Tartalom. 2011, XI. évfolyam 3. szám. GEN-LAB Kft.

Átírás

1 2011, XI. évfolyam. szám GEN-LAB Kft. Tartalom Kinetex Melyik dimenzió, milyen készülék? 2. oldal Kinetex Számoljunk egy kicsit.... oldal AXIA preparatív kolonnák 4 6. oldal Bemutatkoznak a 20m-es GC kolonnák 7 9. oldal Fecskendőszűrők jobbat, kedvezőbb áron? HILIC kromatográfia ha túl poláros 10. oldal oldal HPLC kiegészítők A-Z-ig 14. oldal GC kiegészítők A-Z-ig 15. oldal Hírek röviden oldal Gen-Lab Kft. H-1119 Budapest, Hadak útja 41. Telefon: (6-1) Fax: (6-1) info@gen-lab.hu Web:

2 Milyen nyomásértékek várhatóak a KinetexTM Core Shell oszlopok használatakor? Sokszor feltesszük ezt a kérdést: A hatékonyság növelése könnyen elérhető, de milyen nyomásesés várható a használat során? Az alábbi táblázatokban megtekinthetjük, hogy különféle oldószer összetétel esetén (50:50 MeCN:H2O és 60:40 MeOH:H2O) más-más dimenziójú oszlop esetén milyen nyomásértékeket várhatunk. Láthatjuk, hogy a kívánt (UHPLC-s) hatékonyság eléréséhez nincs szükség új, nagynyomású pumpával ellátott készülék beszerzésére. Hagyományos LC rendszeren is megvalósíthatunk gyors és nagy hatékonyságú elválasztást. Természetesen ha már rendelkezünk UHPLC készülékkel akár eddig nem látott eredményeket is elérhetünk. A grafikonok alatti táblázatban megtalálja, hogy melyik görbéhez milyen kolonna dimenzió tartozik. 50:50 MeCN/Víz 60:40 MeOH/Víz 2. oldal

3 Kinetex - Nagy hatékonyság... Ez mit is takar? Sokszor olvashattuk már, hogy a Kinetex kolonnák használatával kimagasló hatékonyságot érhetünk el akár hagyományos (pmax<400 bar) HPLC készüléken. Nézzük meg, hogy ez számokban mit jelent? 10μm teljesen porózus töltetről váltunk 2,6μm-es Kinetexre. Megközelítőleg 6x-os hatékonyság növekedés 5μm teljesen porózus töltetről váltunk 2,6μm-es Kinetexre. Megközelítőleg x-os hatékonyság növekedés μm teljesen porózus töltetről váltunk 2,6μm-es Kinetexre. Megközelítőleg 2x-es hatékonyság növekedés 2,5μm teljesen porózus töltetről váltunk 2,6μm-es Kinetexre. Megközelítőleg 1,5x-es hatékonyság növekedés 1,7μm teljesen porózus töltetről váltunk 2,6μm-es Kinetexre. Azonos hatékonyság! Mindez felbontás tekintetében mit takar? Ha az oszlop hatékonyságát megtriplázzuk úgy, hogy egy 5μm-es oszlop helyett egy Kinetex 2,6μm-es kolonnát használunk (megegyező dimenzióval), milyen felbontásbeli növekedést tapasztalhatunk? x-os hatékonyság növekedéssel (ΔN=) számolva: A felbontás megnövekszik -mal, ami pontosan 7% felbontásbeli növekedést jelent. Ez a gyakorlatban: Ha egy 150mm-es 5μm-es oszlopot használok és 1,-es felbontás mérhető a kritikus pár között, kaphatok-e alapvonali elválást ha egy ugyanolyan dimenziójú Kinetex oszlopot használok? IGEN! Tudjon meg többet. oldal

4 Megnövelt oszlop élettartam a szabadalmaztatott technológiának köszönhetően Egységes töltés és reprodukálható csúcsalakok Nagyobb hatékonyság Nagy áramlási sebesség tűrés Megnövelt terhelhetőség Élesebb csúcsok Az AXIATM egy töltési technikát és részben ebből következően egy új kolonna megjelenési formát (hardvert) jelent. Ezek együttesen egy homogén és megfelelő sűrűségű, tehát nagy és állandó kolonna hatékonyságot (N) biztosító töltetágyat eredményeznek. Választható töltetek: Luna - világszerte elismert töltetek, 99,99%-os tisztaságú szilika, állófázis: C18, C18(2), C8(2), Phenyl-hexyl, Pentafluorophenyl Propyl (PFP), szilika és amino, nagy fajlagos felület: 400 (C18: 440) m2/g; pórusátmérő: 100 Å Peszticid osztály Gemini - nagy ph (1-12!) stabilitás, hosszú élettartam - TWIN technológia, állófázis: C18, C6-Phenyl, nagy fajlagos felület: 75 m2/g; pórusátmérő: 110 Å Gemini - NX nagy ph(1-12!) stabilitás, megnövelt élettartam TWIN-NX technológia (etilén keresztkötésekkel védett szilika), állófázis: C18, nagy fajlagos felület: 75 m2/g; pórusátmérő: 110 Å Synergi - Synergi MAX-RP (C12), Synergi Polar-RP (fenil-éter / poláris endcapping ), Synergi Hydro-RP (C18 / poláris endcapping ) Jupiter 00 fehérjék elválasztásához ( > 10,000 MW), állófázis: C4, C5, C18 Jupiter Proteo kis molekulatömegű ( < 10,000 MW) fehérjék és peptidek elválasztásához, állófázis: C12 Lux királis fázisok 5 állófázis, melyek az enantiomerek több mint 92%-ra megfelelő elválasztással szolgálnak. 4. oldal

5 ÚJ GENERÁCIÓS PREPARATÍV OSZLOPOK TÖLTÉSI TECHNOLÓGIA: 1 2 Az egyéb töltési technikákkal ellentétben az AXIA kolonnáknál nem szükséges az utókomprimálás. 1. A töltet belekerül egy hüvelyen keresztül az oszlopba. 2. A hidraulikus dugattyúval a megfelelő nyomással beletömörítik a töltetet az oszlopba.. A töltet homogén, a dugattyú a helyén marad (p=áll.). 4. A dugattyú még mindig az oszlopban (p=áll.) és ekkor megtörténik az oszlop lezárása. 5. A fedél ráhelyezése és a dugattyú szárának leválasztása (p=áll.). 6. a nyomás még mindig állandó, a töltet homogén maradt. 1. injektálás = injektálás oszlop = 2. oszlop reprodukálhatóság Hagyományos töltési eljárás A hagyományos töltési technikáknál a töltés befejeztével eltávolítják a dugattyút és a nyomóerő megszűnésével az összepréselt töltet kitágul. A kitágulás hatására kisebb sűrűségű helyek keletkeznek. A használat során az áramló fázis a kolonnatöltetet átrendezi, amelynek eredményeképpen a kolonna elején holttérfogat keletkezik, ezért az elméleti tányérszám (N) jelentős mértékben csökkenhet. Tudjon meg többet 5. oldal

6 Élettartam vizsgálat: Luna 5u C18(2) Axia (1. vs injektálás): Oszlop: Luna 5 μm C18(2) 100 Å LC Column 50 x 21.2 mm, AXIA Packed Dimenzió: 50 x 21,2 mm ID Katalógusszám: 00B-4252-P0-AX Elúció típusa: Gradiens Komponensek: 1 Triprolidine 2 Methacycline Amitriptyline A eluens: 0.5% TFA vízben B eluens: 0.5% TFA acetonitrilben Profil: Lépés: Time (perc): Áramlási sebesség: 0 ml/perc Pct A: Pct B: Injektálás: 2 μl (250 C) Detektálás: UV-Vis Abs. - Variable 254 nm Peszticid osztály Az alábbi táblázatban megtekintheti a jellemző injektálható mintamennyiséget (mg) és az ajánlott áramlási sebességet (ml/min) az analitikai mérettől (4.6 mm átmérő) a preparatív oszlopokig (21,2-50 mm): Hossz / Átmérő 4.6 mm 21.2 mm 0 mm 50 mm 50 mm mm mm mm mm Áramlási sebesség (ml/perc) Tudjon meg többet 6. oldal

7 Gázkromatográfiás mérések optimalizálása 20 méteres oszlopok Optimalizálás célja lehet: 1. Analízisidő csökkentése 2. Robosztusság növelése. Felbontás növelése 4. Érzékenység növelése A gázkromatográfiás mérések optimalizálásának és ezzel együtt a produktivitás növelésének egyik módja lehet általános (0 m; 0,25 μm; 0,25mm) oszlopaink kisebb méretűre cserélése. A belső átmérő csökkentésével megegyező élettartam mellett nagyobb felbontást és rövidebb analízisidőt lehet elérni. Előnyök: 1. Jobb jel/zaj viszony 2. Rövidebb futási idő. Alacsonyabb költség 4. Nagyobb hatékonyság : Hatékonyság - Kisebb átmérő nagyobb oszlophatékonyság Az alábbi táblázatban megtekintheti, hogy az oszlop átmérőjének függvényében hogyan változik egy oszlop hatékonysága: Oszlop belső átmérője (mm) Elméleti tányérszám (P/m) Tányérszámváltozás (%) Felbontásváltozás (%) 0, % 5% 0, % 18% 0, % 10% 0, % 0% 0, % -10% 0, % -40% Tudjon meg többet 7. oldal

8 Poliaromás szénhidrogének (PAH) ZB-5ms oszlopon: A következő két példa szemlélteti, milyen előnyökkel szolgálhat a kolonna méreteinek csökkentése, különös tekintettel a felbontás és az analízis időbeli változásaira vonatokozóan: Oszlop: Zebron ZB-5MS GC kapilláris oszlop Fázis: 5% fenil 95% dimetil-polisziloxán (Arilén Mátrix Technológia) Dimenzió: 0 m x 0,25 mm x 0,25 μm Katalógusszám: 7HG-G Hőmérséklet program: 155 C-ról 250 C-ig 25 C/perc-cel, majd 280 C-ra 5 C/perc-cel, majd 25 C/perc-cel 20 C-ra Vivőgáz: Hélium, 1,4 ml/perc Injektálás: split 15:1 1 μl (285 C) Detektálás: MS (240 C) 8. oldal Oszlop: Zebron ZB-5MS GC kapilláris oszlop Fázis: 5% fenil 95% dimetil-polisziloxán (Arilén Mátrix Technológia) Dimenzió: 20 m x 0.18 mm x 0.18 μm Katalógusszám: 7FD-G Hőmérséklet program: 10 C 0.5 percig, 250 C ra 25 C/perc-cel, 270 C-ra 6 C/perc-cel, 20 C-ra 25 C/perc-cel, majd 20 C 4 percig Vivőgáz: Hélium, 1,2 ml/perc Injektálás: split 15:1 1 μl (285 C) Detektálás: MS (180 C) Komponensek: 1 Naphthalene 2 Acenaphthylene Acenaphthene 4 Fluorene 5 Phenanthrene 6 Anthracene 7 Fluoranthene 8 Pyrene 9 Benzo[a]anthracene 10 Chrysene 11 Benzo[b]fluoranthene 12 Benzo[k]fluoranthene 1 Benzo[a]pyrene 14 Indeno[1,2,-cd]pyrene 15 Dibenz[a,h]anthracene 16 Benzo[g,h,i]perylene További alkalmazások:

9 ASTM módszer D2887 ZB-1ms oszlopon: Oszlop: Zebron ZB-1ms GC kapilláris kolonna Fázis: 100% dimethyl polysiloxane Dimenzió: 0 m x 0,25 mm x 0,25 μm Katalógusszám: 7HG-G Hőmérséklet program: 50 C 0.5 percig, 60 C-ra 0 C/perc-cel, majd 60 C 7 percig Vivőgáz: Hélium, 1,6 ml/perc Injektálás: Split 0:1 1 μl (0 C) Detektálás: Flame Ionization (FID) (60 C) Oszlop: Zebron ZB-1ms GC kapilláris kolonna Fázis: 100% dimethyl polysiloxane Dimenzió: 20 m x 0.18 mm x 0.18 μm Katalógusszám: 7FD-G Hőmérséklet program: 50 C 0.5percig, 50 C-ra 0 C/perc-cel majd hőntartás 8percig Vivőgáz: Hélium, 1,1 ml/perc Injektálás: Split 0:1 0,5 μl (40 C) Detektálás: Flame Ionization (FID) (60 C) Komponensek: 1 Pentane (C5) 2 Solvent Contaminant Hexane (C6) 4 Heptane (C7) 5 Octane (C8) 6 Nonane (C9) 7 Decane (C10) 8 Undecane (C11) 9 Dodecane (C12) 10 Tetradecane (C14) 11 Pentadecane (C15) 12 Hexadecane (C16) 1 Heptadecane (C17) 14 Octadecane (C18) 15 o-terphenyl 16 Eicosane (C20) 17 Tetracosane (C24) 18 Octacosane (C28) 19 Dotriacontane (C2) 20 Hexatriacontane (C6) 21 Tetracontane (C40) 22 Tetratetracontane (C44) További alkalmazások: 9. oldal

10 Phenex fecskendőszűrő Fecskendőszűrők: Kiváló minőségű Phenomenex termékek, melyek segítségével egyszerűen és költséghatékonyan tisztíthatja mintáit. A PhenexTM fecskendőszűrők gyors és hatékony megoldást jelenthetnek oszlopaink élettartamának megnövelésére, illetve méréseink reprodukálhatóságának javítására. Kiváló Ár! Átmérő / Mennyiség 4 mm és mm 100 db 210 Ft/db 26 Ft/db 500 db 168 Ft/db 210 Ft/db Membrán típusok: Membrán átmérők: - PTFE Polytetrafluoroethylene - PES Polyethersulfone - RC Regenerated Cellulose - NY Nylon - GF/NY Glass fiber / Nylon - GF/CA Glass Fiber / Cellulose Acetate - GF Glass Fiber - 4 mm Minta mennyisége: 2 ml mm Minta mennyisége: 2-10 ml mm Minta mennyisége: ml Pórusméret: - 0,2 μm - 0,45 μm Akár Akár órás órás kiszállítással! kiszállítással! Kérjen mintacsomagot: info@gen-lab.hu 10. oldal

11 HILIC Bár a HPLC-n történő elválasztások nagy része hidrofób állófázison (C18, C8, fenil...) történik, a hidrofil anyagok visszatartása nagyon kis mértékű fordított fázisú körülmények között. A hidrofób állófázis mellett stagnáló szerves oldószer réteg kedvezőtlen hatással van a poláris vegyületek és állófázis között kialakuló kölcsönhatásra, ennek eredményeképpen ezeknek az anyagoknak a visszatartása kicsi lesz. A HILIC (Hidrophilic Interaction Liquid Chromatography) megnövekedett retenciót biztosít poláris anyagokra akár magas szerves tartalmú mozgófázisban is. Az állófázis felületén egy vízréteg alakul ki, amely elősegíti a poláris vegyületek transzferét a szerves mozgófázisból az állófázisra, így jelentősen nő a visszatartás. HILIC módban minél polárisabb egy vegyület, annál nagyobb visszatartásra számíthatunk. Nagy előnye még a HILIC-nek, hogy a mozgófázis magas szerves oldószer tartalma miatt ideális MS detektáláshoz. Meghatározó kölcsönhatások HILIC módban: H-híd Dipol-dipol mozgófázis Vízben gazdag réteg az állófázis felületén HILIC esetén az eluensek erősségi sorrendje: THF < aceton < acetonitril < izopropanol <etanol < metanol < víz A HILIC további előnye, hogy lehetővé teszi az SPE-vel és protein precipitációval történt mintaelőkészítés után az eluált mintakomponens azonnali injektálását az oszlopra, mivel ezek az oldószerek gyengébb eluensek, mint a HILIC mozgófázis, így nem okoznak zónaszélesedést, illetve korai elúciót. 11. oldal

12 Ajánlott általános gradiens profil HILIC módban: 90% 50% ACN A HILIC módban gyengén visszatartott anyagok meghatározására 2,5 percig tartsuk az acetonitrilt 90%-on 7,5 perc gradiens szakasz, a szerves fázis kezdő- és végkoncentrációja módosítható a maximális szelektivitás eléréséig Az acetonitrilt izokratikus módban 2,5 percig 50%-on tartjuk a HILIC módban erősen visszatartott vegyületek meghatározására. Vízoldható vitaminok Kinetex 2.6um HILIC 150 x 4.6mm oszlopon Oszlop: Kinetex 2.6 μm HILIC 100 Å LC Dimenzió: 150 x 4,6 mm ID Katalógusszám : 00F-4461-E0 Elúciós profil: gradiens Eluens A: Acetonitril Eluens B: 100mM Ammónium formiát ph.2 Eluens C: Víz Gradiens profil: Idő (perc) A B C Áramlási sebesség: 1 ml/min Hőmérséklet.: szobahőmérséklet Detektálás: UV-Vis 260 nm-en Minták: Nikotinamid PABA Piridoxin Riboflavin Nikotinsav Aszkorbinsav Fólsav B12 vitamin Tiamin 12. oldal

13 HILIC vs. RP Poláris anyagok meghatározásának összehasonlítása HILIC és C18 oszlopon Nikotin és metabolitjainak meghatározása Luna HILIC oszlopon Oszlop: Luna 5 µm HILIC 200 Å LC 100 x 2 mm Katalógusszám:00D-4450-B0 Dimenzió:100 x 2 mm ID Elúciós profil: Izokratikus Eluens A: 90/10 Acetonitril/100mM Ammónium Formiát ph.2 Gradiens Profil: Idő (min) A Áramlási sebesség: 0,4 ml/min Hőmérséklet: szobahőmérséklet Detektálás: Tömegspektométer (MS) Nikotin és metabolitjainak meghatározása C18 oszlopon Oszlop: Gemini 5 μm C Å LC 100 x 2 mm Katalógusszám: 00D-445-B0 Dimenzió: 100 x 2 mm ID Elúciós profil: gradiens Eluens A: víz 0,1 % v/v hangyasavban Eluens B: acetonitril 0,1% v/v hangyasavban Gradiens profil: Idő (min) 0 1,01 5,5 A B 0 Áramlási sebesség: 0,4 ml/min Hőmérséklet: szobahőmérséklet Detektálás: Tömegspektrométer (MS) 1. oldal

14 Kromatográfiás kiegészítők HPLC kiegészítők SolventTrak Oldószer visszanyerő rendszer Degassex Oldószer gáztalanító készülék PEEK Különböző belső átmérővel ThermaSphere Kolonna termosztátok Kék, sárga, piros Csatlakozók Synergi Kolonna választó Kolonna védelem Sure-Fit Connector Önbeállófejes csatlakozó bármely HPLC oszlophoz FilterSys Eluens szűrő KrudKatcher Mechanikai előszűrő Analitikai in-line filter Sure-Lok Coupler Alacsony holttérfogatú csatlakozó SecurityGuard Tudjon meg többet Védőkolonna 14. oldal

15 Kromatográfiás kiegészítők GC kiegészítők Detektor tisztító készlet Injektor tisztító készlet Ferrule eltávolító Fecskendők Hamilton SGE, VICI Cool-Lock Nut Kolonna csatlakozó Szeptum Merlin Microseal Septum Csatlakozók Kolonna vágó Inlet base seal O-ring Ferrule Linerek Gáz-, nedvesség-, oxigén csapdák Tudjon meg többet 15. oldal

16 Hírek röviden... A Gen-Lab Kft. hagyományteremtő szándékkal megrendezi első kromatográfiás horgászversenyét. Az időpont Szeptember. Bővebb információért keresse fel honlapunkat Új Kinetex állófázisok várhatók szeptemberben.. Tekintse meg legújabb technikai videóinkat: - UPLC készülék és Kinetex - Agilent 1100-as optimalizálása A videókat keresse honlapunkon (), Kinetex aloldalon Szeptemberben rengeteg szemináriummal jelentkezünk: Prep HPLC, GC, SPE, Kinetex Királis elválasztási problémákkal került szembe? Királis módszerfejlesztés, módszer optimalizálás, keressen minket bizalommal info@gen-lab.hu Tudjon meg többet Gen-Lab Kft. H-1119 Budapest, Hadak útja 41. Telefon: (6-1) Fax: (6-1) info@gen-lab.hu Web: