Szerv- és szövet-specifikus Myxobolus fajok elkülönítése molekuláris biológiai módszerek segítségével

Átírás

1 Szerv- és szövet-specifikus Myxobolus fajok elkülönítése molekuláris biológiai módszerek segítségével Cech Gábor, Molnár Kálmán és Székely Csaba MTA Állatorvos-tudományi Kutatóintézete, 1143 Budapest, Hungária krt. 21.

2 Kérdésfelvetés A halak nyálkaspórás parazitákkal való fertőzöttségével kapcsolatban mindig alapvető kérdés a szerv- illetve szövetspecificitás megállapítása,azaz annak ismerete, hogy az adott parazita egy szervben élősködik, vagy több szervet is képes fertőzni. Fontos szempont az adott szerven belül a pontosabb lokáció azaz a szöveti affinitás vizsgálata is. Az eltérő szervi vagy szöveti lokáció valószínűsítheti, hogy külön fajokról van szó, ezt azonban biztosan csak a molekuláris vizsgálatok tudják megerősíteni, illetve cáfolni. Vizsgálataink során három különböző, eddig le nem írt Myxobolus fajt vizsgáltunk, klasszikus morfológiai megfigyelésekkel, illetve a 18S rdns gén vizsgálatával, s hasonlítottuk össze azokat ismert fajokkal.

3 Anyag és módszer Gyűjtött anyag: - Myxobolus sp. spórák küsz (Alburnus alburnus) májából, herejéből, veséjéből és a beléből - Myxobolus margitae spórák küsz (A. alburnus) kopoltyúlemezeiből - Myxobolus sp. spórák küsz (A. alburnus) és bodorka (Rutilus rutilus) kopoltyúlemezének porcszövetéből Morfológiai vizsgálatok: - fixálatlan spórák vizsgálata mikroszkóppal - szövettani vizsgálatok (hematoxilin-eozin festés) Molekuláris vizsgálatok: - PCR a kis riboszomális alegység RNS-ére (18S rdns) - a 18S rdns szakasz szekvencianalízise

4 Myxobolus shaharomae sp. n. spórái - rövid ellipszoid spórák - egyenlő nagyságú, körte alakú poláris kapszulák - a poláris filamentumban öt csavarodás -intekapszuláris appendix nem figyelhető meg

5 Myxobolus shaharomae sp. n. plazmódiumai különböző szövetekben bél bél máj here

6 M. shaharomae sp. n. (here) M. shaharomae sp. n. (here) M. shaharomae sp. n. (máj) M. shaharomae sp. n. (máj) M. shaharomae sp. n. (vese) M. alburni M. erythrophtalmi sp. n. M. ellipsoides M. dogieli M. cycloides M. impressus 100 M. parviformis M. pseudodispar 0.05

7 M. feisti sp. n. spórái: frontális nézetben ellipszoid, szuturális nézetben citromalakúak egyenlő méretű, körtealakú poláris kapszulák, a poláris filamentumban 6 csavarodás van nagy háromszögletű interkapszuláris appendix M. susanlimae sp. n. spórái: a M. susanlimae sp. n. spórái nagyon hasonlítanak a M. feisti sp. n.-re a két faj között mindössze a méretben mutatkozik enyhe különbség

8 M. feisti sp. n. plazmódiuma M. susanlimae sp. n. plazmódiuma

9 M. margitae I M. margitae II M. susanlimae sp. n. I M. susanlimae sp. n. II M. macrocapsularis M. feisti sp. n. IV M. feisti sp. n. II M. feisti sp. n. I M. feisti sp. n. III M. muelleri M. bramae M. dujardini 0.02

10 M. shaharomae sp. n. here M. shaharomae sp. n. here M. shaharomae sp. n. máj M. shaharomae sp. n. máj M. shaharomae sp. n. vese M. alburni 99 M. erythrophtalmi sp. n. 83 M. ellipsoides 56 M. dogieli M. cycloides M. muellericus 50 M. impressus M. parviformis 95 M. dispar M. cyprinicola 100 M. muelleri 89 M. bramae M. macrocapsularis M. susanlimae sp. n. I 100 M. susanlimae sp. n. II 100 M. margitae I 63 M. margitae II M. feisti sp. n. IV 56 M. feisti sp. n. I 100 m. feisti sp. n. II M. feisti sp. n. III M. dujardini 18S ribosomal RNA M. cyprini 18S ribosomal RNA C. shasta 18S ribosomal RNA 0.05

11 Összefoglalás M. sharomae sp. n. esetében sikerült kimutatni, hogy a spóramorfológiájukban megegyező, a küsz több különböző szervéből származó (máj, vese, here, bélfal) minták 18S rdns szekvenciájukban megegyeznek. M. susanlimae sp. n. a küsz kopoltyúlemezének porcos íveiből vett párhuzamos minták egymással teljes mértékben megegyeztek, de a szintén küszön élősködő, ám eltérő lokációjú M. margitae-től jelentős mértékben eltértek. A bodorkán élősködő M. feisti sp. n. párhuzamos mintái azonos 18S rdns szekvenciával rendelkeztek, de a hasonló lokációjú és spóramorfológiájú M. susanlimae sp. n.-tól különböztek.

12 Köszönöm a figyelmet!