Pályázat címe: Struktur und Funktion des antifungalen proteins PAF aus Penicillium chrysogenum. Beszámoló/Eredmények

Hasonló dokumentumok
Egy antifungális diszulfid fehérje szerkezeti dinamikája és hideg/meleg kitekeredése (avagy PAF, a hűvös sárkány)

Carsten Kümmel Dipl. Tonmeister

MUNKASZERZŐDÉS. amely egyrészről az. név: S.C. NUMELE FIRMEI SR.L. székhely: STR., NR. _LOCALITATEA, JUDET, TARA. cégjegyzékszám: NR.REG.

BUNDESGESETZBLATT FÜR DIE REPUBLIK ÖSTERREICH. Jahrgang 1999 Ausgegeben am 13. April 1999 Teil III

WiR gratulieren GRATULÁLUNK!

Mercedes-Benz : Six Sigma Black Belt, ( ) Six Sigma Black Belt, Werk Kecskemét, Ungarn (135203)

Kombi-V15. pellet / hasábfa kombikazán. Teljesítmény. 4-14,9 kw. Verzió: 1 / 2009

1900 körüli városlodi étkészlet

EGY SZIKLAGÖDÖR KERÁMIAANYAGA A HADTÖRTÉNETI MÚZEUM UDVARÁN

WEIDINGKR GYÖRGY HURLER FERENC

Meghívó a gyermekkorcsoport 9. Nemzetközi Delphincupjára Simmeringen

Adott esetben születési név és korábbi házassági név Keresztnév Vorname ggf. Geburtsname und Name aus früherer Ehe

EK-TípusVizsgálati Tanúsítvány EG-Baumusterprüfbescheinigung

CSECSEM Ő- ÉS GYERMEKHALANDÓSÁG KÉT PEST KÖRNYÉKI KÖZSÉGBEN A MÚLT SZÁZAD AS ÉVEIBEN

Találkozó az általános iskolákkal Október 4.

MEZŐGAZDASÁGI ÉS TECHNIKATÖRTÉNETI GYŰJTEMÉNY BORSOD MEGYÉBEN HAJDÚ RÁFIS JÁNOS

Bretzfeld-Budaörs testvérvárosi kapcsolat. 25 éves évfordulója május 8-11.

Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet TÁMOP / XXI. századi közoktatás (fejlesztés, koordináció) II. szakasz NÉMET NYELV

Dombóvár Város Önkormányzata Képviselő-testületének január 30-i rendes ülésére

NÉMET CSOPORTOS TANFOLYAMOK TEMATIKA

Padlécek, lécekbe öntött merevítéssel Bankbohlen mit innenliegender Armierung

Komplex tehetséggondozási program a Ceglédi kistérségben TÁMOP /

Public-Key Kryptography mit Diskreten Logarithmen

Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet TÁMOP / XXI. századi közoktatás (fejlesztés, koordináció) II. szakasz NÉMET NYELV

Az Imre Samu Nyelvi Intézet ünnepi megnyitója a sajtóban:

C nyelvi programkövetelmény. A javaslattevő alapadatai. A programkövetelmény nyelvre vonatkozó adatai. 960 óra (+ 180 óra OP)

ÓRATERV. Nevelési-oktatási stratégia Módszerek Tanulói munkaformák Eszközök

A FELTALÁLÓI LÉPÉS KÖVETELMÉNYE A HASZNÁLATIMINTA-OLTALMI JOGBAN

KÖZMEGHALLGATÁS BESZÁMOLÓ. KÉSZÜLT KOMLÓ VÁROS NÉMET NEMZETISÉGI ÖNKORMÁNYZATA DECEMBER 09-i K Ö Z M E G H A L L G A T Á S Á N

Wirtschaftsdeutsch, Tourismus und Gastgewerbe 50

A FELTALÁLÓI LÉPÉS KÖVETELMÉNYE A HASZNÁLATI MINTAOLTALMI JOGBAN

TP600 HASZNÁLATI UTASÍTÁS

ÜZEMELTETÉS : 18 l /100 km l /100 km. Skoda / Toyota Prius. Magyar Építőkémia és Vakolatszövetség

Tartalomjegyzék. Bevezetés/szervíz, oktatás 3-9. DK-kábelösszekötő dobozok ,5-240 mm 2, IP 54-67

BALASSA JÁNOS HALÁLÁNAK 100. ÉVFORDULÓJÁRA

Grenzerfahrungen. Eötvös Schüler zum Abschluss eines etwinning Projekts zu Gast in der Slowakei / eötvösös diákok projektzáró utazása Szlovákiába

Kérdõív az örökösödési bizonyítvány iránti kérelemhez

JEGYZŐKÖNYV / PROTOKOLL

A FELSÉGSÉRTÉS TÉNYÁLLÁSA A CSEMEGI-KÓDEXBEN SZABÓ ISTVÁN

FÖLDRAJZ NÉMET NYELVEN GEOGRAPHIE

Die ungarische Sonntagszeitung Vasárnapi Ujság, Budapest

Alumínium bejárati ajtók Modell családokról általában. Tartalomjegyzék

Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet TÁMOP / XXI. századi közoktatás (fejlesztés, koordináció) II. szakasz NÉMET NYELV

Kassza nyitva tartás. Kassenöffnungszeiten

Szülést megkönnyítő módosulás a Spalax hungaricus hungaricus Nhrg. medencéjén

Osztályozóvizsga évfolyam SCHRITTE INTERNATIONAL 1. TANKÖNYV

11. Kormányzói levél, május

vasárnap, 2010 május 23-án - a Pünkösd ünnepére egy közös energiameditációt szerveztem.

1002. Lot 8 db/st./pcs 2007 BU 1, 2, 5, 10, 20, 50, 50, 100 forint 5000 db/st./pcs Adamo: FO40, 10.-

Szabadságharc /Freiheitskrieg/ ( )

VIZSGALEÍRÁS NÉMET NYELV. 8. évfolyamos vizsga

Beszámoló az Osztrák-Magyar Irodalom- és Kultúrtudományi Vegyesbizottság évi munkájáról

Könyv és Nevelés 2006/4.

A FELSZÍN ALATTI VIZEKÉRT ALAPÍTVÁNY TÁMOGATÓI DECEMBER 31-IG

Üzleti élet Nyitás. Nagyon hivatalos, a címzettnek meghatározott rangja van, aminek szerepelnie kell

Üzleti élet Nyitás. Nagyon hivatalos, a címzettnek meghatározott rangja van, aminek szerepelnie kell

VERTEBRATA HUNGARICA M USE I HlSTORICO - NATURALIS HUNGARICI Tom. VII Fosc. 1-2.

A U T O M A T A M O S Ó G É P WMB6510J BEKO

Lead Partner Seminar. Berichte auf Projektebene / Projektszintű jelentések

CALMAX Mûanyagforma- és hidegmunkaacél

Kis molekulatömegű antimikrobiális fehérjék és kódoló génjeik vizsgálata

Markthalle Budapest an der Fehérvári-Straße Architektur: Kertész Építész Stúdió (Kertész András, Frikker Zsolt, Bó di Imre)

Menschen um uns wie sind sie?

FÖLDRAJZ NÉMET NYELVEN

BALOGH BÉLA, PUTNOK ÉS HARMAC TÖRTÉNETÍRÓJA

Prospektus GmbH Veszprem, Tartu Str. 6. Ungarn Tel.: Fax:

Látogatás a Heti Válasznál

Könyv és Nevelés 2007/3.

ERD14: egy funkcionálisan rendezetlen dehidrin fehérje szerkezeti és funkcionális jellemzése

Publikációs lista Szabó Szilárd

A tanóra megbeszélésének folyamata

KRISTALLRoll. TERASZOK.HU Élet a teraszon

Zehnder ComfoAir 550. Lüftungsgerät. Alkalmazás. Verwendung. Hatásfok. Wirkungsgrad. Ventilatoren. Ventilátorok. Bedienung Kezelés.

Beépítési útmutató ENREGIS/Gitterbox csapadékvíz szikkasztó rendszer

Dr. Szabó Zsolt Ph.D

Szerkesztette: Technikai szerkesztő: Feketéné Bíró Edit. A kötet megjelenését Komlóska Község Önkormányzata és a Komlóskáért Alapítvány támogatta.

Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet TÁMOP / XXI. századi közoktatás (fejlesztés, koordináció) II. szakasz NÉMET NYELV

Környezetvédelmi termékdíj változások

K E N N D A T E N V O N W E R K Z E U G S T Ä H L E N. ARNE Hidegmunkaacél. Uberall, wo Werkzeuge hergestellt und verwendet werden

mi és más népek - összehasonlításuk, karaktereik személyleírás: főként külső tulajdonságok alapján

Irrtümer. 1620_25 Blaue Blume, Max Hueber Verlag Der Ötzi

A Piarista Rend Magyarországon. Szerk.: Forgó András. Bp., (Művelődéstörténeti műhely. Rendtörténeti konferenciák) 9. p. 2

Einfluss der Furttiefen auf die Ökonomie der Schifffahrt

KG 51R F K. 1 Az igénylést benyújtó személy adatai. 2 Az igénylő személy házas- ill. élettársának adatai

VEZETÉKVÉDŐ KAPCSOLÓK HIBAÁRAM KIOLDÁSSAL

Diákok tanárszerepben

Az Andrássy Gyula Budapesti Német Nyelvű Egyetem Könyvtárának Szervezeti és Működési Szabályzata

am von 18:00 bis 20:30 Uhr Südpol, Arsenalstrasse Kriens

HAGYOMÁNY ÉS LUXUS STÍLUSOSAN BERENDEZETT KÖRNYEZETBEN

Beszámolónkban a még 2001-ben megtervezett és nemzetközi együttműködésre is számító programunk várható eredményeit és ütemezéseit próbáljuk követni.

Hasznos kifejezések nem csak kezdőknek Meinungsäußerung ( véleménynyilvánítás ):

Pusztainé Tötök Éva tantárgyprogramjai

Magyar

Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet TÁMOP / XXI. századi közoktatás (fejlesztés, koordináció) II. szakasz NÉMET NYELV

Eintritt mit der Familie familiäre Sportbewegung im Zeichen der gesunden Lebensweise

TERMÉKKATALÓGUS RÁFUTÓFÉK RÁFUTÓFÉK MECHANIZMUS.

A CSONGRÁD-BOKROSI VASESZKÖZLELET* SIMON KATALIN

Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet TÁMOP / XXI. századi közoktatás (fejlesztés, koordináció) II. szakasz NÉMET NYELV

Berlin nevezetességei

Német nyelv 5-6.évfolyam. 1.forduló

Átírás:

Projektszám: 79öu1 Pályázó neve: Dr. Florentine Marx HUF 693.000,00.- EUR 7.061,00.- Intézménye: Med. Univ. Innsbruck Projektpartner neve: Prof. Dr. Gyula Batta Intézménye: University of Debrecen Pályázat címe: Struktur und Funktion des antifungalen proteins PAF aus Penicillium chrysogenum Beszámoló/Eredmények A projekt jellege: (kérjük bejelölni) Workshop, konferencia Publikáció, tananyag Kutatási együttm ködés Oktatási program A projektben tervezett kísérleteket sikeresen megvalósítottuk. Pichia pastoris expressziós rendszerrel a következ rekombináns PAF mutánsokat (cisztein - szerin cserével) állítottuk el : PAF C7S, PAF C14S und PAF C54S. A mutáns fehérjéket és a kontroll natív PAF fehérjét in-vivo körülmények közt stabil 15N és 13C izotópokkal jelöltük további NMR vizsgálatok céljából. Elkészült a duplán jelölt PAF teljes NMR jelhozzárendelése. Az eredmények alapján több tudományos közlemény van el készületben. Az a két fiatal MSc. hallgató (Nyitrai Mónika és Fzil Ádám) akik a projekt keretében hosszabb id t tölthetettek Innsbruck-ban, PhD ösztöndíjat nyertek Batta prof. témavezetésével. Munkájuk során hasznosíthatják a tanult új mikrobiológiai és molekuláris biológiai ismereteiket. H mérsékleti egyensúlyban sok fehérje vizes oldata a feltekeredett ( natív ) és a kitekeredett formákat egyidej leg tartalmazza. Amíg a natív forma NMR technikával megfigyelhet és jellemezhet, a kitekeredett konformerek rejtett cserepartnerként léteznek és nehezen detektálhatók. A m ködési mód megértéséhez fontos lenne megtudni, hogy a PAF esetében melyik forma az aktív. Ezért a natív formában három diszulfid híddal stabilizált PAF és a mutánsok szerkezeti-dinamikai sajátságait vizsgáltuk. Az egyszeres cisztein mutánsok nem voltak feltekeredve, mégis maradt némi biológiai aktivitásuk (pl. C54S). A korábban elkészült lizin mutánsok közül noha fel volt tekeredve, a K35,K38A mutáns teljesen elvesztette az aktivitását. Az eddigi NMR relaxációs méréseink alapján (+31 o C h mérsékleten) a spontán diszulfid híd átrendez dést kizártuk. A h mérséklet által indukált reverzibilis ki-és feltekeredést 15 N- 1 H HSQC NMR segítségével követtük a 10 +80 o C h mérséklet tartományban. A mérésekb l két és háromállapotú modellekkel, aminosavanként meghatároztuk a kitekeredési folyamat termodinamikai paramétereit (entalpia, h kapacitás, alacsony és magas h mérséklet olvadáspontok). Az derült ki, hogy a hideg denaturálódás szinkronban történik, míg a forró denaturálódás jobban érinti a fehérje nem-konzervált hurok régióit. Az irreverzibilisen denaturált fehérje inaktív oligomer szerkezeteket adott. A PAF kémiai szintézisére tett kísérletek (Prof. Tóth Gábor, Szeged) a nem várt diszulfid híd átrendez dések miatt csak részben voltak sikeresek. Azonban az eddigi szintetikus és tömegspektrometriai eredmények kombinációja alátámasztja, hogy a korábban általunk javasolt abcabc diszulfid híd mintázat helyes. A PAF-ra érzékeny A. Nidulans membrán frakciója NMR_STD kísérletben a PAF aromás régióinál mutatott interakciót. Az NMR és ITC el kísérletek szerint a PAF gyengén köt Ca2+ ionokat és foszfatidil-inozitolokat, ami további támpontot adhat a hatásmechanizmushoz.

Publikációs jegyzék: Batta G; Fizil Á; Kurtán T; Gáspári Z; Barna T.M; Kövér E.K; Leiter É; Pócsi I; Marx F. "Thermal unfolding of a highly stable antifungal protein at extreme temperatures" The 5 th Central European Conference Chemistry towards Biology, Primošten, Croatia, September 8 11, 2010, SL-5 Batta G; Fizil Á; Gáspári Z; Barna T.M; Kövér E.K; Nyitrai M; Tomori V; Leiter É; Pócsi I; Marx F. Cold and hot unfolding of a higly stable antifungal protein, Bio-NMR and EAST-NMR Annual User Meeting, January 24-27, 2011Brno, Czech Republic, P-4 G. Batta, Á. Fizil, Z. Gáspári, T. Barna, K. E. Kövér, M. Nyitrai, V. Tomori, É. Leiter, I. Pócsi, F. Marx Cold and hot unfolding of a higly stable antifungal protein Gordon Research Conferences, Computational Aspects of Biomolecular NMR Location / Il Ciocco Hotel and Resort /Lucca (Barga), Italy, May 22-27. 2011, P-8 G. Batta, T. Barna, Á. Fizil, Z. Gáspári, K. E. Kövér, M. Nyitrai, V. Tomori, É. Leiter, I. Pócsi, F. Marx Cold-hot unfolding and dynamics of a higly stable antifungal protein EUROMAR 2011, aug 21-25, Frankfurt am Main, Germany, P-Rd536 G. Batta: To see or not to see? Cold and hot unfolding of a highly stable antifungal protein. EAST-NMR and 13 th Central European NMR Symposium, Budapest, August 30, 2011, L G. Batta: Disulfide bond topology: Synthetic and mass spectroscopy hurdles, 4th European Conference on Chemistry for Life Sciences, Budapest, August 31-September 3, L G. Batta: Structure, dynamics and unfolding of a highly stable antifungal protein. 2nd Regional EAST NMR meeting, Bratislava, September 8-9, 2011, L Heged s N, Leiter E, Kovács B, Tomori V, Kwon NJ, Emri T, Marx F, Batta G, Csernoch L, Haas H, Yu JH, Pócsi I. The small molecular mass antifungal protein of Penicillium chrysogenum - a mechanism of action oriented review. J Basic Microbiol. 2011 Jul 21. doi: 10.1002/jobm.20110004

Projektnummer: 79öu1 Antragsteller: Dr. Florentine Marx HUF 693.000,00.- EUR 7.061,00.- Institut: Med. Univ. Innsbruck Projektpartner: Prof. Dr. Gyula Batta Institut: Univ. Debrecen Titel: Struktur und Funktion des antifungalen proteins PAF aus Penicillium chrysogenum Bericht Art der Förderung: Workshop, Konferenz Publikation, Lehrmaterial Forschungsprojekt Unterrichtsprojekt Die für dieses Projekt geplanten Experimente konnten durchgeführt und erfolgreich abgeschlossen werden. Unter Zuhilfenahme des Pichia pastoris Expressionssystems wurden folgende PAF Proteinvarianten rekombinant hergestellt: PAF C7S, PAF C14S und PAF C54S. In allen diesen Proteinvarianten wurde ein Cystein an der entsprechenden Stelle durch ein Serin ersetzt. Diese Proteinvarianten sowie natives PAF als Kontrolle wurden in vivo mit 13 C- / 15 N-Isotopen markiert, bevor die Proteine gereinigt und deren Struktur mittels NMR- Analyse untersucht wurde. Die Struktur des doppelt-markierten nativen PAF Proteins konnte vollständig aufgeklärt werden. Beide ungarische Diplom-Studenten (Mónika Nyitrai und Ádam Fizil), die an diesem Projekt beteiligt waren und einige Monate in meinem Labor für "Angewandte Mykologie" in der Sektion Molekularbiologie (Medizinischen Universität Innsbruck) verbracht haben, sind nun Doktoranden in der Arbeitsgruppe von Prof. Batta (Universität Debrecen) und verwenden das mikrobiologische und molekularbiologische Know-how, welches sie in Innsbruck erlernt haben. Zahlreiche wasserlösliche Proteine liegen bei thermischen Gleichgewicht als eine Mischung aus gefalteten und ungefalteten Molekülen vor. Während die grossteils gefalteten Proteine problemlos mittels NMR identifiziert werden können, koexistieren die in geringen Mengen vorhandenen ungefalteten Proteine als "versteckte Austauschpartner". Um jene Proteinformen zu identifizieren, die für den biologischen Effekt von PAF verantwortlich sind, haben wir das dynamische Verhalten des antifungalen Proteins untersucht, welches über drei Disulfidbrückenbindungen stabilisert wird. Die Aminosäureaustäusche der Cysteinreste führten in den PAF Proteinvarianten zu ungefalteten Strukturen, wiesen aber trotzdem noch eine antifungale Restaktivität auf (z.b. PAF C54S). Aminosäureaustäusche von kritischen Lysinresten hingegen führten zu dem Verlust der Proteinaktivität trotz korrekter Faltung (z.b. PAF K35,38A). Diese Proteinvarianten standen uns bereits aus vorangegangenen Studien zur Verfügung. Die Möglichkeit einer Neuorganisation der Disulfidbrückenbindungen bei 31 C konnte ausgeschlossen werden. Eine Temperatur-induzierte reversible Entfaltung/Faltung von PAF wurde in einem Bereich zwischen -10 C bis +80 C mittels 15 N- 1 H HSQC NMR untersucht. Die Enthalpie, die Hitze-Kapazität und die Schmelzpunkte der Proteinentfaltung bei tiefen und hohen Temperaturen wurden für jede Aminosäure einzeln anhand verschiedener Modelle untersucht ("two-state model", three-state model", "intermediate-state model"). Wir konnten nachweisen, dass die Denaturierung bei tiefen Temperaturen geregelt abläuft, während bei Hitzeschock nicht, und dass sogenannte "hot-spots" in den nicht-konservierten Loop-Regionen des Proteins auftreten. Weiters konnten wir zeigen, dass Hitze-inaktiviertes PAF als Oligomer vorliegt und inaktiv ist. Die chemische Synthese von PAF (Prof. Gábor Tóth, Szeged) war nur teilweise erfolgreich, da es zur Ausbildung von unerwarteten Disulfidbrückenbindungen im synthetischen PAF kam. Trotzdem konnten wir mittels dieser synthetischen Daten und weiterer MS Analysen jene Disulfidbrückenbindungen bestätigen, die wir in vorangegangenen Arbeiten bereits postuliert haben. ja

NMR-STD Expreimente zeigten, dass aromatische Regionen von PAF an Plasmamembranfraktionen des sensitiven Schimmelpilzes Aspergillus nidulans binden. Darüberhinaus lassen vorläufige NMR und ITC Expreimente darauf schliessen, dass PAF Ca2+ Ionen und Phosphatidyl-Inositole (Bestandteile der Plasmamembran) binden. Diese Ergebnisse geben weiter Einblick in die Wirkungsweise dieses antifungalen Proteins. Publikationsliste: Publikationsverzeichnis: Batta G; Fizil Á; Kurtán T; Gáspári Z; Barna T.M; Kövér E.K; Leiter É; Pócsi I; Marx F. "Thermal unfolding of a highly stable antifungal protein at extreme temperatures" The 5 th Central European Conference Chemistry towards Biology, Primošten, Croatia, September 8 11, 2010, SL-5 Batta G; Fizil Á; Gáspári Z; Barna T.M; Kövér E.K; Nyitrai M; Tomori V; Leiter É; Pócsi I; Marx F. Cold and hot unfolding of a higly stable antifungal protein, Bio-NMR and EAST-NMR Annual User Meeting, January 24-27, 2011Brno, Czech Republic, P-4 G. Batta, Á. Fizil, Z. Gáspári, T. Barna, K. E. Kövér, M. Nyitrai, V. Tomori, É. Leiter, I. Pócsi, F. Marx Cold and hot unfolding of a higly stable antifungal protein Gordon Research Conferences, Computational Aspects of Biomolecular NMR Location / Il Ciocco Hotel and Resort /Lucca (Barga), Italy, May 22-27. 2011, P-8 G. Batta, T. Barna, Á. Fizil, Z. Gáspári, K. E. Kövér, M. Nyitrai, V. Tomori, É. Leiter, I. Pócsi, F. Marx Cold-hot unfolding and dynamics of a higly stable antifungal protein EUROMAR 2011, aug 21-25, Frankfurt am Main, Germany, P-Rd536 G. Batta: To see or not to see? Cold and hot unfolding of a highly stable antifungal protein. EAST-NMR and 13 th Central European NMR Symposium, Budapest, August 30, 2011, L G. Batta: Disulfide bond topology: Synthetic and mass spectroscopy hurdles, 4th European Conference on Chemistry for Life Sciences, Budapest, August 31-September 3, L G. Batta: Structure, dynamics and unfolding of a highly stable antifungal protein. 2nd Regional EAST NMR meeting, Bratislava, September 8-9, 2011, L Hegedüs N, Leiter E, Kovács B, Tomori V, Kwon NJ, Emri T, Marx F, Batta G, Csernoch L, Haas H, Yu JH, Pócsi I. The small molecular mass antifungal protein of Penicillium chrysogenum - a mechanism of action oriented review. J Basic Microbiol. 2011 Jul 21. doi: 10.1002/jobm.20110004