Metabolikus kórképek állatkísérletes modelljei (diabetes, diszlipidémia, hiperurikémia) Dr. Zupkó István, tszvez. egy. docens SZTE Gyógyszerhatástani és Biofarmáciai Intézet Diabetes, hiperglikémia Hiperurikémia Hiperlipidémia In vivo & in vitro módszerek 1
In vivo DM modellek Pancreatectomia Beagle kutyán (1890) 10% glükóz, 10 IU/L inz: 1L/nap, 3 napig Krónikusan: 30-40 IU inz, pancreas enzimek, 3 havonta D-vit Hormonális DM Kutya, macska: ismételt GH DM Tmalac, nyúl: glükokortikoid DM Patkány: glükokort + erıltetett etetés DM Immunmediált DM: többszöri inz tmalacnak inz ellenanyag Patkánynak iv: hiperglikémia Glükóz csökkentése nyúlon (Ph Hg): 18 h éheztetés 0,2 IU/kg 60 min: 25% csökkenés 8 nap washout standardok melletti kezelés, 60 & 150 min mérés Hipoglikémiás görcs egéren: sc inz, 90 min megfigyelés: elhullás, görcs, háton fekvés 2
Spontán DM állatok Defektív leptin pathway BB (Bio Breeding) rat: autoimmun insulitis, 60-120 nap: gyors DM, mikofenolátra szenz WBN/KOB rat: Wistar-törzs, öreg : lassú spontán glükóz intoler DM Cohen rat: hiperinzulinémia, inz rezisztencia Goto-Kakizaki rat: non obese, inz rezisztens, inbred Wistar, NIDDM Zucker fatty rat: obesitas modell, hiperinzulin, glükóz intolerancia, inz rezisztens, éhomi glükóz: ~ norm Zucker diabetic fatty rat: ~20 mm glükóz 3
Indukált diabetes modellek Szelektív toxicitás a β-sejtrekre: GLUT2 (vs máj) Alloxán: 65 mg/kg iv (150 mg/kg ip), éheztetés után hatékonyabb, hiperglikémia parciálisan véd Mech: glükokináz inhibitor, ROS-generátor Kivédhetı: 3-O-metilglükóz (GLUT2 komp) antioxidánsok (SH-donorok) paradox hatás Diabetogén szerek: citotoxikus glükóz-analógok (glükomimetikum) nefrotox 4
Alloxán DM Allox: I-IV STZ: II-IV 5
STZ Alkilálószer Szelektív uptake: GLUT2 (egyéb tox) NAD & ATP dep PARP inhib: kivéd ROS:?? 40-60 gm/kg iv/ip 100 mg/kg ip Többszöri kis D: immunmediált DM SPRD, 60 mg/kg iv 6
Myometrium adrenerg neuron funkció Myometrium adrenerg neuron funkció 7
Myometrium adrenerg funkciók DM Kont STZ - NIDDM 2 napos korban 150 mg/kg ip, 25-50% túlél 8-10 hetes kor 4 Vércukor (mm) ± SEM 3 2 1 0 Hím D Hím K Nıstény D Nıstény K Éhomi glükóz, D: STZ-kezelt, K: kontroll 8
Vércukor (mm) ± SEM 20 15 10 5 0 n.sz. *** *** Hím K Hím D Nıstény K Nıstény D 1 órás posztprandiális glükóz Plazma glükóz (mm) ± SEM 20 15 10 5 0 Kontroll * Glibenklamid 10 mg/kg glibenklamid (éheztetés kezdetén + a táp visszaadása elıtt 30 perccel). 1 órás posztprandiális glükóz 9
Keményítı-terhelés 16 óra éheztetés, 2,5 g/kg keményítı szuszpenzió po, további éheztetés 5.5 Glükóz emelkedés 5.0 Glükóz (mm) 4.5 4.0 3.5 3.0 0 1 2 3 Idı (h) In vitro DM módszerek Zsírsejtek glükóz felvétele (epididymal fat): kollagenáz-emésztés, 14 C-glükóz + tesztanyag Fıleg inzulin-származékokra Izolált pancreas: indirekt hatások is mérhetık α-amiláz végpontos meghatározás: 3,5-(NO) 2 szalicilsav nitro-aminoszalicilsav 546 nm Glükozidáz: maltóz/szacharóz (37 C, 20 min): glükóz meghatározás. Leállítás: forralással 10
Everted sac Hiperlipidémia in vivo Intakt állaton is lehet mérni, de [önkontroll, szeparálás, májextrakció] Koleszterin-atherosclerosis nyúlon: 0,3-2% kol, 10-12 héten át Patkánynak napi 10 ml/kg: 1L mogyoróvaj + 100 g kol + 30 g propiltiouracil + 100 g kólsav 7 nap alatt kialakul a hiperlipidémia opcionális: ballonlézió RICO rat: kol, norm TG, nem obes Poloxamer-407: 0,5-1 g/kg ip 11
Egér: 0,5 g/kg polox-407, 24 órás eredmények éheztetés alatt 12
13
1 nap atorv elıkezelés Polox-407 + 3 nap atorv 0.6 0.5 Abszorbancia 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 Atorv KolKont Kol Atorv TG Kont TG Lipid-tolerancia teszt ~5 napig tesztanyag, majd 10% lipid emulzió iv bólus. 0., 10-20-30-40 min: TG meghatátozás. A lipoprotein-lipáz aktivitást jelzi. 14
Hiperurikémia modell Urikáz (urát-oxidáz): fıemlısökben és dalmatában nincs K-oxonát hiperurikémia (250 mg/kg ip) 15 Húgysav koncentráció (mg/dl)± SEM 14 13 12 11 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Idı (h) 15
14 50 mg/kg allopurinol po (az oxonáttal egyszerre) Húgysav koncentráció (mg/dl) ± SEM 12 10 8 6 4 2 0 ** kontroll 0,5 1 2 4 6 Vérvétel ideje (h) 16
Abszorbancia XO meghatározása in vitro Xantin + H 2 O + O 2 húgysav + H 2 O 2 Húgysav: 290 nm, kinetikus assay 700 600 500 400 300 0 25 50 75 100 125 Reakcióidı (s) Kontroll 0,312µg/ml 0,625µg/ml 1,25µg/ml 2,5µg/ml 5µg/ml Xantin-oxidáz gátlás (%) 100 75 50 25 allopurinol 0 0 1 2 3 4 5 6 Allopurinol koncentráció (µg/ml) 17