BACTEC Diluting Fluid HASZNÁLATI JAVASLAT A BACTEC Hígító Folyadékot olyan eljárások során kell alkalmazni, amikor mikobaktérium tenyészeteket kell az inokuláláshoz hígítani. Legfõbb felhasználási területe a M. tuberculosis standard BACTEC gyógyszerérzékenységi teszttel való vizsgálata. 1,3-7 Az eljárás folyamán az inokulumot 1:100 arányban hígítják a kontroll palackokkal való alkalmazáshoz. A Hígító Folyadékot minden más, olyan vizsgálat során, például NAP teszt, vagy bármilyen olyan teszt, amelyhez a tenyészeteket hígítani kell, is fel lehet használni. 2 ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT A Hígító Folyadék használata része a M. tuberculosis BACTEC gyógyszerérzékenységi teszttel való vizsgálatának. A Hígító Folyadék detergensként poliszorbát 80-at (Tween 80) és zsírsav mentes albumint tartalmaz. Ezek az anyagok elõsegítik a mikobaktériumok eloszlatását a szuszpenzióban. Az albumin zsírsav mentes, így nem kompetitív a tápközegben található 14 C jelölt zsírsavakkal. A poliszorbát 80 koncentrációja minimális, így nem lép kölcsönhatásba a gyógyszerérzékenységi teszttel, ennek ellenére elõsegíti, hogy a mikobaktérium szuszpenzió egységes és homogén legyen. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE A BACTEC gyógyszerérzékenységi teszt a módosított arányossági módszeren alapul. A rezisztencia kritikus aránya 1%, vagyis amennyiben a teszt mycobacterium pouplációnak legalább 1%-a rezisztens, úgy az egész tenyészet rezisztensnek tekintendõ. A rezisztencia 1%-os arányának meghatározásához a 12B Mycobacteria Medium (mikobakteium tápközegben), a kontroll palackhoz felhasznált bakteriális inokulumot a tápközeges palackba való adagolás elõtt százszorosára kell hígítani. A BACTEC Hígító Folyadék megkönnyíti a tenyészet 1:100 arányú hígításának elkészítését. A Hígító Folyadékban található zsírsav mentes albumin és a poliszorbát 80 elõsegíti a szuszpenzió diszpergálását, így a mikobaktérium szuszpenzió homogénebb lesz. REAGENSEK A BACTEC Hígító Folyadék palack az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazza: PP117JAA 2007/06 Magyar BACTEC HÍGÍTÓ FOLYADÉK 9.9 ML/PALACK Mennyiség 1 liter tisztított vízre vonatkoztatva Poliszorbát 80.................................. 0,2 ml Zsírsav mentes szarvasmarha szérum albumin...... 2,0 g Figyelmeztetés: A BACTEC DF in vitro diagnosztizáláshoz használható. A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai mintákban patogén mikroorganizmusok, pl. Hepatitis és HIV vírusok lehetnek jelen. Minden vérrel, ill. más testnedvvel fertõzött egységet a "Standard Precautions" 8-11 elõírásai szerint, ill. az intézet irányelvei szerint kell kezelni. Használat elõtt, minden palackot meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, romlásra, illetve befertõzõdésre utaló nyom (homályosság, a gumikupak kidudorodása, illetve beszívódása). A befertõzõdés jeleit mutató palackokat NE HASZNÁLJA. A fertõzött palackban túlnyomás uralkodhat. A palack fertõzöttsége nem mindig nyilvánvaló. A turbiditást, fertõzöttséget, vagy elszínezõdést (sötétebb szín) mutató palackokat ne használja fel. A nyilvánvalóan károsodott palckokat még inokulálás elõtt dobja ki. Bizonyos esetekben elõfordulhat, hogy az üvegpalack megreped, illetve a nyaka a kupak megbontása vagy munka közben letörik. Ezenkívül, ritkán, elõfordulhat, hogy a palackok nem lettek kellõen lezárva. Mindkét esetben a palackok tartalma kifröccsenhet, illetve szivároghat, különösen akkor, ha a palackokat felfordítják. Ha a palackokat már inokulálta, a csepegõ és szivárgó üvegekkel bánjon óvatosan, mivel azok fertõzõ mikrooganizmusokat, anyagokat tartalmazhatnak. Kidobás elõtt minden inokulált palackot autoklávozással sterilizáljon. A mikrobiológiai veszélyek miatt mindig dolgozzon aszeptikusan és a felállított biztonsági rendszabályoknak megfelelõen. A tesztet a CDC elõírásainak megfelelõen megfelelõ biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ szellõztetéssel rendelkezõ helyiségben kell elvégezni. 12 A potenciálisan fertõzõ mintákkal és tenyészetekkel végzett munka idõtartamára vegyen fel a célnak megfelelõ köpenyt, maszkot és kesztyût. Kövesse a CDC és az OSHA elõírásait. 12 Hogy az inokulálás alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon rögzített tûjû fecskendõket, illetve biztonságosan rögzített Luer-Lok hegyeket. TÁROLÁSI ÚTMUTATÓ A BACTEC Hígító Folyadék palackokat hûvös (2 25 C), száraz, a közvetlen napvénytõl védett helyen kell tárolni. MINTÁK GYÛJTÉSE Lásd a gyógyszerérzékenységi vizsgálat használati útmutatóját (S.I.R.E. gyógyszerkészlet használati útmutatóját, PP-118JAA).
ELJÁRÁS Szállított anyagok: BACTEC Hígító Folyadék Szükséges, de nem szállított anyagok: BACTEC 12B tápközeg BACTEC 460TB készülék Tuberkulin fecskendõ rögzített tûvel Fertõtlenítõoldat 70%-os izopropil-alkohol Távolítsa el a BACTEC Hígító Folyadék palackok lepattintható kupakját. Minden alkalommal, amikor beleszúrnak a palackba, a gumi kupakot fertõtleníteni kell. Minden palack tetejét tisztítsa le fertõtlenítõszerrel, majd 70%-os alkohollal. A hígítandó tenyészet szuszpenziót rögzített tûjû fecskendõvel, illetve biztonságosan rögzített Luer-Lok heggyel tegye a palackba. Ha 0.1 ml tenyészetet tesz a palckba, 1:100 arányú hígítást kap. A palack tartalmát gondosan ekverje össze, legalább 10-szer fordítsa fel. Amennyiben nem 1:100 arányú hígításra van szükség, vegye ki a szükséges mennyiséget, és készítse el a kívánt hígítást. További részletekért lásd a S.I.R.E. gyógyszerérzékenységi teszt használati útmutatóját (PP-118JAA) vagy a BACTEC 460TB használati útmutatóját (MA-0029). MINÕSÉGELLENÕRZÉS A lejárati idõ után NE HASZNÁLJA FEL a palackokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a palackokat, melyeken sérülés bármilyen nyoma látszik. Az ilyen palackokat a megfelelõ módon dobja ki. A felhasználónak használat elõtt a Hígító Folyadék palackot meg kell vizsgálnia, hogy nem következett-e be minõségromlás. A mikrobiológiai eljárások minõségellenõrzésével kapcsolatban, a részletekért lásd a S.I.R.E. gyógyszerérzékenységi teszt használati útmutatóját (PP-118JAA) vagy a BACTEC 460TB használati útmutatóját (MA-0029). A Quality Control Certificate (Minõségellenõrzési tanúsítvány) minden Hígító Folyadék készlet mellett megtalálható. A Minõségellenõrzési tanúsítvány ismerteti az ilyen típusú termékkel használható teszt mikroorganizmusokat. A napi karbantartás részeként a BACTEC 460 TB készüléken naponta kell Teljesítményvizsgáló palackokat (BACTEC Teljesítményvizsgáló készlet) tesztelni. Amennyiben a leolvasott értékek alacsonyak, pedig a Performance Test Vials palackokat megfelelõen tesztelte, akkor zavar állhatott be a gép mûködésében (lásd BACTEC PTK használati útmutató, PP-046JAA). AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI A megfelelõ 1:100 arányú hígítás csak akkor készíthetõ el, ha a hígítandó szuszpenzió megfelelõen diszpergált. Nagy csomók jelenléte, fõleg M. tuberculosis esetében, pontatlan hígításokhoz vezethet, ami befolyásolhatja a gyógyszerérzékenységi tesztek eredményességét. Befertõzõdés Ügyelni kell, hogy az inokulálás során a BACTEC palackok ne fertõzõdjenek be. A bertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai mintáknak. Az ilyen meghatározást a felhasználónak kell elvégeznie a kinyert mikroorganizmus típusának, ugyanannak a mikroorganizmusnak több tenyészetben való elõfordulásának, a beteg kórelõéletének, a felszerelések megfelelõ ellenõrzésének, stb. függvényében. A befertõzõdés lehet még a BACTEC tûk és csövek nem megfelelõ kezelésének, a kupak nem megfelelõ tisztításának vagy a BACTEC tûmelegítõ egység elégtelen mûködésének a következménye (lásd kézikönyv). A tápoldatban levõ biológiai anyagok és a mikroorganizmusok velejáró variabilitásának természete miatt a felhasználónak tudatában kell lennie annak, hogy az egyes mikroorganizmusok kimutatása potenciálisan eltérõ eredményeket adhat. VÁRT ÉRTÉKEK ÉS SPECIFIKUS TELJESÍTMÉNY JELLEMZÕK A részletekért lásd a S.I.R.E. gyógyszerkészlet használati útmutatóját (PP-118JAA). Ha a sejtszuszpenzió, például M. tuberculosis esetében, megfelelõ homogenizálás után kerül a Hígító Folyadék palackba, a kívánt hígítás készíthetõ el. A poliszorbát 80 jelenléte, annak alacsony koncentrációja miatt, nem befolyásolja jelentõs mértékben a gyógyszerérzékenységi mintázatot. 2
IRODALOMJEGYZÉK 1. Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23:934-937, 1986. 2. Laszlo, A. and S.H. Siddiqi. Evaluation of a rapid radiometric differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with r-nitro-a-acetylamino-b-hydroxy-propiophenone. J. Clin. Microbiol. 19:694-695, 1984. 3. Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984. 4. Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18:689-696, 1983. 5. Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: 908-912. 6. Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: 919-923. 7. Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123:402-406, 1981. 8. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA. 9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 10. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 12. Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, 1985. 3
4
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 BD, BD Logo, BACTEC and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2007 BD.