Leggyakrabban vizsgált minták

Átírás

1 Leggyakrabban vizsgált minták vér (teljes vér), szérum, plazma vizelet agyfolyadék, liquor lavage (pl. bronchoalveolaris lavage, BAL) izületi folyadék folyadékgyülem bélsár bendőfolyadék 1

2 Teljes vér, vérplazma, vérszérum Teljes vér antikoaguláns centrifugálás alvadás Plazma Szérum 2

3 MÉRÉS ELİTTI, PREANALITIKAI HATÁSOK 1.: a beküldı kilinikus felelıssége Vérvételi eszközök: steril, éles, száraz (vagy alvadásgátlóval átmosott ), kellı vastagságú tő steril, száraz (vagy alvadásgátlót tartalmazó), megfelelı vákuumra alkalmas fecskendı száraz (alvadásgátlót tartalmazó) vércsı üvegcsı: szérumnyeréshez jobb ( alvadásgyorsító) mőanyag csı: plazmanyeréshez jobb ( alvadásgátló) Vérvételi hibák: rossz technika ( pumpálás, nagy vákuum haemolysist okoz (l. késıbb) etetés utáni vérvétel lipaemiát okoz (húsevık!) rosszul megválasztott alvadásgátló téves eredményt okoz 3

4 Vérplazma: színeltérések szmha kutya a b Karotindús plazma (a) Karotinszegény szérum (b) egészséges (N), hemolizált (Hem), icterusos (Ict), lipémiás (Lip) 4

5 MÉRÉS ELİTTI, PREANALITIKAI HATÁSOK 2.: a beküldı klinikus és a fogadó labor felelıssége. A szállítás hibái: lassú meleg hımérséklet rázkódás A tárolás hibái: szobahımérsékleten? jégszekrényben? fagyasztva? meddig? 5

6 Vákuumos vérvételi eszközök 6

7 Vákuumos vérvételi csövek Gyári vákuummal Saját vákuum biztositásával Letörhetı dugattyúnyél 7

8 Alvadásgyorsitós és szérumszeparátoros vérvételi csövek Alvadásgyorsitó üveggyöngyös, nyitott vérvételhez Szérumszeparátorgéles, zárt (vákuumos) vérvételhez 8

9 Szérumszeparátoros (géles) vérvételi csı Üres csı, alul a gél/zselé 2. Csı vérrel feltöltve 3. Ülepités 3 óráig (a gél nem jön fel) 4. Centrifugálás 10 percig (a gél feljön a szérum alá) 9

10 Szérumszeparátoros, vákuumos vérvételi csı (centrifugálás után) 10

11 Vákuumos vérvételi csövek 11

12 Vérvétel vákuumos csıbe kutyából 12

13 Vérvételi tők fecskendıvel történı vérvételhez Vastag tő: minimális hemolizisveszély, kellı mennyiség gyorsan nyerhetı Vékony tő: hemolizisveszély, bealvad, lassú 13

14 A centrifugálás elıtt minden vér egyforma! 14

15 Leggyakoribb hatások: hemolízis, lipémia, icterus 15

16 A hemolízis hatása Növeli a plazmában/szérumban a vvsben nagyobb mennyiségben lévı anyagokat: enzimek (AST, GLDH, LDH) szubsztrátok: NH 3, K, Mg, foszfátionok a hasonló spektrumban mérhetı anyagokat: bilirubin Csökkenti a plazmában a vvsben kisebb mennyiségben lévı anyagokat: glükóz Na

17 A HEMOLÍZIS ÉS A LIPÉMIA HATÁSA 1. ALP, AST, ALT, CK, GGT, LDH Bilirubin Kálium Karbamid Kreatinin Anorg. foszfát (P) Ammónia Paraméter Hemolízis / Lipaemia 17

18 A HEMOLÍZIS ÉS A LIPÉMIA HATÁSA 2. Paraméter Hemolízis Lipaemia Vas Koleszterin Triglicerid Glükóz Összfehérje Összlipid / / /0 18

19 A HEMOLÍZIS LEGGYAKORIBB OKAI túl erıs szívóhatás "pumpálás" a vérvételkor (kisállat) kontamináció (vizes csı, detergens nyomok) a vérminta állása több óráig hőtés, melegítés túl hosszú ideig tartó vagy/és túl gyors centrifugálás durva "bánásmód" a vérmintával (rázás) 19

20 Vvs és plazmanh 3 Arány: 3:1 A hemolízis növeli a plazmanh 3 at

21 Vvs és plazmaglükóz Arány: 0,7 0,8:1 A hemolízis enyhén csökkenti a plazmaglükózt

22 A LIPAEMIA HATÁSA A lipidaemia NÖVELI vagy CSÖKKENTI néhány anyag mérési eredményét a plazmában (szérumban) néhány extra lipidfrakció jelenléte vagy az okozott turbiditás miatt: összlipid, triglicerid, koleszterin többi: általában nem is mérhetők 22

23 23 ANTIKOAGULÁNSOK HATÁSA (FONTOSABB PÉLDÁKKAL) Hemosztázis Min. vérkép Menny. vérkép Kreatinin / Karbamid Kalcium GGT Glükóz Ammónia Enzimek Citrát EDTA Heparin

24 Nacitráros vérvételi csövek 9NC kék kupakos hemosztázishoz 4NC fekete kupakos vörösvérsejtsüllyedéshez 24

25 Antikoagulánshatás Példa : kálium és calciumionkoncentráció heparinos és KEDTA plazmában, egészséges állatból Heparinplazma: Élettani lelet KEDTA plazma: Kóros lelet ( K és Ca) 25

26 ANTIKOAGULÁNSOK HATÁSA 2. Az elızıek miatt: BIOKÉMIÁHOZ: heparint/szérumot, HEMATOLÓGIÁHOZ (mennyiségi, minıségi vérképhez) EDTÁt, VÉRALVADÁS VIZSGÁLATOKHOZ (protrombin idıhöz, APTIhoz stb.) citrátot használjunk 26

27 Vérvételi csövek színkódja (német) Vvssüllyedés: lila 27

28 Citrátos gyári vércsövek (amerikai színkód) hemosztázisvizsgálathoz és vérsüllyedéshez 28

29 Antikoagulánsok javasolt felhasználása A gyári csövek: készen, megfelelı arányban tartalmazzák az antikoagulánsokat. Ezeket használjuk! Pontosan a jelig kell venni a vért! Kétszer óvatosan átfordítani elegendı. 29

30 Vérparaméterek stabilitása leszívott szérumban/plazmában 1. Szobahım. 48 C 20 C ALP >7 nap ( 10 %) 7 nap 7 nap Ammónia (EDTA!) 0,52 ó (jégen) 710 ALT AST Bilirubin Csak friss szérumból! CK hét Gamma GT hét Glükóz (deprot) 4 ó 3 10 Hb(teljes vér) 24 órán belül 24 órán belül 24 órán belül 30

31 Vérparaméterek stabilitása leszívott szérumban/plazmában 2. Szobahım. 48 C 20 C Kálium 2 hét 2 hét hetek Karbamid hónap Kalcium hónap Koleszterin hónap Kreatinin 46 ó 1 6 hónap Összfehérje Összlipid 3 hetek 31

32 Állott vér ionogramja 32

33 SZÉRUMOT VAGY PLAZMÁT HASZNÁLJUNK? 1. Általában jelentıs különbség nincs, bár a szérum biológiai "mátrixhatása" kisebb (direkt bilirubint, epesavakat csak szérumból lehet mérni) 2. A szérumnyerés idıigényes, még alvadásgyorsító (drága!) használatakor is 3. Szérumnyerés esetén fokozott a hemolízis veszélye 4. Símafalú mőanyag kémcsıben (ami egyébként olcsó lenne) a szérum esetleg ki sem válik Ezért általában plazma nyerésére törekedjünk!

34 Teljes vér vagy plazma/szérum? Sok szárazreagensautomatával és tesztcsíkkal teljes vérbıl is lehetséges meghatározásokat végezni. A nedveskémiai analízisek csak plazmából/szérumból kivitelezhetık. Összehasonlíthatóke az eredmények? Általában NEM. 34

35 Mérés elıtti, preanalitikai tényezık: vizelet Mintavétel : spontán (középsugár!) katéterezés cystocentesis (kisállatban) Kontamináció: vér baktérium spermium detergensek/mosogatószerek 35

36 Vizeletvétel, de hogyan? Szabadon: technikai nehézségek (szuka!), szennyezıdés Katéterezés: technikai nehézségek (kistető szuka!, tehén), húgyúti szennyezıdés, téves proteinuria és hematuriadiagnózis Cystocentesis: még szokatlan. Baktériumvizsgálatnál indokolt 36

37 A VIZELET TÁROLÁSA, KÜLDÉSE Vizelet tárolása: lehetıleg ne tároljuk (bakteriális fertızıdés) 4 és 8 C között maximum 1012 óráig tárolható, hozzá néhány timolkristályt vagy kevés fenolt kell adni A fagyasztás a mikroszkópos elemzést lehetetlenné teszi! "Maradványanyagok" veszélye: mosószer (ph!) redukáló anyagok (pl. cukrok) jelenléte Nagyon jól záródó edényben küldjük vizsgálatra! 37

38 A vizelettárolás hatása (dalmata) 1. csı: friss vizelet, egészséges dalmát kutyából 2. csı: ugyanaz a vizelet 24 órás hőtıszekrényben való tárolás után 3. csı: ugyanaz a vizelet centrifugálás után (sedimentum lateritum, kicsapódott húgysavkristályok) 38

39 Preanalitikai hatások: liquor, lavage, synovia, folyadékgyülem Mintavétel: Steril viszonyok! Csak friss mintát Két cső használata: EDTA és üres Kontamináció: vér baktérium 39

40 Mérés elıtti hatások: liquor, lavage, synovia, folyadékgyülem Tárolás: Sose tároljuk. Jusson a laboratóriumba < 30 perc alatt Fagyasztás: mikroszkópos sejtelemzést lehetetlenné teszi Biokémiai vizsgálathoz: előzetes centrifugálás után a felülúszó fagyasztása lehetséges 40

41 Mérés elıtti hatások: bendıfolyadék Mintavétel: Óvatos szondakezelés (trachea!) Megfelelő szűrő a szonda végén Kontamináció: Nyál Tárolás: Ne tároljuk Mikroszkópos vizsgálat: Elımelegített tárgylemez, tartó 41