I/3 Lemez agar táptalaj: (bouillon, 1-3% agar-agar)

Átírás

1 I. Sterile media (principles, significance) 1. Bouillon (broth) 2. Agar slant, tube I/1,2 Steril táptalajok: Bouillon, Ferdeagar, Magasagar 3. Agar plate I/3 Lemez agar táptalaj: (bouillon, 1-3% agar-agar)

2 4. Enrichment media: cooked meat (CM)- and serum bouillon 5. Blood agar plate I/5 Véresagar táptalaj: (agar táptalaj, 5% defibrinált vér)

3 6. Chocolate agar plate I/6 Csokoládé agar táptalaj: (hõvel kezelt véresagar táptalaj) 7. Selective and differentiating media (a) Clauberg (tellurite) and Löfler (b) Löwenstein-Jensen, Sula (c) Eosine-methyleneblue (d) Bismuth sulphite (e) Brilliant green (f) Desoxycholate-citrate (DC) (g) TCBS

4 8. Transport media 9. Blood culture bottles Hemokultúra palackok: Baktériumoknak vérbõl való kitenyésztésére szolgáló rendszer. 10. Virus transport medium

5 II. Cultures (theoretical background, description) 1. Staphylococcus aureus, S. epidermidis on agar plate Staphylococcus aureus és S. epidermidis agar táptalajon S. aureus: aranysárga pigment S. epidermidis: porcelánfehér pigment 2. S. aureus on blood agar plate Staphylococcus aureus véresagar táptalajon 1-2 mm átmérõjû, kerek aranysárga, vajszerû telepek, melyeket béta-típusú haemolyticus udvar vesz körül

6 3. S. epidermidis on blood agar plate Staphylococcus epidermidis véresagar táptalajon 1-2 mm átmérõjû, kerek, sima felszínû, vajszerû, csillogó porcelánfehér telepek, haemolysis nincs 4. S. saprophyticus and S. epidermidis on agar plate with novobiocin disc Novobiocin érzékenységi teszt Staphylococcus epidermidis: érzékeny Staphylococcus saprophyticus: rezisztens

7 5. Streptococcus pyogenes on blood agar plate Streptococcus pyogenes véresagar táptalajon 0,1-1 mm átmérõjû, színtelen, kissé domború telepek, melyeket nagy béta-típusú haemolyticus udvar vesz körül. 6. S. mitis on blood and chocolate agar plate Streptococcus mitis véresagar táptalajon Apró, gombostûfejnyi, színtelen telepek, melyeket alfa típusú haemolyticus udvar vesz körül Streptococcus mitis csokoládé agar táptalajon Apró, gombostûfejnyi, színtelen telepek, melyeket alfa típusú haemolyticus udvar vesz körül

8 7. S. pneumoniae on blood and on chocolate agar plate Streptococcus pneumoniae véresagar táptalajon 1-2 mm átmérõjû, sima felszínû telepek, közepükön köldökszerû behúzódás A telepeket alfa-típusú haemolyticus udvar veszi körül Streptococcus pneumoniae csokoládé agar táptalajon Apró színtelen, kerek telepek, alattuk alfa haemolyticus udvar 8. Haemophilus influenzae on chocolate agar plate Haemophilus influenzae csokoládé agar táptalajon 0,5-1 mm átmérõjû, harmatcsepp szerû telepek, náthás orrváladékra emlékeztetõ szaggal.

9 9. Escherichia coli on agar and on eosin-methyleneblue medium Escherichia coli Eozin metilénkék táptalajon Laktóz pozitivitás miatt kék színû telepek 10. Proteus sp. on blood agar plate and eosine-methyleneblue medium Proteus vulgaris véresagar lemezen Nem képez önálló telepeket, csillói segítségével a táptalaj felszínét befutja, (rajzik)

10 11. Pseudomonas aeruginosa on agar and blood agar plate Pseudomonas aeruginosa agar lemezen 2-3 mm átmérõjû telepek. A baktérium vízoldékony pigmentjei (pyocianin és fluorescein) a táptalajba diffundálnak, és zöldes színûre festik azt. A tenyészet hársfavirág illatú, a telepek irizáló felszínûek 12. Klebsiella sp. on agar plate and eosine-methyleneblue medium Klebsiella pneumoniae agar lemezen 2-3 mm átmérõjû, nyákos, összefolyó telepek, a nyákos küllemet a tokképzõdés okozza

11 13. Salmonella sp. on bismuth-sulphite medium Salmonella typhi bizmutszulfit táptalajon A táptalaj brillantzöldet, valamint Bi- és Na-szulfitot tartalmaz. Értékelés: Salmonellák H2S képzés következtében a Bi- sót Bi-szulfiddá redukálják és fekete színû telepeket képeznek. A brillantzöld az E. coli növekedését és a Proteus rajzását gátolja. 14. E. coli and Salmonella sp. on brilliant green medium E. coli és S. typhi Brillantzöld táptalajon Brillantcukrot, Andrade indikátort és brillantzöldet (szelektáló anyag) tartalmazó táptalajon a Salmonellák telepei színtelenek, az esetleg kinövõ E. coli telepei vörös színûek

12 15. E. coli and Shigella sp. on DC medium Shigella és E. coli Dezoxicholát-citrát táptalajon A táptalaj tartalmaz dezoxycholsavat, Na-citrátot (szelektáló anyagként), Ferroammoniumszulfátot, laktózt, ólomacetátot, és neutrálvörös indikátort. Shigellák szabadon, jól nõnek, színtelen telepeket képeznek. E. coli és proteus gátlódik. E. coli telepei a laktózbontás következtében vörös színûek, az epesavas sók a telep körül kicsapódnak. 16. Faeces of patient with dysentery on eosine-methyleneblue medium Dysenteriás széklet Eozin-metilénkék táptalajon A táptalaj tartalmaz eozint, metilénkéket, rajzásgátlót és laktózt. Shigella telepek: színtelenek E. coli telepek: kékeslilák

13 17. Russel medium(steril) and: (a) lactose +, gas + (b) lactose -, gas + (c) lactose -, gas Russel táptalaj szénhidrát fermentáció kimutatására gázképzéssel vagy gázképzés nélkül a, laktóz fermentáció gázképzéssel b, dextróz fermentáció gázképzéssel c, dextróz fermentáció gázképzés nélkül

14 18. Christensen medium(sterile) and: - Urease+ - Urease- Christensen táptalaj (ureum, cukrok és fenolvörös indikátor) urease + baktériumok: lila urease - baktériumok: sárga

15 19. Corynebacterium diphtheriae on Clauberg (tellurite) and on Löffler medium Corynebacterium diphtheriae Clauberg táptalajon A táptalaj tellursót tartalmaz, a baktériumok redukálják azt, a telepek fekete színûek. Szaguk fokhagyma szagára emlékeztet.

16 20. Mycobacterium tuberculosis on Löwenstein medium Mycobacterium tuberculosis Löwenstein-Jensen táptalajon: Tojást, burgonyalásztet, aszparagint, glicerint, szelektáló anyagként malachitzöldet tartalmaz. A baktérium kenyérmorzsa szerû telepeket képez rajta.

17 21. Leptospira on Korthof medium Leptospira Korthoff táptalajon A táptalaj peptont, sókat, valamint 10% nyúlsavót tartalmaz. 30 C-on inkubáljuk 6-7 napig. A baktérium tenyészet dohányfüst szerûen gomolyog a folyékony táptalajban, ha elõbb megrázzuk a kémcsövet.

18 ??. TCBS-táptalaj TCBS táptalaj Összetétel: Tioszulfát Citrát Bile (epe) Szacharóz A brómtimolkék indikátort tartalmazó, lúgos ph-jú táptalajon a vibriók aranysárga telepeket képeznek

19 22. Bacillus cereus on agar and blood agar plate medium Bacillus cereus agar táptalajon Szabálytalan szélû, egyenetlen felszínû, ún. "medúza-fõ" szerû telepek, telepek szélén kifutókkal.

20 23. Clostridium tetani in Holman (chopped meat) and in thioglycolate medium Clostridium tetani Holman táptalajon: gázképzõdés nincs, parafinndugó nem emelkedik fel. A táptalaj enyhén zavaros. A hús nem emésztõdik (proteolitikus enzim O) Thioglikolátos táptalajon: gázképzõdés nincs A táptalaj enyhén zavaros. A hús nem emésztõdik (proteolitikus enzim O) 24. Gasgangraene clostridia in Hollman and thioglycolate medium Gázgangréna clostridiumok Holmann és thioglycolat táptalajon A táptalajt megzavarosítják, a fõtt húst emésztik (proteolitikus enzimek), a paraffindugó a gázképzés miatt felemelkedik.

21 III. Reactions and methods 1. Elek test ELEK PRÓBA Patogén, toxint termelõ Corynebacterium diphtheriae törzsek elkülönítésére szolgáló agar-gél diffúziós precipitáció.

22 2. Widal's type tube agglutination tests: (a) Gruber-Widal reakció (b) Weil-Felix reakció (c) Wright reakció (d) Paul-Bunnel reakció Csõ-agglutináció (kvantitatív agglutináció) Gruber-Widál reakcióban az antigén: S. typhi (hastífusz) Titer:1:200 Weil-Felix reakcióban az antigén: Proteus OX 19 (kiütéses tífusz) Titer: 1:800 Wright reakcióban az antigén: Brucella (Brucellosis) Titer: 1:80 3. Aspecific serological tests for the diagnosis of syphilis: Wasserman reaction, RPR, VDRL

23 4. Influenzavirus hemagglutination (HA) and haemagglutination inhibition (HAI), and complement fixation (CF) test - microtitre (Takátsy's) plate Influenza vírus hemagglutináció (HA) Hemagglutináció gátlás (HAG) Komplement kötési reakció (KKR) 5. Diagnosis of fresh rubella infection (HAI) 6. ELISA test: HIV-1 and HIV-2 hepatitis viruses 7. Verification of HIV-1 infection by Western-blot

24 8. Phage typing Fágtipizálás Szerológiai és biokémiai módszerekkel tovább nem differenciálható baktériumtörzsek között megfelelõ, virulens fágokkal további különbségek tehetõk. (Agar lemezre szélesztett baktériumokon a megfelelõ fág litikus plakkot hoz létre) Fágtipizálás Szerológiai és biokémiai módszerekkel tovább nem differenciálható baktériumtörzsek között megfelelõ, virulens fágokkal további különbségek tehetõk. (Agar lemezre szélesztett baktériumokon a megfelelõ fág litikus plakkot hoz létre) 9. Blood cultures. Rules and regulations of collecting sample(s) for blood culture bottles 10. Gram staining 1. kristályibolya és Na-oxalát 1:4 keveréke - 2 perc 2. Lugol oldat - 1 perc 3. 96%-os alkohollal differenciálás 4. carbol-fuchsinos utófestés - 1 perc 5. öblítés - szárítás (Gram +: sötétlila, Gram -: piros) 11. Ziehl-Neelsen staining 1. fixált kenetre karbol-fuchsin oldat 2. 3x gõzölgésig melegíteni 3. sósavas alkohollal differenciálni 4. utófestés: metilénkék oldat 1-2 perc 5. vízzel lemosni - szárítás Mycobacterium, baktérium spóra kimutatására 12. Antibiotic susceptibility tests with disc diffusion on agar plate with a Gram + and Gram bacterium 13. Commercial kits for identification (ATB, API systems)

25 IV. Ready made microscopic preparations 1. With Gram staining - Staphyloccus sp. Staphylococcus sp. Gram festéssel Gram + coccusok szõlõfürthöz hasonló elhelyezkedésben - S. pyogenes Streptococcus pyogenes - Gram festés Gram + coccusok láncokban

26 - S. pneumoniae Streptococcus pneumoniae - Gram festés Gram + coccusok párokban, lándzsa alak - Neisseria sp. Neisseria sp - Gram festés Gram - coccusok párokban, bab alak

27 - E. coli Escherichia coli - Gram festés Gram - pálca alak - Haemophilus influenzae Haemophilus influenzae - Gram festés Gram - rövid pálcák vagy coccobacillusok

28 - Bacillus cereus Bacillus cereus - Gram festés Gram + pálcák, centrálisan nem deformáló spóra festõdési hiányként látszik - Gas-gangraene and tetanus spores Clostridiumok - Gram festés Gram + pálcák C. tetani: kerek, terminálisan deformáló endospóra C. perfringens és egyéb gáz gangréna clostridiumok - ovális, excentrikus v. subterminálisan deformáló endospóra

29 2. With methyleneblue staining - Neisseria gonorrhoeae in pus Neisseria gonorrheae urethra váladékban metilénkék festés - Candida albicans from culture Candida albicans - Metilénkék festés Nagy sarjadzó gomba sejtek

30 - Trichomonas vaginalis and soor (Candida albicans) positive vaginal smear Candida albicans - Metilénkék festés Hüvelyváladék Trichomonas vaginalis hüvelyváladékban Metilénkék festés Nagy metakromáziásan festõdõ flagellata, sötéten festõdõ maggal??. Neisser-festéssel: C. diphtheriae Corynebacterium diphtheriae - Neisser festés Vékony sárgára festõdõ pálcák, végükön lila színû Babes-Ernst szemcsék (volutin szemcsék)

31 3. Silver impregnation: Leptospira sp. Leptospira sp - Ezüst impregnáció 4. Ziehl-Neelsen staining: Mycobacterium tuberculosis in sputum Mycobacterium tuberculosis köpetben - Ziehl Neelsen festés - saválló piros pálcák - kék coccusok, fehérvérsejtek

32 5. Thin blood film (Giemsa): - Plasmodium falciparum Plasmodium falciparum - Giemsa festés - Vérkenet Gyûrû alak a vörösvérsejtekben - Trypanosoma brucei Trypanosoma brucei - Giemsa festés - vérkenet A centralis mag és a nagy kinetoplast pirosra festõdik

33 6. Anorectal cellulose-tape preparation (native): Enterobius vermicularis eggs Enterobius vermicularis féregpete - Anorectalis cellux készítmény (natív) Az ovalis pete egyik oldala lapított

34 V. Principles of instrumentation of specimen collection 11. Cotton wool swab 2. Diphtheria (D) tube 3. Laryngeal swab 4. Typhus (Ty) container 5. Sputum container 6. Transpocult media 7. Uricult plus 8. Gastro-duodenal tubes 9. Cellulose tape and glass slides 10. Faeces container 11. Sterile syringes and hypodermic needles VI. Principles of methods of specimen collection 1. Skin, wound and eye infections 2. Anterior nares, oro-pharynx, larynx 3. Acute and chronic medial otititis, paranasal sinusitis 4. Bronchitis, pneumonia (sputum) 5. Duodenal fluid 6. Mid-stream urine, urine via catheter and bladder puncture 7. Genital infections 8. Cerebrospinal fluid 9. Synovial fluid 10. Biopsy specimen 11. Faeces for the diagnosis of parasitic infections 12. Blood film (malaria, trypanosomiasis) 13. Paired sera for serological tests VII. Tests to be performed by the students! 1. Wet-mount 2. Preparation and fixation of smears with cotton wool swabs and/or loop from broth and/or plate 3. Stainings (a) Gram staining (fixed smear) (b) Ziehl-Neelsen (fixed sputum) 4. Bacterium inoculation (a) Surface streaking (Plating-out of a microbial culture) for isolation of bacterial colonies

35 From fluid to solid medium From solid to solid medium (b) Preparation of bacterial lawn cultures for susceptibility, as well as phage typing tests (c) Transfer of bacteria From solid to fluid medium From solid to slant and tube agar From fluid to fluid medium 5. Rapid biochemical reactions (a) clumping (rabbit plasma) (b) Oxidase reaction (c) Catalase reaction (d) Indole (on U-I medium with Kovacs reagent) 6. Slide agglutination: Escherichia coli from eosine methyleneblue medium