BACTEC Mycosis-IC/F Culture Vials Szeletkív tápközeg élesztõkhöz és gombákhoz Magyar HASZNÁLATI JAVASLAT BACTEC Mycosis-IC/F tenyésztõ palackok aerob vérkultúrákhoz használandók. Elsõsorban élesztõk és gombák vérbõl való szelektív kitenyésztésére és kimutatására használandó a BACTEC fluoreszcens sorozatához tartozó készülékekkel. ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT Egy vagy több palackot inokulálni kell a vizsgálandó mintával, majd a palackokat inkubálás és idõszakos leolvasás céljából a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékbe kell helyezni. Minden palack kémiai érzékelõt tartalmaz, amely kimutatja a mikroorganizmusok szaporodása következtében termelt CO 2 -szint növekedését. A készülék 10 percenként ellenõrzi az érzékelõ fluoreszcenciájának növekedését, amely egyenes arányban van a jelenlévõ CO 2 mennyiségével. A pozitív leolvasási eredmény azt jelenti, hogy a palackban feltételezhetõen élõ mikroorganizmusok vannak. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE Ha a BACTEC palack tesztinokulátumában élesztõk és gombák találhatók, akkor CO 2 képzõdik, miközben a mikroorganizmusok metabolizálják a palackban található szubsztrátokat. A palack érzékelõ fluoreszcenciájában bekövetkezõ növekedést, amit a nagyobb mennyiségû CO 2 okoz, a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék mérni képes. A CO 2 növekedés sebességének és mértékének elemzése lehetõvé teszi, hogy a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék meghatározza, hogy a palack pozitív-e, azaz a tesztminta tartalmaz-e élõ mikroorganizmusokat. REAGENSEK A BACTEC Mycosis-IC/F tenyésztõ palackok az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazzák: Összetevõk listája Tisztított víz... 40 ml Szív-agyvelõ agar... 1,0% m/v Emésztett szója-kazein tápleves... 0,5% m/v Élesztõkivona... 0,035% m/v Szacharóz... 0,6% m/v Dextróz... 0,1% m/v m-inozit... 0,05% m/v Vas-ammónium-citrát... 0,0001% m/v Nátrium polianetol-szulfonát (SPS)... 0,05% m/v Szaponin... 0,24% m/v Kloramfenikol... 0,0037% m/v Tobramicin... 0,001% m/v Habzásgátló anyag... 0,01% m/v Valamennyi BACTEC tápközeg hozzáadott CO 2-ot tartalmaz. Az összetétel változtatható a specifikus teljesítményelvárások kielégítése céljából. Figyelmeztetés In vitro diagnosztizáláshoz. A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai mintákban patogén mikroorganizmusok, pl. Hepatitis és HIV vírusok lehetnek jelen. Minden vérrel, illetve más testnedvvel szennyezett anyagot a Standard Precautions 1-4 elõírásai szerint, illetve az intézet irányelvei szerint kell kezelni. Használat elõtt minden palackot meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, befertõzõdésre vagy károsodásra utaló nyom. A nyilvánvalóan károsodott, illetve befertõzõdött palackokat melyek szivárognak, homályosak, tartalmuk elszínezõdött (sötétebb), a gumikupak beszívódott vagy kidudorodik ne használja fel. A fertõzött palackokban túlnyomás uralkodhat. Ha befertõzõdött palackot használ közvetlen vérvételhez, a befertõzõdött tápközeg visszafolyhat a beteg vénájába. A palackok fertõzöttsége nem mindig nyilvánvaló. Közvetlen vérvétel során kísérje figyelemmel végig a folyamatot annak érdekében, hogy semmilyen anyag ne folyhasson vissza a beteg szervezetébe. Ritkán elõfordulhat, hogy az üveg nyaka megreped, vagy a kupak lepattintása, illetve munka közben letörik. Ezenkívül, ritkán elõfordulhat, hogy a palack nem lett kellõen lezárva. A palackok tartalma mindkét esetben kifröccsenhet, illetve szivároghat. Ha a palackokat már inokulálta, a kicsepegett és kiszivárgott anyaggal bánjon óvatosan, mivel azok fertõzõ organizmusokat vagy anyagokat tartalmazhatnak. Kidobás elõtt minden inokulált palackot autoklávozással sterilizáljon. Továbboltáshoz vagy festéshez, stb.-hez való pozitív tenyészapalackok: Mintavétel elõtt ki kell engedni a mikrobiális metabolizmus során gyakran képzõdõ gázt. Amennyiben lehetséges, a mintavételt biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ védõöltözékben (beleértve a kesztyût és maszkot) kell elvégezni. A továbboltásról további információk az Eljárás címû szakaszban találhatók. Hogy a tenyésztõ palackok inokulálása alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon rögzített tûjû fecskendõket vagy Luer-Lok hegyeket. Tárolási útmutató A BACTEC palackok kézhezvételkor használatra készek, további feloldás, illetve hígítás már nem szükséges. Tárolás 2 25 C hõmérsékleten, száraz, napfénytõl védett helyen. PP113JAA 2008/01
MINTÁK GYÛJTÉSE A befertõzõdés elkerülése végett a mintavételhez használjon aszeptikus technikákat. A minta ajánlott térfogata 8 10 ml. A BACTEC palackokat tanácsos közvetlenül a betegágynál inokulálni a mintával. A mintavételhez leggyakrabban egy Luer-Lok heggyel ellátott 10 vagy 20 ml-es fecskendõt használnak. A mintavételhez optimális esetben Vacutainer Needle Holder-t és Vacutainer Blood Collection Set-et, Vacutainer Safety-Lok Blood Collection Set-et vagy más pillangótû készletet kell használni. Ha tût és vérvételi csõrendszert (közvetlen vérvétel) használ, a mintavétel kezdete után fokozott figyelemmel kísérje végig a vér folyásának irányát. A palackban lévõ vákuum általában meghaladja a 10 ml-t, ezért a felhasználónak a palack címkéjén lévõ 5 mles jelek segítségével ellenõriznie kell a levett minta mennyiségét. Ha a kívánt 8 10 ml-t sikerült levenni, a további áramlást a csõ elszorításával, és a vérvételi készlet BACTEC palackból való kihúzásával kell megállítani. 3 ml-es térfogatú minták is felhasználhatók, ilyenkor azonban a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében. Az inokulált BACTEC palackot a lehetõ legrövidebb idõn belül a laboratóriumba kell juttatni. A vérvételhez sárga kupakú Vacutainer Brand Tube, SPS-t tartalmazó csöveket is lehet használni. A csöveket a lehetõ legrövidebb idõn belül a laboratóriumba kell juttatni, és tartalmukkal a BACTEC palackokat inokulálni kell. ELJÁRÁS Távolítsa el a BACTEC palack tetejérõl a levehetõ kupakot, majd vizsgálja meg az üveget különös trekintettel a repedésekre, a befertõzõdésre, a túlzott zavarosságra, a kupak beszívódására, illetve kidudorodására. Ha bármilyen hibát észlel, NE HASZNÁLJA FEL a palackot. Inokulálás elõtt törölje le a gumikupakot alkohollal (jódtartalmú fertõtlenítõ szer használata nem javallott). Aszeptikus módon fecskendezzen vagy engedjen közvetlenül a palackba, palackonként 8 10 ml mintát. A tápközeg 3 10 ml vérmintával használható. Amennyiben a minta mennyisége kevesebb, mint 3 ml, a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében (lásd Az eljárás korlátai). Az inokulált palackokat inkubálás és monitorozás céljából a lehetõ legrövidebb idõn belül be kell tenni a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékébe. Ha az inokulált palackot nem helyezi idõben a készülékbe és a palackban jól láthatóan elindult a szaporodás, akkor a palackot ne tesztelje BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékben, hanem oltsa tovább, készítsen megfelelõ festést, és tekintse a palackot feltehetõen pozitívnak. A készülékben elhelyezett palackokat a készülék automatikusan, a teszt protokoll idõtartama alatt 10 percenként teszteli. A pozitív palackokat a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék meghatározza, és pozitívnak minõsíti (lásd a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatóját). Az üvegen belül található érzékelõ nem mutat szemmel látható különbséget a pozitív vagy negatív palackokban, ennek ellenére a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék ki tudja mutatni a fluoreszcenciában bekövetkezett változásokat. Amennyiben a tesztperiódus végére egy negatív BACTEC Mycosis-IC/F palack szemmel láthatóan pozitívvá válik (azaz a gumikupak kidudorodik és/vagy a tápközeg zavaros), oltsa tovább, fesse meg megfelelõ módon, és tekintse feltehetõen pozitívnak. A pozitív palackokat tovább kell oltani, és megfelelõen festett kenetet kell készíteni. Az esetek többségében a mikroorganizmusok láthatóvá válnak, és az orvossal az elõzetes eredményeket közölni lehet. Továbboltás: Továbboltás elõtt helyezze a palackot álló helyzetbe, és takarja le a palack kupakját egy alkoholos törlõvel. A palackban uralkodó túlnyomás megszüntetésére szúrjon egy megfelelõ szûrõvel (vagy vattacsomóval) ellátott steril tût az alkoholos törlõn át a palack kupakjába. A tût a nyomás csökkentése után, a továbboltáshoz való minta kivétele elõtt el kell távolítani. A tû beszúrását és kihúzását egyenes irányú mozdulatokkal kell elvégezni, és kerülni kell a tekerõ mozdulatokat. A maximális izolátum hozamhoz, a negatív tenyészeteket ellenõrizze festéssel és/vagy továbboltással, mielõtt a mintákat negatívnak értékelné, és kidobná. MINÕSÉGELLENÕRZÉS A minõség-ellenõrzési vizsgálatokat a vonatkozó helyi, állami és/vagy szövetségi jogszabályoknak és akkreditációs követelményeknek, illetve a laboratórium standard minõség-ellenõrzési eljárásainak megfelelõen kell elvégezni. A megfelelõ minõség-ellenõrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni a megfelelõ CLSI (korábban NCCLS) irányelveket és a CLIA elõírásokat. A lejárati idõ után NE HASZNÁLJA FEL a tenyésztõ palackokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a palackokat, melyeken sérülés bármilyen nyoma látszik. Az ilyen palackokat a megfelelõ módon dobja ki. A Quality Control Certificate (Minõségellenõrzési tanúsítvány) minden tápközeg dobozban megtalálható. A Minõségellenõrzési tanúsítvány felsorolja a teszt mikroorganizmusokat, beleértve az CLSI standard, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media fejezetében leírt ATCC tenyészeteket is. 5 Az érzékelés idõtartama ezen táptalaj esetén a Minõségellenõrzési tanúsítványban felsorolt valamennyi mikroorganizmus esetében 72 óra: Mikrooganizmus Candida albicans* ATCC 10231 Candida parapsilosis ATCC 10232 Candida (Torulopsis) glabrata ATCC 15545 Candida albicans ATCC 14053 Candida krusei ATCC 34135 Cryptococcus neoformans ATCC 13690 Candida tropicalis ATCC 750 *CLSI törzs Minden tápközeg szállítmány teljesítményét egy negatív és egy pozitív palack teszttel ajánlatos megvizsgálni. A pozitív palackokat 0,1 ml 0.5 McFarland-os Standard Candida albicans (ATCC 10231) vagy Candida (Torulopsis) glabrata oldattal kell inokulálni. Ezt, valamint egy nem inokulált palackot a készülékbe kell helyezni, majd tesztelni. A készüléknek az inokulált palackokat 72 órán belül pozitívnak kell mutatnia. A negatív, kontroll palacknak negatívnak kell maradnia. Ezzel ellenõrizheti, hogy a tápközeget nem tárolták-e vagy szállították-e káros körülmények között a laboratóriumba érkezés elõtt. Ha bármelyik palack nem a várt eredményt adja, mindaddig ne használja a tápközeget, amíg fel nem vette a BD helyi képviseletével. A BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékek minõség-ellenõrzésérõl a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatójában olvashat további információkat. 2
AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Befertõzõdés Ügyelni kell, hogy a mintavétel alatt és az inokulálás során a BACTEC palackokba kerülõ minták ne fertõzõdjenek be. A bertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai mintáknak. Az ilyen meghatározást a felhasználónak kell elvégeznie olyan tényezõk alapján, mint a kimutatott mikroorganizmus típusa, ugyanannak a mikroorganizmusnak a gyakorisága több tenyészetben, a beteg kórelõélete, stb. Nem élõ organizmusok A tenyésztõ tápközegekbõl készített Gram-festett kenetek kis számú, nem élõ mikroorganizmust tartalmazhatnak, melyek a tápközeg összetevõibõl, a festékbõl, az immerziós olajból, az üveg tárgylemezekrõl, illetve az inokuláláshoz használt mintából származhatnak. Ezenkívül, a betegtõl származó mintában lehetnek olyan mikroorganizmusok, melyek nem szaporodnak a tenyésztéshez vagy továbboltáshoz használt tápközegben. Az ilyen mintákat szükség esetén a megfelelõ speciális tápközegben kell továbboltani. 6 Dimorf gombák A Mycosis-IC/F Medium tápközeget elsõsorban élesztõk kimutatására fejlesztették ki. A tápközeg nem bizonyult hatékonynak a dimorf gombák kimutatásában. Általános szempontok Az izolátumok optimális kimutatásához 8 10 ml vér szükséges. Ennél kisebb vagy nagyobb térfogat kedvezõtlenül befolyásolhatja a kimutatást és/vagy az érzékelés idõtartamát. A vér tartalmazhat antimikrobiotikumokat vagy egyéb olyan gátló anyagokat, melyek lelassítják, vagy megakadályozzák a mikroorganizmusok szaporodását. Amennyiben a mintában olyan mikroorganizmusok vannak jelen, amelyek nem termelnek elég CO 2 -ot ahhoz, hogy a rendszer kimutassa, illetve a szignifikáns szaporodás még a készülékbe helyezés elõtt megtörtént, fals negatív leolvasást kaphatunk eredményként. Magas fehérvérsejt-szám esetében fals pozitív eredmény születhet. A táptalajokban levõ biológiai anyagok és a mikroorganizmusok variabilitásának természete miatt a felhasználónak tudatában kell lennie annak, hogy az egyes mikroorganizmusok kimutatása potenciálisan variábilis eredményeket adhat. VÁRT ÉRTÉKEK ÉS SPECIFIKUS TELJESÍTMÉNY JELLEMZÕK Oltásos vértenyésztési vizsgálatok Az oltásos vértenyésztési vizsgálatokhoz teljes humán vért és 10 100 CFU tartalmú inokulumokat használtak. A következõ lista azokat a mikrooraganizmusokat tartalmazza, melyek szaporodnak a Mycosis-IC/F tápközegben, és a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékkel kimutathatók. A BACTEC Mycosis-IC/F Medium tápközegben az Oltásos vértenyésztési vizsgálatban kimutatott élesztõk és gombák listája Aspergillus flavus Candida parapsilosis Mucor ramosissimus Candida albicans Candida rugosa Penicillium roqueforti Candida glabrata Candida tropicalis Trichosporon capitatum Candida krusei Cryptococcus neoformans A BACTEC tápközeg teljesítményét az élesztõk és gombák kimutatásának tekintetében a korábbiakban a BACTEC NR Fungal tápközeggel és a BACTEC nem-radiometrikus rendszerekkel állapították meg. A BD által kivitelezett oltásos laboratóriumi vizsgálatok során kimutatták, hogy a Mycosis-IC/F tápközeg teljesítménye egyenértékû a NR Fungal tápközeg teljesítményével. KISZERELÉS Kat. sz. Leírás 442206 BACTEC Mycosis-IC/F Culture Vials, 50 palackos kiszerelés IRODALOMJEGYZÉK 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80. 3. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3, Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3
4
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 U.S.A. 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Luer-Lok, Safety-Lok and Vacutainer are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2008 BD