HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ HASZNÁLATRA KÉSZ LEMEZES TÁPTALAJOK PA-254032.08 Frissítés: 2017. február BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square HASZNÁLATI JAVASLAT A BD Mueller Hinton II Agar tápközeg különféle kiszerelésekben kapható; gyorsan szaporodó aerob mikroorganizmusok klinikai izolátumainak szabványosított korongos diffúziós antibiotikumérzékenységi vizsgálatához használják antimikrobiális hatóanyagok jelenlétében, a Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) és az EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing az antimikrobiális szerek érzékenységi vizsgálatával foglalkozó európai bizottság) által szabványosított módszer szerint. 1,2 AZ ELJÁRÁS MŰKÖDÉSI ELVE ÉS MAGYARÁZATA Mikrobiológiai módszer. Mivel a mikrobiológiai laboratóriumok a 1960-as évek elején rengeteg féle módszert használtak a baktériumoknak az antibiotikumokkal és más hatóanyagokkal szembeni érzékenységét, Bauer, Kirby és munkatársaik kidolgoztak egy standard eljárást, melyben a Mueller Hinton Agart, egy amúgy gonococcusok izolálására kifejlesztett táptalajt, választottak teszttáptalajnak. 1-5 Azt követően, egy nemzetközi együttműködésben elvégzett tanulmány megerősítette ezt a választást, mert a Mueller Hinton Agar egy viszonylag jól reprodukálható táptalaj, receptúrája egyszerű, és eddigi alkalmazása során már bőséges adatbázis gyűlt össze vele kapcsolatban. 6 A CLSI és az EUCAST leírja a Bauer-Kirby-féle módszer standard eljárását; a további részletek ezekben a dokumentumokban találhatók meg. 7,8 A Bauer-Kirby módszerrel összhangban számos más nemzeti standardot is kidolgoztak az antibiotikum érzékenység vizsgálatára. Ezek a standardok az inokulum sűrűségében, az inokuláció módszerében, a gátlási zóna méretében és annak értelmezésében különbözhetnek a CLSI és az EUCAST ajánlásaitól. A Bauer-Kirby-féle módszer az antibiotikumoknak, melyekkel papírkorongokat itattak át, gélben való diffúzióján alapszik. 9 Ellentétben a korábbi módszerekkel, melyek alacsony és magas antibiotikum-koncentrációjú korongokat alkalmaztak, s melyeket a gátlási zóna jelenlétével, ill. hiányával értelmeztek, ez a módszer egyfajta koncentrációjú antibiotikummal átitatott korongokkal dolgozik és a gátlási zónák átmérőjének függvényében állapítja meg a minimális gátlási koncentrációt (MIC, minimum inhibitory concentration). 1-3,7-9 A teszt során a mikroorganizmus standardizált szuszpenzióját a táptalaj teljes felületére fel kell vinni mintavevő pálcikával. Az antibiotikum vagy más antimikrobiális szer adott adagjával átitatott korongokat a táptalaj felületére helyezik; a lemezt inkubálják, majd minden korong körül megmérik a gátlási zónák átmérőjét. Annak megállapítására, hogy az adott mikroorganizmus érzékeny (S), közepesen érzékeny (I) vagy ellenálló-e (R), a kapott gátlási zónák méretét a CLSI Document M100 (M2) fejezetének 2A 2D táblázataiban foglaltakkal hasonlítják össze. 10 Annak megállapítására, hogy az adott mikroorganizmus érzékeny (S) vagy ellenálló (R), a kapott gátlási zónák méretét az EUCAST határpontokat tartalmazó táblázataiban felsoroltakkal hasonlítják össze. 11 Kiderült, hogy a korongmódszeres antibiotikum-érzékenység vizsgálatot számos tényező befolyásolhatja. Ezek közé sorolható a táptalaj, a táptalaj felületén lévő túl nagy nedvesség, az agar vastagsága, a korongok potenciája, az inokulum koncentrációja, ph és a teszt mikroorganizmusok ß-laktamáz termelése. 6-9,12 PA-254032.08 Oldalszám: 1 / 10
A BD Mueller Hinton II Agar-t úgy készítik, hogy abban a timin- és timidinszint alacsony legyen, míg a kalcium- és magnéziumszintet ellenőrzik. 15-17 A nyersanyagok timin- és timidin tartalmát trimetoprim-szulfametoxazol (SXT) tartalmú tesztkorongokkal és Enterococcus faecalis ATCC TM 29212-vel ellenőrzik. A kalcium- és magnéziumszintet a nyersanyagok ellenőrzésével, valamint szükség szerint, kalcium- és magnéziumforrásokkal állítják be annak érdekében, hogy az aminoglikozidos antibiotikumokkal és a Pseudomonas aeruginosa ATTC 27853-mal pontos átmérőjű gátlási zónákat kapjanak. Az egyes BD Mueller Hinton II Agar lemezformátumok agarmélységét a CLSI és az EUCAST ajánlásai alapján állították be. 7,8 REAGENSEK BD Mueller Hinton II Agar 1 liter tisztított vízre vonatkoztatott összetétel* Marhahúskivonat 2,0 g Kazein savas hidrolizátuma 17,5 Keményítő 1,5 Agar 17,0 ph 7,3 ± 0,2 *Úgy beállítva és/vagy kiegészítve, hogy megfeleljen a teljesítménykövetelményeknek. FIGYELMEZTETÉS. Használata szakértelmet igényel. Ne használja a lemezeket, ha azokon mikrobiális szennyeződést, elszíneződést, kiszáradást és betöredezést, illetve a károsodás bármilyen más jelét észleli. Amennyiben ez a táptalaj kiszáradás miatt erősen zsugorodott, úgy az hamis eredményekhez vezethet. A steril munkával, a biológiai veszélyekkel és a használt termékek hulladékként való kezelésével kapcsolatban olvassa el az ÁLTALÁNOS HASZNÁLATI ÚTMUTATÓT. TÁROLÁS ÉS ELTARTHATÓSÁG Átvétel után a felhasználásig a lemezeket sötét helyen, 2 8 C-on, az eredeti lezárt tasakban tárolja. Kerülni kell a lemezek megfagyását, illetve túlmelegedését. A lemezeket a lejárati időn belül kell inokulálni (lásd a csomagolás címkéjét), és az előírt ideig kell inkubálni. A felbontott 10-es csomagolás lemezeit tiszta helyen, 2 8 C-on kell tárolni, és egy héten belül fel kell használni. FELHASZNÁLÓI MINŐSÉGELLENŐRZÉS A felhasználói minőségi ellenőrzéshez amennyiben lehetséges kövesse az idevágó CLSI 10 és EUCAST 18 szabványokat, vagy amennyiben azok nem alkalmazhatók, kövesse a nemzeti standardokat. Inokuláljon reprezentatív mintákat mindkét táptalajon a következő törzsekkel (a részleteket lásd a Minták típusa és A teszt kivitelezése című részben). Inkubálja a lemezeket lehetőleg fordított helyzetben, az alább feltüntetett hőmérséklet-, idő- és légköri feltételek szerint. A BD Mueller Hinton II Agar lemezek és a korongok hatékonyságát legalább hetente kétszer ellenőrizni kell. PA-254032.08 Oldalszám: 2 / 10
1. táblázat: A minőségellenőrző törzsek gátlási zónáinak átmérőtartományai a CLSI 19 és EUCAST 20 irányelvek szerint Törzs Antibiotikum hatóanyag Tartomány (mm) Inkubáció Escherichia coli Ampicillin (10 µg) 15-22 CLSI: ATCC 25922 1 Imipenem (10 µg) 26-32 Gentamicin (10 µg) 19-26 Amikacin (30 µg) 19-26 Ciprofloxacin (5 µg) 30-40 Trimetoprim-szulfametoxazol 23-29 SXT (1,25 µg 23,75 µg) Escherichia coli ATCC 35218 1 Amoxicillin/klavulánsav (30 µg) Ampicillin-sulbactam (30 µg) 17-22 13-19 CLSI: Enterococcus faecalis ATCC 29212 2 Trimetoprim-szulfametoxazol 26-34 CLSI: (1,25 µg 23,75 µg) Ciprofloxacin (5 µg) 19-25 Staphylococcus aureus ATCC 25923 3 Tetraciklin (30 µg) Gentamicin (10 µg) 24-30 19-27 CLSI: Eritromicin (15 µg) 22-30 Klindamicin (2 µg) 24-30 Staphylococcus aureus Tetraciklin (30 µg) 23-31 CLSI: ATCC 29213 2 Gentamicin (10 µg) 19-25 Eritromicin (15 µg) 23-29 Klindamicin (2 µg) 23-29 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 1 Aztreonam (30 µg) Amikacin (30 µg) 23-29 18-26 CLSI: Gentamicin (10 µg) 17-23 Imipenem (10 µg) 20-28 Nem inokulált Színtelen vagy világos sárga 1 : A minőségellenőrző törzsek CLSI és EUCAST irányelvek szerint várható eredményei 2 : A minőségellenőrző törzsek EUCAST irányelvek szerint várható eredményei 3 : A minőségellenőrző törzsek CLSI irányelvek szerint várható eredményei ELJÁRÁS Szállított anyagok BD Mueller Hinton II Agar (különböző lemezméretekben; lásd Csomagolás/Kiszerelések). Mikrobiológiailag ellenőrizve. Nem szállított anyagok 1. A CLSI szerint: Inokulum tápleves kémcsőben, pl. BD Trypticase TM Soy Broth (szójababos-kazeines emésztett tápleves) vagy Mueller Hinton II Broth (kation-kiegyenlített) a standard inokulum elkészítéséhez, valamint steril tápleves vagy fiziológiás sóoldat az inokulum hígításához. 7 Az EUCAST szerint: 0,9%-os sóoldat (5 ml mennyiségben) a standard inokulum elkészítéséhez. 8 2. Bárium-szulfát összehasonlító standard (0,5 ml 0,048 M-os BaCl 2 [1,175 tömeg%-os BaCl 2 2H 2 O] a 99,5 ml 0,18 M-os [0,36 N] H 2 SO 4 [1 térfogat%-os] oldathoz) vagy 3. Fotometrikus készülék az inokulum-szuszpenzió turbiditásának beállításához, hogy ekvivalens legyen a 0,5 McFarland-os standarddal. 4. A fent felsorolt anyagok (1 3) helyett használható a BD Prompt TM Inoculation System (térfogatmérésen alapuló inokulumkészítő eszköz). 7,8,25 PA-254032.08 Oldalszám: 3 / 10
5. Kontroll kultúrák a CLSI szerint: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 és ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterococcus faecalis ATCC 29212 és Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. 10 Kontroll kultúrák az EUCAST szerint: Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC 25922 és ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterococcus faecalis ATCC 29212 és ATCC 51299, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 és Staphylococcus aureus NCTC 12493. 18 6. Meghatározott mennyiségű antibiotikummal átitatott papírkorongok, 7,8 pl. BD Sensi-Disc TM antibiogram-tesztkorongok. 7. Elosztó eszköz, mint pl. a BD Sensi-Disc 6-, 8-21-férőhelyes elosztója. A Mueller Hinton II Agar Square lemezekhez is rendelkezésre áll ilyen elosztó rendszer. 8. Milliméteres beosztású vonalzó vagy más mérőeszköz a gátlási zóna méréséhez. 9. Kiegészítő tenyésztápközegek, reagensek és laboratóriumi eszközök, szükség szerint. Minták típusa Ez a termék klinikai mintából izolált tiszta tenyészetek antibiotikum-érzékenységének tesztelésére szolgál (lásd még: TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK ÉS AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI). Lehetséges ugyan az antibiotikum érzékenységet közvetlenül vér és vizelet kultúrákon elvégezni; de, ezeket a teszteket tiszta tenyészetekkel is meg kell ismételni és megerősíteni. 21-24 A teszt kivitelezése Ez a módszertan a CLSI 7 és az EUCAST 8 által javasolt közvetlen telep-szuszpenzió módszert ismerteti: 1. Győződjön meg arról, hogy rendelkezésre áll egy friss (= 24 órás), nem szelektáló táptalajról, pl. véres agar, származó kultúra. A CLSI szerint: Rutin érzékenységi vizsgálatokhoz az inokulum kolóniákból készített közvetlen sóoldatos vagy tápleves-szuszpenzióval állítható elő. Az EUCAST szerint: Rutin érzékenységi vizsgálatokhoz az inokulum több hasonló alakú kolóniából készített közvetlen sóoldattal állítható elő. 2. Azonnal állítsa be ezt a szuszpenziót a 0,5 McFarland bárium szulfát standardok zavarosságához inkubáció nélkül. A standard és az inokulum turbitásának méréséhez tartsa mindkét kémcsövet egy fehér háttér elé, melyen vékony fekete vonalak vannak, ill. használjon egy fotometrikus mérőműszert. 3. Azok az alternatív inokulumkészítési módszerek, melyek folyamán olyan eszköz kerül alkalmazásra, mely lehetővé teszi a turbiditás beállítása nélkül az inokulum standardizálását, mint pl. a BD Prompt Inoculation System, elfogadásra kerültek a rutin teszt eljárások körében. 25 4. Az inokulumot optimálisan 15 percen belül használja fel. A szuszpenziót mindig a készítés után 60 percen belül kell felhasználni. Merítsen bele egy steril mintavételi pálcikát a pontosan hígított inokulumba, majd néhányszor görgesse meg azt a kémcső felső részéhez nyomva, hogy a felesleges folyadékot kipréselje és elkerülje a túlzott inokulálást. 5. A lemezen az agar teljes felületét három alkalommal inokulája úgy, hogy az egyenletes szélesztés érdekében minden inokulálás után 60 -os szögben fordítsa el a lemezt. 6. A CLSI szerint: Mielőtt felhelyezné az antimikrobiotikummal átitatott korongokat, annak érdekében, hogy az agar felülete beihassa a felesleges nedvességet, a lemezek fedelét 3 5 percig hagyja félig nyitva és legfeljebb 15 percre tartsa szobahőmérsékleten a lemezeket. A korongokat antimikrobiális korong-diszpenzerrel helyezze fel, ügyelve a sterilitásra. A korongokat úgy helyezze el, hogy azok középpontja egymástól legalább 24 mm-re legyen. Az EUCAST szerint: A korongokat a megszárított lemezre az inokulálás után 15 percen belül helyezze fel, ügyelve a sterilitásra. Legfeljebb maximum hat lemezt helyezzen a lemezre. 7. Miután a korongokat elhelyezte az agaron, nyomkodja le azokat egy steril tű vagy csipesz segítségével annak érdekében, hogy teljes felületükkel érintkezzenek a táptalajjal. Ezt a lépést, amennyiben egy ön-tamponáló BD Sensi-Disc elosztót használ, kihagyhatja. 8. A korongok felhelyezése után 15 percen belül fordítsa fel és inkubálja a lemezeket. A lemezeket emelt széndioxid tartalmú légkörben kell inkubálni. Az ajánlott inkubációs feltételeket az CLSI és EUCAST dokumentumokban találja. 7,8,10,11 PA-254032.08 Oldalszám: 4 / 10
Eredmények leolvasása 1. Inkubálás után a legtöbb lemezen összefolyó pázsitot fog találni. Amennyiben kizárólag különálló telepek fejlődnek, az inokulum túl híg volt, és a tesztet meg kell ismételni. 2. A CLSI szerint: Mérje meg a teljes gátlási zónák méretét (szabad szemmel észlelve) a korong átmérőjével egyetemben, kerekítsen kerek milliméterre, egy tolómérő, vonalzó vagy az erre a célra készült sablon segítségével. A mérőeszközt a fekete, nem tükröződő hátéren lévő lemez aljára kell helyezni és felülről kell megvilágítani. 7 Az EUCAST szerint: Mérje meg a teljes gátlási zónák méretét (szabad szemmel észlelve) a korong átmérőjével egyetemben, kerekítsen kerek milliméterre, egy tolómérő vagy vonalzó segítségével. A mérőeszközt a fekete háttéren lévő lemez aljára kell helyezni és visszavert fénnyel kell megvilágítani. A lemezt a szemtől 30 cm-re kell tartani. 8 3. A végpontokat ott kell felvenni, ahol szabad szemmel jól látható, hogy nincs növekedés. Az apró, nehezen látható, a gátlási zóna szélén növekvő telepeket hagyja figyelmen kívül. 4. A CLSI szerint: Ez alól kivételt képez az oxacillinnel tesztelt Staphylococcus aureus és a vancomycinnel tesztelt enterococcusok. Ezekben az esetekben átvilágító fényt kell használni a korong körül növő fátyol észlelésére, melyet az okkult rezisztens MRSA törzsek vagy a vancomycin-rezisztens enterococcusok mutatnak. 7,26 A Proteus fajok esetében, amennyiben a gátlási zóna széle nyilvánvaló, a zóna belseje felé való rajzást hagyja figyelmen kívül. A trimethoprim és a szulfonamidok esetében, a táptalajban lévő antagonisták olykor lehetővé tesznek némi gyenge növekedést, ezért a gyenge növekedést (a felület 20%-a vagy annál kevesebb nőtt csak be) hagyja figyelmen kívül és a gátlási zóna átmérőjének mérésekor a nyilvánvaló határvonalat vegye csak figyelembe. Az EUCAST szerint: Kettős zóna esetén a belsőt mérje meg, kivéve ha kifejezetten máshogy szól az utasítás. 8 Számítás és az eredmények értelmezése A CLSI szerint: A gátlási zónák így kapott átmérőit hasonlítsa össze a CLSI Document M100 (M2) fejezetében található 2A 2D táblázatok adataival. 10 A kapott értékek alapján sorolja be az adott mikroorganizmust az érzékeny, közepesen érzékeny vagy rezisztens kategóriák egyikébe. Az EUCAST szerint: A zónák átmérőit a határponttáblázatokkal összehasonlítva értelmezze. 11 Ezt követően a specifikus mikroorganizmusokkal elért eredményekről rezisztensként vagy fogékonyként lehet beszámolni. A specifikus növekedési jellemzőkről szóló további információkat, az eredmények értelmezésével kapcsolatos és egyéb útmutató dokumentumokat az EUCAST-nál talál. TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK ÉS AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI A Mueller Hinton Agar egy standard táptalaj a gyorsan növő aerob vagy fakultatív anaerob baktériumok, mint pl. a staphylococcusok, enterococcusok, az Enterobacteriaceae-k tagjai, és anaerob gram-negatív bacilusok (pl. Pseudomonas fajok) antibiotikum-érzékenységének vizsgálatához. Az érzékenység értelmezésére szolgáló útmutató dokumentumokat évente frissítik, az eredmények helyes értelmezéséhez a legfrissebb verziót használja. 10,11 Az érzékeny fajok, pl. Haemophilus fajok, Neisseria fajok, a Streptococcus pneumoniae és a streptococcusok, teszteléséhez más eljárásokat és táptalajokat fejlesztettek ki. A CLSI és EUCAST standardizált eljárás nem alkalmazható obligát anaerobok, a Mueller Hinton Agaron alig vagy csak gyengén növő mikroorganizmusok, vagy olyan mikroorganizmusok esetében, melyek növekedési rátája törzsenként erősen változó. 7,8 Az érzékeny mikroorganizmusokat (pl. Haemophilus influenzae) a CLSI és EUCAST ajánlásai alapján kell vizsgálni. 7,8 Belső teljesítményértékelés A BD Mueller Hinton II Agar (az összes lemezformátum) teljesítményét a javasolt minőségellenőrzési (QC) törzsek, köztük jellemzett rezisztenciamechanizmussal rendelkezők (Escherichia coli ATCC 35218, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 51299, Staphylococcus aureus NCTC 12493, Staphylococcus aureus ATCC 29213 Amoxicillin-klavulánsavval AMC-3). 19,20,34 alkalmazásával végzett belső validálás hitelesítette. A 2. táblázatban a minőség-ellenőrzési és a jellemzett rezisztenciamechanizmussal rendelkező törzsekhez való validált antimikrobiális hatású szerek láthatók. Más jelölés hiányában a validált antimikrobiális hatású szerek meghatározott gátlási zónáinak átmérői az előírt CLSI és EUCAST szerinti tartományokon belül voltak. 19,20 A további teljesítményvizsgálatok a klinikai MRSA izolátumokkal és a mecc-rezisztenstípus használatával azt mutatták, hogy a BD Mueller Hinton II Agar pontosan detektálja a meccpozitív MRSA törzseket. 34,35 PA-254032.08 Oldalszám: 5 / 10
E. coli ATCC 25922 10,18 P. aeruginosa ATCC 27853 10,18 E. faecalis ATCC 29212 10,18 S. aureus ATCC 29213 18 E. coli ATCC 35218 10,18 S. aureus NCTC 12493 18 K. pneumoniae ATCC 700603 10,18 E. faecalis ATCC 51299 18 2. táblázat: Validált antimikrobiális hatású szerek és minőség-ellenőrzési törzsek áttekintése Más jelölés hiányában a gátlási zónák átmérői a vonatkozó CLSI és/vagy EUCAST szerinti tartományokon belül voltak. 19,20 Antibiotikum hatóanyag Korong tartalma (µg) Amikacin AN-30 Amoxicillin/klavulánsav AMC-3 5 AMC-30 Ampicillin 3 AM-2 AM-10 Ampicillin-szulbaktám SAM-20 Aztreonam ATM-30 Benzilpenicillin P-1 Cefadroxil CFR-30 1 Cefalexin CN-30 1 Cefepim FEP-30 Cefexim CFM-5 Cefotaxim CTX-5 2 2 Cefoxitin FOX-30 Cefpodoxim CPD-10 Ceftaroline CPT-5 2 Ceftazidim CAZ-10 2 2 2 Ceftibuten CFT-30 Ceftriaxon CRO-30 Cefuroxim CXM-30 Kloramfenikol C-30 Ciprofloxacin CIP-5 Klindamicin CC-2 Doripenem DOR-10 Ertapenem ETP-10 Eritromicin E-15 Fusidsav FA-10 Gentamicin GM-10 GM-30 Imipenem IPM-10 Levofloxacin LVX-5 Linezolid LZD-10 Mecillinam MEC-10 Meropenem MEM-10 Minociklin MI-30 Moxifloxacin MXF-5 Mupirocin MUP-200 Nalidixsav NA-30 PA-254032.08 Oldalszám: 6 / 10
E. coli ATCC 25922 10,18 P. aeruginosa ATCC 27853 10,18 E. faecalis ATCC 29212 10,18 S. aureus ATCC 29213 18 E. coli ATCC 35218 10,18 S. aureus NCTC 12493 18 K. pneumoniae ATCC 700603 10,18 E. faecalis ATCC 51299 18 2. táblázat: Folytatás. Antibiotikum hatóanyag Korong tartalma (µg), Netilmicin NET-10 2 2 Nitrofurantoin FM-100 2 Norfloxacin NOR-10 Ofloxacin OFX-5 Pefloxacin PEF-5 Piperacillin PIP-30 2 Piperacillin-tazobaktám PIP-30/TAZ-6 2 2 2 Kinuprisztin-dalfoprisztin SYN-15 Rifampicin RA-5 Streptomycin S-300 6 Teikoplanin TEC-30 Tetraciklin TE-30 Ticarcillin TIC-75 Ticarcillin-klavulánsav TIM-85 Tigeciklin TGC-15 Tobramicin NN-10 Trimetoprim TMP-5 4 Trimetoprim-szulfametoxazol SXT1,25-23,75 Vankomicin VA-5 A jelzett gátlási zónák az EUCAST és CLSI tartományon belül voltak. 1 A CLSI nem javasolja az aintimikrobiális hatású szer tesztelését. 2 A CLSI és az EUCAST az aintimikrobiális hatású szer különböző koncentrációit ajánlja. Az EUCAST ajánlásait követtük. 3 Az antimikrobiális hatású szerek gátlási zónája nincs az EUCAST által ajánlott tartományban (Mueller Hinton II Agar, 150 mm és négyzet). 4 Az antimikrobiális hatású szerek gátlási zónája nincs az EUCAST által ajánlott tartományban (Mueller Hinton II Agar, 90 mm). 5 Az antimikrobiális hatású szer gátlási zónája nincs az EUCAST és a CLSI által ajánlott tartományban (Mueller Hinton II Agar, 90 mm). 6 Az antimikrobiális hatású szer gátlási zónája nincs a CLSI által ajánlott tartományban (Mueller Hinton II Agar, 90 és 150 mm), de az EUCAST által ajánlott tartományon belül van. Az eljárás korlátai Ezt az antibiotikum-érzékenység tesztet kizárólag tiszta tenyészetekkel lehet elvégezni. Az antibiotikum-érzékenységi teszt elvégzése előtt tanácsos az izolátumok gram-festését és előzetes identifikálását elvégezni. Bizonyos mikroorganizmus-antibiotikum kombinációk esetében a gátlási zóna határa nem válik el élesen, ami pontatlan leolvasást eredményezhet. Kiderült, hogy a korongmódszeres antibiotikum-érzékenység vizsgálatot számos tényező befolyásolhatja. Ezek közé sorolható a táptalaj vastagsága, a korong potenciája, az inokulum koncentrációja és életkora, valamint a ph. 31 PA-254032.08 Oldalszám: 7 / 10
A nem megfelelő koncentrációjú inokulum pontatlan eredményeket adhat. A gátlási zóna túl kicsi, ha az inokulum túl sűrű, illetve túl nagy és nehezen mérhető, ha az inokulum túl híg. Ezért erősen javasolt, hogy kövesse az inokulum és az inokulált lemezek kezelésére vonatkozó CLSI- és EUCAST-ajánlásokat annak érdekében, hogy minimalizálja a helytelen kezelés miatt kapott pontatlan eredmények kockázatát. Az antibiotikum-érzékenység mérő korongok helytelen tárolása következtében azok hatékonysága csökkenhet, ami álérzékeny eredményekhez vezethet. Amennyiben a táptalaj a helytelen tárolás miatt erősen zsugorodott, úgy az hamis eredményekhez vezethet. Egy mikroorganizmus in vitro érzékenysége egy adott antibiotikummal szemben nem jelenti feltétlenül azt, hogy ez a hatóanyag in vivo is hatékony lesz. A kapott eredmények értelmezéséhez tanulmányozza az idevonatkozó szakirodalmat. 10,11,32,33 A timint vagy timidint igénylő baktériumok 27,28 a Mueller Hinton Agar alacsony timin és timidin tartalma miatt nem növekednek kielégítő módon ezen a táptalajon. Új eljárásokat dolgoztak ki, melyekben magas gentamicin (120 mg) és streptomycin (300 mg) tartalmú korongokat használnak a nagyfokú aminoglikozid-rezisztencia szűrésére, annak ellenőrzésére hogy egy penicillin vagy glikopeptid egy aminoglikoziddal együtt nincs-e szinergista hatással egy enterococcusos izolátumra. 7,28,29 Az MRSA, rezisztens enterococcusok, szélesebb spektrum, ß-laktamáz termelés, gramnegatív bacilusok detektálásának teljes leírását és más teszt limitáló tényezőket a CLSI M2 és M7 dokumentumokban és az EUCAST dokumentumokban találja meg. 7,8,10,11,30 A Mueller Hinton II Agar megbízhatónak bizonyult az oxacillin korongok körül elmosódott gátlási zónát fejlesztő MRSA-k detektálásakor. 26 Kétséges esetben, alkalmazzon egy kiegészítő módszert, mint pl. a BD Oxacillin Screen Agar-t. Az ebben a leírásban megtalálható inokulációs eljárások, értelmezések, ajánlások, valamint az itt és a CLSI és EUCAST standardokban megadott gátlásizóna-értékek eltérhetnek a nemzeti standardoktól. 7,8,31 IRODALOMJEGYZÉK 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck. 1966. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45:493-496. 2. Matuschek, E., D.F. Brown, and G. Kahlmeter. Development of the EUCAST disk diffusion antimicrobial susceptibility testing method and its implementation in routine microbiology laboratories. Clin. Microbiol. Infect. 2014; 20 (4): 255-66. 3. Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby. 1970. Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5:91-100. 4. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp. 1970. An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53:149-158. 5. Mueller, J.H., and J. Hinton. 1941. A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48:330-333. 6. Ericsson, H.M., and J.C. Sherris. 1971. Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, Suppl. 217. 7. CLSI. Approved standard: M02-A12 - Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA. Search for latest version at www.clsi.org. 8. EUCAST Disk Diffusion Method for Antimicrobial Susceptibility Testing. Search for latest version at http://www.eucast.org. 9. Woods, G.L., and J.A. Washington. 1995. Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p. 1327-1341. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.C. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, DC. 10. CLSI - Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility. CLSI supplement M100S. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute. Search for latest version at www.clsi.org. 11. The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Search for latest version at http://www.eucast.org. PA-254032.08 Oldalszám: 8 / 10
12. Thornsberry, C., T.L. Gavan, and E.H. Gerlach. 1977. Cumitech 6, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society of Microbiology, Washington, DC. 13. Koch, A.E., and J.J. Burchall. 1971. Reversal of the antimicrobial activity of trimethoprim by thymidine in commercially prepared media. Appl. Microbiol. 22:812-817. 14. Ferone, R., S.R.M. Bushby, J.J. Burchall, W.D. Moore, and D. Smith. 1975. Identification of Harper-Cawston factor as thymidine phosphorylase and removal from media of substances interfering with susceptibility testing to sulfonamides and diaminopyrimidines. Antimicrob. Agents Chemother. 7:91-98. 15. Reller, L.G., F.D. Schoenknecht, M.A. Kenny, and J.C. Sherris. 1974. Antibiotic susceptibility testing of Pseudomonas aeruginosa: selection of a control strain and criteria for magnesium and calcium content in media. J. Infect. Dis. 130:454-463. 16. Pollock, H.M., B.H. Minshew, M.A. Kenny, and F.D. Schoenknecht. 1978. Effect of different lots of Mueller-Hinton Agar on the interpretation of the gentamicin susceptibility of Pseudomonas aeruginosa. Antimicrob. Agents Chemother. 14:360-367. 17. D'Amato, R.F., and C. Thornsberry. 1979. Calcium and magnesium in Mueller-Hinton agar and their influence on disk diffusion susceptibility results. Current Microbiol. 2:135-138. 18. The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Routine and extended internal quality control for MIC determination and disk diffusion as recommended by EUCAST. Search for latest version at http://www.eucast.org. 19. The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Routine and extended internal quality control for MIC determination and disk diffusion as recommended by EUCAST. Version 6.0, 2016. http://www.eucast.org. 20. CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 26 th ed. CLSI supplement M100S. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2016. 21. Wegner, D.L., C.R. Mathis, and T.R. Neblett. 1976. Direct method to determine the antibiotic susceptibility of rapidly growing blood pathogens. Antimicrob. Agents Chemother. 9:861-862. 22. Johnson, J.E., and J.A. Washington II. 1976. Comparison of direct and standardized antimicrobial susceptibility testing of positive blood cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 10:211-214. 23. Waterworth, P.M., and M. Del Piano. 1976. Dependability of sensitivity tests in primary culture. J. Clin. Pathol. 29:179-184. 24. Hollick, G.E., and J.A. Washington II. 1976. Comparison of direct and standardized disk diffusion susceptibility testing of urine cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 9:804-809. 25. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson. 1983. Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17:450-457. 26. Hindler, J.A., and C.B. Anderbied. 1985. Effect of the source of Mueller-Hinton agar and resistance frequency on the detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 21:205-210. 27. Maskell, R., O.A. Okubadejo, R.H. Payne, and L. Pead. 1977. Human infections with thymine-requiring bacteria. J. Med. Microbiol, 11:33-45. 28. Haltiner, R.C., P.C. Migneault, and R.G. Robertson. 1980. Incidence of thymidinedependent enterococci detected on Mueller-Hinton agar with low thymidine content. Antimicrob. Agents Chemother. 18:365-368. 29. Murray, B.E. 1990. The life and times of the Enterococcus. Clin. Microbiol. Rev. 3:46-65. 30. CLSI. Approved standard: M7. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at www.clsi.org. 31. Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge. 2003. Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA-254032.08 Oldalszám: 9 / 10
32. Washington, J.A., and G.L. Woods. 1995. Antimicrobial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods. P. 1327-1341. In Muarry, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F:C:, and Yolken, R:H. (ed.), Manual of clinical microbiology, 6 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 1995. 33. Neumann, M.A., D.F. Sahm, C. Thornsberry, J.E. McGowan, Jr. Cumitech 6A, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing: a practical guide. Coordinating ed., J.E. McGowan, Jr. American Society of Microbiology, Washington, D.C.1991. 34. Data on file. Becton Dickinson. 35. Skov, R., A.R. Larsen, A. Kearns, M. Holmes, C. Teale, G. Edwards, and R. Hill. Phenotypic detection of mecc-mrsa: cefoxitin is more reliable than oxacillin. 2014. J. Antimicrob. Chemother. 69:133-135. CSOMAGOLÁS ÉS KISZERELÉSEK BD Mueller Hinton II Agar (Stacker 90 mm-es lemezek; [standard méret]) Kat. Sz. 254032 Használatra kész táptalajok, 20-as csomag Kat. Sz. 254081 Használatra kész lemezes táptalajok, 120 darabos csomag BD Mueller Hinton II Agar (150 mm) Kat. Sz. 254062 Használatra kész táptalajok, 20-as csomag BD Mueller Hinton II Agar, Square (120 x 120 mm) Kat. Sz. 254518 Használatra kész táptalajok, 20-as csomag TOVÁBBI INFORMÁCIÓK További információkért forduljon a BD helyi képviseletéhez. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 69126 Heidelberg, Németország Telefon: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ Minden védjegy a vonatkozó tulajdonos birtokában van. 2017 BD. A BD, a BD embléma és minden más védjegy a Becton, Dickinson and Company tulajdona. PA-254032.08 Oldalszám: 10 / 10