STREPTOtest 24. Szükséges reagensek, tesztcsíkok: A készlet nem tartalmazza! Szuszpenziós közeg STREPTOtest 24-hez

Átírás

1 In vitro diagnosztikum Kódszám: A alkalmas a Streptococcus, Enterococcus és hasonló Gram pozitív, kataláz negatív fajok meghatározására klinikai mintákból. A készlet 40, három soros részt tartalmaz, amelyek 1-1 törzs meghatározását teszik lehetıvé. Egy három soros egység 24 biokémiai tesztet tartalmaz. A meghatározás kiértékelése vizuálisan, vagy mőszeresen történhet. A pirrolidonil-arilamidáz és a hippurát hidrolizis szőrıvizsgálatára külön tesztek állnak rendelkezésre. Értékelı szoftver használata esetén az azonosítást a kataláz és a hemolitikus aktivitást kimutató VPtest megerısítheti. A teszttel 40 törzs vizsgálata végezhetı el. Tartalma 10 db mikrotiter lemez (lemezenként 4 törzs vizsgálatára), alumínium fóliacsomagolásban, nedvszívóval, Használati Utasítás, meghatározó táblázattal, 10 db polietilén tasak, 40 db eredményértékelı lap, Keret és fedı, steril. Tárolás, felhasználás A hőtıszekrényben (2 8 C) tárolható és a csomagoláson feltüntetett lejárati ideig használható. ELJÁRÁS Szükséges reagensek, tesztcsíkok: A készlet nem tartalmazza! Szuszpenziós közeg -hez Paraffinolaj, steril. Kiegészítı reagensek, tesztcsíkok: VPtest, HIPPURATEtest, HIPPURATE reagens, PYRAtest, PYR reagens. Szükséges eszközök (a készlet nem tartalmazza) Petri-csészék, Columbia véres agar táptalajjal, Kémcsıállvány, kémcsı (100x15mm), 3-3,5 ml steril, nem pufferolt fiziológiás sóoldattal, Densi-LA-Méter II zavarosság mérı mőszer, Kódszám: , Vortex V1, Kódszám: , Automata adagolópipetta, Mikro-La-Stepper, Kódszám: , Termosztát 37 C, Mintavevı (Dacron), A szokásos mikrobiológiai felszerelés: oltókacs, színes jelölı toll, égı, fertıtlenítıszer. Értékelı eszközök Színskála a -hez, Kódszám: , Értékelı szoftver TNW. Tartsuk be a fertızı anyagokkal történı munkavégzés szabályait! A tenyészet izolálása Izolálja a kultúrát a szokásos nem szelektív véres agarról (Columbia agar 5-7 % birkavérrel). Értékelje a tiszta kultúra morfológiáját, az izolátum származási helyét, a hemolitikus aktivitást és a színezéktermelést a véres agaron. A β-hemolizáló sztreptokokkuszok esetében alapvetı a szerológia csoport ismerete. Pneumokokkuszok esetében optocin érzékenységet és az epe hatására bekövetkezı oldódást kell vizsgálni, figyelembe véve a vankomicin (30 µg/korong) érzékenységet. Az inkubálást lehetıleg CO 2 atmoszférában kell végezni. Egyes esetekben figyelembe kell venni a vankomicin (30µg/korong) érzékenységi teszt eredményét a Leuconostoc és Pediococcus megkülönböztetésére más, viridans szteptokokkuszoktól. Gyártó: ERBA-LACHEMA a.s. Ellenırzött: Verzió szám: 2/1/2011 Forgalmazó: VITANI Kft. H-1147 Budapest, Telepes u. 17. Telefon: , Fax/Üzenet: vitani.kft@vitani.hu web: 1

2 A baktérium szuszpenzió készítése Tiszta 24 órás tenyészetbıl készítsen 3-3,5 ml szuszpenziót steril, nem pufferolt fiziológiás sóoldatban. Gyenge növekedés esetén inkubálja a lemezt további 24 órát. Vortexelje a szuszpenziót alaposan és mérje meg a turbiditását. A turbidítás 2-2,2 MacFarland legyen. Mérjen a szuszpenzióból 1,5 ml-t a szuszpenziós közegbe és gondosan homogenizálja. Ajánlatos ellenırzı leoltással ellenırizni a szuszpenzió tisztaságát. Megjegyzés A megfelelı szuszpenzió sőrőség eléréséhez használjon mintavevı pálcát. mikrotiter lemez elıkészítése Készítse elı az üres keretet és a fedıt. Nyissa ki az alumíniumfóliát és vegye elı a lemezt. Vágja le a szükséges számú csíkot. Távolítsa el az öntapadó fóliát a csíkokról és helyezze az elıkészített keretbe. Jegyezze fel a vizsgált izolátum azonosítóját a megfelelı csíkon. Tegye a megmaradt csíkokat a tárolótasakba nedvszívóval, és tárolja hőtıszekrényben a késıbbi felhasználásig. Óvja a nedvességtıl! Célszerő a maradék lemezt négy héten belül felhasználni. Sterilezze a keretet és a fedıt ismételt felhasználás esetén gızzel, vagy fertıtlenítıszerrel. Inokuláció Mérjen 100 µl fiziológiás sóoldatban készült inokulumot az elsı sor lyukaiba, továbbá a második és a harmadik sor H lyukába. Mérjen 100 µl szuszpenziós közegben készült inokulumot a második és a harmadik sor G-tıl A-ig lyukaiba. Fedje le az inokuláció után 2 csepp paraffin olajjal az ARG és a S06 lyukat. Helyezze a HIPPURATEtest csíkot a fiziológiás sóoldatban készült szuszpenzióba (egy HIPPURATEtest csíkhoz mintegy 0,5 ml szuszpenzió szükséges). A reakciók értékelése Inkubáció után ellenırizze a Petri-csészében a tenyésztés tisztaságát. A HIPPURATtest csík Használati Utasítása szerint adjon a csıbe HIPPURATE reagenst. Jegyezze fel az eredményt. Végezzen PYRAtest vizsgálatot a PYRAtest Használati Utasítása szerint. Jegyezze fel az eredményt. Az értékelı szoftver ajánlása szerint végezzen VPtest vizsgálatot. Megjegyzés A kényelmes használat érdekében a reakciók kódja a fedılemezre van nyomtatva, jelöli azokat a lyukakat, amelyeket paraffinolajjal kell borítani. A készlet eredménye vizuálisan és mőszeresen is értékelhetı. Vizuális értékelés Értékeléshez használja a Színváltozást bemutató táblázatot, vagy a STREPTOtest referencia színskálát. A kataláz negatív kokkuszok alapvetı biokémiai jellemzıit a Meghatározó táblázat tartalmazza. Az értékeléshez és az azonosításhoz ajánlott a TNW szoftver használata. Az értékelés módszerét és az eredmények bemutatását a TNW kézikönyv tartalmazza. Az azonosításhoz minden eredményt figyelembe kell venni: a vizsgálati anyag forrása, a telepek megjelenése és állaga, pigment termelés, hemolízis stb. Téves azonosítás esetén lehetséges további vizsgálatok elvégzése a TNW szoftver ajánlása szerint, vagy a vizsgálat megismétlése szükséges. Mőszeres értékelés Az értékelést a szoftver használati utasítása szerint kell végezni. Megsemmisítés A vizsgálatban használt eszközök fertıtlenítésre, az egyszer használatos ampullák, edények, mikrotiter lemezek megsemmisítésre kerülnek, az erre vonatkozó elıírásoknak megfelelıen. Hibaforrások Szennyezett vagy kevert tenyészet. A felhasznált inokulum turbiditása, vagy mennyisége nem volt megfelelı. A csík szennyezıdése a szomszédos inokulummal. A paraffinolaj borítás hiánya a megfelelı reakcióknál. Eltérés a Használati Utasítástól. 2

3 Atipikus törzs azonosítása, amelyet az azonosítási adatbázis nem tartalmaz. Korlátok A készlet kizárólag a Gram pozitív és kataláz negatív Streptococcusok és Enterococusok családjába tartozó kokkuszok és a rokon törzsek azonosítására alkalmas, amelyeket az azonosító adatbázis tartalmaz. Nem alkalmas más fajok azonosítására, vagy kizárására. Az itt használt módosított mikromódszerekkel kapott eredmények különbözhetnek a szokásos vizsgálatok eredményeitıl, illetve a szakirodalomban hozzáférhetı eredményektıl. Ellenırzés A készletet 115 törzzsel ellenırzték: Az azonosítás 62,2%-ban helyes volt. Az azonosítás 26,6%-ban nem volt jól megkülönböztethetı. A törzsek 11,2%-a nem azonosítható, vagy tévesen azonosított volt. Minıségbiztosítás, ellenırzés Új gyártási számú készlet, vagy nagyszámú vizsgálat esetén ajánlatos a színkifejlıdés, a pozitív és negatív reakciók ellenırzése standard kontroll törzsekkel. A törzsek a következı címen rendelhetık meg: Czech Collection of Microorganisms, Tvrdého 14, Brno, Czech Republic T: , Fax: ; ccm@sci.muni.cz. A törzsek hozzáférhetık liofilizált vagy zselatin korong formában. KONTROLL TÖRZSEK EREDMÉNYKÖZLİ LAPJA CCM No 1. sor 2. sor 3. sor NAG LAP bmn GLR bgl bga aga PHS ESL INU MAN SOR MLB RIB LAC PUL ARG SO6 AMG TGT MLT RAF TRE SOE CCM 3659 (ATCC 43198) E. cecorum CCM 4216 (ATCC 49427) E. raffinosus CCM 4047 (ATCC 10556) S. sanguinis CCM 1875 (ATCC 11700) E. faecalis CCM 2697 (ATCC 27574) K. sedentarius + + s + s s s s s Magyarázat: + = pozitív reakció; = negatív reakció; s = gyenge reakció Figyelmeztetés: Használjon friss izolátumot a CCM törzsekbıl. Ezek a törzsek a készlet ellenırzésére szolgálnak és nem a pontosság, érzékenység meghatározására. 1. sor 2. sor 3. sor Oszlop Teszt Kód SZÍNVÁLTOZTATÁST BEMUTATÓ TÁBLÁZAT Pozitív Reakció Negatív H N-Acetil- ß-D-glükózamin NAG sárga, halvány sárga színtelen G L-Leucin-aminopeptidáz LAP sárga, halvány sárga színtelen F β-mannosidáz bmn sárga, halvány sárga színtelen E ß-Glükuronidáz GLR sárga, halvány sárga színtelen D β-glükozidáz bgl sárga, halvány sárga színtelen C ß -Galaktozidáz bga sárga, halvány sárga színtelen B α-galatozidáz aga sárga, halvány sárga színtelen A Foszfatáz PHS sárga, halvány sárga színtelen H Eszkulin ESL fekete, sötét barna, sötét szürke színtelen, h. barna, h. szürke G Inulin INU sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös F Manitol MAN sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös E Sorbitol TGT sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös D Mellibiose MLB sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös C Ribóz RIB sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös B Laktóz LAC sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös A Pullulan PUL sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös H Arginin ARG sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös G Növekszik 6,5%NaCL SO6 sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös F α-metilglükózamin AMG sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös E Tagatóz TGT sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös D Maltóz MLT sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös C Raffinóz RAF sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös B Trehalóz TRE sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös A Szorbóz SOE sárga, halvány narancs vörös, narancsvörös Kiegészítı tesztek Pyrrolidonil-aril-amidáz PYR Vörös, narancs sárga 3

4 Hippurát hidrolízis HIP kék színtelen, halványsárga Kiegészítı reagens Acetoin VPT vörös, narancs színtelen, halvány rózsaszín MEGHATÁROZÓ TÁBLÁZAT Kiegészítı 1. sor 2. sor 3. sor reagens H G F E D C B A H G F E D C B A H G F E D C B A PYR HYP NAG LAP bmn GLR bgl bga aga PHS ESL INU MAN SOR MLB RIB LAC PUL ARG SO6 AMG TGT MLT RAF TRE SOE Meghatározás (+) - d d - d d d d - d (+) - - d Abiotrophia adiacens (+) d (-) d + - d d + d Abiotrophia defectiva (+) d (+) (-) d - (+) - d d - d d (-) - + d - + d (+) - Aerococcus viridans (-) - + (-) - d d d - Alloiococcus otitis + - d - d - d d d d - d - - Dolosicoccus paucivorans (+) (-) (+) d (+) (-) + + Enterococcus avium (+) (+) + d d + + d + (+) + - Enterococcus casseliflavus (-) d d d d d d Enterococcus cecorum d d d d d d Enterococcus columbae + (-) (+) (+) (+) - (+) d d (+) d + - d - Enterococcus durans + (-) + (+) (+) (+) d Enterococcus faecalis + d (+) (+) (-) - (+) (+) d d d Enterococcus faecium d (-) + d (+) + (-) (+) + + d + (+) + - Enterococcus gallinarum d + (+) - + (-) + (+) d (+) + - d d (-) + - Enterococcus mundtii + d d d d d d Enterococcus pseudoavium d Enterococcus saccharolyticus + d d d d - d + (+) - + (-) (-) (-) (+) + + d + + d d (+) d + - Enterococcus hirae/dispar + d - d d - d d d d - + d d (+) Enterococcus malodoratus/raffinosus + + d + d - d - - d d d - (+) d d d Facklamia sourekii d - - d d d d (-) (-) - - (-) (-) - d - (-) + (-) (-) d Gemella sp. + + d - d d d (+) d (+) + d - + d d Globicatella sanguinis d (+) d d Helcococcus kunzii (+) - (-) + - (-) d - - d d (+) d d Lactococcus garvieae - d - d - - d - - d d d d d Lactococcus lactis ssp. cremoris (-) (-) d d d - + d - - d d d d - + d (+) (+) d Lactococcus lactis ssp. lactis d (+) d - d d d - d d d - - d (-) - (+) d d d Leuconostos ssp d (-) (-) d - d - (-) - d - (+) - Streptococcus acidominimus d (+) - (-) (-) (+) d + + d (+) d + - (+) d Streptococcus agalactiae d d d - d d + - (-) d d + d Streptococcus bovis biovar I d - - (+) d d - - d - d d - d (+) - + (+) d d Streptococcus bovis biovar II d d + d d d - - (-) d d + d Streptococcus bovis biovar II d - (+) (+) (+) d - Streptococcus canis d - + (+) d Str. dysgalactiae ssp. dysgalactiae (+) d d d Str. dysgalactiae ssp. equisimilis d - + (+) Str. equi ssp.zooepidemicus d (+) (-) - - Streptococcus equi subsp. equi d - (+) (+) (-) (+) - d Streptococcus intermedius d (+) (+) + d d d Streptococcus mutans (-) - d d - (+) - d d d d - (-) - d (+) + - Streptococcus pneumoniae (+) - (+) (+) d d (+) d d + d d Streptococcus porcinus + - d + - (-) d - (-) (+) Streptococcus pyogenes d - + (+) d (+) (-) + d (-) - - (-) + + d Streptococcus suis (-) (+) - + (-) d + - (-) - + (+) + + (-) (-) + (-) + - Streptococcus uberis - - (-) d (-) (-) (-) - (-) - d d + - d (-) + (-) (+) - Streptococcus anginosus/constellatus d - d d d + + (+) - d d - (+) d (+) - d (-) + d + d Str. Scristatus/ gordonii - - d (-) d d d d (-) + d (-) (+) d d - Streptococcus mitis/ oralis - - (-) d d - (-) (+) d - (-) (-) - (+) d - - d - + d d - Str. Salivarius/ vestibularis - - d + (-) - d d d d d d (-) (-) d (-) + d d (-) d d + d d d Str. sanguinis / parasanguinis Magyarázat: + = pozitív (+) = valószínő pozitív d = változó ( ) = gyengén pozitív = negatív reakció Figyelmeztetés a Használati utasításra Csak IN VITRO használatra Csomagoláson feltüntetett jelölések Csomagolási darabszám Felhasználhatóság ideje Gyártó cég Csak egyszeri használatra Tárolási hımérséklet tartomány Gyári szám Katalógus szám 4

5 5