Gyors vizsgálati módszerek a víz mikrobiológiai ellenőrzésében

Átírás

1 Gyors vizsgálati módszerek a víz mikrobiológiai ellenőrzésében Reskóné Dr. Nagy Mária WESSLING Hungary Kft. Dömötör Szilveszter Agro-Legato Kft.

2 IDEXX Laboratories, Inc. Központ: Westbrook, Maine, USA 17 országban működtet irodákat, amelyek 175 ország ügyfeleit szolgálják ki, 5600 munkatársat foglalkoztat világszerte. Világviszonylatban piacvezető a víz mikrobiológiában. legnépszerűbb vezető terméke: Colilert-18 Distributor Support Manager (Europe, Middle East & North Africa ): Dr Mike Cresswell MSB Cbiol.

3 Cégalapítás: Globális vezető a technológia-alapú diagnosztikai termékek, szolgáltatások terén : Víz minőség Állategészségügy Tej minőségbiztosítás Haszonállat, baromfi (PAS) Üzletági bevételek Házi kedvencek csoport Haszonállat szolgáltatások Víz Tejipar Egyéb Az IDEXX stratégiája: a fejlesztés, gyártás, marketing és értékesítés legmagasabb szintű végrehajtása, egyedülálló ügyfélszolgálat, támogatás és technikai segítésnyújtás.

4 Elfogadás/jóváhagyás /validálás IDEXX vízvizsgálati termékekre Colilert-18 ISO :2012 MSZ EN ISO :2014 Ivóvizek: Coliform/E. coli vizsgálatára a 98/83 / EK irányelv alternatív módszerként jelöli. Ivóvizek: Coliform/E. coli AFNOR val Szennyezett vizek: Faecal coliforms - Journal of AOAC InternatIonal, Vol. 94, no. 5, Ivóvizek, természetes fürdővizek: Coliform/E. coli AFNOR val Enterolert-DW Ivóvíz: Enterococcusok AFNOR val Enterolert E Fürdővíz, szennyezett víz: Enterococcusok AFNOR val

5 Termékek Coliform and E. coli Enterococci P. aeruginosa Minőségbiztosítás Colilert Enterolert Pseudalert Quanti-Cult Colilert -18 Enterolert -E Pseudalert 250 Water QC Colisure Enterolert -DW Colilert 250 Enterolert 250 Cryptosporidium/ Giardia Összcsíraszám meghatározás Mennyiségi meghatározás Kellékek Filta-Max Filta-Max xpress Invitrogen Dynabeads for IMS SimPlate for HPC HPC for Quanti-tray Quanti-Tray Quanti-Tray /2000 Mintagyűjtő edények Inkubátorok

6 Magyarországi ismertség, használat augusztus 8. A Colilert-Quanti Tray az OTH által elismert alternatív módszer ivóvíz és fürdővíz vizsgálatra, elsőként a Bakonykarszt ZRt. alkalmazza ivóvízre Colilert akkreditált egyedi mószer, ivóvízhez: Bakonykarszt ZRt., DRV vízvizsgáló laboratóriuma. Később követi a DRV, majd több vízvizsgáló laboratórium Áttörés A Colilert ISO szabványos módszer ISO :2012 Egyre több labor használja az IDEXX módszert országszerte, köztük hatósági partnerek, valamint magáncégek is Az év során több tízezer tesztet használtak fel Magyarországon főleg ivóvízvizsgálati célra, 70% E.coli, Coliform, 15% Enterococcus, 15% egyéb teszt (Pesudomonas, HPC) Kihirdetésre kerül a Magyar Szabvány az IDEXX Colilert/Quanti Tray módszerre MSZ EN ISO :2014

7 IDEXX víz üzletág a nagyvilágban A Világ 115 országában évente több mint 20 millió víztesztet használnak fel 7 kontinensen 2 milliárd ember ivóvizének vizsgálata történik folyamatosan IDEXX gyorstesztekkel Gógyszeripari szintű létesítmények, gyártás tiszta térben Gyártás Franciaország, Svájc, USA, Egyesült Királyság, Kína Elosztás USA, Kanada, Hollandia, Ausztrália, Japán, Kína

8 Leggyakrabban használt tesztek típusai Megbízható eszközök steril edényzet, dehidratált tápközeg, Gyors, egyszerű mintakezelés, Rövid inkubálás 1 nap, Gyors, megbízható értékelés. 1. Higiénés indikátorok jelenléte /hiánya Ásványvizek, palackozott vizek (250 ml) Coliform/ Enterococcusok Pseudomonas E. coli aeruginosa Colilert 250 Enterolert 250 Pseudalert 250 Értékelés Inkubálás

9 Leggyakrabban használt tesztek típusai 2.) Legvalószínűbb szám (MPN 100 ml-ben) meghatározása Quanti-Tray módszerrel További eszközök: Quanti-Tray tálca 51 résszel tiszta vizek Quanti-Tray /2000 tálca 97 résszel szennyezettebb vizek Automatikus, Quanti-Tray lezáró készülék UV lámpa a kiértékeléshez

10 A módszer alkalmazása a mennyiségi tesztek esetében ugyanaz, az értékelés módja különbözik Lépések: Reagens betöltése a mintába Coliform/ E. coli Enterococcusok Pseudomonas aeruginosa Feloldódást követően a Qanti-Tray tálca megtöltése Colilert Enterolert Pseudalert Colilert 250 Enterolert 250 Pseudalert 250 Colilert 18 Colisure Enterolert-DW Enterolert-E A mintával telt tálca zárása Inkubálás után a vizsgálat módszerének megfelelő értékelés

11 Coliform és E. coli kimutatása, számlálása Colilert Inkubálás: 36 ± 0.2 C / óra Colilert 18 Inkubálás: 36 ± 0.2 C / óra Coliform pozitív: sárga cellák száma E. coli pozitív: UV fényben (650 nm) fluoreszkáló cellák száma Tiszta vizek: Quanty-Tray 51, MPN 100 ml-ben: Szennyezett vizek: Quanty-Tray/2000 (97) MPN 100 ml-ben:

12 Colilert, Colilert 18 működése Az orto-nitrofenil-β-d-galaktopiranosid (ONPG) ß-galaktozidázzal történő enzimatikus bontásán alapszik. Az emzimaktivitás eredményeként a minta színtelenről sárgára változik. Az eljárás UV megvilágítást nem igényel. A 4-metil-umbelliferil-β-D-glükuronid (MUG) ß-glükuronidázzal történő enzimatikus bontásán alapszik. Az emzimaktivitás eredményeként a minta coliform pozitív, sárga buborékjai közül az E. coli pozitívok UV megvilágítás alatt kéken fluoreszkálnak.

13 Enterococcusok kimutatása, számlálása Enterolert-DW Klórral, vagy egyéb kezelt ivóvíz Inkubálás: 41 ± 0.5 C/ 24 óra Enterococcusok Természetes megvilágításban a zöld szín pozitív eredményt jelent Enterolert-E Szennyezett vizek, természetes fürdővizek Inkubálás: 41 ± 0.5 C/ 24 óra Enterococcusok UV fényben (650 nm) fluoreszkáló cellák száma

14 Enterolert-DW, Enterolert-E működése Enterolert-DW: az orto-nitrofenil-β-d-glükozid (ONPG) glükozidázzal való enzimatikus bontásán alapszik. Az emzimaktivitás eredményeként a pozitív minta színe kékről zöldre változik. Az eljárás UV megvilágítást nem igényel. Enterolert-E: a 4-metil-umbelliferyl ß-D-glucosid ß-glükozidázzal való enzimatikus bontásán alapszik. Az emzimaktivitás eredményeként a pozitív minta színe UV megvilágításban fluoreszkál.

15 Más higiénés szennyezést jelző mikrobák kimutatása, számlálása Hasonló elven működik a többi teszt is, ahol a pozitív buborékok számát vagy az egyszerűen leolvasható elszíneződés, vagy UV fény hatására történő fluoreszkálás adja. Pseudalert Pseudomonas aeruginosa 24 óra 38 ± 0.5 C-on SimPlate Telepszám/Mikrobaszám

16 Szabványosítás, validálás Coliform és E. coli számlálása Colilert18 98/83 / EK irányelv alternatív módszerként jelöli MSZ ISO :1993 MSZ EN ISO :2012 a Colilert18 módszert tartalmazza A fáradságos többcsöves módszer helyett a Quanti-Tray/2000 szennyezettebb vizek esetében jól alkalmazható. Megfelel a minta korábbi 3x5 ismétlésű, 1:1, 1:10, 1:100 arányú hígításainak eredményével.

17 Szabványosítás, validálás Coliform és E. coli, fekál coliform számlálása Colilert 18 MSZ EN ISO :2012 Quanti-Tray/2000 Ivóvizek, természetes fürdővizek: Coliform/E. coli vizsgálatán felül, Colilert18 eredménye megfeleltethető az MSZ EN ISO :2000 mikrotiter módszernek. Ld. AFNOR val A Colilert18 módszer 44.5 C ±0.2 C, óra inkubálás mellett alkalmas a Fekál coliformok MPN számának megadására szennyezett vizekből. A módszert az AOAC validálta (Journal of AOAC. InternatIonal Vol. 94,no )

18 Szabványosítás, validálás Enterococcusok számlálása MSZ EN ISO :2000 Enterolert-DW: Ivóvizek esetében megfeleltethető. Ld. AFNOR val Enterolert-E: szennyezettebb vizek, pl. természetes fürdővizek esetében eredménye az MSZ EN ISO :2000 módszerének megfeleltethető. Ld. AFNOR val IDEXX áprilisától ISO szerinti QC bizonyítvánnyal látja el a Coliform / Escherichia coli, Enterococcusok, Pseudomonas aeruginosa és heterotróf telepszám vizsgálatára gyártott termékeit: Colilert, Colilert-18, Enterolert, Enterolert-DW, Enterolert-E, Pseudalert és HPC SimPlate.

19 % Market Shares Módszerváltások Többcsöves módszer Membránszűrés Years Irányított szubsztrát technologia

20 Köszönetnyilvánítás Dr Mike Cresswell MSB Cbiol. Distributor Support Manager

21 Köszönjük a figyelmet!