I. Differenciáltatott idegi őssejtek implantációja kifejlett központi idegrendszerbe
|
|
- Zoltán Hajdu
- 8 évvel ezelőtt
- Látták:
Átírás
1 Zárójelentés a Sejtbeültetés a központi idegszövetbe: a bevitt sejtek differenciációs állapota és a befogadó szövet harmonizációja c. OTKA-posztdoktori támogatás keretében nyert eredmények összefoglalása. Korábbi munkánkban (Demeter és mtsai. 2005) megmutattuk, hogy az idegi őssejtek sorsát alapvetően befolyásolja a szöveti környezet. Míg a fejlődő, embrionális idegrendszerben az embrionális idegi őssejtek idegsejt irányba differenciálódnak és bevándorolnak a befogadó szövet sejtjei közé, addig az idegsejt-képzés szakaszán túl lévő központi idegrendszer szövetében, beültetés után megőrzik differenciálatlan állapotukat, és nem keverednek a befogadó szövet sejtjeivel. A felnőttkori idegrendszerben a beültetett őssejtek differenciációjának elmaradását egyaránt okozhatja a differenciációt indukáló, illetve a differenciálódó sejtek túlélését biztosító faktorok hiánya. A posztdoktori pályázat keretében végzett munkám során kerestem azokat a tényezőket, amelyek elősegíthetik a beültetett idegi őssejtek és/vagy idegsejtek integrálódását/túlélését a kifejlett agyszövetben. I. Differenciáltatott idegi őssejtek implantációja kifejlett központi idegrendszerbe Mivel felnőttkori idegsejt képzés csak kis mértékben és csak néhány agyterületen történik, feltételezhető, hogy az idegsejt irányú differenciációt indukáló faktorok csak korlátozott mértékben és meghatározott területken fordulnak elő (Seaberg és van der Kooy 2002). Idegi irányba már elkötelezett sejtek beültetése megnövelheti az integrálódó sejtek arányát. A korábbi implantációs kísérletekben használt NE-4C idegi őssejtek sok tekintetben hasonlítanak az elkötelezetlen, embrionális idegi őssejtekhez (nestin és SSEA-1 immunreaktivítás (1. ábra), rövid sejtciklus). Feltételezhető volt, hogy az NE-4C sejtek in vitro differenciáltatásával, amelynek során ideg- és asztroglia sejtek jönnek létre (Schlett és Madarász 1997), olyan sejteket nyerünk, amelyek nagyobb arányban képesek integrálódni a felnőttkori idegrendszerbe. Az érett idegsejtek nem vihetőek szuszpenzióba mivel kifejlett dendritjük és axonjuk olyan mértékben sérülne, hogy az idegsejtek pusztulásához vezetne, ezért a korábbi beültetéseknél használt neuroektodermális őssejtek helyett fiatal idegsejteket vagy 1
2 idegsejt irányba már elkötelezett, de még osztódó sejteket (progenitorok) lehet a beültetéshez használni. A közelmúlt kutatásai azt mutatták, hogy a fejlődő agykéregben az első idegsejtek megjelenésével együtt kialakuló radiális-glia sejtek szintén létrehoznak idegsejteket, azaz idegsejt-progenitorként is viselkednek (Hartfuss és mtsai 2001; Götz és mtsai. 1998). nestin SSEA-1 nestin / SSEA-1 A B C 1. ábra A neuroektoderma marker nestin intermedier fillamentum (A és C) és SSEA-1 sejtfelszíni őssejt antigén (B és C) egyaránt kimutatható imuncitokémiai festéssel az NE-4C sejtek indukálatlan tenyészeteiben (1. stádium) Mérce: 25 μm Első lépésként meghatároztuk, hogy az NE-4C sejtvonal in vitro differenciálódásának melyik stádiumaiban tartalmaznak a tenyészetek a legnagyobb számban fiatal ideg-, illetve radiális-glia sejteket. Az NE-4C sejtvonal retinsav (RA) indukálta in vitro idegi differenciációját jellemző stádiumokat az I. táblázat foglalja össze. A differenciáció 3-4. stádiumára jellemző az idegsejt előalakok kialakulása (Schlett és mtsai 1997 és 2/A-B ábra) amelyeket βiii-tubulin kifejeződésük alapján azonosíthatunk. Az in vitro idegi sejtdifferenciálódás ezen stádiumában jelentősen megnő a kérgi radiális-glia sejtekre jellemző pax6 gén expressziója és a kérgi proneurális bhlh transzkripciós faktor, a neurogenin2 átíródása (2/C ábra) (Kageyama és Nakanishi, 1997). A radiális-glia sejtekre jellemző RC2-t fehérjét kifejező sejtek, a pax6 gén aktivációjával együtt már a differenciáció korai stádiumaiban (2-4. stádium) megjelennek, és nagy számban vannak jelen a retinsavval indukált NE-4C tenyészetekben az idegsejt képződés fő szakában (2/A-B ábra). 2
3 száma I. Táblázat Az NE-4C neuroektodermális idegi őssejt-vonal RA indukálta idegi irányú differenciációjának jellemző stádiumai Stádium neve Indukció napja Sejtbiológiai események 1. Indukálatlan 0 folyamatos sejtosztódás egy-sejt réteg 2. Kezdeti Aggregáció Kivándorlás Idegsejt érés Asztrogliasejt képzés 10- osztódás és szelektív érzékenység a depolarizációra (Herberth et al 2002); változó sejtadhézió (Schlett et al 2000; Tárnok et al 2002) csökkenő osztódás (Schlett and Madarász 1997) aggregáció; idegsejtképződés kezdete sejtkivándorlás az aggregátumokból; idegsejtképződés, nyúlványnövekedés csökkenő idegsejtképződés; idegsejt érés (Herberth et al 2002; Jelitai et al 2002; 2006); idegsejtek hálózatának kialakulása; aljzatsejtek osztódása idegsejtek aggregációja; neurit kötegek kialakulása; asztroglia-sejtek képzése; aljzatsejtek osztódása Tenyészet Jellemző sejtformák mintázata Sejtalakok Fenotípus markerek egy-sejt réteg aggregátumok kivándorló sejtek egy-sejt rétege a fellazuló aggregátumok körül idegsejtek hálózata az egy-sejt réteget alkotó aljzatsejteken idegsejt kötegekkel összekötött idegsejtaggregátumok az egy-sejt réteget alkotó aljzatsejteken egyforma, epitél alakú őssejtek egyforma, epitél alakú őssejtek őssejtek; radiális glia sejtek; idegsejt előalakok radiális glia sejtek; őssejtek; idegsejt előalakok idegsejt előalakok ; differenciálódó idegsejtek; őssejtek eltérően differenciált idegsejtek; asztroglia-sejtek; őssejtek Nestin (Schlett K és Madarász E, 1997)5}, SSEA1 Nestin (Schlett K és Madarász E, 1997)5}, RC2, SSEA-1 SSEA-1, Nestin, RC2 βiii-tubulin, neurofillamentum (Schlett K és mtsai., 1997) RC2, Nestin SSEA-1 βiii-tubulin, MAP2, NeuN, βiii-tubulin, MAP2, NeuN synaptophysyn, NMDA receptorok (Jelitai M és mtsai., 2002) Nestin, SSEA1 βiii-tubulin, MAP2, NeuN, synaptophysyn, NMDA receptor (Jelitai M és mtsai., 2002) GFAP, S100β (Schlett K és Madarász E, 1997)5} és nem publikált adatok Nestin, SSEA1 3
4 2. ábra Az RC2 és βiii-tubulin immunreaktív sejtek az NE-4C sejtvonal indukálatlan (1. stádium) és RA indukált (2-4 stádium) tenyészeteiben. A fázis RC2 βiii-tubulin RC2- biiitubulin 4. sádium 3. sádium 2. sádium 1. stádium 4
5 B Relatív érték a korai 4. sádiumához viszonyítva [%] RC2 βiii-tubulin 11. korai 2 2. késői korai 5 4. késői 64. fejlődési stádiumok A: Reprezentatív fázis kontraszt (első oszlop) és RC2 (második oszlop; piros), βiiitubulin (harmadik oszlop; zöld) valamint kettős (4. oszlop) immunfestett mikroszkópos képek az NE-4C sejtvonal korai differenciációs szakaszaiból (1-4 stádium). A RA kezelés hatására az 1. stádiumra jellemző egysejtréteg (első sor) felbomlik, és a sejtek aggregátumokat képeznek. Az alakuló aggregátumokban, a 2. stádium végétől jelennek meg az első differenciált, RC2 immunreaktív sejtek (második sor). Az első éretlen, βiiitubulin immunreaktív idegsejt-előalakok ezt követően a kompakt aggregátumokban jelennek meg a differenciació 3. stádiumában (harmadik sor). A differenciáció 4. stádiumában (4. sor) a túlnyomórészt RC2-t vagy βiii-tubulin-t kifejező sejtek kivándorolnak az aggregátumokból. A kettős immunfestés (4. oszlop) jól mutatja, hogy a két sejtmarker nem fejeződik ki azonos sejtben. mérce: 100 μm B: A különböző sejttípusok diferenciációjának mértékét az immunreaktív területek meghatározásával állapítottuk meg. Négy független kísérlet során, egyenként 30 mikroszkópos területen (10x objektívvel) megmértük az RC2 és βiii-tubulin immunreaktív területeket. A grafikon egy reprezentatív kísérlet eredményét mutatja. A két immunjelölés összevethetősége miatt a mért adatokat a korai 4. szakasz adataihoz, mint 100 %-hoz viszonyítottuk. Az adatok egyértelműen mutatják, hogy az RC2 immunreaktív sejtek az idegsejtek kialakulása előtt jelennek meg, és arányuk korai 4. szakaszban éri el a maximumot, majd csökken. Ugyanakkor az idegsejtekre jellemző immunreaktivítás a teljes 4. szakaszban növekszik. 5
6 C 1.s. 2.s. 3.s. 4.s. 5.s. ngn2 mash1 math2 pax6 hprt C: Az idegsejt irányú elköteleződésre jellemző transzkripciós faktorok expressziójának RT-PCR vizsgálata a különböző differenciációs szakaszokban. A differenciálatlan NE-4C tenyészetekben (1. stádium) (1.s.) nem fejeződnek ki proneurális (neurogenin-2 (ngn2), mash1), neuronális (math2) bhlh faktorok, vagy a korai előagy idegi irányú elköteleződését jelző pax6 transzkripciós faktor. Az idegsejtek kialakulása előtt (2. stádium) (2.s.) illetve az idegsejt-prekurzorok megjelenésével egy időben (3. stádium) (3.s.) jelentősen megnő a proneurális gének és a pax6 expressziója. A neuronális math2 mrns-e csak az idegsejteket már nagy számban tartalmazó tenyészetekben (4-5. stádium) (4.s. és 5.s.) volt kimutatható. Az eredményeket a hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (hprt) gén mrns-ének szintjéhez viszonyítottuk. A fentiek alapján implqntációhoz a differenciáció 4. stádiumában lévő zöld fluoreszcens fehérjét kifejező NE-4C sejteket használtunk. A sejt-szuszpenzióból, mely főként radiális glia és fiatal idegsejteket tartalmaz, sejtet ültettünk be kifejlett állatok agykérgébe és hippocampus-ába. A sejtszuszpenzió egy részét tovább tenyésztettük. Minden esetben megállapítottuk, hogy az in vitro tovább-tenyésztett sejtek 10 nap alatt, nagy számban differenciálódtak ideg és asztroglia sejtekké, in vitro (3. ábra). Az implantált sejtek sorsát hisztológiai/immunhisztológiai módszerrel követtük. A befogadó-állatok agyát a beültetést követő 10. napon fixáltuk, és a beültetett területeket fagyasztott metszetek készítése után immuncitokémiai módszerrel vizsgáltuk. A zöld fluoreszcencia alapján azonosított beültetett sejtek között nagy számban azonosítottunk GFAP-t kifejező asztroglia sejteket (4. ábra), de idegsejtekké differenciált NE-4C sejteket nem találtunk. 6
7 Összefoglalás: A kifejlett idegrendszer nem indukálta idegsejtek kialakulását már elkötelezett idegi progenitorokból sem. Nem támogatta sem a fiatal idegsejtek életbemaradását, sem integrációját a befogadó szövetbe. Következtetès: Miután az NE-4C sejtek rendelkeznek a neuron-képzés lehetőségével, az adatok azt mutatják, hogy az intracrebrális neuron-fejlődés elmaradását a kifejlett előagy szöveti környezete akadályozta 7
8 Idegsejtek Asztroglia-sejtek Endogén-GFP βiii-tubulin GFAP Endogén-GFP Endogén-GFP βiiitubulin Endogén-GFP és GFAP 3. ábra A differenciáció 4. stádiumában az implantációhoz használt sejtszuszpenzióból az eredeti sejtszámnak megfelelő sejtsűrűségben visszaültetett sejtek további 10 napos in vitro tenyésztés után jelentős számban tartalmaztak ideg (jobb oszlop) és asztroglia sejteket. Mind az ideg (βiii-tubulin) mind az asztroglia (GFAP) irányba differenciált sejtek megőrizték zöld flureszceins fehérje (GFP) expressziójukat. Mérce: 100 μm 8
9 A Ctx DAPI Hip Ctx GFP Hip 4. ábra (9. és 10. oldal) A: Az előagy kéregbe ültetett sejteket GFP expressziójuk alapján azonosítottuk. Hip: hippocampus, Ctx: cortex B: A GFP-t kifejező sejtek jelentős része GFAP-t tartalmaz (fehér nyíl). A GFAP immunreaktivitást (piros) optikai szeletelés (Zeiss apotom rendszer) segítségével azonosítottuk a vizsgált sejtekben. Az így elkészített képeken egyértelműen láthatók voltak a GFP-jelölt (zöld) sejtek között az asztroglia irányba differenciált és nem differenciált (GFAP immunnegatív) sejtek is (fehér háromszög). mérce: A: 500 μm, B: 50 μm 9
10 B Fluoresceins mikroszkópos kép Apotom kép Endogén-GFP és GFAP GFAP Endogén-GFP 10
11 II. Az NE-4C sejtvonal regionális elkötelezettsége és a regionális elkötelezettség kialakulásának vizsgálata Az idegrendszer tagolódása már az idegsejtek képzése előtt megkezdődik majd az egyedfejlődés folyamán fokozatosan növekedve alakul ki az idegsejtek fenotípusában is megjelenő igen nagyfokú változékonyság. Az idegsejtek végső fenotípusa nagymértékben függ kialakulásuk helyétől. Így, ha az NE-4C sejtek hordoznak pozíció (testtengelyek) szerinti elkötelezettséget, feltételezhető, hogy az általuk létrehozott idegsejtek nem képesek integrálódni az elkötelezettségüktől eltérő területeken. Az idegi differenciáció és az idegi őssejtek vizsgálata kapcsán felvetődő kérdés, hogy az idegi őssejtek milyen mértékben hordozzák az eredetüknek megfelelő regionális elköteleződés jegyeit, illetve ezek milyen mértékben változtathatóak (Nakagawa és mtsai. 1996; Hitoshi és mtsai. 2002; Santa-Olalla és mtsai. 2003; Hack és mtsai 2004). Az elmúlt években publikált adatok részben egymásnak ellentmondó eredményekről számoltak be. A vizsgálatok során az idegi őssejteket neurosphere kultúrában tartották fenn in vitro. Az ilyen körülmények között tenyésztett sejtek között ugyan nagy számban vannak jelen idegi őssejtek, de azok mellett jelentős a különféle irányban és mértékben differenciálódott sejtek aránya is (Campos és mtsai 2004). Ha a regionális elköteleződés függ a sejt differenciáltsági fokától, akkor az eredményeket nagymértékben befolyásolhatja, hogy az adott neurosphere milyen mértékben tartalmazott őssejteket illetve differenciált sejteket. Az idegsejt-képzés és a pozícionális elköteleződés összefüggésének tanulmányozására az NE-4C sejtvonal differenciálatlan és differenciált tenyészeteiben vizsgáltuk egyes in vivo régió-specifikusan kifejeződő gének aktiválódását. A proneurális neurogenin2 és a mash1 bhlh gének mellett olyan homeo-gének expresszióját vizsgáltuk, amelyek in vivo kifejeződése lefedi a központi idegrendszer teljes anterior-posterior tengelyét, és sok dorso-ventrálisan tagolt területét, és amelyek többsége in vivo egymással nem átfedő területeken fejeződik ki (5/A ábra). Az idegsejtek kialakulásában kulcsszerepet játszó proneurális bhlh gének közül a neurogenin2 és a mash1 egymással nem átfedő területeken fejeződnek ki (Fode és mtsai 11
12 2000). Az NE-4C sejtvonal differenciációja során mindkét bhlh transzkripciós faktor expressziója jelentősen megnő az idegsejtképződés szakaszában (2/C ábra). A fejlődő idegrendszer regionális tagolódásában fontos szerepük van a különböző homeo-box transzkripciós faktoroknak is. A vizsgált homeo -gének közül csak az Otx2 aktivitása volt jelentős a differenciálatlan sejtekben (1. stádium). Az összes többi gén mrns-e nem, vagy csak igen kis mértékben volt kimutatható (5/B ábra és Herberth és mtsai. 2005). Az otx2 azonban a korai, neuruláció előtti embrió-pajzsban is expresszálódik: az epiblast sejtek és az embrionális (ES) őssejtek mindegyikének jellemzője (Perea-Gomez és mtsai., 2004). Az adatok tehát azt mutatják, hogy az NE-4C sejtvonal testtengely szerinti elkötelezettséggel nem rendelkezik. A differenciált, idegsejtekben gazdag NE-4C tenyészetekben ugyanakkor, az összes vizsgált regionálisan kifejeződő gén aktiválódott. A megfigyelés azt jelezte, hogy az NE-4C idegi őssejtekből kialakuló idegsejtek képesek lehetnek igen különböző agyi régióknak megfelelő differenciációs programok szerint fejlődni. 12
13 Dlx2 (Distal-Less homeobox 2) ventrális előagy Emx2 (Empty spiracles homológ 2) dorzális előagy Pax6 (Paired box gene 6) dorzális előagy Otx2 (Orthodenticle homolog 2) elő-középagy Otx3 (orthodenticle homolog 3) (Dmbx1) középagy En1 (Engrailed1) középagy Gbx2 (Gastrulation Brain homeobox 2) Isthmus Hoxb2 (Homeo box B2) 2. rombomérától caudalisan 1. s. 4. s. A 5. ábra Régió-specifikus gének expressziója B NF- Dlx Emx2 A: A vizsgált Regionálisan eltérő területeken kifejeződő (régió-specifikus) transzkripciós faktorok expressziós mintázatának sematikus képe 9,5 napos egér embrióban. B: Régió-specifikus transzkripciós faktorok expressziója az NE-4C sejtvonal differenciálatlan (1. stádium) (1.s.) és differenciált (4. stádium) (4.s.) tenyészeteiben. Az idegsejt differenciáció mértékét az idegsejtekben kifejeződő intermedier filamentum-fehérje, a neurofilamentum nehéz láncának (nfh) aktivációja mutatja. A differenciáció 1. stádiumában csak az otx2 transzkripciós faktor aktivitása jelentős, míg a differenciált tenyészetben (4. stádium) az összes vizsgált régió-specifikus gén mrns-e kimutatható. Az eredményeket a hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (hprt) gén mrns-ének szintjéhez viszonyítottuk Pax6 Otx2 SCL Gata3 Otx3 Gbx Hoxb Hpr Differenciálódó különböző régió-specifikus géneket expresszáló - tenyészetekből izoláltuk a fennmaradó NE-4C őssejteket. A differenciáció 4. és 6. stádiumából izolált őssejtek (6/A-B), elkötelezetlen őssejt-állapotukban regionális elköteleződést nem mutattak (6/E). Indukció után (6/C-D) azonban, a differenciált tenyészetekben azonosítható volt mind az elő- (emx2) mind az utóagyi (hox2b) területekre jellemző homeo-box gén aktivitása (6/E). 13
14 A 6. stádium B 6. stádium βiii-tubulin / SSEA-1 BrdU- NeuN NeuN BrdU C 4. stádium D 6. stádium βiii-tubulin GFAP E NE- emx hoxb hpr 1.s 4.s 1.s 4.s 1.sz 4.s 6. ábra Az NE-4C differenciált tenyészeteiben fennmaradnak differenciálatlan idegi őssejtek A: A differenciáció 6. stádiumában jelen lévő differenciálatlan őssejtek SSEA-1 immunreaktivításuk alapján azonosíthatóak. B: A differenciált tenyészetekben fixálása előtt alkalmazott 20 perces BrdU kezeléssel számos osztódó sejtet azonosítottunk a NeuN immunreaktív idegsejtek mellett. C-D: Differenciált tenyészetekből osztódási potenciáljuk alapján szelektált klón (0905) újbóli RA kezelés hatására az eredeti NE-4C sejtvonallal megegyező időrendben ideg (C) és asztroglia (D) sejteket hoz létre. E: Sejtosztódási kapacitásuk alapján szelektált, differenciációs képességüket megőrző klónok (0901; 0905; 1204) regionális elköteleződésének RT-PCR vizsgálata. A differenciálatlan (1. stádium) (1.s.) állapotban lévő sejtek az eredeti NE-4C sejtvonalhoz hasonlóan sem az előagyra jellemző emx2-t, sem az utóagyban kifejeződő hox2b-t nem expresszálják, míg a differenciált tenyészetekben (4. stádium) (4.s.) mindkét gén mrns-e kimutatható. Az eredményeket a hypoxanthine guanine phosphoribol transferase (hprt) gén mrnsének szintjéhez viszonyítottuk. mérce: 500 μm az A és 50 μm a B-D képeken 14
15 A fentiek alapján, a regionális elköteleződés az idegszöveti differenciáció előrehaladott stádiumaiban megjelenő sejttípus(ok)hoz köthető. A részletesebb időbeli vizsgálataink megmutatták, hogy a proneurális gének aktiválódásával párhuzamosan megjelentek a poszterior területekre jellemző (gbx2, hox2b) régiós-pecifikus gének mrns-ei is, míg más elsősorban elő- és középagyi területekre jellemző transzkripciós faktorok (emx2, dlx2, otx3) aktivitása csak a differenciáció 4. szakaszában vált jelentőssé (7/A ábra). Az anterior és poszterior területekre jellemző gének expressziós mintázatában talált különbséget okozhatja az idegi differenciációt indító RA jelenléte, amely ismerten poszteriorizáló hatást gyakorol a korai idegszövetre (Avantaggiato és mtsai. 1996). A poszteriorizáló hatás és a regionális gének aktivitása közötti összefüggés vizsgálatához a tenyészeteket folyamatos (168 órás) és standard (72 órás) RA kezelésnek tettük ki. A 4. stádiumban vett mintákban a RA poszteriorizáló hatása az otx2 gén - amelyről ismert, hogy expresszióját a RA befolyásolja (Avantaggiato és mtsai 1996) - mrns-ének szintjében volt tetten érhető. Ugyanakkor, a RA-kezelés hosszától függően nem találtunk különbséget sem az anterior emx2, sem a poszterior gbx2, vagy hoxb2 gének aktivitása között 7/B ábra). 7. ábra (17. oldal) Régióspecifikus gének RT-PCR vizsgálata az NE-4C sejtvonal a differenciációja során A: Az elő- (emx2, dlx2) és középagyi (otx3) területeken kifejeződő homeobox transzkripciós faktorok mrns-e csak a math2-t is kifejező, differenciált tenyészetekben (4-5. stádium) (4.s.) (5.s.) van jelen jelentős mennyiségben. A posterior területekre jellemző gének (gbx2, hox2b) mrns-e már a differenciáció 2. stádiumában (2.s.) is kimutatható. Az otx2 gén folyamatosan aktív, de a RA kezelés idején a az expresszió mértéke csökken. B: A folyamatos RA kezelés hatására sem változott jelentősen, sem az előagyi (emx2, pax6), sem az utóagyi (gbx2, hoxb2) gének expressziójának mértéke. A RA posteriarozáló hatását ugyanakkor jól mutatja az otx2 kifejeződésének jelentős csökkenése folyamatos RA kezelés hatására. Az első oszlopban az 1. stádium (1.s), a 2-3. oszlopban a differenciáció 4. stádium (4.s.) a RA kezelés kezdetét követő 7. napon rövid (72 óra) és folyamatos (168 óra) RA kezelt mintákat hasonlítottunk össze. Az eredményeket a hypoxanthine guanine phosphoribol transferase (hprt) gén mrnsének szintjéhez viszonyítottuk. 15
16 A math2 1. s. 2. s. 3. s. 4. s. 5. s. B RA kezelés hossza [óra] : 1.s 4. s. (7. nap) dlx1 emx2 emx2 pax6 otx2 otx3 gbx2 otx2 gbx2 hoxb2 hoxb2 hprt hprt A párhuzamosan aktiválódó differenciációs útvonalak alapján feltételezhető volt, hogy az NE-4C sejtekből különböző típusú idegsejtek fejlődhetnek. A regionális sokféleséget mutató mintákban megvizsgáltuk a glutamaterg és a GABAerg transzmitter fenotípusra jellemző gének kifejeződését valamint néhány olyan régióspecifikus gén aktivitását, amelyek jellemzően a monoaminerg idegsejtekben illetve az azok keletkezésének helyén fejeződnek ki, in vivo. Az RT-PCR vizsgálatok azt mutatták, hogy a differenciált tenyészetekben aktiválódnak a különböző transzmitter fenotípushoz köthető gének azaz az NE-4C differenciált tenyészeteiben többféle idegsejt fenotípus kialakulására is van lehetőség (8. ábra). Az eltérő neurotranszmitter fenotípusú idegsejtek kialakulását immuncitokémiai módszerrel is ellenőriztük. A differenciáció 6. stádiumában fixált tenyészetekben nagy számban találtunk GABAerg és glutatamaterg (GABA és VGAT illetve Vglut2 immunreaktív) idegsejteket. Elvétve (<1%) azonosítottunk szerotonin tartalmú neuronokat, de egyáltalán nem találtunk tirozin-hydroxiláz immunpozitív sejteket (8. ábra és II táblázat). 16
17 II. Táblázat A különböző transzmitterfenotípusok előfordulási gyakorisága 100 %=NeuN immunreaktív sejtek száma Transzmitter fenotípus Vizsgált marker Idegsejtek aránya GABA-erg GABA, VGAT 57,7±8,2 Glutamaterg VGlut2 44.2±1,6 Cathecolaminerg TH Nem volt azonosítható Serotonerg 5HT < 1 8. ábra (19. oldal) Különböző transzmitter fenotípusú idegsejtek megjelenése az NE-4C sejtvonal differenciációja során gén aktivitás vizsgálata RT-PCR módszerrel a differenciáció 1-5. stádiumaiban (A) és immuncutokémiai festés a differenciáció 6. szakaszában lévő stádiumában (B-E). A: Az éret idegsejteket tartalmazó (neurofillament nehéz lánc mrnst kifejező tenyészetekben) egyaránt kimutatható volt a GABAerg fenotípusra jellemző glutaminsavdekarboxiláz 65 és 67 (gad65 és gad67), a vezikuláris GABA transzporter (vgat) és glutamaterg idegsejtekre jellemző vezikuláris glutamát transzporter 2 (vglut2). A monoaminerg idegsejtekre jellemző illetve azok keletkezésének helyén kifejeződő réióspecifikus trabszkripciós faktorok (phox2b, GATA3, nkx2.2 és lmx1b) expressziója szintén jelentősen megnőtt az érett idegsejteket tartalmazó tenyészetekben. Az eredményeket a hypoxanthine guanine phosphoribol transferase (hprt) gén mrns-ének szintjéhez viszonyítottuk. B: A MAP2 (piros) immunreaktív idegsejtek egy része VGAT (vezikuláris GABA transzporter) (zöld) immunpizitív (nyilak), míg más részük nem mutat VGAT immunreaktivítást (csillagok). C: Idegsejt specifikus sejtmag marker (NeuN) (kék) és GABA (barna) kettős immuncitokémiai festés. D: Idegsejt specifikus sejtmag marker (NeuN) (barna) és Vglut2 (kék) kettős immuncitokémiai festés. E: Serotonin (5HT) immunreaktív idegsejtek B-E mérce: 50 μm 17
18 A nf-h gad-65 gad-67 vgat vglut2 lmx1b nkx2.2 gata3 phox2b hprt 1. s. 3. s. 4. s. 5. s. VGAT MAP2 MAP2 / VGAT B1 B2 B3 GABA - NeuN NeuN VGlut2 5-HT C D E 18
19 Az NE-4C sejtvonallal végzett génexpressziós vizsgálatok egy részét megismételtük az embrionális őssejt (ES) R1 (Nagy és mtsai. 1993) és embrionális carcinoma (EC) P19 (Edwards és McBurney, 1983) sejtvonalakon is. Mindkét sejtvonal RA hatására jelentős mértékben idegi irányba differenciálódik (8/A ábra). A RA kezeléssel differenciáltatott ES és EC sejtek, hasonlóan az NE-4C sejtvonalhoz, mrns szinten mutatták a regionális és transzmitter fenotípusban megjelenő sokféleséget (8/B ábra). A ES P19 βiii-tubulin B days 0 EB4+1RA EB4+2RA EB4+3RA EB4+4RA +Gel7 0 RA1 RA2 RA2+1 RA2+2 otx2 emx2 dlx2 hoxb2 ngn2 mash1 math2 vglut2 gad65 vgat2 hprt 19
20 9. ábra (20. oldal) Egér embrionális (ES) őssejtek és embrionális carcinoma (EC; P19) sejtvonalak RAindukált in vitro differenciációja. A: βiii-tubulin immuncitokémiai festés az ES sejtek in vitro differenciációjának 15. és a P19 EC sejtek fejlődésének 4. napján. mérce: 50 μm B: RT-PCR génexpressziós vizsgálat a RA indukált differenciáció során. A differenciáció alatt mindkét sejtvonalban megjelennek a különböző agyterületekre jellemző proneurális (ngn2, mash1) és homeobox (emx2, dlx2, hoxb2) transzkripciós faktorok mrns-ei. A differenciált, math2-t kifejező tenyészetekben (ES 15. napon; P19 3. naptól) mind a GABAerg (gad65, vgat), mind a glutamaterg (vglut2) idegsejtfenotípusokra jellemző gének aktivitása jelentőssé válik. Az ES mintákat differenciálatlan sejtek tenyészeteiből (0), valamint 4 napos aggregáció után ( embryonic body (EB4) állapotban kezdett) 1 (EB4+1RA), 2 (EB4+2RA) és 3 (EB4+3RA) napos RA kezelés után, illetve a 4 napos RA kezelést követően 7 napos gelatinon történt tenyésztés után, a teljes differenciáció 15. napján (EB4+4RA+Gel7) gyűjtöttük. A P19 sejtek tenyészeteiből a RA kezelés kezdetét követő 1. (RA1), 2. (RA2), 3. (RA2+1) és 4. (RA2+2) napján vettünk mintát. Az eredményeket a hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (hprt) gén mrns-ének szintjéhez viszonyítottuk. Összefoglalás: 1. Az in vitro kísérletek azt mutatják, hogy az éretlen idegi őssejtek nem hordoznak regionális elkötelezettséget, a regionális elköteleződést jelző gének a differenciáció meghatározott szakaszaiban aktiválódnak: A pronerális bhlh gének expressziója az idegsejtképződés előtt, a radiális-glia sejtek differenciációjának kezdeti szakaszában nő. A proneurális géneket időben követi számos régióspecifikus gén aktiválódása. Az otx3, emx2, dlx2, nkx2.2 gének az NE-4C sejtek in vitro neuronképzésének 4. stádiumában fejeződtek ki a legnagyobb mértékben. Ebben az időszakaszban tapasztaltuk az idegsejtképződés legnagyobb mértékét és a radiális-glia sejtek legnagyobb arányú jelenlétét. 20
21 2. Egyszeri, rövid RA kezelés hatására - további külső hatások nélkül is - több differenciációs útvonal indukálódik. Mindezek eredményeként a kezdeti homogén sejtpopuláció heterogénné válik. Egymás mellett jelen vannak Radiális-glia sejtek Különböző mértékben differenciálódott idegsejtek Különböző transzmitter fenotípusú neuronok Asztroglia sejtek Eredeti fejlődési képességüket megőrző őssejtek, valamint a különböző régiókra jellemző: Proneurális és homeo-box transzkripciós faktorok 3. A különböző cathecholaminerg idegsejtek kialakulásának hiánya arra utal, hogy bizonyos sejttípusok kialakulásához további differenciációt szabályozó hatások szükségesek. Következtetés: Az implantációhoz használt sejtek egymás mellett létező regionális sokfélesége miatt, az integrálódás hiánya nem magyarázható regionális összeférhetetlenséggel. 21
22 III. A RA idegi irányú differenciációt segítő hatásának vizsgálata, in vitro Laboratóriumunk munkatársai által végzett kísérletek szerint, fagyasztással sértett agyszövetbe implantált NE-4C idegi őssejtek kitöltik a sérülés következtében elhalt szöveti teret, de jelentős idegi irányú differenciációt nem mutatnak. A beültetett sejtek megőrzik korábbi tulajdonságaikat: in vitro visszatenyésztés után, sejtosztódási paramétereik, kromoszóma számuk és differenciációs potenciáljuk megegyezik az eredeti NE-4C sejtvonallal (Ágoston és mtsai. 2006). Kooperációban végzett implantációs kísérletek ugyanakkor arra utalnak, hogy hidrogélbe beágyazott NE-4C sejtek jelentős mértékben differenciálódtak idegsejtekké, foto lézióval sértett előagyi területeken (Anderova és mtsai. 2006). A fenti eredmények arra utalnak, hogy bizonyos szöveti környezeti változások elősegíthetik az implantált sejtek integrációját. A befogadó szöveti környezet módosítható olyan szolubilis faktorral vagy több faktor megfelelő kombinációjával, amely megváltoztatja a kifejlett idegrendszer sejtjeinek viselkedését és/vagy segíti a beültetett sejtek túlélését. Az NE-4C sejtvonal in vitro vizsgálatával elemezhető az egyes faktorok idegi differenciációra gyakorolt hatása. Eddigi vizsgálatainkban, az idegi irányú differenciációt indukáló RA hatását tanulmányoztuk számos in vitro NE-4C, EC, ES sejtek idegsejtképzése - rendszerben. Adataink szerint az idegi irányú differnciációhoz elégséges rövid idejű (2-3 napos) RA kezelés melynek hatására az NE-4C sejtek ideg majd asztroglia sejteket hoznak létre (Schlett és Madarász 1997 és II. táblázat). Egy második, az asztroglia sejtek képződése idején alkalmazott RA kezelés (10-6 M), ugyanakkor, jelentős mértékben csökkentette az asztroglia sejtek kialakulását (10. ábra). Az alkalmazott RA kezelés a már differenciálódott asztroglia sejtek túlélését, fennmaradását nem befolyásolta. 22
23 10. ábra A RA kezelés gátolja az asztroglia sejtek keletkezését. A: Az ideg- és asztroglia sejtek számának változása különböző idejű RA kezelés hatására, a differencicáció 6. stádiumában (13. nap). A NeuN immunreaktív idegsejteket és a GFAP immunpozitív asztroglia sejteket három párhuzamos tenyészetből, 60 mikroszkópos látótéren (20x objektívvel) számoltuk és átlagoltuk. A differenciáció 5-6. stádiumában alkalmazott, illetve a folyamatos RA kezelés jelentős mértékben csökkentette a GFAP pozitív asztroglia sejtek számát, míg az idegsejtek számát nem befolyásolta. A 150 % Idegsejtek és asztroglia sejtek számának változása és és RA kezelés ideje [nap] NeuN GFAP B 3 nap RA 13 nap RA GFAP - NeuN B: Reprezentatív mikroszkópos felvétel egy kettősen immunfestett GFAP (barna) és NeuN (kék) - tenyészetnek a differenciáció C 13. napján (6. stádium) 3 napos és folyamatos RA kezelés után. mérce: 50 μm C: A gliagenezis különböző szakaszaiban alkalmazott RA kezelés hatása. Az 5-6. szakaszban alkalmazott (7-14. nap) RA kezelés meggátolta a GFAP immunreaktív asztroglia sejtek kialakulását, míg a gliagenezis kezdete után adott RA hatására a GFAP immunreaktivítás nem változik. A RA gátolja a GFAP immunreaktív gliasejtek megjelenését, de a meglévő gliasejtek számát nem csökkentette Asztroglia irányú differenciáció mértéke 14 napos standart RA kezelt %- ban RA: RA: RA 0-2 +RA 23
24 Összefoglalás: A RA - magreceptorhoz kötött transzkripciós faktorként - képes olyan génexpressziós változásokat előidézni, amelynek hatására a differenciálatlan neuroektodermális őssejtekben elindul az idegi irányú differenciáció, míg a későbbi differenciációs szakaszban gátolja az asztroglia képződést. Következtetések: A RA, vagy ahhoz hasonló hatású szolubilis faktorok, az idegszöveti fejlődés meghatározott szakaszaiban képesek elősegíteni az idegi őssejtek idegsejt irányú differenciációját, ugyanakkor gátolhatják az alternatív irányú sejtsorsok, pl. az asztroglia sejtek létrejötét. 24
25 IV. ALKAMAZOTT MÓDSZEREK, ESZKÖZÖK ÉS ANYAGOK Az NE-4C és a P19 sejtek fenntartása és in vitro RA kezelése Az NE-4C sejteket Poly-L-lizin-nel (Sigma) borított tenyésztőfelületen, 5 % FCS (fötális borjú savó, Gibco BRL) tartalmú MEM (Sigma) tápoldatban, 100% páratartalomban, 37 C -os 5% CO 2 tartalmú termosztátban neveltük. A tápoldatot 5mM glutaminnal (Sigma), 40μg/ml gentamicinnel (Sigma és Chinoin) és 2.5 μg/ml amphotericin B-vel (Sigma) egészítettük ki. A tenyészeteket 2-3 naponta a teljes tenyésztőfelület benövése (konfluens állapot) előtt, szemikonfluens állapotban Ca 2+ mentes PBS oldattal történő mosás után 0.5 mg/ml tripszin-oldattal vittük szuszpenzióba és ültettük át új tenyésztőedénybe 10 4 /cm 2 sejtűrűségben. A sejtvonal sejtjeit hosszú távú tároláshoz 1-2x10 6 sejt/ml koncentrációban, 10% DMSO-t (Sigma) tartalmazó 10%-os MEM-FCS-ben, folyamatos hűtéssel fagyasztottuk le, majd a lefagyasztott sejteket folyékony N 2 -ben tároltuk. A RA-as differenciációhoz a 3-5x10 4 /cm 2 sejtsűrűségű tenyészeteket, a sejtek ajzatra való letapadása után 10-6 M végkoncentrációjú all-transz retinsav (RA, Sigma) tartalmú tápfolyadékkal indukáltuk a 2-3 napig. A tenyészeteken 2 naponta cseréltük a tápfolyadékot. RT-PCR A tenyészetek RNS tartalmát Trizol (Gibco) reagenssel izoláltuk, majd azt az esetleges DNS szennyeződéstől DNAse I (Promega) kezeléssel tisztítottuk meg. A tisztított RNSből reverz-transzkriptázzal (Promega) cdns-t készítettünk. A cdns-ből PCR (Taq PCR Core Kit Qiagen) reakcióval mutattuk ki a különböző gének jelenlétét, illetve hiányát. Az egyes gének kimutatásához használt primereket az III. táblázat tartalmazza. III. táblázat Az RT-PCR során használt primerek Gén neve Forward Reverse dlx2 5 cagggtccttggtctcttca3 5 ctgctgaggtcactgctacg3 otx3 5 gcagctccagaaacagaa3 5 gagtcctcttcacggtccag3 emx2 5 gtcccagcttttaagctaga3 5 cttttgccttttgaatttcgttc3 gad65 5 ggtctggcttttggtccttc3 5 tgccaattcccaattatactcttga3 gad67 5 gctggaaggcatggaaggtttta3 5 tgagccccatcaccgtagca3 gata3 5 acgtctcactccgaggcagcatg3 5 gaagtcctccagcgccgtcatgcac3 gbx2 5 ttcgaagtcaacaccagcag3 5 cccctttaagcccgtctaat3 hoxb2 5 gctggagaaggagttccact3 5 tagggaaactgcaagtcgat3 hprt 5 cacaggactagaacacctgc3 5 gctggtgaaaaggacctct3 lmx1b 5 tggagtagagccggtcaatg3 5 ctgatgcgagtcaacgagtc3 mash1 5 ttagtccagaggaacaagagctgc3 5 aagatgcaggatctgctgccatcc3 math2 5 tgagaatggcttgtccagaagg3 5 tggtagggtgggtagaatgtgg3 nfh 5 catgaaggaaggagcaaagc3 5 gcttcctggactctgtggtc3 ngn2 5 aagaggactatggcgtgtgg3 5 atgaagcaatcctccctcct3 nkx2.2 5 ggttccagaaccatcgctac3 5 caccgaaaacaaacgacaaa3 otx2 5 ggaaacagcgaagggagagga3 5 ctgctgctgttggcggcactt3 pax6 5 acgaaagagaggatgcctc3 5 cccaagcaaagatggaag3 phox2b 5 ctcctacccctttcctcacc3 5 cagctcggatcactcaatca3 vgat 5'acgaggagaacgaagacgg 3' 5'acgatgatgccaatggagat 3' vglut2 5 tggaaaatccctcggacaga3 5 tagacgggcatggatgtgaa3 25
26 Implantáció: Sejtek előkészítése Az implantációhoz NE-4C sejtvvonal GFP-t kifejező alklónját használtuk (Demeter és mtsai. 2005), amely megőrizte az eredeti NE-4C sejtvonal differenciációs tulajdonságait. A differenciációs protokol szerint differenciácltatott sejteket a RA kezelést követő 4. napon, a diferenciáció 4. stádiumában 1mM EDTA-PBS-sel szuszpenzióba vittük majd centrifugálás után sejt/μl koncentrációban MEM tenyésztőfolyadékba vettük fel. Az implantáció elvégzése után a maradék sejtszuszpenzióbol sejtet (ami megfelelő sejtszám az indukció állapotának) 12 mm átmérőjű PLL-el fedett üveglemezen tovább tenyésztettük. Altatás A műtendő egerek testsúlyát lemértük. Ketamin-t (SBH-Ketamin injekció, 100mg/ml SelBruHa Kft.) és Xylazin-t (ROMETAR 2% injekció, 20mg/ml SPOFA a.s., Praha) PBS-ben 10x-re hígítottunk, 2:1 arányban összekevertük, és 300μl-t injektáltunk a 10-15g-os egerekbe. (125mg/testsúlykg ketamin és 25mg/testsúlykg xylazin.) Néhány perc múlva ellenőriztük, hogy az állat mélyen alszik-e, majd a sztereotaxis (Kopf, Stoelting) készülékbe helyeztük. Implantáció felnőtt egér előagyba Az alvó egeret sztereotaxis készülékben rögzítettük. A fejtetőn az implantáció helye mellett, mediánszaggitálisan egy körülbelül 10mm-es metszést ejtettünk. A bőrt finoman széthúzva a koponyát megtisztítottuk a kötőszövettől és az izmoktól, és a csontot hidrogénperoxiddal letöröltük. Sztereotaxissal bemértük a szúrás helyét (Hippocampus: Bergman ponttól.: 1,1 mm előre; jobbra: 0,8 mm; ventrálisan: 2,0mm; Agykéreg: Bergman ponttól 1,1 mm előre, balra: 3,0 mm ventrálisan: 1,2mm), majd fúróval óvatosan átlyukasztottuk a koponyacsontot. Így egy körülbelül 1mm átmérőjű nyílást vágtunk, figyelve arra, hogy az agyat ne sértsük meg. Ezután a sztereotaxis-készülékbe előre behelyezett Hemmilton fecskendőbe felszívtuk a beültetendő sejteket, majd a megfelelő mélységbe lassan leeresztve elkezdtük az injektálást. 10 ezer sejtet ültettünk be, 1 μl térfogatban, MEM tápoldatba. Ezt a műveletet nagyon lassan, 1-2 perc alatt, kb. 0.5μl/perc perfúziós sebességgel végeztük. Az infúzió végén még legalább 1 percet vártunk, és csak ezután húztuk ki lassan a kapillárist. A fejbőrt összevarrtuk, majd gentamicinnel (1μg/ml) átitatott papírvattával fedtük, így csökkentve a seb bakteriális elfertőződését. A még alvó állatokat testmeleg helyen tartottuk ébredésig. A teljes ébredés után visszahelyeztük a dobozaikba. Az állatházban a műtött állatokat napi megfigyelés alatt, szokásos körülmények között tartottuk. Transzkardiális perfúzió A műtétek után 10 nappal az állatokat elaltattuk. Feltártuk a mellüreget, és a szív bal kamrájába perfundáló folyadékkal feltöltött kanült vezettünk. A jobb pitvaron ejtett metszés után először ml PBS-t folyattunk át, amíg a jobb pitvaron át már csak tiszta perfúziós folyadék távozott. Ezután ml 4% paraformaldehid oldatot áramoltattuk át teljes fixálódásig. A foramen magnumon át bevezetett ollóval mindkét 26
27 oldalon felvágtuk a koponyát, majd csipesszel óvatosan felhajtva a koponyacsontot, az agyat kiemeltük, és 4%-os PFA oldatba helyeztük 24 órára. Hisztológiai vizsgálatok Az utófixálás után, az agyat 15% glükózt és 0.1% nátrium-azidot tartalmazó oldatba helyeztük, és +4ºC-on inkubáltuk 2 napig. A blokkokat folyékony, C -ra hűtött izopentánba (Merck) merítve fagyasztottuk le. A lefagyasztott preparátumokból kriosztáttal 10 és 20 μm-es metszeteket készítettünk, melyeket 7 lemezre folyamatosan vettünk fel, így egy-egy lemezre egymás után kerülő metszetek egymástól 70 illetve 140 μm-re lévő szövetrészeket tartalmaznak és 7 közel azonos metszetsorozatot kaptunk. Immuncitokémia és immunhisztokémia A kriosztáttal készített metszeteken immunhisztokémia festéseket felolvasztás után végeztük és PBS-es mosás után a metszeteket 10 percig 0,1%-os Triton-X100-PBS-ben inkubáltuk, amit háromszoros PBS-es mosás követett. Az in vitro tenyészeteket 4%-os paraformaldehiddel fixáltuk, a fixálót háromszoros PBS-es mosással távolítottuk el, amit 5 perces Triton-X100 (0,1% PBS-ben) kezelés és újbóli háromszoros PBS mosás követett. Az egyes kezelések között a preparátumokat háromszor PBS-sel (az in vitro tenyészeteken 5 perces, a metszeteken 15 perces inkubálásokkal) mostuk. A nem specifikus fehérjekötő helyek blokkolása után (1-1,5 órás inkubálás 5-10%-os FCS tartalmú PBS-sel) a metszeteket és a fixált tenyészeteket első réteg ellenanyagokkal [SSEA-1 (DSHB), RC2 (DSHB), βiii-tubulin (ExBio Praha), GFAP (Sigma), VGlut2 (Synaptic Systems) GABA és NeuN (Chemichon) 1:1000 valamint MAP2 (Chemichon), VGAT2 (Synaptic Systems), Serotonin 1:100 koncentrációban] blokkoló oldatban egész éjszakán át +4 C -on inkubáltuk. MAP2 és βiii-tubulin és GFAP kimutatásához Alexa488 és Alexa 594 konjugált másodlagos ellenanyagokat (Molecular Probes) használtunk. A biotin konjugált másodlagos ellenanyagokat (Vector) követően a preparátumokat avidin-alexa488 és avidin-alexa594 (Molecular Probes) valamint avidin-peroxidase (ABC kittel Vector) harmadlagos ellenanyagokkal inkubáltuk. A másodlagos és harmadlagos ellenanyagokat 1/1000 higításban és 1 1,5 1 órás szobahőn való inkubálással használtuk. A peroxidáz reakciót PBS-ben oldott 0.55 mg/ml koncentrációjú DAB (3-3'-diamino benzamidin, Sigma) és 0.3% H 2 O 2 oldatban 5-25 perces szobahőmérsékletű inkubálással hívtuk elő. A reakciót 0.1%-os Na-azid (Sigma) PBS mosással állítottuk le. Kettős peroxidáz festés során (NeuN és Vglut illetve GABA) az első immunreakció előhívása során az előhívást 0.1 M Cu 2+ -t is tartalmazó oldatban végeztük, melynek eredményeként a reakció terméke sötétkék, fekete színű csapadék. A második reakció előtt újabb blokkolással fedtük az újonnan kialakult nem specifikus fehérjekötő helyeket. A második immunreakciót a korábban leírtakkal azonos módon végeztük el. Az egyszeri immunfestések és a fluoreszceins jelölések után a preparátumokat Mowiollal (Calbiochem) a peroxidáz kettős festés után felszálló alkoholsorral és xilollal történő dehidratálás után Depex-szel (Serva) fedtük le. Az RC2, βiii-tubulin és GFAp immunreaktivitás mértékét Axiovision 4.5 szoftver segítségével határoztuk meg. Minden vizsgált differenciációs állapot (RC2, βiii-tubulin) és RA kezelési variáció (GFAP) esetén legalább 30 mikroszkópos látóteret mértünk meg 27
28 3 különböző kísérletben. Az RC2 és βiii-tubulin immunreaktivítás összehasonlíthatóságáért a korai negyedik stádium értékének (100%) százalékában ábrázoltuk az adatokat. A GFAP mérések esetén a RA kezelés sejtszámra gyakorolt esetleges hatásának kivédésére az értékeket a sejtmagok által elfoglalt területhez (ami jól egybevágott a sejtszám változásával) viszonyítottunk és a standard (2-3 napos) kezeléssel a 14. napon fixált tenyészetekhez (100%) viszonyítottunk. Az idegsejtek számának és a különböző transzmitter fenotípusú idegsejtek arányának meghatározása A teljes idegset számot idegsejt specifikus sejtmag marker (NeuN) segítségével határoztuk meg (100%), az egyes transzmitterfenotípusú kettősen immunpozitív (GABA+NeuN és Vglut+NeuN) idegsejtek arányát ehhez viszonyítottuk. A számolásokhoz 10 mikroszkópos látótér (20x nagyítás) sejtjeit számoltuk meg, és 3 párhuzamos tenyészetből kapott értékeket átlagoltuk. 28
29 Hivatkozások Ágoston V.A, Zádori A., Demeter K., Nagy Z., Madarász E. 2006, Different behaviour of implanted stem cells in intact and lesioned forebrain cortices. Neuropath., Appl.Neurobiol., in press Anderova M, Kubinova S, Jelitai M, Neprasova H, Glogarova K, Prajerova I, Urdzikova L, Chvatal A, Sykova E. (2006) Transplantation of embryonic neuroectodermal progenitor cells into the site of a photochemical lesion: immunohistochemical and electrophysiological analysis. J Neurobiol. Sep 1;66(10): Avantaggiato, V., Acampora, D., Tuorto, F., and Simeone, A. (1996). Retinoic acid induces stage-specific repatterning of the rostral central nervous system. Developmental Biology 175, Campos, L. S., Leone, D. P., Relvas, J. B., Brakebusch, C., Fassler, R., Suter, U., and ffrench-constant, C. (2004). {beta}1 integrins activate a MAPK signalling pathway in neural stem cells that contributes to their maintenance. Development 131, Demeter, K., Herberth, B., Duda, E., Domonkos, A., Jaffredo, T., Herman, J. P., and Madarasz, E. (2004). Fate of cloned embryonic neuroectodermal cells implanted into the adult, newborn and embryonic forebrain. Experimental Neurology 188, Edwards, M. K. S., and McBurney, M. W. (1983). The concentration of retinoic acid determines the differentiated cell types formed by a teratocarcinoma cell line. Developmental Biology 98, Fode, C., Ma, Q., Casarosa, S., Ang, S.-L., Anderson, D. J., and Guillemot, F. (2000). A role for neural determination genes in specifying the dorsoventral identity of telencephalic neurons. Genes Dev. 14, Götz, M., Stoykova, A., and Gruss, P. (1998). Pax6 Controls Radial Glia Differentiation in the Cerebral Cortex. Neuron 21, Hack, M. A., Sugimori, M., Lundberg, C., Nakafuku, M., and Gotz, M. (2004). Regionalization and fate specification in neurospheres: the role of Olig2 and Pax6. Molecular and Cellular Neuroscience 25, Hartfuss, E., Galli, R., Heins, N., and Gotz, M. (2001). Characterization of CNS Precursor Subtypes and Radial Glia. Developmental Biology 229, Herberth, B., Minko, K., Csillag, A., Jaffredo, T., and Madarasz, E. (2005). SCL, GATA- 2 and Lmo2 expression in neurogenesis. International Journal of Developmental Neuroscience 23, Hitoshi, S., Tropepe, V., Ekker, M., and van der Kooy, D. (2002). Neural stem cell lineages are regionally specified, but not committed, within distinct compartments of the developing brain. Development 129, Jelitai M, Schlett K, Varju P, Eisel U, and E, M. (2002). Regulated appearance of NMDA receptor subunits and channel functions during in vitro neuronal differentiation. Journal of Neurobiology 51, Kageyama, R., and Nakanishi, S. (1997). Helix-loop-helix factors in growth and differentiation of the vertebrate nervous system. Current Opinion in Genetics & Development 7,
30 Nagy, A., Rossant, J., Nagy, R., Abramow-Newerly, W., and Roder, J. (1993). Derivation of Completely Cell Culture-Derived Mice from Early-Passage Embryonic Stem Cells. PNAS 90, Nakagawa, Y., Kaneko, T., Ogura, T., Suzuki, T., Torii, M., Kaibuchi, K., Arai, K., Nakamura, S., and Nakafuku, M. (1996). Roles of cell-autonomous mechanisms for differential expression of region-specific transcription factors in neuroepithelial cells. Development 122, Perea-Gomez, A., Camus, A., Moreau, A., Grieve, K., Moneron, G., Dubois, A., Cibert, C., and Collignon, J. (2004). Initiation of Gastrulation in the Mouse Embryo Is Preceded by an Apparent Shift in the Orientation of the Anterior-Posterior Axis. Current Biology 14, Santa-Olalla, J., Baizabal, J.-M., Fregoso, M., del Carmen Cardenas, M., and Covarrubias, L. (2003). The in vivo positional identity gene expression code is not preserved in neural stem cells grown in culture. European Journal of Neuroscience 18, Schlett K, and Madarász E. (1997). Retinoic acid induced neural differentiation in a neuroectodermal cell line immortalized by p53 deficiency. Journal of Neuroscience Research 47, Schlett K, Herberth B., and Madarasz, E. (1997). In Vitro pattern formation during neurogenesis in neuroectodermal progenitor cells immortalized by p53-deficiency. International Journal of Developmental Neuroscience 15, Seaberg RM, van der Kooy D. (2002) Adult rodent neurogenic regions: the ventricular subependyma contains neural stem cells, but the dentate gyrus contains restricted progenitors. J Neurosci. Mar 1;22(5):
Heterogén sejtfenotípusok kialakulása egy homogén idegi őssejt populáció in vitro differenciációja során. Doktori Értekezés Tézisei
Heterogén sejtfenotípusok kialakulása egy homogén idegi őssejt populáció in vitro differenciációja során. Doktori Értekezés Tézisei Varga Balázs Viktor ELTE Biológia Doktori Iskola Idegtudomány és humánbiológia
1. régió-specifikus és proneurális gének aktiválódása az NE-4C embrionális (E9) neuroektodermális sejtvonal in vitro neuronképzése során
OTKA K 68939 zárójelentés: 2008 július 1-2011. június 30. A projekt fő célkitűzéseként a fejlődő központi idegrendszerben időben és térben jellegzetes mintázat szerint aktiválódó ún. pozícionális gének
Jelitai Márta OTKA pályázat (F 68940) zárójelentés (2007 07.01-2010 06.30) Idegi ős/progenitor sejtek fejlődésének fiziológiai jellemzése
Jelitai Márta OTKA pályázat (F 68940) zárójelentés (2007 07.01-2010 06.30) Idegi ős/progenitor sejtek fejlődésének fiziológiai jellemzése Alulírott Jelitai Márta, Fiatal Kutatói kategóriában (F 68940)
Az idegi sokféleség kialakulását szabályozó folyamatok vizsgálata klonális eredetű őssejt populációk in vitro differenciációja során
Az idegi sokféleség kialakulását szabályozó folyamatok vizsgálata klonális eredetű őssejt populációk in vitro differenciációja során Doktori tézisek Hádinger Nóra Semmelweis Egyetem Szentágothai János
A polikomb fehérje, Rybp kulcsfontosságú az egér embrionális őssejtek neurális differenciációjához
A polikomb fehérje, Rybp kulcsfontosságú az egér embrionális őssejtek neurális differenciációjához Ph.D. értekezés tézisei Kovács Gergő Témavezető: Dr. Pirity Melinda MTA-Szegedi Biológiai Kutatóközpont,
Embrionális neuroektoderma eredetű őssejtek beépülése az agyszövetbe: implantációs vizsgálatok klónozott idegi őssejtek felhasználásával
Embrionális neuroektoderma eredetű őssejtek beépülése az agyszövetbe: implantációs vizsgálatok klónozott idegi őssejtek felhasználásával Doktori tézisek Demeter Kornél MTA Kísérleti Orvostudományi Kutató
Doktori Értekezés. Varga Balázs Viktor
Doktori Értekezés Varga Balázs Viktor ELTE Biológia Doktori Iskola Idegtudomány és humánbiológia program Programvezető Détári László DSc., egyetemi tanár Témavezető Madarász Emília DSc., tudományos tanácsadó
Kolin-acetiltranszferáz
Kolin-acetiltranszferáz Neurotranszmitter-kritériumok: Szintetizáló enzim-készlet ( kulcs-enzimek ) Tároló-rendszer (vezikuláris transzporterek) Felvevő /lebontó rendszer Adagolással posztszinaptikus válasz
4,5 napos egér. 6 napos human. 8 napos human 10 napos human
4,5 napos egér 6 napos human 8 napos human 10 napos human Az Anterio-Posterioralis testtengely meghatározódik a primitívárok és az antero-visceralis entoderma (AVE) kialakulásával. epiblaszt AVE Primitív
Molekuláris és celluláris neurobiológia MTA KOKI előadó
Molekuláris és celluláris neurobiológia 2016.09.14-2016.12.14 MTA KOKI előadó 16.00-17.30 CNS : mechanikailag és kémiailag védett, immun-privilegizált szerv vér-agygát: kémiai és immunológiai barrier
FUSARIUM TOXINOK IDEGRENDSZERI HATÁSÁNAK ELEMZÉSE
FUSARIUM TOXINOK IDEGRENDSZERI HATÁSÁNAK ELEMZÉSE Világi Ildikó, Varró Petra, Bódi Vera, Schlett Katalin, Szűcs Attila, Rátkai Erika Anikó, Szentgyörgyi Viktória, Détári László, Tóth Attila, Hajnik Tünde,
Retinoidok szerepe az idegi őssejtek differenciációjának szabályozásában
Retinoidok szerepe az idegi őssejtek differenciációjának szabályozásában Doktori tézisek Orsolits Barbara Semmelweis Egyetem Szentágothai János Idegtudományi Doktori Iskola Témavezető: Dr. Környei Zsuzsanna,
KUTATÁSI JELENTÉS. DrJuice termékek Ezüstkolloid Hydrogél és Kolloid oldat hatásvizsgálata
KUTATÁSI JELENTÉS A Bay Zoltán Alkalmazott Kutatási Közalapítvány Nanotechnológiai Kutatóintézet e részére DrJuice termékek Ezüstkolloid Hydrogél és Kolloid oldat hatásvizsgálata. E z ü s t k o l l o
Sejtek - őssejtek dióhéjban. 2014. február. Sarkadi Balázs, MTA-TTK Molekuláris Farmakológiai Intézet - SE Kutatócsoport, Budapest
Sejtek - őssejtek dióhéjban 2014. február Sarkadi Balázs, MTA-TTK Molekuláris Farmakológiai Intézet - SE Kutatócsoport, Budapest A legtöbb sejtünk osztódik, differenciálódik, elpusztul... vérsejtek Vannak
Doktori értekézes tézisei
Doktori értekézes tézisei A GABA jelátvitel molekuláris alkotóelemei és működése az egyedfejlődés során: két különböző rendszer vizsgálata Marija Schwirtlich Semmelweis Egyetem, Szentágothai János Idegtudomaánzi
Asztrociták: a központi idegrendszer sokoldalú sejtjei. 2009.11.04. Dr Környei Zsuzsanna
Asztrociták: a központi idegrendszer sokoldalú sejtjei 2009.11.04. Dr Környei Zsuzsanna Caenorhabditis elegans 1090 testi sejt 302 idegsejt 56 gliasejt Idegi sejttípusok Neural cell types Idegsejtek Gliasejtek
Stressz és neurogenezis
Stressz és neurogenezis Charlotte A. Oomen et al. J. Neurosci. 2010; Mirescu et al., Nature Neuroscience 2004 I.M. Abraham, et al., J. Neuroendocrinology, 2001 Neurogenesis and neuronal regeneration in
Mikrogliák eredete és differenciációja
Mikrogliák eredete és differenciációja 2017. 10. 24. Jordán Viktória F. Ginhoux et al. Origin and differentiation of microglia, 2013 F. Ginhoux et al. Fate mapping anaylsis reveals that adult microglia
2012.11.27. Neuronok előkészítése funkcionális vizsgálatokra. Az alkalmazható technikák előnyei és hátrányai. Neuronok izolálása I
Neuronok előkészítése funkcionális vizsgálatokra. Az alkalmazható technikák előnyei és hátrányai Sejtszintű elektrofiziológia 1.: csatornák funkcionális Sejtszintű elektrofiziológia 2.: izolált/sejtkultúrában
A csirkén (Gallus domesticus L., Leghorn) végzett kísérletekhez 38 o C-on inkubált
3. Anyagok és vizsgálati módszerek 3.1. Csirke vizsgálati anyag előkészítése A csirkén (Gallus domesticus L., Leghorn) végzett kísérletekhez 38 o C-on inkubált csirke embriókat és frissen kikelt csirkéket
(11) Lajstromszám: E 005 846 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA
!HU00000846T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 846 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 787448 (22) A bejelentés napja:
A harántcsíkolt vázizom differenciációja, regenerációja
A harántcsíkolt vázizom differenciációja, regenerációja Shahragim Tajbakhsh Current Opinion in Genetics & Development 2003, 13:413 422 közti mezoderma vese ivarszervek Paraxiáls mezoderma Fej szomiták
Ca 2+ Transients in Astrocyte Fine Processes Occur Via Ca 2+ Influx in the Adult Mouse Hippocampus
Ca 2+ Transients in Astrocyte Fine Processes Occur Via Ca 2+ Influx in the Adult Mouse Hippocampus Ravi L. Rungta, Louis-Philippe Bernier, Lasse Dissing-Olesen, Christopher J. Groten,Jeffrey M. LeDue,
4.1. A bélidegrendszer nitrerg neuronjainak vizsgálata fejlődő csirkeembrióban
4. Eredmények 4.1. A bélidegrendszer nitrerg neuronjainak vizsgálata fejlődő csirkeembrióban Kvalitatív vizsgálataink azt mutatták, hogy a PM-ben a ganglionok és internodális ágak a 12. embrionális napon
10 13 idegsejt x 10 4 szinapszis = 10 17 kapcsolat!
Élettartam = szervezet életideje Kosársejt; patkány hippocampus CA1 régió axon s.r. s.p. dendrit s.o. 100 mm Zemankovics Rita rekonstrukciója; MTA KOKI 10 13 idegsejt x 10 4 szinapszis = 10 17 kapcsolat!
Az idegszöveti sejtek ontogenezise az embrionális neuronképzés
Az idegszöveti sejtek ontogenezise az embrionális neuronképzés Az embrionális fejlődés főbb lépései embrionális extraembrionális szövetek elkülönülése gasztruláció: csíralemezek kialakulása - endoderma
Az anti-apoptózis mechanizmus vizsgálata agyi ischaemia/hypoxia modellekben
OTKA T-037887 zárójelentés Az anti-apoptózis mechanizmus vizsgálata agyi ischaemia/hypoxia modellekben Az ischaemias stroke-ot követően az elzáródott ér ellátási területének centrumában percek, órák alatt
Áramlási citometria 2011. / 4. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE KK
Áramlási citometria 2011. / 4 Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE KK Az áramlási citometria elve Az áramlási citometria ( Flow cytometria ) sejtek gyors, multiparaméteres vizsgálatára alkalmas
PhD tézis. Pajer Krisztián
Transzplantált neuroektodermális őssejtek hatása sérült gerincvelői motoneuronokra mellső gyökér avulzió és reimplantációt követően: betekintés a molekuláris mechanizmusba PhD tézis Pajer Krisztián Szegedi
Sok féle idegsejt jellegzetes idegsejt-sajátságok
Sok féle idegsejt jellegzetes idegsejt-sajátságok Élettartam ~ szervezet életideje Kosársejt; patkány hippocampus CA1 régió axon s.r. s.p. dendrit s.o. 100 mm Zemankovics Rita rekonstrukciója; MTA KOKI
OTKA ZÁRÓJELENTÉS
NF-κB aktiváció % Annexin pozitív sejtek, 24h kezelés OTKA 613 ZÁRÓJELENTÉS A nitrogén monoxid (NO) egy rövid féléletidejű, számos szabályozó szabályozó funkciót betöltő molekula, immunmoduláns hatása
Az idegsejt-felszín specializált membrán-foltok mozaikja
Tagolt, nyúlványos szerkezet igen nagy sejtfelület a térfogathoz képest speciális, nagy távolságokat áthidaló transzportfolyamatok lokális anyagtermelés és sejtmagtól távoli fehérjeszintézis igen sok adhéziós
Az idegi õssejtek és lehetséges orvosi alkalmazásuk
Madarász Emília Az idegi õssejtek és lehetséges orvosi alkalmazásuk Az idegi õssejtek és lehetséges orvosi alkalmazásuk Madarász Emília PhD, a biológiai tudomány kandidátusa, MTA Kísérleti Orvostudományi
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: Az orvosi biotechnológiai mesterképzés
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0011 Az orvosi
Kutatási beszámoló ( )
Kutatási beszámoló (2008-2012) A thrombocyták aktivációja alapvető jelentőségű a thrombotikus betegségek kialakulása szempontjából. A pályázat során ezen aktivációs folyamatok mechanizmusait vizsgáltuk.
BEVEZETÉS CÉLKITŰZÉSEK
BEVEZETÉS Az 1980-as évek elejéig a nitrogén oxid biológiai jelentőségéről nem voltak információink. Az azóta eltelt 30 évben bebizonyosodott, hogy az NO növényekben olyan különböző fiziológiai folyamatokban
Őssejtek és hemopoiézis 1/23
Őssejtek és hemopoiézis 1/23 Sejtsorsok Sejtosztódás Sejt differenciáció sejtvonulatok szövetek (több sejtvonulat) Sejt pusztulás Sejtvonulat az őssejtek és azok utódai egy adott szöveti sejt differenciációja
Immunológia Alapjai. 13. előadás. Elsődleges T sejt érés és differenciálódás
Immunológia Alapjai 13. előadás Elsődleges T sejt érés és differenciálódás A T és B sejt receptor eltérő szerkezetű A T sejt receptor komplex felépítése + DOMÉNES SZERKEZET αβ ΤcR SP(CD4+ vagy CD8+) γδ
Jegyzőkönyv. dr. Kozsurek Márk. A CART peptid a gerincvelői szintű nociceptív információfeldolgozásban szerepet játszó neuronális hálózatokban
Jegyzőkönyv dr. Kozsurek Márk A CART peptid a gerincvelői szintű nociceptív információfeldolgozásban szerepet játszó neuronális hálózatokban című doktori értekezésének házi védéséről Jegyzőkönyv dr. Kozsurek
KÉSZÍTETTE: BALOGH VERONIKA ELTE IDEGTUDOMÁNY ÉS HUMÁNBIOLÓGIA SZAKIRÁNY MSC 2015/16 II. FÉLÉV
KÉSZÍTETTE: BALOGH VERONIKA ELTE IDEGTUDOMÁNY ÉS HUMÁNBIOLÓGIA SZAKIRÁNY MSC 2015/16 II. FÉLÉV TÉNYEK, CÉLOK, KÉRDÉSEK Kísérlet központja Neuronok és réskapcsolatokkal összekötött asztrocita hálózatok
IN SITU HIBRIDIZÁCIÓS HISZTOKÉMIA (ISHH)
IN SITU HIBRIDIZÁCIÓS HISZTOKÉMIA (ISHH) Dobolyi Árpád SE Anatómiai, Szövet- és Fejlődéstani Intézet AZ ISHH ÖSSZEHASONLÍTÁSA A FLUORESZCENS IN SITU HIBRIDIZÁCIÓVAL (FISH) RNS és nem DNS vizsgálata Tipikusan
10. előadás: A sejtciklus szabályozása és a rák
10. előadás: A sejtciklus szabályozása és a rák sejtciklus = Azon egymást követő fázisok vagy szakaszok sorrendje, amelyen egy sejt áthaladaz egyik osztódástól a következőig.) A sejtciklus változatai szabálytalan
Epigenetikai Szabályozás
Epigenetikai Szabályozás Kromatin alapegysége a nukleoszóma 1. DNS Linker DNS Nukleoszóma mag H1 DNS 10 nm 30 nm Nukleoszóma gyöngy (4x2 hiszton molekula + 146 nukleotid pár) 10 nm-es szál 30 nm-es szál
Humán asztrociták. Nagyobb és komplexebb. idegrendszeri fejlődésben jelentős szerepű
Humán asztrociták Nagyobb és komplexebb idegrendszeri fejlődésben jelentős szerepű Forrás: Human vs Rodent astrocytes. (Courtesy Alexi Verkhratsky (Chapter 3), Neuroglia by Kettenmann) Glial Progenitor
2.6.16. VIZSGÁLATOK IDEGEN KÓROKOZÓKRA HUMÁN ÉLŐVÍRUS-VAKCINÁKBAN
2.6.16. Vizsgálatok idegen kórokozókra Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.7.0 1 2.6.16. VIZSGÁLATOK IDEGEN KÓROKOZÓKRA HUMÁN ÉLŐVÍRUS-VAKCINÁKBAN 01/2011:20616 Azokhoz a vizsgálatokhoz, amelyekhez a vírust előzőleg
Molekuláris Medicina
Molekuláris Medicina Molekuláris Medicina Őssejt terápia Génterápia Tumor terápia Immunterápia Egyéb terápiák Vakcinák Genetikai diagnosztika Orvosi genomika Terápiák Diagnosztikák Orvostudomány: régi
Humán szubmandibuláris nyálmirigy-eredetű primer sejtek és immortalizált sejtvonal differenciálódásának in vitro vizsgálata
Humán szubmandibuláris nyálmirigy-eredetű primer sejtek és immortalizált sejtvonal differenciálódásának in vitro vizsgálata Doktori tézisek Szlávik Vanda Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok
Őssejtkezelés kardiovaszkuláris kórképekben
Őssejtkezelés kardiovaszkuláris kórképekben Papp Zoltán Debreceni Egyetem Kardiológiai Intézet Klinikai Fiziológiai Tanszék Megmenthető a károsodott szív őssejtekkel? Funkcionális változások az öregedő
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: Az orvosi biotechnológiai mesterképzés
A doktori értekezés tézisei. A növényi NRP fehérjék lehetséges szerepe a hiszton defoszforiláció szabályozásában, és a hőstressz válaszban.
A doktori értekezés tézisei A növényi NRP fehérjék lehetséges szerepe a hiszton defoszforiláció szabályozásában, és a hőstressz válaszban. Bíró Judit Témavezető: Dr. Fehér Attila Magyar Tudományos Akadémia
Immunológia I. 4. előadás. Kacskovics Imre
Immunológia I. 4. előadás Kacskovics Imre (imre.kacskovics@ttk.elte.hu) 3.1. ábra A vérsejtek képződésének helyszínei az élet folyamán 3.2. ábra A hemopoetikus őssejt aszimmetrikus osztódása 3.3. ábra
AZ ÖSZTROGÉN ÉS A DEHIDROEPIANDROSZTERON SZEREPE A SZINAPTIKUS ÁTRENDEZŐDÉSBEN
AZ ÖSZTROGÉN ÉS A DEHIDROEPIANDROSZTERON SZEREPE A SZINAPTIKUS ÁTRENDEZŐDÉSBEN c. PhD-értekezés magyar nyelvű összefoglalója Csákvári Eszter Témavezető: Dr. Párducz Árpád Magyar Tudományos Akadémia Szegedi
A citokin egyensúly. Gyulladásgátló cytokinek. Gyulladáskeltő citokinek. Védelem és sejttúlélés. Gyulladás, sejtpusztulás NA DA.
Apoptózis; Asztrocita: fagocitózis; PGD4; Növekedési faktorok: TGFβ1; neurosteroidok Gyulladásgátló cytokinek A citokin egyensúly NEUROTRANSZMITTEREK Reaktív asztroglia, aktivált mikroglia; Perifériás
Retinoidok szerepe az idegi őssejtek differenciációjának szabályozásában
Retinoidok szerepe az idegi őssejtek differenciációjának szabályozásában Doktori értekezés Orsolits Barbara Semmelweis Egyetem Szentágothai János Idegtudományi Doktori Iskola Témavezető: Dr. Környei Zsuzsanna,
ŐSSEJTEK: CSODATEVŐK VAGY CSAK CSODÁK?
1 of 6 11/02/2011 01:02 AM Magyar Tudomány, 2004/3 326. o. Őssejtek Mezey Éva PHD, programvezető, In Situ Hybridization Facility Basic Neuroscience Program, National Institute of Neurological Diseases
http://www.geneticliteracyproject.org Nagy Krisztina Semmelweis Egyetem, Orálbiológiai Tanszék
ŐSSEJTEK http://www.geneticliteracyproject.org 2015. május 6. Nagy Krisztina Semmelweis Egyetem, Orálbiológiai Tanszék Az őssejt definíciója korlátlan önmegújító képesség differenciált utódsejtek létrehozása
A GLIASEJTEK ÉS AZ EPILEPTIKUS AKTIVITÁS KAPCSOLATA GÁSPÁR ATTILA GLIA SEJTEK ÉLETTANA EA
A GLIASEJTEK ÉS AZ EPILEPTIKUS AKTIVITÁS KAPCSOLATA GÁSPÁR ATTILA GLIA SEJTEK ÉLETTANA EA 2017.11.14. AZ ASZTROGLIA SEJTEK FONTOSABB TULAJDONSÁGAI AZ EPILEPTIKUS AKTIVITÁS SZEMPONTJÁBÓL (Devinsky és mtsai.,
Ig Szupercsaládba (IgSF)tartozó sejtadhéziós molekulák CD2 CD48 The SIGLEC family (e.g. CD22, CD83) Intercellular adhesion molecules (ICAMs) Vascular
Ig Szupercsaládba (IgSF)tartozó sejtadhéziós molekulák CD2 CD48 The SIGLEC family (e.g. CD22, CD83) Intercellular adhesion molecules (ICAMs) Vascular cell adhesion molecules (e.g. VCAM- 1) Neural Cell
Fogbél eredetű felnőtt szöveti őssejtek idegi differenciációja. Doktori tézis
Fogbél eredetű felnőtt szöveti őssejtek idegi differenciációja Doktori tézis Király Marianna Semmelweis Egyetem Klinikai Orvostudományok Doktori Iskola Témavezető: Dr. Varga Gábor, az MTA doktora Hivatalos
GABA jelátvitel a fejlıdı egér szemlencsében
Eötvös Loránd Tudományegyetem, Természettudományi Kar Biológia Doktori Iskola Vezetıje: Dr. Erdei Anna, egyetemi tanár, akadémikus Szerkezeti Biokémia Doktori Program Vezetıje: Dr. Gráf László, egyetemi
Doktori értekezés tézisei
Doktori értekezés tézisei A komplement- és a Toll-szerű receptorok kifejeződése és szerepe emberi B-sejteken fiziológiás és autoimmun körülmények között - az adaptív és a természetes immunválasz kapcsolata
Zárójelentés a Hisztamin hatása a sejtdifferenciációra, összehasonlító vizsgálatok tumor - és embrionális őssejteken című 62558 számú OTKA pályázatról
Zárójelentés a Hisztamin hatása a sejtdifferenciációra, összehasonlító vizsgálatok tumor - és embrionális őssejteken című 62558 számú OTKA pályázatról A hisztaminnak az allergiás reakciókban betöltött
Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai
Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése Kereskedelmi forgalomban kapható készülékek 1 Fogalmak
Asztroglia Ca 2+ szignál szerepe az Alzheimer kórban FAZEKAS CSILLA LEA NOVEMBER
Asztroglia Ca 2+ szignál szerepe az Alzheimer kórban FAZEKAS CSILLA LEA 2017. NOVEMBER Az Alzheimer kór Neurodegeneratív betegség Gyógyíthatatlan 65 év felettiek Kezelés: vakcinákkal inhibitor molekulákkal
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0011 Az orvosi
TUMORSEJTEK FENOTÍPUS-VÁLTOZÁSA TUMOR-SZTRÓMA SEJTFÚZIÓ HATÁSÁRA. Dr. Kurgyis Zsuzsanna
TUMORSEJTEK FENOTÍPUS-VÁLTOZÁSA TUMOR-SZTRÓMA SEJTFÚZIÓ HATÁSÁRA PhD tézis Dr. Kurgyis Zsuzsanna Bőrgyógyászati és Allergológiai Klinika Szegedi Tudományegyetem Szeged 2017 2 TUMORSEJTEK FENOTÍPUS-VÁLTOZÁSA
A diabetes hatása a terhes patkány uterus működésére és farmakológiai reaktivitására
OTKA 62707 A diabetes hatása a terhes patkány uterus működésére és farmakológiai reaktivitására Zárójelentés A gesztációs diabetes mellitus (GDM) egyike a leggyakoribb terhességi komplikációknak, megfelelő
67. Pathologus Kongresszus
A kemoirradiáció okozta oncocytás átalakulás szövettani, immunhisztokémiai, ultrastruktúrális jellemzői és lehetséges prognosztikus jelentősége rectum adenocarcinomákban 67. Pathologus Kongresszus Bogner
Doktori értekezés tézisei. A komplementrendszer szerepe EAE-ben (Experimental Autoimmune Encephalomyelitis), a sclerosis multiplex egérmodelljében
Doktori értekezés tézisei A komplementrendszer szerepe EAE-ben (Experimental Autoimmune Encephalomyelitis), a sclerosis multiplex egérmodelljében Készítette: Terényi Nóra Témavezető: Prof. Erdei Anna Biológia
Az ABCG2 multidrog transzporter fehérje szerkezetének és működésének vizsgálata
Az ABCG2 multidrog transzporter fehérje szerkezetének és működésének Kutatási előzmények Az ABC transzporter membránfehérjék az ATP elhasítása (ATPáz aktivitás) révén nyerik az energiát az általuk végzett
Az immunrendszer működésében résztvevő sejtek Erdei Anna Immunológiai Tanszék ELTE
Az immunrendszer működésében résztvevő sejtek Erdei Anna Immunológiai Tanszék ELTE Tanárszakosok, 2017. Bev. 2. ábra Az immunválasz kialakulása 3.1. ábra A vérsejtek képződésének helyszínei az élet folyamán
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0011 Az orvosi
Molekuláris biológiai összefoglaló kurzus 11. Hét. Kun Lídia, Semmelweis Egyetem, genetikai Sejt- és Immunbiológiai Intézet
Molekuláris biológiai összefoglaló kurzus 11. Hét Kun Lídia, Semmelweis Egyetem, genetikai Sejt- és Immunbiológiai Intézet Megtermékenyítés I. Folliculus sejtek Zona pellucida(zp-1, ZP- 2,3) Membrán Citoplazma
T-2 TOXIN ÉS DEOXINIVALENOL EGYÜTTES HATÁSA A LIPIDPEROXIDÁCIÓRA ÉS A GLUTATION-REDOX RENDSZERRE, VALAMINT ANNAK SZABÁLYOZÁSÁRA BROJLERCSIRKÉBEN
T-2 TOXIN ÉS DEOXINIVALENOL EGYÜTTES HATÁSA A LIPIDPEROXIDÁCIÓRA ÉS A GLUTATION-REDOX RENDSZERRE, VALAMINT ANNAK SZABÁLYOZÁSÁRA BROJLERCSIRKÉBEN Mézes Miklós a,b, Pelyhe Csilla b, Kövesi Benjámin a, Zándoki
Xenobiotikum transzporterek vizsgálata humán keratinocitákban és bőrben
DOKTORI (PHD) ÉRTEKEZÉS TÉZISEI Xenobiotikum transzporterek vizsgálata humán keratinocitákban és bőrben Bebes Attila Témavezető: Dr. Széll Márta tudományos tanácsadó Szegedi Tudományegyetem Bőrgyógyászati
PÉCSI TUDOMÁNYEGYETEM ÁLTALÁNOS ORVOSTUDOMÁNYI KAR Áramlási citometria, sejtszeparálás ÁRAMLÁSI CITOMETRIA, SEJTSZEPARÁLÁS BIOFIZIKA 2. 2015. március 3. Dr. Bugyi Beáta Biofizikai Intézet ÁRAMLÁSI folyadékáramban
Immunológia alapjai. T-sejt differenciálódás és szelekció a tímuszban: a mikrokörnyezet és szolubilis faktorok szabályozó szerepe
Immunológia alapjai T-sejt differenciálódás és szelekció a tímuszban: a mikrokörnyezet és szolubilis faktorok szabályozó szerepe A limfocita fejlődés lépései Recirkuláció a periférián Korai érés és növekedési
BIOLÓGIAI HATÓANYAGOK TESZTELÉSE BIOTECHNOLÓGIAI MÓDSZEREKKEL
Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 BIOLÓGIAI HATÓANYAGOK
Az elért eredmények. a) A jobb- és baloldali petefészek supraspinális beidegzése
Az elért eredmények A perifériás belsőelválasztású mirigyek működésének szabályozásában a hypothalamushypophysis-célszerv rendszer döntő szerepet játszik. Közvetett, élettani megfigyelések arra utaltak,
Immunológia alapjai előadás. A humorális immunválasz formái és lefolyása: extrafollikuláris reakció és
Immunológia alapjai 15-16. előadás A humorális immunválasz formái és lefolyása: extrafollikuláris reakció és csíracentrum reakció, affinitás-érés és izotípusváltás. A B-sejt fejlődés szakaszai HSC Primer
A zsírszövet mellett az agyvelő lipidekben leggazdagabb szervünk. Pontosabban az agy igen gazdag hosszú szénláncú politelítetlen zsírsavakban
BEVEZETÉS ÉS A KUTATÁS CÉLJA A zsírszövet mellett az agyvelő lipidekben leggazdagabb szervünk. Pontosabban az agy igen gazdag hosszú szénláncú politelítetlen zsírsavakban (LCPUFA), mint az arachidonsav
Verkhratsky, Butt 2012
Verkhratsky, Butt 2012 Quarles 2007 Wilder Graves Penfield 1891 1976, kanadai idegsebész 1932: a mielint oligodendrociták képzik, nem az axon http://hjkri.buffalo.edu/paez.html 1 oligo : 50 axont is burkolhat
Immunológia alapjai. Az immunválasz szupressziója Előadás. A szupresszióban részt vevő sejtes és molekuláris elemek
Immunológia alapjai 19 20. Előadás Az immunválasz szupressziója A szupresszióban részt vevő sejtes és molekuláris elemek Mi a szupresszió? Általános biológiai szabályzó funkció. Az immunszupresszió az
Transzgénikus állatok előállítása
Transzgénikus állatok előállítása A biotechnológia alapjai Pomázi Andrea Mezőgazdasági biotechnológia A gazdasági állatok és növények nemesítése új biotechnológiai eljárások felhasználásával. Cél: jobb
Tüdő adenocarcinomásbetegek agyi áttéteiben jelenlévő immunsejtek, valamint a PD-L1 és PD-1 fehérjék túlélésre gyakorolt hatása
Tüdő adenocarcinomásbetegek agyi áttéteiben jelenlévő immunsejtek, valamint a és PD-1 fehérjék túlélésre gyakorolt hatása Téglási Vanda, MoldvayJudit, Fábián Katalin, Csala Irén, PipekOrsolya, Bagó Attila,
Immunológia I. 2. előadás. Kacskovics Imre (imre.kacskovics@ttk.elte.hu)
Immunológia I. 2. előadás Kacskovics Imre (imre.kacskovics@ttk.elte.hu) Az immunválasz kialakulása A veleszületett és az adaptív immunválasz összefonódása A veleszületett immunválasz mechanizmusai A veleszületett
Anyai eredet kromoszómák. Zigóta
2012. február 28. Anyai eredet kromoszómák Apai eredet kromoszómák Zigóta Muslica embrió Fej Nem képz dik fej, az embrió elpusztul A muslica blasztoderma sorstérképe Genetikai boncolás + + STERIL FEJ
SEJT- ÉS SZÖVETTENYÉSZTÉS Állati sejtek tenyésztése. Bevezetés. Történeti áttekintés. A tenyésztés alapjai. Tenyészetek növekedése
SEJT- ÉS SZÖVETTENYÉSZTÉS 5.1. Állati sejtek tenyésztése Bevezetés Az élőlények hierarchikus szerveződése: Sejt Szövet Szerv Szervrendszer Egyedfejlődés: embrionális őssejt differenciálódott sejtek 1 2
A Telomerase-specific Doxorubicin-releasing Molecular Beacon for Cancer Theranostics
A Telomerase-specific Doxorubicin-releasing Molecular Beacon for Cancer Theranostics Yi Ma, Zhaohui Wang, Min Zhang, Zhihao Han, Dan Chen, Qiuyun Zhu, Weidong Gao, Zhiyu Qian, and Yueqing Gu Angew. Chem.
A termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish.
OTKA K67808 zárójelentés 2012. A termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish. A fluoreszcens in situ hibridizáció (FISH) olyan technikai fejlettséget ért
Lymphoma sejtvonalak és gyerekkori leukémia (ALL) sejtek mikro RNS (mir) profiljának vizsgálata
Lymphoma sejtvonalak és gyerekkori leukémia (ALL) sejtek mikro RNS (mir) profiljának vizsgálata Dr. Nemes Karolina, Márk Ágnes, Dr. Hajdu Melinda, Csorba Gézáné, Dr. Kopper László, Dr. Csóka Monika, Dr.
A lézer-szkenning citometria lehetőségei. Laser-scanning cytometer (LSC) Pásztázó citométer. Az áramlási citometria fő korlátai
Az áramlási citométer bevezetésének fontosabb állomásai A lézer-szkenning citometria lehetőségei Bacsó Zsolt Coulter, 1949 Coulter számláló szabadalmaztatása Crosland-Taylor, 1953 sejtek hidrodinamikai
Lukácsi Szilvia
Immunológia II GY 2018.04.13. Lukácsi Szilvia 7. Sterilitás, in vitro sejttenyésztés Az immunrendszer sejtjeinek izolálása, azonosítása és funkcionális vizsgálata: I. Monociták, makrofágok, dendritikus
TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0011 Tantárgy címe: Transzdifferenciáció és regeneratív medicina Dr. Balogh Péter és Dr. Engelmann Péter
Előadás Előadás címe Dia Dia címe száma 1. Őssejtek és transzdifferenciáció: bevezetés, alapok 2. Őssejt-típusok, fenntartásuk és homeosztázisuk 3. Regeneráció állatmodellekben 2. Alapfogalmak 3. Őssejt-kutatás
NÖVÉNYÉLETTAN. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010
NÖVÉNYÉLETTAN Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010 Sejtfal szintézis és megnyúlás Környezeti tényezők hatása a növények növekedésére és fejlődésére Előadás áttekintése
mintasepcifikus mikrokapilláris elektroforézis Lab-on-Chip elektroforézis / elektrokinetikus elven DNS, RNS, mirns 12, fehérje 10, sejtes minta 6
Agilent 2100 Bioanalyzer mikrokapilláris gélelektroforézis rendszer G2943CA 2100 Bioanalyzer system forgalmazó: Kromat Kft. 1112 Budapest Péterhegyi u. 98. t:36 (1) 248-2110 www.kromat.hu bio@kromat.hu
AsztroGlia - neuron interakció
2011.04. 06. AsztroGlia - neuron interakció protoplazmás asztroglia (szürkeállomány); rostos asztroglia (fehérállomány); oligodendroglia (CNS); Schwann sejt (PNS); radiális glia (cortex); Bergmann glia
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: Az orvosi biotechnológiai mesterképzés
Fogbél eredetű felnőtt szöveti őssejtek idegi differenciációja
Fogbél eredetű felnőtt szöveti őssejtek idegi differenciációja Doktori értekezés Király Marianna Semmelweis Egyetem Klinikai Orvostudományok Doktori Iskola Témavezető: Dr. Varga Gábor, az MTA doktora Hivatalos