17. Baromfi Világkongresszus

Átírás

1 A MOÁE Baromfi-egészségügyi Társaságának és a MÁK Budapesti szervezetének szakülése 17. Baromfi Világkongresszus Dr Pénzes Zoltán, Dr Jánosi Katalin Ceva-Phylaxia, Virológiai Fejlesztési Igazgatóság Budapest, Nov. 9.

2 Tartalom IB vakcinázások következtében kialakuló ellenanyag titer és védelem közötti kapcsolat R. Ariyoshi, et al. Az izraeli 233A variáns vakcina hatékonysága egy kínai nephropathogén IB törzzsel szemben Ashash U. et al. Rövid áttekintés a Fertőző Bronchitis vírus tojótyúkokra kifejtett hatásáról R C Jones et al. Különböző IBV QX-variánsok kimutatása egyazon baromfitelepen Monne et al Az attenuált V1-1/96 IBV által, a virulens 793B törzs ellen nyújtott védettség kommersz csirkében Pénzes et al. A kvantitatív PCR alkalmazhatósága a fertőző bronchitis vakcinák hatékonysági vizsgálatában Pénzes et al.

3 IB vakcinázások következtében kialakuló ellenanyag titer és védelem közötti kapcsolat R. Ariyoshi, H. Ota, K. Yamazaki, T. Kawai, T. Honda, H. Shimada THE CHEMO-CERO-THERAPEUTIC RESERCH INSTITUTE Animal Vaccine Science Information Division Okubo Kumamoto , Japan

4 Célok IB elleni vakcinázás: két különböző szerotípusú élő vakcina, majd olaj-emulziós vakcina alkalmazása, átfogó immunválaszt indukál Mely vakcina kombináció a leghatékonyabb? 50, 108, 150 napos állatokban (szerológia, ráfertőzés) 1 Massachusetts és 3 különböző japán szerotípusú ÉLŐ vakcina 2 japán szerotípust tartalmazó INAKTIVÁLT vakcina

5 Kísérleti modell Élő vakcinák napos, 3 hetes (nerima (Massachusetts), TM86 (Jap. dom. st1), AK01 (Jap. dom. st3), C78 (Jap. dom. st2)) Inaktivált vakcina 10 hetes (nerima, TM869) Ráfertőző vírusok (4 szerotípus) 16x16 SPF csirke (vakcinázott) + 1x20 SPF csirke (kontroll) NAPOS 3 HETES 10 HETES vérvétel, ráfertőzés, qpcr ráfert. után: 50., 108., 150. napon

6 Eredmények, megbeszélés Az elsőként nerima- (Mass) vagy TM-törzs átfogó védelem, széles spektrum 50 és 108 napos korban Az elsőként C78 vagy AK01-törzs szük spektrumú védelem Plusz inaktivált vakcina növekvő ellenanyag szint napos korig; bizonyos esetekben már csökkenő ea. szint 108 napos kortól Ellenanyag titer és ráfertőző vírusszaporodás elleni védelem a légcsőben (qpcr) szoros korreláció 50 és 108 napos korban; nem volt korreláció 150 napos korban

7 Az izraeli 233A variáns vakcina hatékonysága egy kínai nephropathogén IB törzzsel szemben Ashash U. 1, Zhao Y. 2,Even-Chen T. 1, Finger A. 1, Banet-Noach C. 1 1 Abic biological laboratories LTD, Israel, A division of Phibro Animal Health udi.ashash@pahc.com 2 China Agricultural University, Beijing, China Japan

8 Célok, kísérleti modell Kínában 793/B csoportba tartozó vakcinák a nephropathogén IB ellen Az izraeli 233A vakcina hatékony-e a kínai YN NP IB (QX) törzzsel szemben? 4 20 SPF csirke GR1 napos (H120) és 2 hetes korban (233A) szemcsepp GR2 napos és 2 hetes korban (233A) szemcsepp GR3 ráfertőzött kontroll GR4 negatív kontroll RÁFERTŐZÉS orrcsepp YN05-1 törzzsel 5 hetes korban Csillóaktivitás (trachea) és kórbonctani vizsgálat 6 hetes korban

9 Eredmények Csoport Kísérleti leírás Elhullás Kórbonctani elváltozás Vese Nyálka Trachea Tüdő Állatlétszám Csillóaktivitás (%) H A + R A + 223A + R N. V. + R N. V. + N. R N. V. nem vakcinázott; R. - ráfertőzött N. V. nem vakcinázott; N. R. nem ráfertőzött

10 Megbeszélés Vakcinázás (szemcsepp) Heterológ törzs elleni védelem Ráfertőzés YN05-1 (QX) Részleges védelem

11 Rövid áttekintés a Fertőző Bronchitis vírus tojótyúkokra kifejtett hatásáról R. C. Jones, F. T. W. Jordan and K. Ganapathy Department of Infection Biology, School of Veterinary Science, University of Liverpool, UK.

12 IBV tojókban Kísérleti modell SPF, leghorn, tojószezon, intranasalisan M41 tojócső szövettan általános állapot tojástermelés szöveti vírusterjedés Légzőszervi tünetek (~ 7 napig) Feltűnő eltérések a tojástermelésben és tojásminőségben A vírus szétterjedt a szövetekben (korai fertőzés) tojócsőben szignifikánsan magas titer a 6. napon A hámszövet csillóvesztése ill. lymphocytás beszűrődés

13 IBV és az ál-tojó szindróma Első leírás: 1956, Broadfoot, USA a tojócső naposkori fertőződése esetén Egy tojóállomány egyedeinek többsége tojóállat küllem tojócső-fejlődési zavar tojásrakás elmaradása Európa QX típusú törzsek Tojócső-fejlődési rendellenességek egyes IBV típusok napos kori fertőzés maternális ellenanyagok hiánya az adott szerotípus ellen Nem az összes IBV típus esetében alakul ki A légzőszervi tüneteket követően kifejezett vírusszaporodás a tojócsőben

14 IBV és az ál-tojó szindróma napos kori fertőződés tojócső hámkárosodás szövet reparálódás tojócső átjárhatósága csökken/megszűnik 4-5 hetes korra cisztaképződés tojások a hasüregbe

15 Különböző IBV QX-variánsok kimutatása egyazon baromfitelepen Isabella Monne 1, Viviana Valastro 1, Alessandra Drago 1, Tibor Cserep 2, Stuart Young 3, Krizia Cecchettin 1, Giovanni Cattoli 1 1 Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Research & Development Department, OIE/FAO and National Reference Laboratory for Newcastle Disease and Avian Influenza, OIE Collaborating Centre for Diseases at the Human-Animal Interface. Legnaro, Padova, Italy 2 Intervet Schering Plough Animal Health United Kingdom 3 Stuart Young Veterinary Services, Colliton Barton UnitedKingdom

16 QX IBV előfordulása Kína 1996 proventriculitis Európa Hollandia Németország Belgium Franciaország Olaszország Nagy Britannia

17 IBV QX szubpopulációk (UK) Légcső és veseminták (érintett tojóállományokból) poolozva valós idejű RT-PCR vizsgálat pozitív minták S1 gén szekvencia-analízis Két fő szubpopuláció együttes jelenléte 1 klón 2009-ben izolált QX törzs (IBV/Chicken/UK/3355/09 strain) 8 klón QX-szerű vírustörzsek (QX-szerű törzsekhez kevésbé hasonló, <94% homologia) Nagy Britanniában a QX-szerű és a korábbi QX törzsek együttesen vannak jelen új QX-szerű vírustörzs? korábbi QX-szerű törzsek evolúciója kapcsán jött létre? TOVÁBBI VIZSGÁLATOK SZÜKSÉGESEK.

18 Attenuált V1-1/96 IBV által nyújtott védettség virulens 793B (homológ) törzs ellen broiler csirkében Z. Pénzes 1, J. Chacón 1, P. Soós 1, R. Glávits 2, A. Zolnai 1, N. Nógrády 1, V. Palya 1 1 Ceva-Phylaxia, Virológiai Fejlesztési Igazgatóság 2 MgSzH-ÁDI Budapest, november 9.

19 Cél Az IBV V1-1/96 attenuált élő vakcinajelölt törzs által biztosított védelem vizsgálata IBV 793/B virulens törzzsel szemben broiler csirkében

20 Kísérleti modell Anyagok és módszerek I. D0 D21 D26 (DPI* 5) 27 (DPI 6) 1. csoport 2.8 log10 EID50 IBV V1-1/96 2. csoport 3.7 log10 EID50 IBV 793/B-típusú kereskedelmi vakcina Állatok elhelyezése (30 db csirke/csoport, 1 napos broiler) 3. csoport Nem vakcinázott kontroll Vakcinázás (spray) (30 db csirke/csoport) Testsúly mérés, homológ ráfertőzés (30 db csirke/csoport) Testsúly mérés, klinikai vizsgálat, csillóaktivitás vizsgálat (10 db csirke/csoport) Testsúly mérés, klinikai vizsgálat, csillóaktivitás vizsgálat, ráfertőző vírus reizolálás (20 db csirke/csoport) Ráfertőző vírus mennyiségi meghatározása qpcr vizsgálattal (10 db csirke/csoport) Légcső kórszövettani vizsgálata (5 db csirke/csoport) *DPI days post infection fertőzés utáni napok száma

21 Anyagok és módszerek II. Mintavétel a légcsőből csillóaktivitás vizsgálata vírusizolálás, qpcr vizsgálat kórszövettani vizsgálat bevezetni megforgatni

22 Ártalmatlanság Eredmények A vakcinázást követő 3 hét során nem tapasztaltunk vakcinázási reakciót Napi súlygyarapodásra gyakorolt hatás Napi súlygyarapodás (gram) 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 48,5 50,2 36,4 54,9 48,0 23,6 51,7 49,1 30,0 0, /6 átlaga Fertőzés utáni napok száma G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll)

23 Eredmények Csillóaktivitás vizsgálat I. Ciliostasis pontszám (0-4) 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 11,9 31,8 31,8 31,8 14,7 14,9 14,7 13,4 14, /6 átlag Fertőzés utáni napok száma G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll) 40 pont 100% ciliostasis; 0 pont 0% ciliostatis (ép csillómozgás) A csillóaktivitás normálnak tekintendő egy adott légcsőszakaszon abban az esetben, amikor a légcsőgyűrűk 50 százalékában kifejezett csillómozgás tapasztalható (0, 1 vagy 2 pontszám, mely megfelel 100, 75 vagy 50%-os csillóaktivitásnak (Ph. Eur.).

24 Eredmények Csillóaktivitás vizsgálat II. Ph. Eur. határ SPF csirkék esetében Ciliostasis pontszám (0-4) 40,0 30,0 31,8 31,8 31,8 20,0 14,7 11,9 14,9 14,7 13,4 14,7 10,0 0, /6 átlag Fertőzés utáni napok száma G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll) 40 pont teljes ciliostasis; 0 pont ép csillómozgás Normál csillóaktivitással rendelkező csirkék %- os aránya /6 átlag Fertőzés utáni napok száma A csillóaktivitás normálnak tekintendő egy adott légcsőszakaszon abban az esetben, amikor a légcsőgyűrűk 50 százalékában kifejezett csillómozgás tapasztalható (0, 1 vagy 2 pontszám, mely megfelel 100, 75 vagy 50%-os csillóaktivitásnak (Ph. Eur.). G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll) A csirkét nem érintett abban az esetben, ha 10 légcsőgyűrűből 9 esetében normál csillóaktivitás tapasztalható. (Ph. Eur.) A Ph. Eur. által, SPF csirkékre (!!!) megadott határ: 80%-a a csirkéknek normál csillóaktivitást kell mutatnia.

25 Eredmények Ráfertőző vírus visszaizolálás (fertőzés utáni 6. napon) Pozitív csirkék (%) Ph. Eur. határ SPF csirkék esetében 20 0 G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll) A légcsőtampon mintából készített inoculumot oltották embrionált SPF tojásba. Az IBV jelenléte megerősített antigén ELISA vizsgálattal.

26 Eredmények Ráfertőző vírus mennyisége a légcsőben (qpcr) (fertőzés utáni 6. napon) 3,00 REU vírustiter (lg EID50/ml) 2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,71 0,93 1,73 0,00 G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll) Mindegyik vakcinázott csoport szignifikánsan alacsonyabb REU* IBV titterrel rendelkezett, mint a kontroll csoport. *REU relative equivalent unit

27 Eredmények VI. Kórszövettani vizsgálatok (fertőzés utáni 6. napon) A légcső felső része 3,0 2,5 Kórszövettani pontszámok (0-3) 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 Elváltozások hámszövet ciliumvesztése hámszövet metaplasia degeneráció limfocitás beszűrődés 1,2 1,1 G1 (1/96) G2 ("793/B") G3 (nem vakcinázott kontroll) Pontszámok 0 = nincs elváltozás 1 = enyhe elváltozások 2 = közepes mértékű elváltozások 3 = súlyos mértékű elváltozások

28 Eredmények VII. A hatékonysági mutatók összefoglalása broiler csirkében Csoport Vizsgálati anyag Csillóaktivitás vizsgálata Vírus izolálás* Ráfertőző vírus mennyisége (qpcr) Kórszövettani vizsgálatok IBV V1-1/96 (2.8 log10 EID50) IB 793/B (3.7 log10 EID50) Nem vakcinázott kontroll * * * - nem érte el a Ph. Eur. SPF csirkére vonatkoztatott határértékét

29 A kvantitatív PCR alkalmazhatósága a fertőző bronchitis vakcinák hatékonysági vizsgálatában Pénzes Zoltán PhD, Soós Pál PhD, Nógrády Noémi PhD, Varga Mária, Jorge Chacón PhD, Zolnai Anna PhD, Nagy Zoltán PhD Virológiai Fejlesztési Igazgatóság CEVA-Phylaxia, Budapest Derzsy Napok, Sárvár, 2011 Június 2-3.

30 Kombinált vakcinázás eredmények Teljes védelem Teljes védelem DV

31 Összefoglalás, következtetések Az általunk validált IBV kvantitatív RT-PCR kellően specifikusnak és érzékenynek bizonyult. A hagyományosan használt módszerekkel összevethető eredménnyel szolgált három különböző hatékonysági kísérleti elrendezésben. Jól alkalmazható kiegészítő módszer különböző IB vakcinázási programok hatékonyágának laboratóriumi vizsgálatánál. 34

32 Köszönöm a figyelmet.