Ciklodextrinek alkalmazása folyadékkromatográfiás módszerekben Dr. Szemán Julianna

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Ciklodextrinek alkalmazása folyadékkromatográfiás módszerekben Dr. Szemán Julianna"

Kornél Szekeres
5 évvel ezelőtt
Látták:

1 Ciklodextrinek alkalmazása folyadékkromatográfiás módszerekben Dr. Szemán Julianna Cyclolab Ciklodextrin Kutató-Fejlesztő Laboratórium Kft Budapest, Illatos u. 7.

2 A ciklodextrinek szerepe Befolyásolja a szelektivitást Királis felismerőképesség Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben Ciklodextrin tartalmú folyadékkromatográfiás állófázisok

3 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben A ciklodextrin kiválasztása ldhatóság alap CD-nél probléma Elválasztandó anyag molekulaméret, funkciós csoportok Single isomer vagy statisztikusan szubsztituált Ár Statisztikusan szubsztituált származékok A homológok/izomerek száma rendkívül nagy Jellemzők: szubsztitució fok (DS) és a szubsztituensek eloszlása A batch-to-batch reprodukálhatóság rendkívül fontos. CMBCD batch-to-batch reprodukálhatósága 25 Group A 3 Batch 1 25 Group A 3 Batch 2 25 Group A 3 Batch Group B Group C Group B Group C Group B 5 Group C

4 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben Az állófázis kiválasztása Fordított fázisú töltet, vizes eluens Függ az elválasztandó anyagtól k: 1-15 MeH-víz < 5% RP állófázisok: C18, C8, C4, CN Töltet típustól is függ (C tartalom, end-cap) P. Zarzycki et al. J. Chromatogr. A 955 (22) J. Szemán et al. J. Chromatogr. A 728 (1996) 423

5 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben Az eluens összetételének szerepe ph Puffer hatása ionerösség puffer kation-anion ionpárképzés és komplexképzés Szerves oldószer hatása MeH, EtH, IPA, ACN, (THF) a komplex stabilitási állandóra solute - állófázis kölcsönhatásra Norgestrel elválasztás, szelektivitás változás a szennyezőkre is! M. Gazdag et al. J. Chromatogr. 45 (1988) 145

6 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben CD koncentráció hatása 12 1 k, Rs k Rs CMBCD [mg/ml] Aminoetil-benzodioxán származék elválasztása karboximetil-bcd-vel

7 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben A szubsztitúciós fok hatása Rs k R s DS k DS Aminoetil-benzodioxán származék elválasztása karboximetil-bcd-vel J. Szemán et al. J. Chromatogr. A 728 (1996) 423

8 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben CD keverékek használata Különböző szelektivitású CD származékok együttes használata (CE-ben elterjedt) HPLC: barbiturát enantiomerek elválasztása αcd és permetilezett-bcd (TRIMEB) keverékkel TRIMEB szerepe az állófázis módosítása: csökken a retenció, kevesebb oldószer kell, ezért jobb az enantiomer elválasztás R. Nowakovski et al. J. Chromatogr. A, 782, 1-11, 1997

9 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben Szelektivitás növelése nem királis anyagoknál mg/ml DIMEB FLN: Flunisolide BRFLN: Bromoflunisolide FLNAL: Flunisolide alcohol mg/ml HPGCD DS: Desonide CLDS: Chlorodesonide

10 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben Gyógyszerkönyvi példa Pharmeuropa 2.1 (28. január) Iloprost, Polar related substances Mobile phase: mix 33 ml of acetonitrile R1 and 67 ml of a 12 g/l solution of β-cyclodextrin R adjusted to ph 2. with phosphoric acid R. pálos eluens, kiválás

11 Ciklodextrinek alkalmazása az eluensben Előnyök A szelektor minősége és koncentrációja könnyen változtatható lcsó oszlopok ill. olcsó adalékok használhatók Hátrányok A szelektor zavarhatja a detektálást (UV, MS) A szelektor igény viszonylag nagy (A szelektor minősége változó lehet)

12 Ciklodextrin tartalmú állófázisok Ciklodextrin tartalmú állófázisok a kereskedelemben az irodalomban leírt Ajánlott irodalom: Chiral Separations, Methods and Protocols; G. Gübitz és M.G. Schmid CYCLBND handbook (Armstrong cikkek)

13 Ciklodextrin tartalmú állófázisok Fordított fázisú elválasztás - ugyanazok az optimálási paraméterek érvényesek, mint az eluensben használt (oldószer, puffer, ph, ionerősség, hőmérséklet) Polar-organikus mód - Acetonitril/metanol/ecetsav/trietilamin mozgófázis Normál fázisú elválasztás - Hexan/Ipa, EtH

14 Saját fejlesztésű királis állófázisok (Natursep) Az állófázis előállítás szempontjai - a szelektor minősége - a szilikagélhez kötés módja - a szilikagél minősége - a szabad szilanolok mennyisége Mono-szubsztituált CD-származék immobilizálásának előnyei: A jól definiált, izomertiszta származékolószerrel - homogén felület - monomer borítottság (víz kizárásával történik) érhető el

15 Az állófázis előállítása A CD származék reakciója trietoxi-szilil-propil-izocianát Vizmentes közegben kötés a szilikagélhez Szabad szilanolok: trimetil szilil endcap Az állófázis minőségének ellenőrzése (NMR)

16 mau DA D1 A, Sig=25,4 Ref=55,1 (D:\DC\KIRÁLI~1\HPLC3_~1\ENA NTI~1\ENA1215\WRFE11.D) min A szilikagél minőségének hatása Királis teszt - warfarin Metanol : TEAPbuffer (ph3) = 35:65 ill *54,5% MeH Hypersil mau Exsil DAD1A, Sig=2,4Ref=36,1(L:\HPLC3\HPLC3 28\ENANTIMER\ENA226\ \WRF2.D) mau Fuji kis boritottság!! DAD1A, Sig=2,4Ref=55,1(L:\HPLC3\HPLC3 28\ENANTIMER\ENA99\ \WRF2.D) min min MN DAD1 A, Sig=25,4 Ref=55,1 (D:\DC\KIRÁLI~1\HPLC3_~2\ENANTI~1\ENA326\WRF5.D) mau Hypersil t R 9,2 Rs 3,7 α 1,19 N Exsil Fuji 17,8 15,2 2,4 1,3 1,14 1, min Macherey-N. 15,7* 1,7 1,15 11

17 Analitikai elválasztások PMMBCD oszlopon Warfarin.1% R szennyezés Clopidogrel.5% R szennyezés S N Cl CH 3 H CH 3 Cl Cl Permetrinsav H 3 C CH 3 H Naproxen CH 3 Rs: 1R-cis/1S-cis: 2.2 1S-cis/1R-trans: 2.4 1R-trans/1S-trans: 4.4 1R-cis 1S-cis 1R-trans 1S-trans H 3 C H

18 Permetilezett és hidroxipropilezett BCD-s állófázisok összehasonlítása Tropa sav H H mau 12 1 DAD1 A, Sig=2,4 Ref=36,1 (:\ENA113\TRP2.D) DAD1 A, Sig=2,4 Ref=36,1 (Z:\DATA\ENA113\TRPASAV_ELU11.D) Permetilezett BCD oszlop Rs: 2, Hidroxipropilezett BCD oszlop Rs: 4, min

19 Különböző CD-s állófázisok elválaszt lasztóképességének összehasonlításasa KUMARINK Anyag BCD HPBCD PMBCD CMBCD N Acenokumarol H CH 3 Fenprokumon H CH 3 Warfarin H CH 3.1 % TEA-foszfát puffer, ph: 3,5 metanol,,7 ml/perc, 25 ºC

20 Különböző CD-s állófázisok elválaszt lasztóképességének összehasonlításasa Anyag Képlet BCD HPBCD PMBCD CMBCD Cl H 3 C H Cl Fenoprop Cl H 3 C H 2,4-DP Cl Cl H 3 C H Cl Mecoprop CH 3.1 % TEA-foszfát puffer, ph: 3,5 metanol,,7 ml/perc, 25 ºC

21 Különböző CD-s állófázisok elválaszt lasztóképességének összehasonlításasa Anyag Képlet BCD HPBCD PMBCD CMBCD Cl Cl Cisz-permetrinsav Transz-permetrinsav H 3 C CH 3 H H Tropasav n.a. H H CH Terbutalin H 3 3 C H H NH CH 3 F Fluoxetin n.a. F F NH CH3.1 % TEA-foszfát puffer, ph: 3,5 metanol,,7 ml/perc, 25 ºC

22 Különböző CD-s állófázisok elválaszt lasztóképességének összehasonlításasa Phenprocoumon enantiomerek (R>S) forditott elúciója BCD és PMBCD oszlopokon, UV és polarimetriás detektálással. H CH 3

23 Szemipreparativ elválasztás Warfarin 1 mg WRF (mg/ml) Time (min) 1R :.52 mg Purity: 95.2% 1S :.42 mg Purity: 95.2%

Hasonló dokumentumok

Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC)

Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC) Kromatográfiás módszerek osztályba sorolása 2 Elúciós technika A mintabevitel ún. dugószerűen történik A mozgófázis a kromatogram kifejlesztése alatt folyamatosan