állatok viselkedése rzási viselkedés

Átírás

1 A hím állatok párosodásisi viselkedése A hím állatok párosodásisi viselkedésének szakaszai Párosodás előtti szakasz (jellegzetes párkapcsolatos viselkedés: vulva tájék szaglászása, vizelés, Flehmen reakció, hangjelzés, lökdösődés, stb.) Párosodás alatti szakasz (immobilitás, felugrás, bevezetés, hágómozgás, ejakuláció, stb.) Párosodás utáni szakasz (leszállás, refrakter periódus, a refraktor periódus hosszát bef. tényezők, élmény!??!) A nőstény állatok szaporódási si viselkedése 1. A hím érdeklődésének felkeltése 2. Jelezze a hím felé a fogadókészséget 3. Receptivítás Atraktivítás: hang, feromon anyagok, pozitura, Fogadókészség: nőstény nőstényre ugrik, nőstény a hímre ugrik, fejjel lökdősi a hímet, Receptivítás: immobilitás, megállás, farok oldalra, hátra lép a hím felé, lordozis Fizikai aktivítás nő!!! (pedométer) Libidó és s párzp rzási viselkedés A libidó elsősorban az androgén hormonok szintjétől függ Természetes körülmények között a hímek nagyon sok időt töltenek az ivarzó nőstények kikeresésével Ivarzó nőstények pheromont termelnek homosexuális viselkedés (tehén, sertés) Nem ivarzó nőstények nem tűrik a hím közeledését Nőstények az ivarzás kezdetén társulnak, de nem engedik a hím felugrását Hím állatok Szaglás Flehmen reakció

2 Libidó és s párzp rzási viselkedés Ivarzó nőstények: jelzik receptivitásukat legúgolás vizelés Farok elmozdítása az egyik oldalra Helyben marad Hímek előjátéka: Fokozott érdeklődés, felfokozott izgalmi állapot Gyakori erekciók Járulékos nemi szervek váladéktermelése beindul Sikertelen felugrások Végül felugrás és párzás Erekció és párosodás Párosodás típusai Rövid (bika, kos, bak, kan macska) Hosszú (kansertés, kankutya, teve) Átmenet (mén) A párosodás lépései (hím állat) 1. Felugrás 2. A pénisz bevezetése 3. Ejakuláció (nyomás vs. hőmérséklet; glans penis stimulálásának szerepe) Pozitív élmények jelentősége!!!!!!!!!!!!! Az erekció kialakulása Neurális és vasomotoros folyamatok összesége eredményeként alakul ki, ha megfelelően izgatott állapotba került a hím. Az erekció kialakulásának feltételei: 1. Megnövekedett vérbeáramlás 2. Üregek kitágulása 3. Csökkent vénás kiáramlás 4. Nyomás emelkedés 5. M. retraktor penis ellazulása Párzási viselkedés Mén A hímvessző bevezetése Hágó mozgások Gyors ejakuláció Farok mozgatás (húgycső perisztaltika) Leszállás Ejakuláció közvetlenül a méhbe Kérődzők Nincsenek hágómozgások Leszállás Gyorsan felkészül egy újabb párzásra

3 Párzási viselkedés Kan Elhúzódó párzás (5-15 perc) Első fázis: bevezetés, hágómozgások (járulékos nemi szervek váladéktermelése) Második fázis: csendes fázis (spermiumban gazdag fázis) Harmadik fázis: (viszkózus váladék, ragacsos dugó) Ejakuláció közvetlenül a méhbe Párzási viselkedés Kutya A hímvessző bevezetése Hágómozgások Összeragadás (a hagyma/bulbus glandis megduzzad/hüvely izomzata összehúzódik) Segíti a spermiumok feljutását a megfelelő helyre Kandúr Gyors Több párzás történik egymás után Indukált ovuláció (LH szint és a párzások száma gyakorisága) Szexuális stimuláci ció jelentősége A reprodukciós teljesítmény és a spermiumok száma az ejakulátumban manipulálható!! Új környezet Új partner A kettő együtt Megfelelő előkészítés ( potyázás, nem engedik ugrani, oxytocin!!) A hímek h termékeny kenyítőképességének Cél: Megbizonyosodni arról, hogy normál termékenyítőképesség várható-e a hímtől; fertilis v. meddő Vizsgálati lépések: Kórelőzményi adatok felvétele Általános vizsgálat A nemi szervek részletes fizikális Párzás megfigyelése Spermagyűjtés és a sperma minőségének

4 A hímek h termékeny kenyítőképességének 1. Kórelőzm zményi adatok felvétele tele: Cél: a hím okolható-e a meddőségért eldönteni, hogy a hím, a nőstény, vagy a környezet/management okozza-e az infertilitást A gondos adatgyűjtés fél siker a kórhatározásban Környezeti tényezők: Tartás, takarmányozás, gondozás Spermagyűjtésre használt terület Eddigi teljesítmény A nőivarú állomány fertilitási adatai A hímek h termékeny kenyítőképességének 2. Általános vizsgálat Életkor Szexuális tapasztalat/gyakorlat Kondíció (közepes) Temperamentum Tisztázni, hogy nem áll-e betegség a háttérben direkt v. indirekt hatás mozgásszervi betegség fájdalom (közvetlen hatás) + (indirekt hatás) stressz A hímek h termékeny kenyítőképességének 3. Nemi szervek Megtekintés és tapintás Herezacskó és herék Mellékhere + Ondóvezeték + Ondózsinór Hímvessző Járulékos nemi szervek/mirigyek (rektális vizsg.) Megfigyelni, hogy 1) ivarzó nőstény társaságában hogyan viselkedik, 2) Párzás Spermagyűjtés és - bírálat Here körméret felvétele (bika cm; kos cm) UH a többi állatban A potenciális termékenys kenységet jelző adatok Sperma termelő képesség A spermiumok életképessége Az abnormális spermiumok száma az ejakulátumban (5-15%, 20% felett term., komoly és kevésbé komoly defektusok) A normális spermiumok száma az ejakulátumban

5 Ejakulátum térfogata (ml): 6 ml Konc. : 1 X 10 9 spermium/ml Total: 6 X 1 X 10 9 (6 milliárd) Progresszív: 70% Total mozgó: 6 X 10 9 X 0.7 (4.2 X 10 9 spermium/ejakulátum) Kívánatos konc./dózis: 15 X 10 6 /dózis Dózisok száma: 4.2 X 10 9 /15 X 10 6 = 280 adag A sperma gyűjt jtése és s minőségének nek bírálata Spermagyűjtés bikától Műhüvely EE (speciális esetekben, alacsony libidó, nem akar felugrani) Belső nemi szervek rektális masszírozása koncentráció nem határozható meg motilitás és morfológia OK MT-re nem használható A hímek h termékeny kenyítőképességének Spermagyűjtés méntől Műhüvely Spermagyűjtés kostól EE Műhüvely Spermagyűjtés kutyától Kézzel A hímek h termékeny kenyítőképességének Spermagyűjtés kansertéstől Kézi stimulálás Fantomra ugratás Felugrás Hágómozgások A péniszt kézzel megragadjuk és közepesen erős nyomást gyakorolunk rá Ejakuláció > csendes szakasz > nincsenek hágómozgások Szűrés (gél frakció) A spermiumban gazdag fázis utáni szakaszban újból jelentkeznek a hágómozgások (gél frakció)

6 Andrológiai laboratóriumi riumi vizsgálatok A sperma klinikai laboratóriumi vizsgálatának célja: diagnózis/meddőség asperma minőségének ellenőrzése a spermiumok termékenyítő-képességének - fertilitásának előrejelzése Spermaminőség és s fertilitás Szoros kapcsolat van a hagyományos értelemben vett spermaminőség (koncentráció, motilitás, morfológia) és a termékenyítő-képesség között. Ezért a koncentráció/motilitás meghatározása, valamint a morfológia ellenőrzése fontos része a spermaminőség bírálatának. A spermiumok motilitása lényeges tulajdonság a termékenyülés szempontjából in vitro és in vivo környezetben egyaránt. A legújabb vizsgálatok szerint több funkciós teszt és a fertilitás/termékenyítőképesség között kapcsolat van Laboratóriumi riumi vizsgálatok Az ejakulátum/sperma laboratóriumi riumi Makroszkópos vizsgálat Mikroszkópos vizsgálat Mikrobiológiai vizsgálat Egyéb vizsgálatok (Funkciós és biokémiai tesztek) Makroszkópos vizsgálat Térfogat Szag ph Szín Mikrobiológiai vizsgálatok Mikroszkópos vizsgálat Koncentráció Motilitás Élő / elhalt sejtek arány Morfológia Spermiumon kívüli egyéb sejtes elemek Spermiogram vs. spermatocitogram Hőmérséklet nagyon fontos!!

7 Szín: Vizelet: Vér: Genny: Vízszerű: Sárga: Normalis: Sárga/sárgás és megemelkedett térfogat Piros/barna (prosztata vagy technika) Sárga/zöld, nem homogén oligospermia normális, ha takarmány eredetű fehéres-szürke, tejfehér, sárgás-fehér, Szag: Pyospermia: kellemetlen, bűzős Járulékos nemi mirigyek termékének illata dominál (pl. kansertés) Férfiben: prosztata váladék, gesztenyevirág illata Vegyhatás: Prosztata és mellékhere: enyhen savas Ondóhólyag és here: lúgos Normális: 7.2 < 7.2 ondóhólyag szekrétuma hiányzik, krónikus gyulladás > 8.0 akut gyulladás Mikrobiológiai vizsgálat. Az ondóúti gyulladások korokozói az ejakulátum mikrobiológiai során ismerhetők fel. Gyakori baktériumok: Escherichia coli, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Enterococcus spp., Proteus vulgaris, Mycoplasma, Ureaplasma, Chlamydia, Mycobacterium. Egyéb: candidia albicans, Trichomonas vaginalis. Mikroszkópos vizsgálat 1. Festetlen, natív minta (1 csepp 10 ul) X nagyításon 37 o C 2. Egyéb sejtek kiszűrése fehérvérsejtek, spermiogenetikus sejtek (spermatidák) Bakteriospermia: 3 X 10 6 /ml AB rezisztencia, egyenetlen elosztás > kontamináció Motilitás: A megfelelő hőmérséklet tartása nagyon fontos Először kis nagyításon (tömeg mozgás, körkörös hullámszerű) Vizsgálat nagy nagyításon (egyedi spermium mozgás) progresszív előrehaladó + fej/farok oldal mozgással + egyenes vonalban közepesen sérült > körben úszik / visszafele úszik / helyben mozog nagyon sérült > oldalán gördül A vizsgálat célja a spermiumok %-os besorolása az alábbi négy csoportba: Gyorsan és lassan előrehaladó: >50% normozoospermia Kóros mozgásúak és nem mozgók: <50% normozoospermia Progresszív Patológiás Immobilis

8 Koncentráció Számlálókamrák Koloriméter / Spektrofotométer CASA Élő/elhalt sejtek aránya Eosin Y Morfológia Spermac Diff-Quick Natív kenet / Fáziskontraszt mikroszkóp Motilitás vizsgálat és s koncentráci ció meghatároz rozás Vitális teszt 40X nagyitas Reagens: sarga eozin, 5g/L koncentratcioban oldat keszites 9 g/l vizes NaCL-al Eljárás: 1 csepp sperma + 1 csepp reagens, keveres, 1 perc után kenet készítes Morfológiai vizsgálat (festés, állapotának ellenőrz Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz

9 Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz Morfológiai vizsgálat (Spermac festés, állapotának ellenőrz

10 Funkciós s tesztek A sperma inkubálása különböző hőmérsékleteken (4 és 40 o C); hőterhelési próba Zona pellucida felkapcsolódási teszt (Zona-binding test, ZBT) Penetrációs teszt I: spermiumok penetrációja cervikális nyákban (20 20/30 30 mm) Penetrációs teszt II: hörcsög petesejt teszt Funkciós s tesztek Kapacitáció-szerű elváltozások értékelése és akroszóma ellenőrzése, akroszóma reakció indukciója IVF, in vitro fertilizáció és in vitro embrió fejlődés DNS állapotának ellenőrzése Felúsztatási próba, swim-up test (jól mozgó, fertilis sejtek elkülönítése) Grádienscentrifugálás (spermiumok és szub-celluláris részecskék szétválasztására) MAR teszt (immunológiai okok kizárása/megerősítése) Funkciós s tesztek Hipo-ozmotikus duzzadási teszt (Hipo-ozmotic swelling test, HOS) > a membrán ellenálló képességét jelzi (150 mosml/l) Peroxidáz próba (fehérvérsejtek és a kerek sejtek megkülönböztetéséhez) CASA és Flow cytometry Számítógépes sperma analízis COMPUTER ASSISTED SEMEN ANALYSES Számítógépes sperma analízis A számítógépre telepített speciális szoftver segítségével objektív módon értékeljük a spermiumok: 1) számát (koncentráció meghatározás), 2) morfológiáját (morfológiai vizsgálat), 3) kinetikai (mozgás) tulajdonságait (motilitás vizsgálat) WHO tanulmányokb nyokból levont megállap llapítások/következtetések A hagyományos, mikroszkópos, vizuális módszer nagyon szubjektív, pontatlan és nehezen reprodukálható eredményeket biztosít Nem lehet egymással összehasonlítani a laboratóriumok eredményeit Objektív értékelési rendszert kell kialakítani, ami plussz információkat is biztosít

11 Számítógépes sperma analízis Motilitás vizsgálat és s koncentráci ció meghatároz rozás Számítógépes sperma analízis Koncentráci ció és motilitás A CASA vizsgálat eredményei: Koncentráció Mozgó/nem mozgó sejtek száma és aránya VCL curvilinear velocity VSL straight-line velocity VAP average path velocity ALH amplitude of lateral head displacement LIN linearity of curvilinear path (VSL/VCL) WOB wobble VAP/VCL STR straightness VSL/VAP BCF beat-cross frequency (beat/sec) Számítógépes sperma analízis Morfológia Számítógépes sperma analízis Értékelés. A fej területe (µm 2 ), hossza (µm), szélessége (µm) A fej formája Az akroszóma nagyságának aránya a fej méretéhez képest (%) A farok hossza (µm) Koncentráció (millió/ml) Motilitási/mozgás eredmények ( 10 paraméter) Morfológiai paraméterek Jelentés készítés + Adatbázis kezelés

12 Számítógépes sperma analízis Mire kell vigyázni: Hőmérséklet Koncentráció Homológ ondóplazma/dpbs+glukóz+bsa 20 µm számláló kamra (Microcell, Celvision, Makler, stb) 6 mező/kamra; 12 mező összesen 200 sejt Számítógépes sperma analízis A CASA előnyei: Objektív, gyors, kimagaslóan precíz eredmények A spermiumok kinetikai tulajdonságaival kapcsolatban több információhoz jutunk Nagyon jó ismételhetőség (megbízhatóság) Morfológiai értékelés A CASA által biztosított adatok közül több szoros kapcsolatban állhat a fertilizációval (humán adatok főképpen) PEROXIDÁZ-FEST FESTÉS Cél: Az ejakulátumban lévő kerek sejtek (neutrofil granulocyták /pyospermia/ és a spermiogenetikus sejtek /spermiogenezis zavara/) között differenciál diagnózis A metodika alapja: a neutrofil granulocytákban van peroxidáz enzim A fehérvérsejt szám mindig magasabb (lymphocyták sem peroxidáz pozitívak

13 Hipo-ozmotikus ozmotikus duzzadási teszt (Hypo-osmoticosmotic swelling test, HOS test) Hipoozmotikus duzzadási teszt Oldat: g Na citrát g fruktóz, feloldva 100 ml desztillált vízben (150 mosm) Eljárás: 1 ml oldatba 0.1 ml spermát teszünk, összekeverjük és 37 o C-on 30 percig inkubáljuk Bírálat: fáziskontraszt mikroszkóppal, 200 sejt Eredmény: min 60% reagál a kezelésre; ha kevesebb, mint 50%, a minta nem OK Hipoozmotikus duzzadási teszt A spermium kromatin (DNS) állományának nak ellenőrz rzése Kenet készítés szárítás levegőn (30 perc) 24 órás tárolás 3:1 alkohol jégecet oldatban Öblítés vízben 0.02% acridin-orange (citrate-pbsoldatban), ph: 2.5, 2 perc, öblítés, UV fluorescens mikroszkópos vizsgálat, 500X fragmentálódott DNS-el sárga/vörös OK DNS-el zöld 100 spermiumot értékelnek Spermium rendellenességek Csoportosítás A rendellenesség jelentkezésének helye szerint A rendellenesség kialakulásának helye szerint (a spermium fejlődése során) A termékenyülésre gyakorolt hatása alapján (nagy és kis rendellenesség) Spermium rendellenességek A spermium fején kialakuló rendellenességek A fej alakja meghatározó (akroszóma) körte, keskeny az alapnál, kicsi és deformált, gigantikus (óriás) (diploid), kettős fej spermatogenezis alatt, here; primary abnormalities/elsődleges rendellenesség Az akroszóma morfológiája és stabilitása nagyon fontos akroszóma defektus > komoly defektus / következmények a fertilitásra; primary abnormalities; általában a mellékherében való transzport ideje alatt, illetve a tárolás alatt, esetleg az ejakuláció után alakul ki akroszóma leválik, üregek képződnek

14 Spermium rendellenességek A középső rész, és a farok rendellenességei; levált fej Elsődleges defektus (a centriol öröklődő defektusa; vagy szerzett) Kis rendellenesség, ami alig hat a fertilitásra, hacsak nem sok sejtet érint Levált fej: Here degenerációja Nem ejakulált hosszú ideje (öregedés) Idős bika Törött nyak: Öregedés Öröklődő gyengesége a fej rögzitésének Spermium rendellenességek A középső rész, és a farok rendellenességei; levált fej A farok abaxiális kapcsolódása: kicsi; néhány százalék elfogadható A középső rész megvastagodása: A mitokondriális helix deformálódása A farok deformitása: Motilitás zavart Csavarodott farok > here degenerációja Visszahajló farok > környezeti ártalom > hypotoniás stressz, hőm., ph, fertőzés, > spermatogenesis mellékhere funkció Kicsi defektus addig amíg a motilitás jó Spermium rendellenességek A középső rész, és a farok rendellenességei; levált fej Protoplazma cseppek A mellékherében az érési folyamat nem fejeződött be Proximális citoplazma csepp > nagyon éretlen Disztális citoplazma csepp > kevésbé komoly Változások a spermában a herék degenerációjakor: Motilitás, abnormális alakok, felmelegítés utáni motilitás, konc. (aspermia), térfogat nem változik, elsődleges (primary) deffektusok (fej > kicsi/abnorm., levált fej, csavarodott farok, akroszóma defekt.) Gyógyulás: morfológia, motilitás, konc., végül a disztális cseppel bíró sejtek # Kenet készk szítés