3% Sorozaton belül 0.14 5.1% 1.84 1.6% 0.81 3.2% Sorozatok között 0.43 15.6% 5.40 4.7% 0.76 3.0% 7

Hivatkozások 1. Tan EM: Autoantibodies to nuclear antigens(ana): Their immunobiology and medicine. Advances in Immunology 33: 167-239, 1982. 2. Tan EM, et al.: The 1982 Revised Criteria for the Classification of Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: 1271-1277, 1982. 3. Yasuma M, et al.: Clinical Significance of IgG Sm Antibodies in patients with systemic lupus erythematosus. J Rheumatology 17: 469, 1990. 4. Miyachi K and Tan EM: Antibodies reacting with ribosomal ribonucleoproteins in connective tissue disease. Arthritis and Rheumatism 22: 87, 1979. 5. Elkon KB, et al.: Lupus autoantibodies target ribosomal P proteins. J Exp Med 162: 459, 1985. 6. Bonfa E and Elkon KB: Clinical and serologic associations of the antiribosomal P protein antibody. Arthritis and Rheumatism 29: 981, 1986. 7. Bonfa E, et al.: Association between lupus psychosis and anti-ribosomal P protein antibodies. N Engl J Med 317: 265, 1987. 8. Arnett FC, et al.: Ribosomal P autoantibodies in systemic lupus erythematosus: Frequencies in different ethnic groups and clinical and immunogenetic associations. Arthritis and Rheumatism 39: 1833-1839, 1996. 9. Isshi K and Hirohata S: Association of anti-ribosomal P protein antibodies with neuropsychotic systemic lupus erythematosus. Arhtritis and Rheumatism 39: 1483-1490, 1996. 10. Elkon KB, et al.: Identification and chemical synthesis of a ribosomal protein antigenic determinant in systemic lupus erythematosus. Proc Natl Acad Sci 83: 7419-7423, 1986. 11. Yoshio T, et al.: Quantitation of antiribosomal P 0 protein antibodies by ELISA with recombinant P 0 fusion protein and their association with central nervous system disease in systemic lupus erythematosus. J Rheumatology 22: 1681-1687, 1995. 12. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 1999, Fourth Edition, (HHS Pub. # (CDC) 93-8395). A terméket előállítja: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 United States of America Forgalmazásra jogosult az EU területén: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com Technical Service 888-545-9495 628600HUN May 2007 Revision HUN0 8