Automatizáció az endokrin laboratóriumi vizsgálatokban. Kıszegi Tamás Pécsi Tudományegyetem Laboratóriumi Medicina Intézet

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Automatizáció az endokrin laboratóriumi vizsgálatokban. Kıszegi Tamás Pécsi Tudományegyetem Laboratóriumi Medicina Intézet"

Fruzsina Székelyné
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 Automatizáció az endokrin laboratóriumi vizsgálatokban Kıszegi Tamás Pécsi Tudományegyetem Laboratóriumi Medicina Intézet

2 A kezdet RIA módszer felfedezése 1960 Rosalyn Yalow és Soloman Berson Kizárólag manuális módszerek

3 A folytatás: 1970-es évek Enzim jelölés kidolgozása (glutáraldehides keresztkötés) Avrameas és Pierce 1971 Engvall és Perlmann elsı ELISA publikáció Boehringer-Mannheim, Abbott, Organon Teknika elsı ELISA kit-ek Automatizáció megindítása (96 lyukú lemezek, pipettorok, fotométerek)

publikáció Boehringer-Mannheim, Abbott, Organon Teknika elsı ELISA

4 A folytatás: 1990-es évektıl Batch típusú analizátorok, elsısorban RIA, késıbb ELISA Homogén immunoassay (EMIT-Enzyme Multiplied Immunoassay Technique), automatizáció kezdete Monoklonális antitestek elterjedése Nemizotópos jelölések kifejlesztése Automata analizátorok fejlesztése késıbb betegorientált készülékek

automatizáció kezdete Monoklonális antitestek elterjedése Nemizotópos

5 Megoldandó problémák Jelölés detektálás Homogén vagy heterogén assay?

6 Jelölık típusai - fluoreszcens FITC primer amino csoport

7 Jelölık típusai - fluorofor Kumarin származékok (metil-umbelliferonfoszfát észter)

8 Jelölık típusai fluoreszcens kelát (lantanida) Idıfelbontású gerjesztés és mérés

9 Jelölık típusai energia transzfer Az energiatranszfer: Europium cryptate és XL 665 fluoreszcens jelölı Excitation N N N Eu 3+ N N N transfar Energy N N Long-lived fluorescene Long-lived fluorescene nm nm Idıfelbontású gerjesztés és mérés

N Eu 3+ N N N transfar Energy N N Long-lived fluorescene

10 Jelölık típusai - lumineszcenciás NaOH vagy peroxidáz enzim hatására világít

11 Jelölık típusai - lumineszcenciás Chemilumiscence NH 2 O = = O NH NH H 2 O 2 OH - NH 2 O = = O O - O - + hν Luminol NaOH vagy peroxidáz enzim hatására világít Luminol

12 Jelölık típusai - lumineszcenciás Dioxetan foszfát észter Alkalikus foszfatáz (AP) enzim aktivitás hatására gerjesztıdik és fotont emittál

13 Jelölık típusai elektro kemilumineszcencia (ECL) Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium (II) complex TPA: tripropylamine

14 A lumineszcens jel típusai Rövid felvillanás Hosszú idıtartamú, közel konstans fény

15 A lumineszcens jel típusai Rövid felvillanás, de sokszor ismételhetı, a jel kumulálódik (ECL)

16 Lumineszcenciás detektálás elve Foton számlálásos mérési elv: foton/idıegység

17 Heterogén (szilárd fázisú módszerek) Bevont csı 96 lyukú lemez Makro gyöngy Mikro gyöngy (mikro partikulum) Mátrix cella

18 Bevont csı Félautomata módszer Akridinium észter jelölés

19 Mikro plate módszer (DELFIA) Idıfelbontású heterogén immuno assay

20 Mikro plate módszer (DELFIA) méréstechnikája

21 Makro gyöngy módszer Enzim katalizált kemilumineszcenciás assay (dioxetane foszfát észter)

22 Mikro gyöngy módszer Mágneses mikro gyöngyök, ECL heterogén assay

23 Mikro gyöngy módszer Fény detektálás Fényjel Streptavidinnel borított mágneses mikrogyöngy Biotinilált anti-pth 1. antitest PTH a mintában Ruténiummal jelölt 2. anti-pth antitest PTH koncentráció Példa a mikro gyöngy szendvics assay felhasználására (ECL)

24 Mikro gyöngy módszer Különbözı heterogén ECL assay típusok

25 Mátrix cellás MEIA módszer Egylépéses kompetitív heterogén mikropartikuláris immunoassay Minta + AP enzim konjugált antianalit IgG Mikro gyöngy: anti-fluoreszcein IgG-analit komplex vetélkedik a szabad jelzett antitesttel Üvegszálas mátrix cellában kötıdés 4-metil-umbelliferil-foszfát szubsztrát - fény

26 Cellulóz mátrix csapda: fluoreszcens immunoassay

27 Homogén módszerek Fluoreszcencia polarizációs immunoassay Energia transzferen alapuló immunoassay

28 Analitikai teljesítıképesség Nagy méréstartomány Nagy érzékenység (pmol/l, fehérjékre pg/ml) Jó specificitás Interassay precizitás < 10% Jó valódiság A mért értékek reagens- és készülék függıek!

29 TNF alfa kontroll kártyája TNF-alfa a célérték %-ában TNF-alfa kontroll kártya alacsony tartomány (77-119pg/ml) átlag: 107,5 szórás: 7,1 VK: 6, mérések száma (db) TNF-alfa a célérték %-ában TNF-alfa kontroll kártya magas tartomány( pg/ml) átlag: 104,9 szórás: 8,7 VK: 8, mérések száma (db)

30 Interferenciák heterofil antitestek A módszer méréstartományában interferenciát okozó antitest titer a mintában Multispecifikus heterofil antitestek (több faj immunglobulinjával reagálhatnak) Monospecifikus heterofil antitestek (a reagensben lévı antitesttel interferálnak) Rf multispecifikus antitest

31 Interferenciák specifikus autoantitestek Mérendı paraméter-specifikus antitestek jelenléte a mintában Leggyakoribb interferenciák: FT4, FT3, Tg AFP, CEA, CA 15.3, CA 125 Prolaktin FSH, LH, HCG Konzultáció a klinikussal!

32 Mérési bizonytalanság Paraméter Ferritin CA 19.9 hgh Inzulin ATPO Valproinsav IgE Szint 1 6,5 12,1 10,9 10,4 21,1 9,01 15,3 Szint 2 6,1 9,4 12,4 8,9 14,3 9,34 9,4

Hasonló dokumentumok

SZÛKÍTETT RÉSZLETEZÕ OKIRAT (2)

Nemzeti Akkreditáló Testület SZÛKÍTETT RÉSZLETEZÕ OKIRAT (2) a NAT-1-1553/2012 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz A Pécsi Tudományegyetem Klinikai Központ Laboratóriumi Medicina Intézet (1=7624