Sciex X500R készülék bemutatása a SWATH alkalmazásai tükrében Szabó Pál, MTA TTK
Hagyományos QTOF rendszer Aggályok: Termetes Bonyolultnak tűnő Nem rutin feladatokra való Következmény: Nem merjük megvenni 2 2015 AB Sciex
Curtain gas CAD gas for linac Concept of reflector biomolecule API interface 4-cem detector: better linearity linac Concept of orthogonal acceleration Tof section Concept of TDC 3 2015 AB Sciex nano spray Quad-Tof technology before AB-Sciex, as per view of BNC.
Q-TOF készülék (QSTAR) 770 L/s 250 L/s Modulator Focusing grid Accelerator column 4 anode detector Sample Ions Curtain Gas 2.5 Torr q 0 10-2 Torr Q 1 q 2 10 mtorr 770 L/s Effective Flight Path = 2.5 m Field Free Drift region 7x10-7 Torr Conducting liner Ion Mirror (reflector) 4 2015 AB Sciex
Q-TOF Nagy érzékenység Nagy felbontás (>10.000) Nagy felbontás fragmensek esetében is Nagy tömegpontosság (<5ppm) Relatíve nagy tömegtartomány (6000-8000 Q, 40.000 TOF) Hagyományos tandem scanfunkciók 5 2015 AB Sciex
Van más helyette? SCIEX X500R QTOF System powered by SCIEX OS software SCIEX X500R QTOF System SCIEX ExionLC AC System SCIEX OS software 6 2015 AB Sciex
Mi is ez a csodabogár? Hardware SCIEX ExionLC rendszer SCIEX OS software által vezérelhető Megbízható kapcsolat az LC és az MS között SCIEX X500R QTOF rendszer N-alakú ionoptika Fűtött TOF cső Egyszerű asztali kivitel Software SCIEX OS software Teljesen új felhasználói felület Azonosítás és kvantitálás egy lépésben Automatikus ismeretlen azonosítás 7 2015 AB Sciex
Mitől olyan jó ez? SCIEX X500R QTOF Rendszer Az első nagy felbontású, nagy érzékenységű MS/MS rendszer, melyet RUTIN használatra terveztek Érzékenység: könnyen elérhető MRL értékek Felbontás: növeli a szelektivitást bonyolult mátrix esetén Lineáris tartomány: 4 nagyságrend Tömegpontosság: szerkezetazonosításnál elengedhetetlen MS/MS alapú azonosítási lehetőségek: IDA, SWATH MS/MS ALL, ionarányok és MS/MS spectrumok Robusztusság köszönhető: Turbo V forrás illetve Curtain Gas interface 8 2015 AB Sciex
Alkalmazási lehetőségek Célmolekulák keresése (targeted screening) TOF MS HR TOF MSMS (MRM) MRM HR Ismeretlen komponensek keresése (non targeted screening) TOF MS (ChemSpider) TOF MSMS SWATH 9 2015 AB Sciex
Információfüggő MS/MS (IDA) A Q1 egységnyi felbontásának köszönhetően nagy szelektivitású MS/MS spektrumokat szolgáltat 10 2015 AB Sciex
MRM HR Megnövelt szelektivitás MRM 209/192 and 209/166 TOF-MS XIC of 209.0675 ± 10 ppm MRM HR 209/192.0404 and 209/166.0611 11 2015 AB Sciex
SWATH Sequential Windowed Acquisition of all Theoretical mass spectra lehetővé teszi MS/MS felvételek készítését általános és átfogó módon A Q1 kvadrupólt szélesre nyitjuk és léptetjük a teljes tömegtartományban Data Independent Acquisition (DIA), információtól független mérés MS/MSALL Regular MS/MS SWATH MS/MS Q1 filter [0.7] CID TOF analyzer Q1 filter [25Da] CID TOF analyzer 12 2015 AB Sciex
MS/MS kvantitatív mérési módszerek anyaionok CID leányionok 0.7 amu 0.7 amu átmenet Hármas kvadrupól MRM/SRM m/z m/z 0.7 amu 0.01 amu 0.01 amu 0.01 amu QqTOF MRM HR X amu X milyen nagy lehet? QqTOF SWATH-MS 13 2015 AB Sciex
Szükséges készülék paraméterek Normal transmission Transmission in case SWATH Ion transmission Ion transmission m/z m/z 14 2015 AB Sciex
SWATH-MS Adatgyűjtés elmélete m/z 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 Aebersold and coworkers, ETH Zurich 400 0 15 2015 AB Sciex 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 min
SWATH-MS Adatgyűjtés elmélete m/z 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 0 16 2015 AB Sciex m/z tömegtartomány = [400-1200] 25Da swath ablak 32 swath-ra van szükség 100ms egy ablak 3.2s ciklusidő swath = A kromatográfiás futás során egy adott tömegablakkal kiválasztott anyaionok fragmenseinek összessége Ciklusidő: azonos tömegablakhoz való visszatéréshez szükséges idő 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 Aebersold and coworkers, ETH Zurich min
SWATH-MS adatgyűjtés elmélete: adatgyűjtés és értékelés Aebersold and coworkers, ETH Zurich TIC MS1 map 17 17 2015 AB Sciex
SWATH-MS adatgyűjtés elmélete: Adatgyűjtés és értékelés < MS2/swath map [swath 600-625 m/z] Keresett peptid Aebersold Aebersold and and coworkers, coworkers, ETH ETH Zurich Zurich < 855.5395 < 742.4556 < 671.4180 < 600.3368 < < MS1 map < < TIC < 327.1295 Kiválasztott ionkromatogramok: < 855.5395 < 742.4556 < 671.4180 < 600.3368 < 327.1295 18 18 2015 AB Sciex
SWATH előnyei általános és nem célzott nincs módszerfejlesztés! Az adatok utólagosan visszanyerhetők (mind MS, MS/MS és XIC) A mérési idő nem növekszik a mérendő komponensek számával A szelektivitása hasonló MRM HR -hez (a háttér általában magasabb) 19 2015 AB Sciex
SCIEX X500R: Egyszerűen, Nagyszerű!