Retinoid X Receptor, egy A-vitamin szenzor a tüdőmetasztázis kontrolljában. Kiss Máté!

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Retinoid X Receptor, egy A-vitamin szenzor a tüdőmetasztázis kontrolljában. Kiss Máté!"

Árpád Tóth
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Retinoid X Receptor, egy A-vitamin szenzor a tüdőmetasztázis kontrolljában Kiss Máté! Magreceptor Kutató Laboratórium Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet Debreceni Egyetem, Általános Orvostudományi Kar

2 Tumor progresszió és metasztázis bűntárs az immunrendszer Invázió makrofág neutrofil granulocita éretlen myeloid sejt Intravazáció Metasztázisképzés Extravazáció Módosítva Kitamura et al. Nat. Rev. Immunol alapján

3 A primer tumor premetasztatikus tüdőt alakít ki Primer tumor Metasztatikus tumorsejtek Csontvelői sejtek Szekretált faktorok S100a8/9 SAA3 TNFα MMP Egészséges tüdő Premetasztatikus tüdő Metasztatikus tüdő

4 Célkitűzés Milyen útvonalak szabályozhatják a tüdő immunsejtjeinek átprogramozódását a premetasztatikus tüdőben?? S100a8/9 SAA3 TNFα MMP Egészséges tüdő Premetasztatikus tüdő

5 Premetasztatikus tüdő globális génexpressziós analízise 67NR benignus és 4T1 malignus egér emlőtumor Tüdő Daganatos állat Egészséges Benignus Malignus 581 gén Microarray kísérlet: Kowanetz et al. PNAS 2006 (GSE62817)

6 A premetasztatikus tüdőben felülreprezentáltak a Retinoid X Receptor (RXR)-szabályozott útvonalak Ingenuity útvonalak -log(p-érték) Granulocita adhézió és diapedezis 6.63 Leukocita extravazáció 4.26 Makrofágok, fibroblastok, és endothel sejtek szerepe rheumatoid arthritisben 4.19 IL-10 jelátvitel 4.00 TREM1 jelátvitel 3.78 LXR/RXR aktiváció 3.66 IL-17A szerepe a psoriasisban 3.65 Natural killer sejt aktiváció 3.08 Toll-like receptor jelátvitel 3.07 Kommunikáció a veleszületett és szerzett immunitás sejtjei között 2.91 LPS/IL-1-mediált RXR funkció gátlás 1.42 VDR/RXR aktiváció 0.94 PPARα/RXR aktiváció 0.90

7 A Retinoid X Receptor egy összetett hatású A-vitamin szenzor A-vitamin 9-cisz-retinsav Zsírsavak Morfogenezis Metabolizmus Immunitás

8 Premetasztatikus géncsoport qpcr validálása Lewis tüdő carcinoma (LLC) egér xenograft modell vs. egészséges tüdő premetasztatikus tüdő (LLC tumor) Változás (premetasztatikus/egészséges) p-érték n=3/3 S100a Mmp S100a Il1r MMP Ngp Csf3r Il1b Sell Il1f Camp Saa Itgam Vcan Il18rap Lcn Ltf Il1rap Il1rn Cd

9 A myeloid RXR hiányában egyes premetasztatikus gének kifejeződése fokozott a tüdőben vs. vs. KO egészséges tüdő premetasztatikus tüdő (LLC tumor) kontroll tüdő myeloid RXR KO tüdő Változás (premetasztatikus/egészséges) p-érték n=3/3 S100a Mmp S100a Il1r MMP Ngp Csf3r Il1b Sell Il1f Camp Saa Itgam Vcan Il18rap Lcn Ltf Il1rap Il1rn Cd Változás (myeloid RXR KO/kontroll) p-érték n=6/6 S100a Mmp S100a Il1r MMP Ngp Csf3r Il1b Sell Il1f Camp Saa Itgam Vcan Il18rap Lcn Ltf Il1rap Il1rn Cd

10 A myeloid RXR hiányában egyes premetasztatikus gének kifejeződése fokozott a tüdőben vs. KO kontroll tüdő myeloid RXR KO tüdő Li et al. Oncogene 2013 Hiratsuka et al. Nature Cell Biology 2008 Leng et al. Cancer Research 2009 Változás (myeloid RXR KO/kontroll) p-érték n=6/6 S100a Mmp S100a Il1r MMP Ngp Csf3r Il1b Sell Il1f Camp Saa Itgam Vcan Il18rap Lcn Ltf Il1rap Il1rn Cd

11 B16-F10 melanoma metasztázis modell 0. nap 21. nap Intravénás injekció: 10 5 B16-F10 melanoma sejt / egér Tüdő eltávolítása

12 A myeloid RXR hiányában több B16-F10 melanoma metasztázis képződik a tüdőben Makroszkópos metasztázis szám Mikroszkópos metasztázis szám n=10 n=13 n=8 n=8 kontroll myeloid RXR KO kontroll myeloid RXR KO

13 A metasztázisok méretmegoszlása a myeloid RXR KO állatokban különbözik n=8/8

14 100 µm alatti metasztázisok myeloid RXR KO állat tüdejében 100 µm

15 Lewis tüdő carcinoma (LLC) spontán metasztázis modell 0. nap 21. nap Subcutan injekció: 2x10 6 LLC sejt / egér Tüdő eltávolítása

16 A myeloid RXR hiányában nő a spontán LLC tüdőmetasztázisok száma Primer tumor növekedés Tüdőmetasztázis gyakorisága Makroszkópos metasztázis szám

17 A myeloid RXR hiányában nem változik a tüdő myeloid sejt infiltrációja (CD11b + Ly6G + ) (CD11b + Ly6G - Ly6C + MHCII - ) (CD11b + Ly6G - Ly6C - MHCII + F4/80 + ) n=3/3

18 Összefoglalás A Retinoid X Receptor csökkenti egy metasztázist elősegítő géncsoport kifejeződését a myeloid sejtekben, és gátolja a tüdőmetasztázisok kialakulását. RXR Camp Ngp Lcn2 SAA3 MMP8

19 Összefoglalás A Retinoid X Receptor csökkenti egy metasztázist elősegítő géncsoport kifejeződését a myeloid sejtekben, és gátolja a tüdőmetasztázisok kialakulását. A-vitamin? Bexarotene? RXR Camp Ngp Lcn2 SAA3 MMP8

20 Köszönetnyilvánítás Magreceptor Kutató Laboratórium ÁOK BMBI, Debrecen Prof. Nagy László Czimmerer Zsolt Pap Attila Dr. Dániel Bence Szalka Beáta Andreas Patsalos Dr. Varga Tamás és minden további munkatárs. Sanford-Burnham Medical Institute at Lake Nona Orlando, FL, USA John Shelley (Histology Core Facility) Matthew Peloquin Dr. Masanobu Komatsu Vrije Universiteit Brussel, Lab of Myeloid Cell Immunology Brüsszel, Belgium Prof. Jo Van Ginderachter Jiri Keirsse Qods Lahmar Dr. Damya Laoui

21 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET! A bemutatott eredményekhez való saját hozzájárulás: microarray adatok elemzése GeneSpring 12.6 programmal útvonal analízis Ingenuity IPA alkalmazással RNS tisztítás tüdőkből primertervezés RT-qPCR futtatás, elemzés primer tumor és metasztázis egérkísérletek (LLC, B16-F10) tüdők perfúziója, fixálása H&E festett metszetek számítógépes morfometriája Leica Aperio ImageScope programmal tüdők immunsejtösszetételének vizsgálata FACS Aria III áramlási citométerrel

23 Lys-M-Cre RXRα fl/fl RXRβ-/- egér Lysozyme promóter! Cre rekombináz! loxp hely! RXRα! loxp hely! Cre Lysozyme-expresszáló sejtek (monocita, makrofág, neutrofil granulocita) egyéb sejtek 23

24 Tüdők myeloid sejt összetételének áramlási citométeres analízise Neutrofil granulociták Monociták Makrofágok

Hasonló dokumentumok

INTRACELLULÁRIS PATOGÉNEK

INTRACELLULÁRIS PATOGÉNEK Bácsi Attila, PhD, DSc etele@med.unideb.hu Debreceni Egyetem, ÁOK Immunológiai Intézet INTRACELLULÁRIS BAKTÉRIUMOK ELLENI IMMUNVÁLASZ Példák intracelluláris baktériumokra Intracelluláris