Biomedal Diagnostics. GlutenTox - Home. 1. A vizsgálat célja. Gyorsteszt a glutén kimutatására ételből, italból, orál higiéniás termékekből

Átírás

1 Biomedal Diagnostics GlutenTox - Home Gyorsteszt a glutén kimutatására ételből, italból, orál higiéniás termékekből Ed.9 Január 2013 KT-5472 (2 egység) KT-5000 (5 egység) GlutenTox - Home Gyorsteszt a glutén kimutatására ételből, italból, orál higiéniás termékekből. Tartalom 1. A vizsgálat célja 2. Bevezetés 3. A teszt alapja 4. Biztosított anyagok 5. Hasznos, de nem biztosított anyagok 6. Tárolási feltételek 7. Óvintézkedések 8. Figyelmeztetések és korlátozások 9. Előkészítés és mintaelemzés 10. Az eredmények értelmezése 11. Minőség-ellenőrzés 12. Analitikus jellemzők 12.1 Szenzitivitás 12.2 Specificitás 12.3 Belső validálás 13. Referenciák Melléklet 1 1. A vizsgálat célja A GlutenTox Home egy gyors és felhasználó barát teszt a glutén érzékenységben szenvedők számára káros glutén kimutatására ételből, italból és orál higiéniás termékekből.

2 2. Bevezetés A glutén érzékenység egy olyan rendellenesség, ami károsítja a vékonybelet, a bélbolyhok elsorvadnak, és ez megakadályozza a tápanyagok úgy, mint fehérje, lipidek, szénhidrát, ásványi sók és vitaminok, felszívódását. Ezt a betegséget az immunrendszer a gluténre (fehérje, ami a gabonafélékben búza, árpa, rozs és kisebb mértékben zab - található) (ref 1,2) adott nem megfelelő válasza okozza, ami hasmenéshez, vitamin és ásványi anyagok hiányához, vérszegénységhez és vékony csontokhoz (oszteoporózis) vezet. A glutén érzékenység életkortól függetlenül hatással van az emberekre. Jelenleg az egyedüli gyógymód a glutén érzékenységben szenvedők számára egy szigorú, élethosszig tartó gluténmentes diéta, ami nehézséget jelent, hiszen a glutén, amellett, hogy jelen van sok ételben, még adalékanyagokban és tartósítószerekben is megtalálható. A Tápanyag Kódex és az EC 41/2009-es szabályozása szerint az étel készítmény címkéjén akkor lehet feltüntetni, hogy a termék gluténmentes és megfelelő glutén érzékenységben szenvedők számára, ha a glutén tartalom nem haladja meg a 20 rész / milliót (ppm*). * ppm = milligramm glutén 1 kiló ételben. 3. A teszt alapja A GlutenTox Home egy immunkromatográfiás teszt a glutén kimutatására különböző összetételű és a feldolgozottság különböző fokán álló (nyerstől a készételig) ételből és italból. A GlutenTox Home használni lehet még a glutén kimutatására orál higiéniás termékekből, mint például fogkrémből és szájöblítőből, ami hasznos, hiszen ezeket a termékeket is le lehet nyelni. A teszt tartalmaz egy egyszerű folyamatból álló extrakciós lépést, mely közös az összes étel típusnál. A kimutatási fázis a mintában található immuntoxikus glutén részecskék a pálcán (ref.3) korábban fixált színes konjugátumokkal (monoklonális anti-gliadin 33mer antitest / piros színű mikro gömbök) való reakcióján alapszik. Ez a komplex a kapilláris hatás miatt elterjed a pálcán. Ha az eredmény pozitív, akkor egy PIROS csík jelenik meg a pálca eredmény zónájában. A PIROS csík hiánya negatív eredményt jelez. Akár van jelen glutén akár nincs, a konjugátum keresztülmegy a pálca kontroll zónáján ahol immobilizált antitestek vannak, és amennyiben a teszt működik akkor egy KÉK csík (kontroll vonal) jelenik meg. Ezek a gyors tesztek különösen hasznosak a vélt glutén szennyezettség forrásának megállapítására. A tesztet lehet otthon vagy utazáskor használni és a megfelelőek a kereskedelmi konyhákban is, hogy igazolják a gluténmentesen étkező vendégeknek szánt ételek glutén mentességét. 4. Biztosított anyagok GlutenTox Home 2 egység (KT-5472) - GlutenTox Home pálca (2 db) és műanyag pipetta (2 db) fémes borítékban. - Eldobható műanyag kanál (2 db) - Sárga kupakos extrakciós palack (2 db) - Eldobható műanyag pipetta (2 db) - Kék kupakos palack oldószerrel (2 db) - Használati utasítás

3 GlutenTox Home 5 egység (KT-5000) - GlutenTox Home pálca (5 db) és műanyag pipetta (5 db) fémes borítékban. - Eldobható műanyag kanál (5 db) - Sárga kupakos extrakciós palack (5 db) - Eldobható műanyag pipetta (5 db) - Kék kupakos palack oldószerrel (5 db) Használati utasítás 5. Hasznos, de nem biztosított anyagok - Mozsár vagy bármilyen más eszköz, ami a minta őrléséhez használható. - Mérleg (0.1 grammos pontosságú) - Stopper - Nem hintőporos eldobható kesztyű - Alkohol (etanol) 6. Tárolási feltételek A terméket 2-30 C / F között kell tárolni. A teszt optimális teljesítményének elérése érdekében a terméket az eredeti csomagolásban kell tárolni és a rányomtatott lejárati idő előtt fel kell használni. Figyelmeztetés: A pálcát tartalmazó borítékot csak a használat előtt szabad kinyitni. A teszt minden komponensét ki lehet dobni normál hulladék tárolóba illetve újra felhasználhatóba, ahol ez megengedett. 7. Óvintézkedések - Az elemzéssel interferáló szennyeződés elkerülése érdekében, nem hintőporos kesztyű viselése ajánlott. Ha nincsen eldobható kesztyű, akkor a teszt előtt alaposan mossa meg a kezét. - Ha egyszer a GlutenTox Home pálcát eltávolította a borítékból akkor fel kell használni amilyen hamar csak lehet, szigorúan tiszta körülmények között. Utána zárja le a csövet. - A lejárati idő után ne használjon semmit a kit-ből. - Ne igya meg egyik oldatot (folyékony) sem a kit-ből. Az extrakciós oldat alkoholt (etanolt) tartalmaz. - Gyermekektől távol tartandó. 8. Figyelmeztetések és korlátozások - Bizonyos típusú mintákból a glutént csak kisebb hatékonysággal lehet kivonni ezért a maximum szenzitivitással dolgozva (10 csepp kivonat a kék kupakos oldat palackba) javasolt a legalább 10 ppm kimutatási limit biztosítása. Alábbiakban találhatók ezek a minták: - Alacsony polifenol vagy tannin tartalmú étel minták, amelyekben ez a komponens - csokoládé, fekete tea, kávé, bor, bogyós gyümölcs stb. - a kisebb összetevő (70%-ig). - Minták antioxidánssal, pl. A, E és C vitamin C/356 F feletti hővel kezelt ételek. FONTOS MEGJEGYZÉS!

4 Ezekben az esetekben úgy találták, hogy a mintában jelen lévő teljes glutén tartalom legalább 25%-a kimutatható. Ezért, amennyiben negatív eredményt kapunk maximum szenzitivitással dolgozva (10 csepp) akkor biztosak lehetünk benne, hogy az étel kevesebb, mint 10 ppm glutént tartalmaz és így gluténmentesnek minősül és megfelel a glutén érzékenységgel kapcsolatos jelenlegi szabályozásnak. - Néhány magas polifenol és tannin tartalmú étel mintában (olyan ételek ahol ez a komponens csokoládé, fekete tea, kávé, bor, bogyós gyümölcsök - több mint 70%) a kivonási folyamat nem megfelelő lehet és ezért a glutén mennyisége alulértékelt lehet. Ilyen esetekben a GlutenTox Home használata nem javasolt. * Több információért forduljon a beszállítójához. 9. Előkészítés és minta analízis FONTOS MEGJEGYZÉS! Mielőtt használja a kit-et szappan tisztítsa meg az eszközöket és a területet amivel a minta kapcsolatba kerül majd öblítse le alaposan. A tisztítás után erősen javasolt alkoholba mártott kendővel még egyszer mindent letörölni. A kit-ben található anyagok készek az azonnal használatra és használat után eldobhatók Ha a minta folyékony, akkor a mintavétel előtt alaposan rázza össze, hogy homogén legyen. Ha minta félig folyékony vagy tésztaszerű, akkor egy fogpiszkáló vagy tiszta kanál segítségével vegyen mintát és keverje össze, hogy homogén keveréket alkosson. Ha a minta szilárd, akkor őrölje meg a mozsárban vagy házi húsdarálóban (aminek teljesen tisztának kell lennie). Ha az étel minta túl kemény (cukorka, nugát, stb.) akkor törjön le belőle egy darabot késsel vagy kis kalapáccsal, hogy hatékony legyen az őrlés. FONTOS MEGJEGYZÉS! Ha az ételnek több része van, bizonyosodjon meg arról, hogy reprezentatív mintát vesz minden részből és egy végső homogén mintát készít elő. Ha ezt nem teszi, és a glutén nem egyformán oszlik el az ételben, akkor hamis negatív eredményt kaphat Használja a biztosított kanalat és az első táblázatban megadott mennyiségeket, vagy ha van megfelelő mérleg (1) akkor 1 grammot kell kimérni. Ha a minta folyékony, akkor használja a beméretezett kanalat vagy vegyen 1 milliliter mintát. (1) A mérleg használata növeli az elemzési folyamat pontosságát. 1. táblázat: Az ételminta mennyisége az étel típusától függően Étel típusa Példa Kanál mennyisége Lisztek, finom porok Finom morzsa kukoricaliszt, rizsliszt, tejpor, fűszerek, stb. kenyér, keksz, sütemény, snacks, stb.

5 Folyadék és szószok Hús, hal és felvágott tej, tejszín, gyümölcslé, sűrített tej, joghurt, leves barnamártás, szószok, stb. Hús, hal, kolbász, hurka, pástétom, konzerv hús és hal, stb Nyisson ki egy sárga kupakos extrakciós palackot és tegye bele a kanál tartalmát (gr vagy ml) 9.4. Zárja le a palackot és alaposan rázza össze legalább 2 percig és aztán hagyja állni kb. 5 percig, hogy a szilárd részek az aljára kerüljenek. A lenyugvási idő a minta típusától függ Nyisson ki egy kék kupakos oldatos palackot. Az eldobható műanyag pipettát használva vegyen ki egy kis folyadékot a sárga kupakos extrakciós palackból. Tegyen 10 vagy 2 cseppet a kék kupakos oldat palackba attól függően, hogy mi a kívánt küszöbértéke a kimutatásnak. (2. táblázat) Keverje lágyan legalább 15 másodpercig. 2. táblázat Cseppek Kimutatási száma limit 10 5 ppm 2 20 ppm 9.6. Nyissa ki a fémes borítékot és távolítsa el a pálcát és a műanyag pipettát (ne használja újra a pipettát a 9.5 lépésből) A pipettával adjon 5-10 cseppet a kék kupakos oldatos palackból a pálca S zónájába Várjon 10 percet, hogy lássa a végeredményt (ha magas a glutén koncentrációja, az eredmény már 1-2 percen belül megjelenhet). FONTOS MEGJEGYZÉS! 10 perc után az eredmények nem teljesen megbízhatóak. 1. ábra: A minta előkészítése és analizálása

6

7 10. Az eredmények interpretálása Negatív: Egy KÉK csík (kontroll vonal) jelenik meg a pálca középső részén (kontroll zóna). Pozitív: A kontroll vonal (KÉK) mellett egy PIROS csík (eredmény vonal) is megjelenik az eredmény zónában. The piros vonal intenzitása a minta glutén koncentrációjától függ. A küszöb kimutatási érték a 9.5 pontban jelzett kék kupakos oldat palackba tett cseppek számától (10 vagy 2) függ. (Lásd 3. táblázat) 3. táblázat: Az eredmények interpretálása (2) Kimutatási küszöb érték 10 csepp 2 csepp Teszt Pozitív > 5 ppm > 20 ppm eredmény Negatív < 5 ppm < 20 ppm (2) Az eredmények kvalitatívak minden kimutatási limitnél. Érvénytelen: A kontroll vonal (KÉK) nem jelenik meg attól függetlenül, hogy az eredmény csík (PIROS) megjelenik-e. A leggyakoribb okok az érvénytelen eredménynél: nem megfelelő mennyiségű minta, melyet egy helytelen folyamat követ, vagy a reagensek lebomlása. Érvénytelen eredmény esetében szükséges a folyamat felülvizsgálata és meg kell ismételni a tesztet egy újjal. A probléma fennáll akkor lépjen kapcsolatba a szállítóval és hagyja abba a teszt használatát. 11. Minőség ellenőrzés A belső kontroll benne van a tesztben. A kék vonal, ami megjelenik a tesztben, jelenti a belső kontrollt, ami ellenőrzi, hogy a minta mennyisége elegendő és a folyamat megfelelő-e. 12. Analitikus jellemzők 12.1 Szenzitivitás A vizsgálat kimutatási határa 5 ppm, maximum szenzitivitással dolgozva (10 csepp). Ez a kimutatási limit minden egyszerű mintánál pl. nyers anyagoknál, kevéssé feldolgozott ételeknél és nem hő kezelt ételeknél - mindig elérhető. A teszt magas szenzitivitása eleget tesz a Tápanyag Kódex és az EC 41/2009-es szabályozásának, ami 20 ppm-es limitet állapít meg glutén mentesként Specificitás Ez a teszt kifejezetten az alábbi mérgező részek jelenlétének kimutatására készült: búza prolamin (gliadin), rozs (secalin), árpa (hordein) és zab (avenin) különböző variácója. Ezek mérgezőek lehetnek és így károsak a glutén érzékenységben szenvedő betegek számára. Mindazonáltal, nem figyeltek meg pozitív eredményt, ha a minta rizst, kukoricát, szóját, hajdinát, szezámot, kölest, teffet, quinoa-t és amarant-ot tartalmazott, ezek a növényi hozzávalók biztonságosak a glutén érzékenységben szenvedők számára Belső validálás A teszt azon képességének biztosítására, hogy széles skálájú különböző mintákat tud elemezni, különböző kereskedelmi mintákat teszteltek. A GlutenTox Home-al elvégzett mintaelemzések

8 minden típusú mátrixban (lásd 1-es melléklet) kielégítően eredményesek és következetesek voltak a Tápanyag Kódex által validált módszerek szerint, ami azt jelenti, hogy a tesztet széles körű mintákon lehet használni. 13. Referenciák 1. SHAN L., et al.; Structural basis for gluten intolerance in celiac sprue ; Science, 2002, 297: COMINO I., et al.; Diversity in oat potential immunogenicity: basis for the selection of oat varieties with no toxicity ; Gut; 2011; 60: MORON B.; et al.; Sensitive detection of cereal fractions that are toxic to celiac disease patients by using monoclonal antibodies to a main immunogenetic wheat peptide, 2008; 87: SIGLEZ M.A.; et al.; Método de detección de gluten en superficies ; Alimentaria, 2010; 411:67-70 Melléklet 1. A GlutenTox Home validálásra tesztelt minták Csoport Liszt és dara Tejtermékek Sült és gabona termékek Hústermékek Haltermékek Zöldségek Levesek, krémek és száraz keverékek Szószok, dresszingek, fűszerek Cukrok Előre elkészített ételek Zsíros ételek Savak ételek Italok Orál higiéniés termékek Tesztelt minták kukoricaliszt, előfőzött kukoricaliszt, kukoricadara, rizsliszt, búzaliszt, hajdina liszt tehéntej, tej oldódó rostokkal, tej gabonafélékkel, natúr és ízesített joghurt sajtkrém, kockasajt pirítós, grisini, kekszek, csokoládés keksz, Madeline, torta, kukoricapehely, tészta, kukorica palacsinta, rizs sütemény, tönkölybúza sütemény, snack darált pulyka és csirke, pulyka kolbász, csirke érmék, disznó kolbász, chorizo tőkehal és hekk salátakeverék, sült zöldségek zöldségleves, csirkés rizses leves, szárított zöldségleves, leveskockák, mogyoróvaj joghurtos salátaöntet, ketchup, szójaszósz, salátaöntet, fokhagymapor, paprikapor, főzőtejszín glükóz szirup, porcukor húsgombóc szószban borsóval, húsos ravioli tojásos tésztában, babfőzelék oliva olaj, napraforgó olaj, vaj margarin, tejszín paradicsomszósz, borecet, almaecet, citromlé víz, tej, gyümölcslevek, sör, szója italok rizs italok, zab italok, alkoholmentes italok fogkrém, szájöblítő

9 Biomedal Diagnostics Több információért kérjük, hogy látogasson el a honlapunkra vagy keressen fel minket: SEVILLA Av. Américo Vespucio, n 5-4, planta 1, módulo 12 Parque Cientifico Tecnológico Cartuja Sevilla Espana Tel (+34) Fax. (+34) Biomedal S.L. info@biomedal.com