Fehérjéket és izomrendszert. Vajdovich Péter és Kungl Krisztina

Átírás

1 Fehérjéket és izomrendszert érintő laboratóriumi vizsgálatok Vajdovich Péter és Kungl Krisztina

2 TP az összes szérum (plazma) fehérje 1. A vérszéruma fibrinogén és a V+ VIII véralvadási faktorokon kívül minden plazmafehérjét tartalmaz A szérum összfehérje gyakorlatilag az ALBUMINt és a GLOBULINokat jelenti Az ALBUMIN a májban képződik A GLOBULINokfőleg a májban és a B- lymphocytákban képződnek: α, β és γ frakciók ismertek Dr. Kungl Krisztina munkája 2 2

3 A szérumfehérjék feladatai Onkotikus nyomás biztosítása(albumin) Pufferhatás (~20%, főleg albumin) Transzport(pl. lipidek, hormonok, fémek) Véralvadás(fibrinogén, stb) Immunfeladatok(globulinok) Gyulladási folyamatok (pl. akut fázis fehérjék APP, citokinek) Dr. Kungl Krisztina munkája 3 3

4 Dr. Kungl Krisztina munkája TP total solids TP refraktometria A hematokrit cső eltörése buffy coat felett (plazma) vagy minta centrifugálása után (plazma vagy szérum) 1 csepp refraktométerre Digitális zseb plazma TP g/l, pontosság +/-1g/L ( ) Madarak esetében magasabb értéket ad, mint spektrofotometriás Biuretmódszer Vizuális kézi plazma TP g/l, pontosság+/-2g/l( ) Téves emelkedésokai:nem homogén csepp, zavaros, nem friss minta, haemolysis, lipaemia, (icterus)

5 TP -spektrofotometria Az alap biokémiai panel része Biuretmódszer (Cu+fehérje kelát) a legtöbb biokémiai automata képesek elvégezni, alkalmas olyan folyadékok vizsgálatára alkalmas, ahol a TP g/l közötti (vér, szabad testűri folyadék) Fals magas: ++/+++ lipaemia, haemolysis Fals alacsony: ++/+++ icterus Minta stabilitás: szérumban 2-8 o C 3 nap, lefagyasztva 6 hónap (az ennél érzékenyebb TP módszereket (turbidimetria, ultraszenzitív TP) más biológiai mintákban használjuk vizelet, liquor Dr. Kungl Krisztina munkája

6 Dr. Kungl Krisztina munkája Összfehérje (TP): életkor-függés TP (g/l) TP kevés az újszülöttben:60-80%-aa felnőtt állatokénak, főleg a kevés globulin miatt Nő a kolosztrumhatásra atp alkalmas a kolosztrumfelvétel ellenőrzésére Csökken 1-5 hetes korra, majd alacsony, mert a plazma volumen gyorsabban nő, mint a máj fehérjetermelési kapacitása Felnőttkori értéket 6-9(-12) hónapos korban éri el Időskorban (kevesebb albumin termelődik) Vemhesség TP (transzferrin, többi ) 6 6

7 A. HYPERPROTEINAEMIA 1. TP frakciónként arányos emelkedés: dehydratio A/G arány élettani A/G arány csökken 2. Emelkedés a globulin frakcióban: gyulladásos folyamatok B. HYPOPROTEINAEMIA A/G arány élettani 1. Minden frakció arányosan: Hyperhydratio,oedemávaljáró szívelégtelenség, polydipsia(pseudo-hypoproteinaemia haemodilutio miatt) 2. Minden frakció, de nem arányosan szelektív (főként Alb)/nem szelektív (minden frakció) fehérjevesztés: PLE/malabsorptio, PLN, vérzés, égési sérülés után 3. Fiatal állatok alacsony referencia érték 4. Egyes frakciók csökkenése lásd: HYPOALBUMINAEMIAés HYPOGLOBULINAEMIA A/G arány csökken A/G arány élettani 7 Dr. Kungl Krisztina munkája 7

8 Áttekintés Plazmafehérjék alap paraméterei TP Alb Glob= TP Alb AFF: CRP, SAA Szénhidrát anyagcsere paraméterei Glükóz Fruktozamin, Glikált Hb laktát Dr. Kungl Krisztina munkája

9 Izomműködés

10 Áttekintés Vizsgálati célok: 1. Izomsejt károsodás 2. Izomsejt működés 10

11 Izomsejt károsodás

12 Izomsejt károsodás Vérből végezhető vizsgálatokat jelent, amelyek a károsodott szívizomból valő kiszabadulással/szivárgással állnak kapcsolatban. - Enzimek: CK kcreatin-kináz LDH laktát-dehidrogenáz AST aszpartát amino-transzferáz - Egyéb kijutó metabolitok: mioglobin troponinok 12

13 KREATIN KINÁZ (CK) - Izomkár után 6-12 ó-val nő, T 1/2 : 2 ó - Agykárosodás a CSF-ben okoz CK-emelkedést - A tartósan emelkedett CK aktivitás izomkárosodásra utal - Az izoenzimek (CK-B, CK-M) meghatározása lehetőséget adhat a lokalizációra (szívizom, harántcsíkolt izom, símaizom, agyvelő) - Aktivitása nagyobb fiatal állatokban (< 1 hónapos - 4x több, mint felnőtt) 13

14 KREATIN KINÁZ (CK) - CK-BB (CK-1) - agy, lép, vese - CK-MB (CK-2) - belek, tüdő, lép, myocard - CK-MM (CK-3) hcs izom, myocard - CK-Mt többféle szövet mitokondr. Elkülönítés elektroforézissel - A vérben CK-MM, CK-BB főként, CK-MB kevés - Szérumban 2.5x több, mint a palzmában (thrombocytákból ki) - Stabilitás 1 hét -20 o C-on tárolva - Fals emelk.: hemolízis, icterus, izomszúrás vérvételkor - Extrém magas értékek lehetnek izomkárosodáskor (>100xURL) 14

15 KREATIN KINÁZ (CK) Emelkedés okai: Izomterhelés, im. inj., vagy károsodás, necrosis, ischemia, roham, trauma, szállítás. Toxin, rhanbdomyolysis, gyull. myopathia (bakt., vírus, parazita), veleszületett izomdisztrófia Hypothyreosis, hyperadrenocorticismus Downer cattle Szívizomkárosodás ritkán emelkedik kifejezetten Símaizomkárosodás szm endometritis Izomlebomlás éhező macskák, IU/l 15

16 ASZPARTÁT AMINOTRANSZFERÁZ (AST) -Ugyancsak fokozódik májbetegségekben (nem specifikus) Cytopl., és mitokondr. Lassabban nő, és lassabban csökken, mint a CK. Izomkár után órával nő, -Hosszabb T1/2 idő, mint a CK vagy LDH kutya: 4-12 ó, macska: 77 p, ló: 7-8 nap Alanin aminotarnszferáz (ALT) Nem izomspec., aktivitás a hcs. Izomban 5%-a, szívizomban 25%-a a májénak. ALT-emelkedés lehet izomkárosodáskor, mert nagy az izom tömeg a májhoz képest!!!! 16

17 AST CK Akut izomkár Aktív, nem rég izomkár Az izomkár megszűnt 2 napja 17

18 LAKTÁT DEHIDROGENÁZ (LDH) -Enyhe érzékenység, alacsony specificitás - sok sejt cytoplasmájában Négy komponens (M izom, és H-heart alegység) -Többféle izoenzim ismert (szívizom-, vázizom) -Hemolízis növeli a plazmabeli aktivitását -Izomsérülés lokalizációjára alkalmas CK-val együtt LDH-1 (4H) in the heart and in RBC (red blood cells), as well as the brain. LDH-2 (3H1M) in the reticuloendothelial system L DH-3 (2H2M) in the lungs LDH-4 (1H3M) in the kidneys, placenta, and pancreas LDH-5 (4M) in the liver and striated muscle Fokozott CK és LDH1 = szívizomkárosodás Fokozott CK és LDH5 = harántcskolt izom károsodás 18

19 TROPONINOK (izom strukturális egysége) 19

20 TROPONINOK (izom strukturális egysége) Cardiac troponin I (ctni), és T (ctnt) CK-MB helyett alkalmazható -Szívizomkárosodáskor koncentrációjuk a plazmában emelkedik -Humán tesztkészletek használhatók állatokban (kutya, macska, ló, szm) is Emelkedett értékek: Billentyű elégtelenség DCM Akut myocard. károsodás GDV (gyomorcsavarodás) miatt Vesselégt., Nem szíveredetű dyspnoe 20

21 MIOGLOBIN -Kis molekulatömegű fehérje (17000 D), hamarabb szabadul ki a sérült izmokból, mint a CK, és azonnal filrálódik a glomeruluson -Váz- és szívizom károsodáskor megjelenik a vizeletben is A szérum színtelen, vagy sárgás. A vizelet barna, vöröses barna, a vizelet tesztcsíkon Hb-t jelez. Haemolysishaemoglobinuria Myoglobinemiamyoglobinuria Vizelet tesztcsík Hb Szérum pirosas halvány sárga AST CK, AST 21

22 2. AZ IZOMSEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA

23 TEJSAV Az anaerob glikolízis végterméke 0,5-2 mmo/l Hypoxia során koncentrációja nő a plazmában Versenylovakban az állóképesség vizsgálatára alkalmas Tréning (verseny )után: 25x URL!!! A csökkenés (clearance) mértéke (gyorsasága) az edzettség fokmérője A vérminta kezelése NaF-os csőben napokig stabil 23

24