STAPHYtest 24. Szükséges reagensek, tesztcsíkok:

Átírás

1 In vitro diagnosztikum Kódszám: A alkalmas klinikai mintákból izolált Staphylococcus törzsek fajainak pontos azonosítására és megkülönböztetésére más Gram pozitív, kataláz pozitív coccusoktól. A készlet 40 vizsgálatra alkalmas, 24 biokémiai tesztet használ és vizuálisan, vagy készülékkel értékelhetı. A készlet lehetıvé teszi a koaguláz szőrıvizsgálatot és a novobiocin rezisztencia vizsgálatát. A biokémiai teszteket a mikrotiter lemez 3 sorának lyukai tartalmazzák, a három csík egy törzs vizsgálatára alkalmas. Az azonosítást segítik a VPtest, PYRAtest és végül az OXItest gyorstesztek, ha használatukat a kiértékelı szoftver javasolja. A teszttel 40 törzs vizsgálata végezhetı el. Tartalma 10 db mikrotiter lemez (lemezenként 4 törzs vizsgálatára), Használati utasítás, meghatározó táblázattal, 10 db polietilén tasak az inkubáláshoz, 40 db eredményértékelı és leletkiadó lap, Keret és jelzéssel ellátott fedı, steril. Kiegészítı anyagok Szükséges reagensek, tesztcsíkok: Kiegészítı reagensek, tesztcsíkok: A készlet nem tartalmazza! Paraffinolaj, steril. OXItest, OXItest reagens, VPtest, Acetoin reagens, PYRAtest, PYR reagens, NOVOBIOCIN korong, BACITRACIN korong. Eszközök, értékeléshez szükséges termékek Densi-La Méter II. Kódszám: Vortex V1, Kódszám: Adagoló pipetta, Kódszám: Színskála STAPHY 24-hez, Kódszám: Kódkönyv STAPHY 24-hez Kódszám: Meghatározó szoftver, Kódszám: Tárolás, felhasználás A hőtıszekrényben (2 8 C) tárolható és a csomagoláson feltüntetett lejárati ideig használható. Eljárás Figyelem: A csak laboratóriumi felhasználásra készült. A készlettel csak megfelelıen gyakorlott személyzet dolgozhat, akik tisztában vannak a fertızı anyagokkal végzett munka szabályaival és a fertızı anyagok megsemmisítésére vonatkozó helyi elıírásokkal. E s z k ö z ö k : Petri-csészék, Columbia véres agar táptalajjal, NOVOBIOCIN korongok Kémcsıállvány, kémcsı (100x15 mm), 3,5 ml steril fiziológiás sóoldattal, Denzitométer, Vortex, Adagoló mikropipetta, 0,1ml-es, steril pipettaheggyel, Termosztát 37 C, A szokásos mikrobiológiai felszerelés: oltókacs, színes jelölı toll, égı, fertıtlenítıszer, Paraffinolaj. Tartsuk be a fertızı anyagokkal történı munkavégzés szabályait! Gyártó: ERBA-LACHEMA a.s. Ellenırzött: Verzió szám: 2/1/2011 Forgalmazó: VITANI Kft. H-1147 Budapest, Telepes u. 17. Telefon: , Fax/Üzenet: vitani.kft@vitani.hu web: 1

2 A t e n y é s z e t i z o l á l á s a : A Staphylococcus nemzetségbe tartozó baktériumok tenyésztésére ajánlott szokásos Columbia véres agar táptalajról izolálja a törzset. A tiszta tenyészetekbıl végezze el a Gram festést és a kataláz tesztet. Ha tenyészetet ellenırizte, végezzen koaguláz tesztet és az eredményt jegyezze fel. A b a k t é r i u m s z u s z p e n z i ó k é s z í t é s e : Készítsen szuszpenziót 24 órás tiszta tenyészetbıl fiziológiás sóoldatban és gondosan homogenizálja Vortex keverıvel. A szuszpenzió optikai sőrősége McFarland 2 érték legyen. Kisebb, vagy nagyobb optikai sőrőségő szuszpenzió téves eredményt okozhat. A szuszpenzióból ugyanazzal az oltókaccsal oltson le egy nem szelektív táptalajra, a tenyészet tisztaságának és morfológiájának ellenırzésére. Koaguláz negatív törzsek novobiocin rezisztenciáját NOVOBIOCIN koronggal kell ellenırizni. S T A P H Y t e s t 2 4 m i k r o t i t e r l e m e z e lı k é s z í t é s e : Készítsük elı az üres keretet és a fedıt. Nyissa fel az alumínium fóliacsomagolást a hegesztésnél és vegye ki a lemezt. Vágja le a szükséges 3 soros egységet, a vizsgálat számának megfelelıen. Távolítsa el az öntapadó fóliát a csíkokról és helyezze a csíkokat a keretbe. Írja fel a vizsgált törzs, vagy izolátum számát a megfelelı csíkra. A lemez maradékát, a fedı fóliával helyezze vissza az alumínium zsákba a nedvszívóval, hajtsa a nyitott végét a lemez alá, és tárolja hőtıszekrényben, különös figyelemmel a nedvesség elleni védelemre. Az elsı felbontás után 10 munkanapon belül használja fel a maradék lemezt. A keretet és a fedıt fertıtlenítse a következı használathoz. Inokuláció Mérjen 0,1 ml szuszpenziót a három sor minden lyukába. A bemérés után fedje le paraffin olajjal a következı lyukakat: H, G és F (Elsı sor, ureáz, arginin és ornitin teszt). M e g j e g y z é s Új gyártási számú készlet használata esetén javasolt a pozitív és negatív reakciók színváltozását standard törzsek alkalmazásával ellenırizni. I n k u b á c i ó Helyezzük a sorokat tartalmazó keretet polietilén zsákba. Zárjuk le a zsák nyitott végét, hogy megakadályozzuk a beszáradást az inkubálás ideje alatt. Helyezzük a lemezt tartalmazó polietilén zsákot 37 C-os termosztátba, órára. L e o l v a s á s, é r t é k e l é s Az inkubáció után vizsgálja meg a Petri csészébe csíkozással leoltott ellenırzı tenyésztés tisztaságát, novobiocin rezisztenciáját, és jegyezze fel az eredményeket. A Staphylococcusok és a Macrococcusok megkülönböztetésére más Gram-pozitív, kataláz pozitív coccusoktól ajánlatos bacitracin 0.04 érzékenységő tesztet végezni, a BACITRACIN S Használati Utasítása szerint. Olvassa le az eredményeket és jegyezze fel az értékelı lapra. M e g j e g y z é s Értékelje a reakciót a Színváltozást bemutató táblázat, a Színskála teszthez, és/vagy az ajánlott kontroll törzs alapján. A mikrotiter lemez fedılapjára nyomtatott jel mutatja, hogy a tesztlyuk paraffinolajjal fedett. V i z u á l i s é r t é k e l é s é s a z o n o s í t á s A kataláz pozitív coccusok alapvetı biokémiai reakcióit és az azonosítás adatbázisát tartalmazza a Meghatározó táblázat, a Kódkönyv vagy a megfelelı szoftver. Az azonosításhoz minden eredményt figyelembe kell venni: a vizsgálati anyag forrása, a telepek megjelenése és állaga, a mikroszkópos vizsgálat eredménye stb. A koaguláz pozitív Staphylococcusok azonosításának értékelésénél mindig vegye figyelembe a koaguláz teszt pozitív eredményét. Kétség esetén meg kell ismételni az eljárást, szükség szerint kiegészítve újabb vizsgálatokkal. Mősz e r r e l t ö r t é nı leo l v a s á s e s e t é n : Mőszeres leolvasásnál a használati utasítás szerint kell eljárni. A meghatározás a profil kiszámításával történik, amelynek részleteit a kódkönyv tartalmazza. 2

3 Megsemmisítés A vizsgálatban használt eszközök fertıtlenítésre és autoklávozásra, az egyszer használatos ampullák, edények, mikrotiter lemezek megsemmisítésre kerülnek, az erre vonatkozó elıírásoknak megfelelıen. H i b a f o r r á s o k Szennyezett tenyészet. A szuszpenzió alacsony turbiditása vagy kis térfogata. A szuszpenziót szennyezte a szomszédos lyuk reagense. Nem volt fedve paraffinolajjal a biokémiai reakciónak megfelelı lyuk. Téves kiértékelés, vagy helytelen kivitelezés történt az egyes lépéseknél. Elıfordulhat olyan törzs vagy faj, amelyre vonatkozó adatokat a Meghatározó táblázat vagy a Kódkönyv nem tartalmaz. Korlátok A készlet kizárólag a Staphylococcus nemzetségbe tartozó kataláz pozitív coccusok azonosítására és az azonosító adatbázisban található rokon fajok megkülönböztetésére alkalmas, nem használható más fajok azonosítására vagy kizárására. Az itt használt módosított mikromódszerekkel kapott eredmények különbözhetnek a szokásos vizsgálatok eredményeitıl, illetve a szakirodalomban hozzáférhetı eredményektıl. Ellenırzés A készletet egy 162 törzset tartalmazó keverékkel vizsgálták: Az azonosítás 93,8%-ban helyes volt, Az azonosítás 2,5%-ban helyes volt, de alacsony i. d. értékkel, A törzsek 3,7%-a nem volt azonosítható. Minıségbiztosítás A teszt minısége a gyártás különbözı folyamatában többszörösen ellenırzött. A gyártási számmal ellátott sarzs standard törzsekkel ellenırzött. Azon laboratóriumok számára, amelyek el kívánják végezni a saját ellenırzést, a következı törzsek használata javasolt: S. epidermidis CCM 4418, S. gallinarum CCM 3572, S. lugdunensis CCM 4069, S. nepalensis CCM 7046, S. sciuri subsp. rodentium CCM 4667 és Kytococcus sedentarius CCM A törzsek liofilizált vagy zselatin-lemez formában a következı címen rendelhetık meg: Czech Collection of Microorganisms, Tvrdého 14, Brno, Czech Republic T: , Fax: M e g j e g y z é s : Mindig friss CCM törzset használjon, ha a készlet mőködését ellenırzi. Ezek a törzsek alkalmasak a teszt mőködésének az ellenırzésére, de nem használhatók a teszt pontosságának vagy meghatározó képességének ellenırzésére. KONTROLL TÖRZSEK EREDMÉNYKÖZLİ LAPJA CCM No 1. sor 2. sor 3. sor URE ARG ORN bga GLR bgl PHS ESL NAG GAL SUC TRE MAN MLT XYL MNS LAC SOR RIB FRU CEL ARA RAF XOL CCM 4418 S. epidermidis d + - d CCM3572 S. gallinarum d CCM 4069 S. lugdunensis CCM7046 S. nepalensis d d CCM 4657 S. sciuri subsp s rodentium CCM 2699 Kytococcus sedentarius Magyarázat: + = pozitív reakció; = negatív reakció; d = változó; s = gyenge reakció. 3

4 SZÍNREAKCIÓ VÁLTOZÁST BEMUTATÓ TÁBLÁZAT 1. sor 2. sor 3. sor Oszlop Teszt Kód Pozitív Reakció Negatív H Ureáz URE lilásvörös, narancsvörös sárga, halvány narancs G Arginin ARG lilásvörös, vörös sárga, halvány narancs F Ornitin ORN lilásvörös, vörös sárga, halvány narancs E ß-Galaktozidáz bga sárga, halványsárga színtelen D ß-Glükuronidáz GLR sárga, halványsárga színtelen C ß -Glükozidáz bgl sárga, halványsárga színtelen B Foszfatáz PHS sárga, halványsárga színtelen A Eszkulin ESL fekete, sötétbarna, sötétszürke színtelen, h.barna,h.szürke H N-acetil- ß-D-glükózamin NAG sárga, sárgásbarna lila, barnáslila G Galaktóz GAL sárga, sárgásbarna lila, barnáslila F Szukróz SUC sárga, sárgásbarna lila, barnáslila E Trehalóz TRE sárga, sárgásbarna lila, barnáslila D Mannit MAN sárga, sárgásbarna lila, barnáslila C Maltóz MLT sárga, sárgásbarna lila, barnáslila B Xilóz XYL sárga, sárgásbarna lila, barnáslila A Mannóz MNS sárga, sárgásbarna lila, barnáslila H Laktóz LAC sárga, sárgásbarna lila, barnáslila G Szorbitol SOR sárga, sárgásbarna lila, barnáslila F Ribóz RIB sárga, sárgásbarna lila, barnáslila E Fruktóz FRU sárga, sárgásbarna lila, barnáslila D Cellobióz CEL sárga, sárgásbarna lila, barnáslila C Arabinóz ARA sárga, sárgásbarna lila, barnáslila B Raffinóz RAF sárga, sárgásbarna lila, barnáslila A Xilitol XOL sárga, sárgásbarna lila, barnáslila Acetoin VPT vörös, rózsaszín színtelen, h.rózsaszín Kiegészítı tesztek Pirrolidon-aril-amidáz PYR vörös, narancs sárga Oxidáz OXI kék színtelen 4

5 COA NOV MEGHATÁROZÓ TÁBLÁZA 1. sor 2. sor 3. sor H G F E D C B A H G F E D C B A H G F E D C B A URE ARG ORN bga GLR bgl PHS ESL NAG GAL SUC TRE MAN MLT XYL MNS LAC SOR RIB FRU CEL ARA RAF XOL Meghatározás d (-) d - (+) d d d + d (+) d d (+) - d + - (-) d d Aerococcus viridans - (+) d (-) (-) Dermacoccus nishinomyaensis - - (-) - - d d - d (+) - + d d Kocuria kristinae d (-) - (-) - d d - d - - Kocuria rosea - - (+) - - d d (-) (-) - (-) d (-) d - - d Kocuria varians - + d d - (-) - d d d + d (-) Macrococcus bovicus (-) - (+) - d d (+) d (+) Macrococcus carouselicus d d - (+) Macrococcus caseolyticus - + (+) d - d (-) d + d Macrococcus equipersicus - - (-) (-) - - (-) Micrococcus sp.* d - d - (+) d - d Rothia mucilaginosa d (+) - d d - (+) d Staphylococcus arlettae d Staphylococcus aureus ssp.anaerobius d - d d Staphylococcus aureus ssp. aureus d - (-) (-) (-) d (+) - d - (-) (-) Staphylococcus auricularis (-) (+) Staphylococcus cap.ssp.ureolyticus d (-) d - (+) Staphylococcus capitis ssp. capitis - - (+) d (+) (+) Staphylococcus caprae (+) - (-) + (-) d d - d (+) (+) Staphylococcus camos ssp. camosus (+) Staphylococcus camosus ssp. utilis d + d d d d d - + (+) (+) - + (+) d d Staphylococcus cohn.ssp. urealyticum (-) - (-) - (-) (-) - + d d - d - d d Staphylococcus cohnii ssp. cohnii (-) d Staphylococcus condimenti d d d + d - d - Staphylococcus delphini - - (+) d (-) d - d (+) - (-) (+) d d Staphylococcus epidermidis d (+) + d + d (+) (+) + + d (-) Staphylococcus equorum (+) - (+) d d + (+) d Staphylococcus felis - + (+) - - d d (+) d (+) + + (+) + + d Staphylococcus gallinarum (+) - d d d - - (+) d + (+) d d d (-) d Staphylococcus haemolyticus (-) d (-) d - (-) Staphylococcus hom. ssp. novobiosept (-) (+) d + d (-) d Staphylococcus hominis ssp. hominis d - d + - (-) (+) d (+) - (+) (+) + (+) (+) (-) Staphylococcus hyicus (+) - d - (-) + - d (+) + (+) d d - + (+) Staphylococcus chromogenes + - (+) d (-) (+) d d - + (+) Staphylococcus intermedius - + d - - d d (-) d (-) d - d d d d Staphylococcus kloosii d - + d + (+) d d + d d d (+) - Staphylococcus lentus - - d - + d - (+) - - (+) d (+) d d + d (-) d (-) (-) (-) - Staphylococcus lugdunensis - Staphylococcus lutrae (-) (-) + - d d Staphylococcus muscae d (+) (+) - - d Staphylococcus pasteuri - - (+) d (+) d d d + d d - - d d d Staphylococcus piscifermentans (-) - (+) - d - - d (-) (+) (+) (+) Staphylococcus saproph. ssp. saproph d d d d - + (+) (+) d d (-) d - d Staphylococcus saprophyt. ssp. bovis d + - d (+) (-) + - d + + d d - - Staphylococcus sciu. ssp. rodentium d + - d + + (+) + + (+) d d + + d d - - Staphylococcus sciu. ssp. camaticus d + (+) + - d + (+) + d (-) (+) (-) (+) d - - Staphylococcus sciuri ssp.sciuri (+) - d (+) d - d d - (+) Staphylococcus schlei. ssp. schleiferi d d (+) + d - d (+) (+) - (+) d - d - + (-) + + (+) d - d + (+) d Staphylococcus schlei.ssp.coagulans - Staphylococcus simulans (+) - d d + - d - - d (+) + d Staphylococcus vitulinus d - d (+) d + + d d - d Staphylococcus warneri (+) + (+) d d (+) (+) + + (+) (+) (+) + d (-) d + - d - (-) Staphylococcus xylosus Magyarázat:+ = % pozitív reakció, (+) = % pozitív reakció d = % változó reakció ( ) = % pozitív reakció, = negatív reakció * = tájékoztató meghatározás Figyelmeztetés a Használati utasításra Csak IN VITRO használatra Tárolási hımérséklet tartomány Csomagoláson feltüntetett jelölések Csomagolási darabszám Felhasználhatóság ideje Gyári szám Gyártó cég Csak egyszeri használatra Katalógus szám 5