TELJESKÖRŰ VÉDELEM 3 BETEGSÉG ELLEN EGYETLEN KELTETŐI OLTÁSSAL

Átírás

1 TELJESKÖRŰ VÉDELEM 3 BETEGSÉG ELLEN EGYETLEN KELTETŐI OLTÁSSAL DR CSERÉP TIBOR DVM MRCVS

2 ÁTTEKINTÉS A rekombináns vakcinák bemutatása rhvt-nd IBD Üzemi körülmények során szerzett tapasztalatok Szerológia

3 REKOMBINÁNS VEKTORVAKCINÁK BAROMFI VÉDELMÉRE A vakcinák új generációja géntechnológián alapszik Elsődleges célok : biztonságosság és kényelem 3

4 REKOMBINÁNS VAKCINÁK: ELŐNYÖK DEVELOPMENT OF RECOMBINANTS VACCINES Biztonságosság A hagyományos vakcinák használatakor jelentkező oltási reakciók kiküszöbölése ND, ILT Elkerülhető a lappangás, horizontális terjedés, virulencia visszatérésének lehetősége ILT Kényelem Több keltetői vakcinázás végezhető, és nem szükséges ismétlő vakcinázása telepeken Elkerülhető a maternális immunitás zavaró hatása, Deventer formula Könnyű alkalmazhatóság tojásba oltás, bőr alá, automatizálás

5 DEVELOPMENT OF RECOMBINANTS VACCINES 1 generációs rhvt egyszeres génbeültetéssel rhvt- ND rhvt- ILT rhvt- IBD rhvt- AI

6 DEVELOPMENT OF RECOMBINANTS VACCINES 2 generációs rhvt kettős génbeültetéssel rhvt- ND-IBD rhvt- ND-ILT

7 PULYKAHERPESZ VÍRUS Nagyon nagy vírus A DNS felelős a vírus replikációjáért és glikoproteinjeinek kódolásáért A glikoproteinek felelősek a gazdasejtekhez való tapadásért és behatolásért Az immunrendszer felismeri az antigéneket és immunválaszt ad

8 PULYKAHERPESZ VÍRUS Nagyon nagy DNS ideális gén eltávolított mutánsok létrehozására, a virus reprodukciós képességének elveszítése nélkül Genomjának vannak olyan szakaszai amelyeknek nincs lényeges funkciójuk, ahova gének helyezhetők be

9 REKOMBINÁNS VEKTOR VAKCINÁK BAROMFI RÉSZÉRE Kizárólag a kulcs protektív - donor gén(ek) kerülnek behelyezésre a vakcina vírus vektorba A donor vírus nem kívánt mellékhatásai elkerülhetők 9

10 REKOMBINÁNS VEKTOR VAKCINÁK BAROMFI RÉSZÉRE Amikor a vektor vírus replikálódik, kifejezi saját védő antigénjeit és a donor gének által kódolt protektív- antigén(ek)t. Elértük a célt : protektív immunválasz mind a donor mind a vektor vírusokra 10

11 REKOMBINÁNS VAKCINÁK HÁTRÁNYAI Az immunitás kialakulása függ a vektor vírus replikációjától HVT replikáció Változások a szerológiai ellenőrzésben inzert által kiváltott immunválasz A korai védettség kialakulása érdekében, segíthet az élő, attenualt vakcinák használata ND A hagyományos élő vakcinákhoz képest drága 11

12 rhvt VEKTOR VAKCINÁK BAROMFI RÉSZÉRE Fagyasztott Marek vakcinák folyékony nitrogénben tárolás, szállítás, beoltás Tojásba vagy napos korban oltás nem terjed horizontálisan! 12

13 Innovax ND IBD A legelső kettős génbeépítésű HVT vakcina

14 A legelső kettős génbeépítésű HVT vakcina

15 A HVT REKOMBINÁNS VAKCINÁK MŰKÖDÉSI MODELLJE B,T lymphocytes ~ 20 nap replikálódás fehérje expresszálódás HVT IBD VP2 ND F Ellenanyagok és sejthez kötött (celluláris) immunválasz rhvt 15

16 1 vektor 3 betegség elleni védelem rhvt - ND-IBD Marek betegség Baromfi pestis Gumboró betegség 16

17 INNOVAX ND-IBD VAKCINÁZÁSI ELŐIRAT Sejthez kötött élő rekombináns pulykaherpeszvírus (HVP360 törzs), ami a sejtekkel a baromfipestis vírus fúziós fehérjéjét és a fertőző burzitisz (Gumboro) VP2 fehérjéjét termelteti. Cél állatfaj: Házityúk A védettség kezdete: Baromfipestis: 4. hét, Gumboro: 3. hét, Marek: 9. nap A védettség tartama: Baromfipestis: 8 hét!, Gumboro: 8 hét!, Marek: a kockázatos időszak teljes tartama alatt Uj adatok Rispens Naposcsibék (tojásba oltás) aktív immunizálására Adható ugyanazon a napon, de nem keverhető a Nobilis ND Clone 30 vagy Nobilis ND C2, Nobilis IB Ma5 vagy Nobilis IB 4-91 vakcinákkal

18 MAREK BETEGSÉG 18 18

19 ND (NCD): BAROMFIPESTIS képek: N Lameda 19 19

20 IBD: FERTŐZŐ BURZITISZ (GUMBORO) E. Leffer L. Newman 20 20

21 EREDMÉNY 21 21

22 REGISZTRÁLÁST MEGELŐZŐ VIZSGÁLATOK EU. PHARMACOPOEIA ( Ph.Eur.) 22 22

23 rhvt ND-IBD BIZTONSÁGOSSÁGA A vakcina túladagolva is biztonságos (bőr alá ( PFU) tojásba oltva ( PFU) ) dózisokban Nincs hatással a keltethetőségre Nem veszélyes a csirkére (120 nap ellenőrzési időszak) Nem nő a virulencia 5. passzázs után sem veszélyes a csirkére (120 nap ellenőrzési időszak) 5. passzázs után is genetikailag stabil (genotípusosan és fenotípusosan) A rekombináns HVT állatról állatra terjedése nagyon hasonló az eredeti HVT törzshöz 23 23

24 REGISZTRÁLÁST MEGELŐZŐ HATÉKONYSÁGI VIZSGÁLATOK 24 24

25 Hatékonysági vizsgálatok ráfertőzéssel Baromfipestis elleni védelem NDV Genotípus GII GIV GVII Klinikai védelem és a vírus ürítésének csökkenése Gumboró elleni védelem STC (Aphis USA), vvibd CS89(EU), Variant E (USA) Klinikai védelem és a Bursa lymphoid sejtjeinek kiürülése elleni védelem (immunszuppresszió) Marek-féle betegség elleni védelem vvmdv RB1B, vmdv Ga5 Klinikai védelem

26 VÉDELEM BAROMFIPESTIS ELLEN 26 26

27 BAROMFIPESTIS ELLENI VÉDELEM TESZTELÉSE A baromfipestisre jellemző tünetek klinikai ellenőrzése (megbetegedések és elhullás) Vakcinázás bőr alá (vagy tojásba oltva) Ráfertőzés izomba oltott, 10 5 EID 50 /dózisú NDV challenge törzs Herts 33/56 1. nap x. nap x. nap +14 nap > ellenőrzés 27 27

28 Védettség, % BAROMFIPESTIS ELLENI VÉDELEM DO sc. * A védelmet a ráfertőzést követő 14 napon át vizsgálták és a madarakat pozitívnak minősítették, ha a Baromfipestisre jellemző klinikai tüneteket mutattak úgymint, mozgáskoordináció hiánya, bénulás és/vagy elhullás Életkor ráfertőzéskor (hetek ) source: A new double construct HVT-vaccine (rhvt-f-vp2) containing inserts for ND and IBD, Rik Koopmam, presentation 2017 AAAP congres Indianapolis

29 Védettség, % Védettség, % Védettség, % TOJÁSBA OLTÁS - VÉDELEM BAROMFIPESTIS ELLEN Amerikai tanulmány Texas GB (genotype II) Baromfipestis ráfertőzés 4 élethetesen (Texas GB) Teszt dozis 10 4 ELD 50 /madár EU tanulmány Teszt dózis 10 5 EID 50 Herts 33/56 (genotype IV) Baromfipestis ráfertőzés 4 élethetesen Baromfipestis ráfertőzés 8 élethetesen 29 29

30 BAROMFIPESTIS ELLENI VÉDELEM - EGYIPTOMI VELOGÉN NDV, GENOTÍPUS VII KLINIKAI VÉDELEM ÉS VÍRUSÜRÍTÉS CSÖKKENÉSE Csoport szám Izol. SPF madarak db Életkor: 1 nap Ráfertőzés : 12 naposan 15. nap 20. nap 22. nap 28. nap Vakcinázás NDV genotípus VII Ráfertőzés Kloáka tampon - madarak száma Ráfertőzést követő 0. nap 3. nap 7. nap 10. nap 14. nap 1 A06 5 Nincs Nincs A07 20 rhvt ND-IBD (sc) AG-1502 (im) all 3 A A09 20 rhvt ND-IBD (sc) + ND C2 (oc) rhvt ND-IBD (sc) +ND Clone30 (oc) AG-1502 (im) all AG-1502 (im) all 5 A10 20 rhvt-nd + IC 2512 IBD (sc) AG-1502 (im) all 6 A12 10 Nincs AG-1502 (im) all all all all all Ráfertőzés dózisa: 10 5 ELD 50 Hasonló vizsgálati terv a 20 és 28 napos ráfertőzésre Adatok: MSD Animal Health

31 Védettség, % BAROMFIPESTIS ELLENI VÉDELEM NDV, GENOTÍPUS VII A ráfertőzést követő 15. napon megfigyelt Baromfispestisre utaló klinikai tünetek Ráfertőzés 12 naposan 20 naposan 28 naposan Negatív kontrol rhvt-nd-ibd day 1 Ráfertőzött kontrol csoport source: A new double construct HVT-vaccine (rhvt-f-vp2) containing inserts for ND and IBD, Rik Koopmam, presentation 2017 WVPA congres Edinburgh

32 Védettség, % (túlélés) Percent Protection(Survival) Klinikai védelem NDV virus, Genotípus VII rhvt ND-IBD, C2 vagy Cl 30 vakcinákkal napos 20 napos 28 napos 12 day-old 20 day-old 28 day-old Innovax ND IBD Innovax ND IBD + Nobilis ND C2 Innovax ND IBD + Nobilis ND Clone30 rhvt-nd + IC IBDV Nem fertőzött Challenged controls kontrol csoport 32 Data on file. MSD Animal Health. 32

33 GUMBORO BETEGSÉG ELLENI VÉDELEM 33

34 rhvt ND-IBD HATÉKONYSÁGA ERŐSEN VIRULENS IBD (CS89) ELLEN Klinikai védelem & Lymphoid depléció (kórszövettan) 10 dpc megfigyelt időszak post mortem 10 dpc Csoport Isolator SPFcsibék száma Vakcinázás 1.napon SC Very virulent IBD CS CID 50 /dose,ocular 1 A30 10 Neg control none none 2 A31 10 Pos control CS89 CS89 3 A32 20 rhvt-nd-ibd CS89 CS89 4 A33 20 rhvt-nd + IC 2512 IBD CS89 CS89 5 A35 20 rhvt-ibd CS89 CS89 D21 D28 Data on file. MSD Animal Health.

35 % Védettség rhvt ND-IBD - vvibdv elleni klinikai védelem: OOI és DOI - SPF állomány, Ráfertőző törzs: CS weeks 3 weeks 4 weeks 6 weeks 8 weeks Challenge Age Innovax ND-IBD HVT only Data on file. MSD Animal Health. Report 2015; GNI/0067/15.

36 ÁTLAGOS KLINIKAI VÉDELEM IBD CS89 RÁFERTŐZÉS UTÁN: D21 & D D21 D28 neg control pos control Innovax ND-IBD rhvt-nd + IC 2512 IBD rhvt-ibd IBD pontozásos módszer (napi pontozás): 0:Nincs IBDV-re utaló tünet 1:IBDV-re utaló elváltozások 2:IBDV ráfertőzés miatti elhullás 2#:Euthanasia erős IBDV fertőzés miatt

37 BURZAKÁROSÍTÓ HATÁS - LYMPHOID DEPLÉCIÓ IBD CS89 RÁFERTŐZÉS UTÁN D21 &D28 4,5 Lymphoid depletion L D S c o r e 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 D21 D28 neg control pos control Innovax ND-IBD rhvt-nd + IC 2512 IBD rhvt-ibd LD score: 0= normal bursa; 1= 1-25% LD; 2= 26-50% LD; 3= 51-75% LD; 4=76-100% LD; 5= 100% LD *LD Lymphoid Depletion ** LD score <3 1) LD score at 3 days post challenge

38 GUMBORO ELLENI VÉDETTSÉG IN OVO OLTÁS ESETÉN US vizsgálat: STC (klasszikus törzs) IBDV ráfertőzés/us Pharmacopeia szerint EU vizsgálat CS89 vvibdv ráfertőzés: 3 és 8 héttel vakcinázás után (EU. Ph.) CS CID 50 /dose ocular 38

39 MAREK-FÉLE BETEGSÉG ELLENI KLINIKAI VÉDELEM 39

40 Védettség % rhvt ND-IBD DO sc. -vvrb1b ráfertőzés 9 napos korban A védettségnek min.80%-nak kell lennie , Innovax ND-IBD 0 Unvaccinated controls Data on file. MSD Animal Health. Report 2015; GNI/0039/15

41 rhvt ND-IBD DO sc, in ovo - ráfertőzés vga5 TÖRZS (US) Védettség % Ráfertőzés: 5 napos korban In ovo In ovo In ovo SC SC placebo placebo 2019 március 21. CVMP pozitiv vélemény

42 MAREK-FÉLE BETEGSÉG ELLENI VÉDELEM RISPENS + rhvt ND-IBD 42

43 Marek védelem - Rispens + rhvt ND-IBD SPF állomány vvmdv RB1B-vel ráfertőzve és megfigyelve 77 napig csoport Vakcina 1 Vakcina 2 Alkalmazás módja vakcina adag vakcina adag 1 rhvt-nd-ibd PFU/ dose 2 rhvt-nd-ibd nem vac/ fertőzött control 4 Nem vac/nem fertőzött PFU/ dose NA NA Rispens Rispens nem vac/ fertőzött control Non vac/nem fertőzött PFU/ dose PFU/ dose Subcutan D1 Subcutan D1 Ráfertőzés IM kor védelem RB1B 5 nap 93% (28/30) RB1B 5nap 100% (30/30) NA - RB1B 5 nap 0 (0/30) NA egészséges (6/6) Monitoring : Klinikai megfigyelés 77 napig + Post mortem vizsgálat minden elhullott egyedből

44 ND védelem Rispens + rhvt ND-IBD ráfertőzés: ND Herts Group Vakcina 1 Vakcina 2 Name Dose Name Dose 1 rhvt-nd-ibd PFU/ dose 2 nem vac/ fertőzött control NA Rispens PFU/ dose Alkalmazás módja Subcutaneous D1 nem vac/ fertőzött control NA - Ráfertőzés IM ND Herts Log10 ELD 50 kor 28nap Védettség (%) 90 (19/21) 0 (0/12) 3 nem vac/nem fertőzött control NA nem vac/nem fertőzött control NA - non Monitoring: Klinikai megfigyelés 14 napig (naponta 2x, a 2. és 3. nappal a ráfertőzés után: baromfipestisre utaló tünetek, elhullás, kórboncolás

45 Gumboro védettség: Rispens + rhvt ND-IBD IBD ráfertőzés: vvibd CS89 csoport Vakcina 1 Vakcina 2 Neve Adag Neve Adag 1 rhvt-nd-ibd PFU/ dose 2 nem vac/ fertőzött control NA Rispens PFU/ dose Alkalmazás módja Subcutaneous D1 nem vac/ fertőzött control NA - Ráfertőzés szemcsepp IBD CS89 30 CID50 kor 21nap Védettség (%) 100 (22/22) 0 (0/11) 3 nem vac/nem fertőzött control NA nem vac/nem fertőzött control NA - nem Monitoring: klinikai monitoring a ráfertőzés után 10 napig: IBDV-re utaló tünetek vagy elhullás, kórboncolás 10 nappal a ráfertőzés után: az életben maradt egyedek kiirtása, Bursa makroszkópos vizsgálata és kórszövettani vizsgálat.

46 A Rismavac nem befolyasolja hátrányosan az Innovax ND IBD hatékonyságát A kombináció életre szóló védettséget biztosít Marek-féle betegség, Baromfipestis és Gumboro ellen a hosszú élettartamú madaraknak is (tenyész és tojó) 3 in 1

47 rhvt ND- IBD ÜZEMI TAPASZTALATOK

48 PERU ND velogenic lentogenic IBDV Variant, Classical Very virulent Lima Arequipa rhvt-nd-ibd Control InnovaxND-IBD +NDC2, DO InnovaxND+NDC2 IC 2512, DO 48

49 A BURSÁK KÓRBONCTANI ÉRTÉKELÉSE A 38. NAPON rhvt-nd-ibd kakas jérce rhvt-nd IC Normális Enyhe atrophia Súlyosfokú atrophia rhvt-nd-ibd rhvt-nd IC 10/14 3/14 1/14 0/14 2/14 12/14

50 TERMELÉSI EREDMÉNYEK ÖSSZEGZÉSE 5 TELEPRŐL: (Innovax ND + C2) IC Innovax-ND-IBD + C2 #1 #2 #3 #4 #5 Average #1 #2 #3 #4 #5 Average Mean end weights per bird (kg)* Age ADWG (g/day)* Mortality (%) Feed conversion** EPI Difference in 100,000 birds BW +38g $3,800 Meat 1 $/kg FCR 4pt (40g) $2,790 $ /ton Cost Vaccination $20 - $15 $500 Difference $6,090 / cycle ~ $36,500 / year ROI 1:12 50

51 ÜZEMI EREDMÉNYEK - Görögország és Cyprus rhvt- ND IBD rhvt-ibd IC 2512 IBD FCR TOTAL MORTALITY(%) FINAL WEIGHT (KG) AVERAGE DAYS TREATMENT COST PER CHICKEN ( ) A 1,82 5,45 2,86 43,2 0,0275 FCR TOTAL MORTALITY(%) FINAL WEIGHT (KG) AVERAGE DAYS TREATMENT COST PER CHICKEN ( ) B 1,91 5,95 2,645 42,53 0,036 FCR TOTAL MORTALITY(%) FINAL WEIGHT (KG) AVERAGE DAYS TREATMENT COST PER CHICKEN ( ) Γ 1,85 5,16 2,30 42,46 0,037

52 ÜZEMI EREDMÉNYEK - Görögország és Cyprus 1,95 1,90 1,85 1,80 1,75 FCR 1,91 1,85 1,82 INNOVAX ND-IBD IC 2512 IBD HVT-IBD INNOVAX TRANSMUNE VAXXITEK Average Values Test 2 & Test 3 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 ADG(g) 66,20 62,20 54,17 INNOVAX TRANSMUNE VAXXITEK INNOVAX IC 2512 IBD HVT-IBD Average Values Test 2 & Test 3

53 ÜZEMI EREDMÉNYEK - Görögország és Cyprus FINAL WEIGHT (KG) 4,00 3,00 2,00 1,00 2,86 2,30 2,65 0,00 INNOVAX IC 2512 IBD HVT-IBD INNOVAX TRANSMUNE VAXXITEK Average Values Test 2 & Test 3 TOTAL MORTALITY(%) 6,50 6,00 5,50 5,00 4,50 5,95 5,45 5,16 INNOVAX TRANSMUNE VAXXITEK INNOVAX IC 2512 IBD Average Values Test 2 & Test 3 HVT-IBD

54 ÜZEMI EREDMÉNYEK - Görögország és Cyprus ROI rhvt-nd-ibd vs rhvt-ibd: 8.36:1 ROI rhvt-nd-ibd vs IC 2512 IBD: 2.97:1

55 rhvt-nd-ibd SZEROLÓGIAI MONITORING NL

56 Monitoring 3 tojó előnevelő cég, 12 nevelő telep 2018 február-március Vakcinázás: - D0: rhvt-nd-ibd, sc - D42: ND élő, spray - W12: APV-IB-ND-EDS inaktivált vakcina Mintázás: - 4, 6, 9, 12 és 15 hetes korban - 30 vérminta/ól/mintavételenként Vizsgálatok (GD, Deventer): - ND HAG - IBD ELISA Idexx (standard) - IBD VP2 ELISA (vektor vakcina specifikus )

57 átlagtiter ND HAG titer 8,0 Baromfipestis: átlagos HAG titerek 12 telepről 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 average 2,0 1,0 0, kor (hét)

58 átlagtiter átlagtiter GUMBORO: ELISA titer IBD ELISA VP2: átlagtiter 12 telep IBD ELISA ( Idexx): átlagtiter 12 telep 12,0 12,0 10,0 10,0 8,0 8,0 6,0 6,0 4,0 4,0 2,0 2,0 0, , Kor/hét Kor/hét

59 Titer csoport Titer csoport Összegzés: szerologiai monitoring Átlagos ND titerek- 12 telep Átlagos VP2 titerek- 12telep Week 4 Week 6 Week 9 Week 12 Week Week 4 Week 6 Week 9 Week 12 Week 15 0 NCD (HAR) 0 HVT-VP2 (ELISA)

60 Következtetés: ND HI teszt: jól mérhető áthangolódás Gumboro ellenanyagok: a VP2 ellenanyagok gyors emelkedése a maternális ellenanyagok ellenére -> nincs rés a védettségen

61 2019 Uj diagnosztika - NGS Szerológiai vizsgálatok rhvt ND-IBD utód állományokban További üzemi kipróbálások broiler, tenyész és tojó állományokban is

62 6 2