Doktori (Ph. D.) tézisek. Lengyel György. Semmelweis Egyetem Gyógyszertudományok Doktori Iskola
|
|
- Mária Juhász
- 7 évvel ezelőtt
- Látták:
Átírás
1 A bilirubin konjugációjának és a konjugátumok transzport folyamatainak tanulmányozása primer kollagén szendvics és hagyományos rigid májsejt kultúrában Doktori (Ph. D.) tézisek Lengyel György Semmelweis Egyetem Gyógyszertudományok Doktori Iskola Témavezető: Dr. Vereczkey László, az MTA doktora Jemnitz Katalin, Ph.D. Hivatalos bírálók: Dr. Bánhegyi Gábor, az MTA doktora Dr. Tihanyi Károly, a bilológia tudományok kandidátusa Szigorlati bizottság elnöke: Szigorlati bizottság tagjai: Prof. Dr. Magyar Kálmán, az MTA rendes tagja Dr. Bánhegyi Gábor, az MTA doktora Dr. Tihanyi Károly, a bilológia tudományok kandidátusa Budapest 2006.
2 ÖSSZEFOGLALÁS A bilirubin metabolizmusában kulcsszerepet játszik az UGT1A1 konjugációs enzim, illetve a bilirubin glukuronidok (BG) effluxában a multidrog rezisztenciával kapcsolatos proteinek (MRP2, MRP3). A bilirubin és a BG szérum koncentrációjának változása jól tükrözi a máj mind fiziológiás, mind patológiás állapotát. Munkám célja az volt, hogy in vitro primer hepatocita kultúrában a bilirubin metabolizmusán keresztül modellezzem az emlősök változó kémiai környezethez történő adaptációját. Az adaptációt kiváltó ingert egyrészt indukciós hatású gyógyszeres kezeléssel (rifampicin, klofibrát, fenobarbitál, metilkolantrén, dexametazon), másrészt transzport gátló vegyületekkel (indometacin, probenecid, benzbromaron) értük el. A BG szekréció a sejtkultúra első négy órájában drámaian csökkent. Ennek oka feltehetőleg az, hogy a transzport proteinek lefűződtek a membránról. Modellrendszerünkben az ismert citokróm P-450 induktorok (dexametazon, klofibrát, rifampicin), a metilkolantrén kivételével, metabolikus enzimindukció révén fokozták az UGT1A1 aktivitást (Jemnitz K, Lengyel G, Vereczkey L. In vitro induction of bilirubin conjugation in primary rat hepatocyte culture. Biochem Biophys Res Commun. 2002;291(1):29-33). Kollagén szendvics konfigurációban tartott májsejteken módszert dolgoztunk ki a kanalikuláris MRP2, illetve a szinuszoidális MRP3 transzport aktivitás izolált tanulmányozására (Lengyel G et al. Canalicular and sinusoidal disposition of bilirubin mono- and diglucuronides in sandwich-cultured human and rat primary hepatocytes. Drug Metab Dispos. 2005;33: ). Hepatocita szendvics kultúrában valamennyi gátlószer nagyobb mértékben gátolta a kanalikuláris effluxot, mint a szinuszoidálisat. A rifampicin esetében a metabolizáló rendszer a szinuszoidális efflux fokozódásával kompenzálta a gátolt kanalikuláris effluxot, mely lehetővé tette a toxikus kémiai hatás elhárítását. Munkám gyakorlati jelentőségét abban látom, hogy a BG efflux meghatározása primer hepatocita szendvics kultúrában alkalmas lehet a gyógyszer-indukált kolesztázis
3 in vitro előrejelzésére. A vizsgált kolesztatikus hatású gyógyszerek (indometacin, rifampicin), illetve transzportgátló szerek (probenecid, benzbromaron) kolesztatikus hatása kimutatható volt a BG effluxának csökkenésén keresztül. Így a gyógyszerjelőlt molekulák BG transzportjának preklinikai vizsgálata hepatocita szendvics kultúrában előre vetítheti egy súlyos mellékhatás lehetőségét (György Lengyel at al, In vitro prediction of drug induced cholestasis using sandwich culture of primary rat hepatocytes (kézirat formájában)). BEVEZETÉS Napjainkra a drogtranszport kutatás eredményeként jelentősen megnövekedett a megismerhető transzporter célfehérjék száma. Szerepük nemcsak a drogtranszportban lényeges, hanem fény derült arra is, hogy számos anyagcserezavar (pl. Dubin-Johnson szindróma) hátterében közvetve vagy közvetlenül a transzport proteinek gátlása vagy csökkent működése állhat. A transzportproteinek szerepének felismerése a gyógyszer metabolizmusban magyarázatot adhat néhány, a klasszikus farmakokinetikától eltérő jelenségre. Éppen ezért a gyógyszerkutatás preklinikai fázisában gyakran vizsgálják a gyógyszerjelölt molekula transzportproteinekre gyakorolt indukciós és gátló hatását. A jelenleg széles körben alkalmazott in vitro tesztek főként transzfektált sejtek, vagy az úgynevezett kifordított membrán vezikulák alkalmazásán alapulnak. Ezek a sejtek morfológiai és funkcionális szempontból is távol állnak a fiziológiás állapottól, ezért az adatok nem mindig extrapolálhatóak az in vivo körülményekre. Munkánk során a bilirubint választottuk modell vegyületnek főként, mert in vivo a bilirubin szérum szintek (direkt, indirekt bilirubin) hűen tükrözik a máj mind fiziológiás, mind patológiás állapotát. Fiziológiás körülmények között a májsejtek felveszik a bilirubint, majd az UGT1A1 (UDP-glukuronozil
4 transzferáz) hatására UDP-glukuronsavval konjugálódva bilirubinmonoglukuronid (BMG), illetve bilirubin-diglukuronid (BDG) keletkezik. A konjugátumok a glukuronidációt követően a kanalikuláris membránon lokalizálódó multidrog rezisztencia protein (MRP2) közreműködésével az epecsatornákba kerülnek. Ha az MRP2 működése akadályoztatott (genetikai deffektus, obstrukció, farmakológiai hatás), akkor a szinuszoidális membránon lokalizálódó MRP3 veszi át a hiányzó vagy csökkent MRP2 aktivitást, így a BDG/BMG a szinuszoidokba kerül, majd vizelettel ürül a szervezetből. CÉLKITŰZÉSEK Doktori munkám alapját a bilirubin metabolizmusában kulcsszerepet játszó UDP-glukuronozil transzferáz (UGT1A1) aktivitásának és a bilirubinglukuronid (BG) kanalikuláris MRP2 és szinuszoidális MRP3 mediált transzportjának vizsgálata képezte. Célul tűztük ki a bilirubin metabolizmusát érintő indukciós és gátló típusú gyógyszer interakciók tanulmányozását. 1. Az irodalomból jól ismert jelenség, hogy a rifampicin (RIF) és a dexametazon (DEX) a pregnán X receptoron keresztül, a fenobarbitál (PB) a konstitutív androsztán receptoron keresztül, a klofibrát (CL) a peroxiszóma proliferátor aktivált receptoron, míg a metilkolantrén (MC) az aromás hidrokarbon receptor közreműködésével enzimindukció révén fokozza a fázis I (citokróm P-450) enzimek aktivitását. Számos közlemény felvetette a fázis I és fázis II enzimek, valamint a fázis III folyamatok (drogtranszport) közös indukciós szabályozásának lehetőségét. Bizonyítani kívántuk a fenti modell vegyületek indukciós hatását a bilirubin UDP-glukuronsavval történő konjugációjára primer rigid májsejt kultúrában, mely mennyiségét tekintve az egyik leggyakoribb fázis II reakció.
5 2. Az induktorok szinuszoidális és kanalikuláis transzport proteinekre gyakorolt hatásának tanulmányozására nem alkalmas a primer rigid májsejt kultúra, mert ebben a rendszerben nem lehetett izoláltan vizsgálni az in vivo eltérő membránon lokalizálódó transzportereket. Ezért célul tűztük ki a fenti vegyületek indukciós hatásának tanulmányozását primer kollagén szendvics májsejt kultúrában. A fenti rendszerben vizsgálni kívántuk a bilirubin-glukuronidok kanalikuláris MRP2 és szinuszoidális MRP3 mediált effluxát. 3. A gyógyszerterápia során a leggyakoribb májeredetű mellékhatás a gyógyszerindukált kolesztázis, mely folyamat hátterében a gyógyszer vegyület eliminációjában kulcsszerepet játszó transzport fehérjék gátlása állhat. Célunk volt egy olyan modellrendszer fejlesztése, mely ötvözi a már ismert primer kollagén szendvics kultúra és egy, a májfunkciót jól tükröző paraméter a bilirubin-glukuronid efflux mértékét detektáló eljárás előnyeit. A fenti rendszerben vizsgálni kívántunk a klinikumból jól ismert kolesztatikus hatású gyógyszereket: indometacin (IM), rifampicin (RIF), valamint az irodalomból ismert transzport gátló vegyületeket - benzbromaron (BB), probenecid (PR). Szendvics kultúrában vizsgált, a BG effluxot érintő gyógyszeres hatásokat megerősíteni kívántuk a BG-tól, illetve a szendvics kultúrától független (vezikula transzport; konfokális lézermikroszkópia) vizsgáló módszerek segítségével is. MÓDSZEREK Májsejtkultúra A bilirubin konjugáció sebességét befolyásoló gyógyszer-interakciókat primer rigid, míg a transzport aktivitást érintő vizsgálatokat primer kollagén szendvics
6 májsejt kultúrában végeztük. A májsejt szuszpenziót kétfázisú májperfúziót követően izoláltuk, majd patkányfarok kollagénnel bevont petricsészékre helyeztük a májsejteket. Kollagén szendvics kultúra esetében a májsejteket az ültetéstől számított 24 óra után NaOH-oldattal neutralizált kollagén réteggel fedtük be. UGT1A1 aktivitás meghatározása rigid májsejt kultúrában A mikroszómális UDP-glukuronozil transzferáz aktivitást B. Burchell módszere szerint határoztuk meg (Methods in Enzymology Vol. 77., Jakoby, W. B. ed., 1981; , Academic Press, New York). A májsejteket 0,025 mm bilirubin-oldattal inkubáltuk 60 percig. A diazotált konjugátumok mennyiségét spektofotometriás módszerrel határoztuk meg. Szinuszoidális és kanalikuláris bilirubin-glukuronid efflux meghatározása primer kollagén szendvics májsejt kultúrában A 24, 72 és 96 órás kollagén szendvics konfigurációban tartott patkány és 96 órás humán májsejteket 0,025 mm-os bilirubin-albuminoldattal inkubáltuk 60 percig. A szubsztrát eltávolítása után Ca 2+ /Mg 2+ ionok jelenlétében és hiányában a sejteket 20 percig 0,5 ml HBSS oldattal szobahőmérsékleten inkubáltuk. Az inkubációs médiumban és az efflux médiumokban a BMG és a BDG mennyiségét HPLC analízissel határoztuk meg. A 60 perces inkubációs idő alatt a termelődött glukuronidok egy része a szinuszoidális transzportereken keresztül az inkubációs médiumba, a másik része pedig a kanalikuláris transzportereken keresztül az in vitro epecsatorna rendszerbe került. Az inkubációs médium BG mennyisége a szinuszoidális transzport aktivitással arányos. Az in vitro epecsatorna BG tartalmát úgy határoztuk meg, hogy szobahőmérsékleten megvontuk a Ca 2+ /Mg 2+ ionokat az efflux médiumból,
7 ennek hatására a Ca 2+ /Mg 2+ ion függő sejtkapcsoló struktúrák megszűnnek, a csatorna felnyílik és az előzőleg termelődött és kiválasztott BG tartalma az efflux médiumba kerül. A szinuszoidális transzport aktivitás szobahőmérsékleten nem szűnik meg teljesen, ennek mértékére a Ca 2+ /Mg 2+ ionokat tartalmazó efflux médium BG tartalma utal. Így a valós kanalikuláris BG mennyisége a Ca 2+ /Mg 2+ ionok hiányában és jelenlétében mért BG tartalom különbségeként számítható. A csatornák BG mennyisége a kanalikuláris transzport aktivitással arányos. Szinuszoidális efflux: BG Inkubációs médium Kanalikuláris efflux: BG BG Ca / Mg mentes HBSS 2+ 2 Ca / Mg HBSS
8 Indukciós kezelés A hepatociták induktorokkal történő kezelését az ültetéstől számított negyedik órában kezdtük és minden nap frissen a tápoldattal együtt adtuk a sejtekhez. Az indukciót 96 órán keresztül folytattuk, és hatását 24 óránként mértük. A kontroll sejtkultúra csak kiegészített William s Medium E tápoldatot kapott, amely 0,1% DMSO-t tartalmazott. Az induktor végkoncentrációk: 3,7 µm MC, 100 µm CL, 50 µm RIF, 250 µm PB, 0,1, 1, 10 µm DEX; valamint 100 µm CL és 10 µm DEX kombinációja. MRP2 és MRP3 proteinek gátlásának vizsgálata hepatocita szendvics kultúrában A 96 órás szendvics kultúrában tartott májsejteket gátlószerek jelenlétében (50 µm RIF, 100 µm CL, 100 µm PR, 400 µm IM) és hiányában (DMSO 0,1%) 0,025 mm bilirubin-albumin oldattal inkubáltuk 15 percig. A szubsztrát tartalmú oldatot eltávolítottuk. A sejteket Ca 2+ /Mg 2+ ionok jelenlétében és hiányában 0,5 ml HBSS-oldattal inkubáltuk (37 0 C). CDF-DA kanalikuláris felhalmozódásának vizsgálata konfokális pásztázó lézer mikroszkóp segítségével Megvizsgáltuk az alkalmazott inhibítorok BG efflux-ra gyakorolt transzportgátló hatását fluoreszcens CDF szubsztrát esetében. A módszer elve, hogy az inkubáció során a fluoreszcenciával nem rendelkező CDF-DA (5(6)- karboxi-2',7'-diklorofluoreszcein-diacetát) bejut a májsejtekbe, majd az észterázok lehasítják a molekuláról az acetil csoportokat, az így létrejött vegyület (CDF) fluoreszkál és szubsztrátja a transzport proteineknek, elsősorban az MRP2-nek. A kanalikuláris MRP2 a csatornába pumpálja a festéket, így a lézer gerjesztés hatására a csatornák alakja zöld fénnyel kirajzolódik. A fluoreszcencia intenzitása függ a csatornában található festék mennyiségétől. A csatornában található fluoreszcens festék mennyiségét a transzport gátlószerek csökkentik, így a fluoreszcencia intenzitása is csökken.
9 A 96 órás kollagén szendvics konfigurációban tartott sejteket a gátlószerek jelenlétében (IM 400 µm, RIF 50 µm, BB 100 µm, CL 100 µm) és hiányában (kontroll: 0,1% DMSO) 10 µm CDF-DA-val inkubáltuk 10 percig. Az inkubáció után a szubsztrát tartalmú oldatot eltávolítottuk, majd 3x2 ml hideg HBSS-oldattal mostuk a sejteket és végül felvételt készítettünk a hidegen tartott sejtekről konfokális pásztázó lézer mikroszkóppal. Vezikuláris transzport kísérletek A vezikuláris transzport kísérletek során alkalmazott kifordított (inside-out) membrán vezikulákat expressszált (bakulovírus expressziós rendszer) humán MRP2 és MRP3 transzportereket tartalmazó SF9 (Spodoptera frugiperda) sejtekből izolálták. A módszer elve: az MRP2, illetve MRP3 transzportereket tartalmazó kifordított vezikulákat esztradiol-glukuroniddal ( 3 H-E 2 17βG) inkubáltuk. A transzporterek ebben a rendszerben a szubsztrátot a vezikula belsejébe pumpálták. Az inkubáció leállítása után a vezikulákat szűrő plate -en kötöttük meg. A szubsztrát felesleg eltávolítása után meghatároztuk a vezikulákban található szubsztrát mennyiségét, folyadék szcintilláción alapuló radioaktivitás méréssel. Az MRP2 esetében 50 µm, míg az MRP3 esetében 2 µm E 2 17βG végkoncentrációt alkalmaztunk. Statisztika A sejtkultúrás kísérleteket minden esetben három független sejtpreparátummal végeztük és a vizsgálatok során 3 párhuzamos mérést végeztünk. Minden kísérlethez saját kontrollt alkalmaztunk. Az adatok átlag±s.d. formában vannak kifejezve. A statisztikailag szignifikáns különbségeket párosított student s t teszttel vizsgáltuk. A szignifikancia minden esetben: p<0,05.
10 EREDMÉNYEK 1. Módszert dolgoztunk ki az irodalomból jól ismert citokróm P-450 induktorok UGT1A1 enzimaktivitására gyakorolt hatásának vizsgálatára primer májsejt monolayeren, mely a diazotált BG spektrofotometriás meghatározásán alapult. Megállapítottuk, hogy a sejtkultúra idejének függvényében változik a bilirubin konjugáció sebessége: a letapadástól számított 4 órára az UGT1A1 aktivitás a kezdeti, sejtszuszpenzióban mérhető aktivitás 10%-ra csökken; ezt követően folyamatosan emelkedik, majd 72 órában éri el a szuszpenzióban mérhető kezdeti aktivitást, amely ezután már nem változik, tehát a 72 órás sejtkultúra már alkalmas a bilirubin UDP-glukuronsavval történő konjugációjának vizsgálatára. A 4 órás kultúra vizsgálata során azt tapasztaltuk, hogy BG közel 90%-a az intracelluláris kompartmentekben akkumulálódott, amely a transzportproteinek csökkent működésére utal órás primer rigid patkány hepatocita kultúrában: a vizsgált induktorok CL, RIF, DEX a MC kivételével szignifikáns módon fokozták (176%; 168%; 178%) a bilirubin konjugáció sebességét a DEX (0,1; 1; 10 µm) koncentrációfüggő módon fokozta a bilirubin konjugáció mértékét (133%; 150%; 178%) a CL+DEX kombináció további aktivitásfokozódást (210%) eredményezett A DEX, RIF, CL kezelés hatására kialakuló enzimaktivitás hátterében fokozott UGT1A1 kifejeződés állt, mely jelenséget Western-blot analízissel igazoltunk, tehát az UGT1A1 aktivitása fokozható volt a már ismert citokróm P-450 induktorokkal.
11 3. Rigid sejtkultúrában nem vizsgálható a polarizált májsejtek szinuszoidális és kanalikuláris transzport proteinjeinek aktivitása, ezért áttértünk a kollagén májsejt kultúra alkalmazására, melyben módszert dolgoztunk ki a BG szinuszoidális és kanalikuláris transzportjának meghatározására. A májsejteket bilirubin-oldattal inkubáltuk, majd meghatároztuk a szinuszoidális és a kanalikuláris transzoport aktivitást. Megállapítottuk, hogy humán és patkány szendvics kultúrában a szinuszoidális és a kanalikuláris BDG/BMG arány nagymértékben hasonlít az in vivo mért paraméterekhez, így a kollagén szendvics kultúrában tartott májsejtek nem csak morfológiai, hanem funkcionális szempontból is hasonlítanak az in vivo környezetben található sejtekre. A szinuszoidális és kanalikuláris transzport membrán specifikus működését egy szinuszoidális transzportszubsztráttal teszteltük (pnitrofenol-glukuronid (pnpg)). A szubsztrát nem került számottevő mértékben a csatornákba, míg a kanalikuláris transzportszubsztrát, a BG igen, tehát a módszer alkalmas a szinuszoidális és a kanalikuláris transzport aktivitás meghatározására. 4. Primer patkány hepatocita szendvics kultúrában a vizsgált induktorok: a szinuszoidális effluxot növelték: DEX (144±9%), RIF (181±50%), a kanalikuláris effluxot növelte: RIF (138±29%) a kanalikuláris effluxot csökkentették: CL (42±23%) Megállapítható, hogy valamennyi vizsgált induktor elsősorban a BG szinuszoidális effluxát fokozta, míg a kanalikuláirs effluxot kevésbé. A CL a kanalikuláris effluxot szignifikáns mértékben gátolta, mely jelenség nem figyelhető meg primer rigid kultúrában. A CL kanalikuláris BG efflux gátló hatása egy szelektív MRP2 gátlószer felismeréséhez vezethet. Igy a továbbiakban a CL gátlószerként való alkalmazását is vizsgáltuk.
12 5. Primer patkány hepatocita szendvics kultúrában a vizsgált gátlószerek: a szinuszoidális effluxot növelték: RIF (202±28%) a szinuszoidális effluxot csökkentették: IM (66±26%), PR (74±1%) a kanalikuláris effluxot csökkentették: IM (53±21%), CL (74±11%), RIF (24±1%), PR (53±3%) A RIF kivételével valamennyi gátlószer csökkentette mind a kanalikuláris, mind a szinuszoidális BG effluxot, megállapíthatjuk, hogy ez a módszer alkalmas a klinikumban kolesztázist okozó transzport gátlószerek vizsgálatára. A módszerrel tanulmányozhatók a kolesztázis ellen ható kompenzatórikus folyamatok is, úgymint a RIF esetében jelentkező szinuszoidális efflux fokozódás. Hogy megerősítsük a modellrendszerünkben kapott eredményeinket a gátlószerek hatását másik két a transzport proteinek tanulmányozásában kiterjedten alkalmazott rendszerben is megvizsgáltuk. 6. Kiterjedten alkalmazott specifikus MRP szubsztrát a CDF-DA. Munkánk során vizsgáltuk a festék kanalikuláris felhalmozódásának változását gátlószerek hatására. A CL, BB, RIF csökkentette a fluoreszcencia mértékét a csatornákban, míg az IM fokozta. Megállapítható, hogy szendvics kultúrában CDF-DA alkalmazása mellett a vizsgált gátlószerek az IM kivételével, a BG effluxhoz hasonlóan gátolták az MRP2 aktivitást. Szendvics kultúrában a fluoreszcein kanalikuláris felhalmozódásának vizsgálata szemikvantitatív eredményekhez vezetett. 7. A gátlószerek hatását megvizsgáltuk MRP2 vagy MRP3 transzportereket tartalmazó kifordított membrán vezikulákon 3 H-E 2 17βG alkalmazása mellett. MRP2 aktivitást fokozta: IM, PR MRP2 aktivitást csökkentette: RIF és BB; IC 50 (RIF) = 50 µm, IC 50 (BB) = 20 µm
13 MRP2 aktivitást nem befolyásolta: CL MRP3 aktivitást csökkentette: RIF és BB; IC 50 (RIF) = 150 µm, IC 50 (BB)=69 µm MRP3 aktivitást nem befolyásolta: IM, CL Az MRP2 mediált 3 H-E 2 17βG transzportot az IM és a PR is fokozta, mely jelenség hátterében a szubsztrátkötő hely és a modulációs hely közötti kooperativitás áll. Az aktiváció és gátlás kialakulása nagymértékben függ a szubsztrát és a gátlószer típusától, illetve koncentrációjától. Az IM és a PR hatására a BG efflux esetében nem figyelhető meg a 3 H-E 2 17βG transzport aktiváció. A BG efflux esetén megfigyelt gátlás egybevág a klinikai megfigyelésekkel, míg a másik két rendszerben a gátlással ellentétes hatás, azaz aktiváció figyelhető meg az IM esetében, mely jelenség nem ad magyarázatot a klinikumban tapasztalt kolesztázisos mellékhatásokra.
14 TÉZISEK Dolgozatom célja volt bemutatni, hogy a bilirubin konjugációján keresztül modellezhető az élő szervezetek változó kémiai környezethez történő adaptációja. 1. Alátámasztottuk, hogy az ismert citokróm P-450 induktorok (RIF, CL, DEX) enzim indukció révén fokozzák a bilirubin UDP-glukuronsavval történő konjugációjának sebességét, ami további bizonyíték arra, hogy a fázis I és fázis II enzimek közös indukciós szabályozás alatt állnak. 2. Elsőként számoltunk be arról, hogy a BG szekréciója a sejtkultúra első négy órájában drámaian csökken. Feltételezésünk szerint ennek oka a transzport proteinek lefűződése a membránról. A jelenséget később konfokális mikroszkópiával is megerősítették, miszerint a transzport proteinek a sejtizolálást követően endocitózissal lefűződnek a sejtmembránról és az intracelluláris térbe kerülnek. A folyamat következtében csökken a sejtmembránban jelenlévő funkcionálisan aktív transzporterek mennyisége. 3. Igazoltuk, hogy a humán és a patkány primer kollagén szendvics konfigurációban tartott májsejtek in vitro körülmények között is megtartják in vivo jellemző BG szekréciós tulajdonságukat. Ezt támasztja alá a transzport aktivitástól nagymértékben függő BDG/BMG arány in vivo és in vitro hasonlósága. Nevezetesen, hogy az in vivo szérum és epe BDG/BMG aránya nagymértékben hasonló az in vitro felülúszó és a csatornákban tapasztalható BDG/BMG aránnyal. A transzport proteinek in vitro megtartott szelektív működésére utal, hogy a szinuszoidális transzport szubsztrát (pnpg) gyakorlatilag nem szekretálódik a csatornákba.
15 4. A hepatocita kollagén szendvics kultúra és a BG, mint specifikus szubsztrát alkalmazásának kombinációja egy olyan módszert eredményezett, amelynek segítségével a két efflux folyamat külön-külön is tanulmányozhatóvá vált. Munkánk során felismertük, hogy az MRP2 és MRP3 transzport proteinek mennyisége eltérő mértékben változik a már ismert citokróm p-450 induktorok hatására, mely további bizonyíték a fázis I, fázis II enzimek, valamint a transzport proteinek közös indukciós szabályzására. 5. A szendvics konfigurációban tartott májsejtek gátlószerekre adott válaszából kiderül, hogy hatásukra nem egyformán reagál a kanalikuláris és a szinuszoidális efflux. A metabolizáló rendszer a szinuszoidális efflux fokozódásával kompenzálhatja a gátolt kanalikuláris effluxot, mely lehetővé teszi a toxikus kémiai hatás elhárítását. 6. A kollagén szendvics konfigurációban végzett gátlás vizsgálatok során nem csak a transzport proteinekre gyakorolt gátló hatás, hanem a májsejtekben működő prekolesztatikus hatások is jelentkeznek (pl. RIF). Ezzel szemben a vezikuláris transzport vizsgálatoknál az aktuálisan vizsgált transzport fehérje-szubsztrát-gátlószer kölcsönhatás független más transzporterektől, illetve a sejt aktuális állapotától. Az utóbbi módszer alkalmas arra, hogy egy egyedi transzport fehérje tulajdonságait vizsgáljuk, míg az előbbi hozzájárulhat a gyógyszerindukált kolesztázis mechanizmusainak mélyebb megértéséhez. Az alkalmazott szubsztrátok (BG, 3 H-E 2 17βG, CDF) különböző mértékben kötődnek a transzport fehérjékhez. A gátlás mértéke függ a szubsztrát és az alkalmazott gátlószer kinetikai paramétereitől (K M, V max ).
16 7. Munkám gyakorlati jelentőségét abban látom, hogy a BG efflux meghatározása primer hepatocita szendvics kultúrában alkalmas lehet a gyógyszer indukált kolesztázis in vitro előrejelzésére. A vizsgált kolesztatikus hatású gyógyszerek (IM, RIF), illetve transzportgátló szerek (PR, BB) kolesztatikus hatása kimutatható volt a BG effluxának csökkenésén keresztül. Így a gyógyszerjelölt molekulák preklinikai vizsgálata hepatocita szendvics kultúrában előre vetítheti egy súlyos mellékhatás lehetőségét is. KÖZLEMEMÉNYEK Az értekezés témájához kapcsolódó közlemények 1. Jemnitz K, Lengyel G, Vereczkey L. In vitro induction of bilirubin conjugation in primary rat hepatocyte culture. Biochem Biophys Res Commun. 2002;291(1):29-33 [IF. 2002: 2.935]. 2. Lengyel G, Veres Z, Szabo P, Vereczkey L, Jemnitz K. Canalicular and sinusoidal disposition of bilirubin mono- and diglucuronides in sandwichcultured human and rat primary hepatocytes. Drug Metab Dispos. 2005;33: [IF. 2004: 3.839]. 3. György Lengyel, Zsuzsa Veres, Tünde Molnár, Vereczkey László, Katalin Jemnitz. In vitro prediction of drug induced cholestasis using sandwich culture of primary rat hepatocytes (kézirat formájában). Az értekezés témájához szorosan nem kapcsolódó közlemény 4. Csuzdi E, Migleczi K, Hazai I, Berzsenyi P, Pallagi I, Horvath G, Lengyel G, Solyom S. Potential metabolites of a condensed 2,3- benzodiazepine derivative. Bioorg Med Chem Lett. 2005;15: [IF.2004: 2.333]. Az értekezés témájához kapcsolódó poszterek 1. Jemnitz K, Veres Z, Lengyel G, Vereczkey L. The effect of dexamethasone on UGT1A1 and UGT1A6 activity induced by 3 methylcholantrene, clofibrate and rifampicin in cultured rat hepatocytes (III-1). Benzon Symposium, Copenhagen, Denmark, 2001.
17 2. Lengyel G, Jemnitz K, Vereczkey L. In vitro induction of bilirubin conjugation in primary rat hepatocyte culture. Pfizer Symposium, Sandwich, London, Jemnitz K, Veres Zs, Lengyel Gy, Molnár T, Vereczkey L. Modulation of mrp2 and mrp3 activities by cholestatic drugs using sandwich culture of primary rat hepatocytes (P203). 16th International Sympsium on Microsomes and Drug Oxidations, Budapest, Hungary, Az értekezés témájához kapcsolódó előadások 1. Lengyel G, Jemnitz K, Vereczkey L. In vitro induction of bilirubin conjugation in primary rat hepatocyte culture. Bioorganic Chemistry Meeting, Budapest, Lengyel G, Jemnitz K, Veres Zs, Vereczkey L. Primer hepatocyta szendvics kultúra alkalmazása a máj-transzporterek vizsgálatában. Magyar Toxikológiai Társaság konferenciája, Budapest, Lengyel G, Jemnitz K, Veres Zs, Vereczkey L. ABC transzporterekkel kapcsolatos gyógyszer-interakciók vizsgálata primer hepatocyta szendvics kultúrában. MTA, Doktori Iskola, Tahi, Lengyel G, Jemnitz K, Veres Zs, Vereczkey L. Bilirubin mono- és diglukuronid effluxának vizsgálata primer hepatocyta szendvics kultúrában. Semmelweis Egyetem, Doktori Iskola, Budapest, Lengyel G, Jemnitz K, Veres Zs, Vereczkey L. Aktiváló és gátlószerek hatása az MRP2 és MRP3 transzport proteinek aktivitására primer hepatocyta szendvics kultúrában. Magyar Farmakológiai Társaság továbbképző szimpózium, Mátraháza, Egyéb előadás 6. Lengyel G, Jemnitz K, Veres Zs, Vereczkey L. ABC transzporterek vizsgálata primer hepatocyta szendvics kultúrában. Akadémiai beszámoló, Budapest, 2005.
18 KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS Ezúton szeretnék köszönetet mondani témavezetőimnek, Dr. Vereczkey Lászlónak és Dr. Jemnitz Katalinnak, hogy tanítottak és megteremtették a TDK, valamint a Ph.D. munkám elvégzéséhez szükséges feltételeket. Hálával és köszönettel tartozom Dr. Veres Zsuzsának, akitől elsajátítottam a precíz kísérlettervezést és a pontos laboratóriumi munkát. Köszönöm egykori farmakológia professzorom, Dr. Tekes Kornélia támogatását, aki nagy segítségemre volt a nem elsősorban tudományos jellegű problémáim megoldásában. Köszönettel tartozom Dr. Szabó Pálnak a tömegspektrometriás mérésekért; Lasztóczi Bálintnak a fénymikroszkópiás felvételekért; Molnár Tündének a konfokális mikroszkópiás felvételekért; Dr. Krajcsi Péternek és a SOLVO Rt.- nek a vezikula transzport kísérletekért. Végezetül hálával tartozom családomnak türelmükért és szeretetükért "Az élet értelme a Küzdelem. A győzelem vagy a vereség az Istenek kezében van. Ünnepeljük hát a Küzdelmet!" Szuahéli Csatadal
Az Ames teszt (Salmonella/S9) a nemzetközi hatóságok által a kémiai anyagok minősítéséhez előírt vizsgálat, amellyel az esetleges genotoxikus hatás
Az Ames teszt (Salmonella/S9) a nemzetközi hatóságok által a kémiai anyagok minősítéséhez előírt vizsgálat, amellyel az esetleges genotoxikus hatás kockázatát mérik fel. Annak érdekében, hogy az anyavegyületével
RészletesebbenTézis tárgyköréhez kapcsolódó tudományos közlemények
Tézis tárgyköréhez kapcsolódó tudományos közlemények ABC transzporterek és lipidkörnyezetük kölcsönhatásának vizsgálata membrán koleszterin tartalom hatása az ABCG2 (BCRP/MXR) fehérje működésére Ph.D.
Részletesebben[S] v' [I] [1] Kompetitív gátlás
8. Szeminárium Enzimkinetika II. Jelen szeminárium során az enzimaktivitás szabályozásával foglalkozunk. Mivel a klinikai gyakorlatban használt gyógyszerhatóanyagok jelentős része enzimgátló hatással bír
RészletesebbenKét kevéssé ismert humán ABCG fehérje expressziója és funkcionális vizsgálata: ABCG1 és ABCG4 jellemzése
Két kevéssé ismert humán ABCG fehérje expressziója és funkcionális vizsgálata: ABCG1 és ABCG4 jellemzése Doktori tézisek Dr. Cserepes Judit Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Doktori Iskola
RészletesebbenSEMMELWEIS EGYETEM GYÓGYSZERTUDOMÁNYOK DOKTORI ISKOLA
TARTALOMJEGYZÉK SEMMELWEIS EGYETEM GYÓGYSZERTUDOMÁNYOK DOKTORI ISKOLA A bilirubin konjugációjának és a konjugátumok transzport folyamatainak tanulmányozása primer kollagén szendvics és hagyományos rigid
RészletesebbenZárójelentés. A) A cervix nyújthatóságának (rezisztencia) állatkísérletes meghatározása terhes és nem terhes patkányban.
Zárójelentés A kutatás fő célkitűzése a β 2 agonisták és altípus szelektív α 1 antagonisták hatásának vizsgálata a terhesség során a patkány cervix érésére összehasonlítva a corpusra gyakorolt hatásokkal.
RészletesebbenA diabetes hatása a terhes patkány uterus működésére és farmakológiai reaktivitására
OTKA 62707 A diabetes hatása a terhes patkány uterus működésére és farmakológiai reaktivitására Zárójelentés A gesztációs diabetes mellitus (GDM) egyike a leggyakoribb terhességi komplikációknak, megfelelő
RészletesebbenTranszporterek vizsgálata lipidmembránokban Sarkadi Balázs MTA-SE Molekuláris Biofizikai Kutatócsoport, MTA-TTK Budapest
Transzporterek vizsgálata lipidmembránokban 2016. Sarkadi Balázs MTA-SE Molekuláris Biofizikai Kutatócsoport, MTA-TTK Budapest Membrántranszport fehérjék típusok, lipid-kapcsolatok A membránok szerkezete
RészletesebbenOTKA ZÁRÓJELENTÉS
NF-κB aktiváció % Annexin pozitív sejtek, 24h kezelés OTKA 613 ZÁRÓJELENTÉS A nitrogén monoxid (NO) egy rövid féléletidejű, számos szabályozó szabályozó funkciót betöltő molekula, immunmoduláns hatása
RészletesebbenGyógyszerrezisztenciát okozó fehérjék vizsgálata
Gyógyszerrezisztenciát okozó fehérjék vizsgálata AKI kíváncsi kémikus kutatótábor 2017.06.25-07.01. Témavezetők : Telbisz Ágnes, Horváth Tamás Kutatók : Dobolyi Zsófia, Bereczki Kristóf, Horváth Ákos Gyógyszerrezisztencia
RészletesebbenOpponensi vélemény. címmel benyújtott akadémiai doktori értekezéséről
1/5 Opponensi vélemény Szalai Gabriella A szalicilsav szerepe gazdasági növények stressztűrő képességében címmel benyújtott akadémiai doktori értekezéséről A munka a növényi stresszbiológia fontos és időszerű
RészletesebbenGyógyszeres kezelések
Gyógyszeres kezelések Az osteogenesis imperfecta gyógyszeres kezelésében számos szert kipróbáltak az elmúlt évtizedekben, de átütő eredménnyel egyik se szolgált. A fluorid kezelés alkalmazása osteogenesis
RészletesebbenHogyan lesznek új gyógyszereink? Bevezetés a gyógyszerkutatásba
Hogyan lesznek új gyógyszereink? Bevezetés a gyógyszerkutatásba Keserű György Miklós, PhD, DSc Magyar Tudományos Akadémia Természettudományi Kutatóközpont A gyógyszerkutatás folyamata Megalapozó kutatások
RészletesebbenA HEPATOBILIÁRIS TRANSZPORTEREK GENETIKAI POLIMORFIZMUSÁNAK TOXIKOLÓGIAI KÖVETKEZMÉNYEI
A HEPATOBILIÁRIS TRANSZPORTEREK GENETIKAI POLIMORFIZMUSÁNAK TOXIKOLÓGIAI KÖVETKEZMÉNYEI JEMNITZ KATALIN MTA Természettudományi Kutatóközpont, Szerveskémiai Intézet Tox 2016, HAJDÚSZOBOSZLÓ 2016. október
RészletesebbenA plazminogén metilglioxál módosítása csökkenti a fibrinolízis hatékonyságát. Léránt István, Kolev Kraszimir, Gombás Judit és Machovich Raymund
A plazminogén metilglioxál módosítása csökkenti a fibrinolízis hatékonyságát Léránt István, Kolev Kraszimir, Gombás Judit és Machovich Raymund Semmelweis Egyetem Orvosi Biokémia Intézet, Budapest Fehérjék
RészletesebbenMembránpotenciál, akciós potenciál
A nyugalmi membránpotenciál Membránpotenciál, akciós potenciál Fizika-Biofizika 2015.november 3. Nyugalomban valamennyi sejt belseje negatív a külső felszínhez képest: negatív nyugalmi potenciál (Em: -30
RészletesebbenA herpes simplex vírus és a rubeolavírus autofágiára gyakorolt in vitro hatásának vizsgálata
A herpes simplex vírus és a rubeolavírus autofágiára gyakorolt in vitro hatásának vizsgálata Dr. Pásztor Kata Ph.D. Tézis Szegedi Tudományegyetem, Általános Orvostudományi Kar Orvosi Mikrobiológiai és
RészletesebbenKÉSZÍTETTE: BALOGH VERONIKA ELTE IDEGTUDOMÁNY ÉS HUMÁNBIOLÓGIA SZAKIRÁNY MSC 2015/16 II. FÉLÉV
KÉSZÍTETTE: BALOGH VERONIKA ELTE IDEGTUDOMÁNY ÉS HUMÁNBIOLÓGIA SZAKIRÁNY MSC 2015/16 II. FÉLÉV TÉNYEK, CÉLOK, KÉRDÉSEK Kísérlet központja Neuronok és réskapcsolatokkal összekötött asztrocita hálózatok
Részletesebbentranszporter fehérjék /ioncsatornák
Sejtpenetráló peptidek biológiailag aktív vegyületek sejtbejuttatásában Bánóczi Zoltán MTA - ELTE Peptidkémiai kutatócsoport megalakulásának 50. évfordulója 2011.12.09 Sejtpenetráló peptidek rövid, pozitívan
RészletesebbenMEMBRÁNKONTAKTOR ALKALMAZÁSA AMMÓNIA IPARI SZENNYVÍZBŐL VALÓ KINYERÉSÉRE
MEMBRÁNKONTAKTOR ALKALMAZÁSA AMMÓNIA IPARI SZENNYVÍZBŐL VALÓ MASZESZ Ipari Szennyvíztisztítás Szakmai Nap 2017. November 30 Lakner Gábor Okleveles Környezetmérnök Témavezető: Bélafiné Dr. Bakó Katalin
RészletesebbenSZTE Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet Igazgató: Dr. Varró András egyetemi tanár
SZTE Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet Igazgató: Dr. Varró András egyetemi tanár TDK felelős: Dr. Pataricza János egyetemi docens tel.: (62) 545-674 fax: (62) 545-680 E-mail: Pataricza@phcol.szote.u
RészletesebbenAz ABCG2 multidrog transzporter fehérje szerkezetének és működésének vizsgálata
Az ABCG2 multidrog transzporter fehérje szerkezetének és működésének Kutatási előzmények Az ABC transzporter membránfehérjék az ATP elhasítása (ATPáz aktivitás) révén nyerik az energiát az általuk végzett
RészletesebbenTerápiarezisztencia-fehérjéket kódoló mrns kvantitatív kimutatása PCRtechnikával. nyirokcsomójában
Terápiarezisztencia-fehérjéket kódoló mrns kvantitatív kimutatása PCRtechnikával lymphomás kutyák nyirokcsomójában Sunyál Orsolya V. évfolyam Témavezetık: Dr. Vajdovich Péter Szabó Bernadett SZIE-ÁOTK
RészletesebbenDr. Csanády László: Az ioncsatorna-enzim határmezsgye: egyedi CFTR és TRPM2 csatornák szerkezete, működése c. MTA doktori értekezésének bírálata
Dr. Csanády László: Az ioncsatorna-enzim határmezsgye: egyedi CFTR és TRPM2 csatornák szerkezete, működése c. MTA doktori értekezésének bírálata Ezúton is köszönöm a lehetőséget és a megtiszteltetést,
RészletesebbenSzívelektrofiziológiai alapjelenségek. Dr. Tóth András 2018
Szívelektrofiziológiai alapjelenségek 1. Dr. Tóth András 2018 Témák Membrántranszport folyamatok Donnan egyensúly Nyugalmi potenciál 1 Transzmembrán transzport A membrántranszport-folyamatok típusai J:
RészletesebbenIsmert molekula új lehetőségekkel Butirát a modern baromfitakarmányozásban
Ismert molekula új lehetőségekkel Butirát a modern baromfitakarmányozásban Dr. Mátis Gábor, PhD SZIE Állatorvos-tudományi Kar Élettani és Biokémiai Tanszék CEPO Konferencia Keszthely, 213. október 18.
RészletesebbenDr. Csala Miklós OTKA NN 75275
Az endoplazmás retikulum piridin-nukleotid rendszerének redox változásai: összefüggés az elhízással, a 2-es típusú diabetes-szel és a metabolikus szindrómával Bevezetés A prohormonnak tekinthető kortizon
RészletesebbenDr. Komáry Zsófia MITOKONDRIUMOK REAKTÍV OXIGÉNSZÁRMAZÉK SZENTÁGOTHAI JÁNOS IDEGTUDOMÁNYI DOKTORI A KÁLCIUM HATÁSA AZ IZOLÁLT SEMMELWEIS EGYETEM
A KÁLCIUM HATÁSA AZ IZOLÁLT MITOKONDRIUMOK REAKTÍV OXIGÉNSZÁRMAZÉK KÉPZÉSÉRE DOKTORI TÉZISEK Dr. Komáry Zsófia SEMMELWEIS EGYETEM SZENTÁGOTHAI JÁNOS IDEGTUDOMÁNYI DOKTORI ISKOLA Dr. Ádám Veronika egyetemi
RészletesebbenGyógyszermolekulák és ABC transzporterek kölcsönhatásának vizsgálatára alkalmas in vitro rendszerek fejlesztése és validálása
Ph.D. értekezés tézisei Gyógyszermolekulák és ABC transzporterek kölcsönhatásának vizsgálatára alkalmas in vitro rendszerek fejlesztése és validálása Kis Emese Témavezető: Dr. Krajcsi Péter Belső konzulens:
RészletesebbenPROGRAM. S.1 14.05 17.50 Klasszikus és nem klasszikus farmakokinetikai vizsgálatok Elnök: Kapás Margit, Tóthfalusi László
PROGRAM 2014. április 23. (szerda) 12.00 Regisztráció 14.00 Megnyitó Monostory Katalin, a Szimpózium elnöke S.1 14.05 17.50 Klasszikus és nem klasszikus farmakokinetikai vizsgálatok Elnök: Kapás Margit,
RészletesebbenMaléth József. Az endoplazmás retikulum - plazma membrán mikrodomének szerepe az intracelluláris Ca 2+ szignalizáció szabályzásában
Az endoplazmás retikulum - plazma membrán mikrodomének szerepe az intracelluláris Ca 2+ szignalizáció szabályzásában Maléth József Tudományos munkatárs MTA Orvosi Tudományok Osztálya 2017. 04. 19. Az endoplazmás
RészletesebbenDebreceni Egyetem Orvos- és Egészségtudományi Centrum Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
Debreceni Egyetem Orvos- és Egészségtudományi Centrum Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet Az ioncsatorna fehérjék szerkezete, működése és szabályozása Panyi György www.biophys.dote.hu Mesterséges membránok
RészletesebbenAz orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: Az orvosi biotechnológiai mesterképzés
RészletesebbenA PET szerepe a gyógyszerfejlesztésben. Berecz Roland DE KK Pszichiátriai Tanszék
A PET szerepe a gyógyszerfejlesztésben Berecz Roland DE KK Pszichiátriai Tanszék Gyógyszerfejlesztés Felfedezés gyógyszertár : 10-15 év Kb. 1 millárd USD/gyógyszer (beleszámolva a sikertelen fejlesztéseket)
RészletesebbenImmunológia alapjai. 10. előadás. Komplement rendszer
Immunológia alapjai 10. előadás Komplement rendszer A gyulladás molekuláris mediátorai: Miért fontos a komplement rendszer? A veleszületett (nem-specifikus) immunválasz része Azonnali válaszreakció A veleszületett
RészletesebbenZárójelentés. Gabonafélék stresszadaptációját befolyásoló jelátviteli folyamatok tanulmányozása. (K75584 sz. OTKA pályázat)
Zárójelentés Gabonafélék stresszadaptációját befolyásoló jelátviteli folyamatok tanulmányozása (K75584 sz. OTKA pályázat) A tervezett kísérletek célja, hogy jobban megértsük a növények változó környezetre
RészletesebbenOpponensi bírálói vélemény Dr. Hegyi Péter
Opponensi bírálói vélemény Dr. Hegyi Péter A pankreász vezetéksejtek élettani és kórélettani jelentősége MTA doktori értekezésének bírálata Dr. Hegyi Péter értekezésében az elméleti és az alkalmazott orvostudomány
RészletesebbenProgramozott sejthalál formák és kulcsfehérjéinek kapcsolata - fókuszban a ferroptózis és az autofágia. V. MedInProt Konferencia November 19.
Programozott sejthalál formák és kulcsfehérjéinek kapcsolata - fókuszban a ferroptózis és az autofágia Dr. Szarka András Dr. Kapuy Orsolya V. MedInProt Konferencia 2016. November 19. Bevezetés Bevezetés
RészletesebbenFUSARIUM TOXINOK IDEGRENDSZERI HATÁSÁNAK ELEMZÉSE
FUSARIUM TOXINOK IDEGRENDSZERI HATÁSÁNAK ELEMZÉSE Világi Ildikó, Varró Petra, Bódi Vera, Schlett Katalin, Szűcs Attila, Rátkai Erika Anikó, Szentgyörgyi Viktória, Détári László, Tóth Attila, Hajnik Tünde,
RészletesebbenRagyogó molekulák: dióhéjban a fluoreszcenciáról és biológiai alkalmazásairól
Ragyogó molekulák: dióhéjban a fluoreszcenciáról és biológiai alkalmazásairól Kele Péter egyetemi adjunktus Lumineszcencia jelenségek Biolumineszcencia (biológiai folyamat, pl. luciferin-luciferáz) Kemilumineszcencia
RészletesebbenPh. D. ÉRTEKEZÉS TÉZISEI BIOLÓGIAI OXIDÁCIÓK BIOMIMETIKUS MODELLEZÉSE. Balogh György Tibor
Ph. D. ÉRTEKEZÉS TÉZISEI BILÓGIAI IDÁCIÓK BIMIMETIKUS MDELLEZÉSE Balogh György Tibor Témavezető: Dr. ógrádi Mihály a kémiai tud. doktora Konzulens: Dr. Keserű György Miklós az MTA doktora Készült a BME
RészletesebbenXenobiotikum transzporterek vizsgálata humán keratinocitákban és bőrben
DOKTORI (PHD) ÉRTEKEZÉS TÉZISEI Xenobiotikum transzporterek vizsgálata humán keratinocitákban és bőrben Bebes Attila Témavezető: Dr. Széll Márta tudományos tanácsadó Szegedi Tudományegyetem Bőrgyógyászati
RészletesebbenNÖVÉNYÉLETTAN. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP /1/A
NÖVÉNYÉLETTAN Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010 Auxinok Előadás áttekintése 1. Az auxinok felfedezése: az első növényi hormon 2. Az auxinok kémiai szerkezete és
RészletesebbenAz ellenanyagok orvosbiológiai. PhD kurzus 2011/2012 II. félév
Az ellenanyagok orvosbiológiai alkalmazása PhD kurzus 2011/2012 II. félév Ellenanyaggal működő módszerek Analitikai felhasználás Analitikai felhasználás Ellenanyag / antigén kapcsolódás Az Ab/Ag kapcsolat
RészletesebbenTRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL
TRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL Az egyes biomolekulák izolálása kulcsfontosságú a biológiai szerepük tisztázásához. Az affinitás kromatográfia egyszerűsége, reprodukálhatósága
RészletesebbenAz áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai
Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése Kereskedelmi forgalomban kapható készülékek 1 Fogalmak
RészletesebbenGlukuronidtranszport az endoplazmás retikulumban. Doktori tézisek. Dr. Révész Katalin. Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Doktori Iskola
Glukuronidtranszport az endoplazmás retikulumban Doktori tézisek Dr. Révész Katalin Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Doktori Iskola Témavezető: Dr. Csala Miklós egyetemi docens, Ph.D. Hivatalos
RészletesebbenKERINGŐ EXTRACELLULÁRIS VEZIKULÁK ÁLTAL INDUKÁLT GÉNEXPRESSZIÓS MINTÁZAT VIZSGÁLATA TROPHOBLAST SEJTVONALBAN
2016. 10. 14. KERINGŐ EXTRACELLULÁRIS VEZIKULÁK ÁLTAL INDUKÁLT GÉNEXPRESSZIÓS MINTÁZAT VIZSGÁLATA TROPHOBLAST SEJTVONALBAN Kovács Árpád Ferenc 1, Pap Erna 1, Fekete Nóra 1, Rigó János 2, Buzás Edit 1,
RészletesebbenA FAD transzportjának szerepe az oxidatív fehérje foldingban patkány máj mikroszómákban
A FAD transzportjának szerepe az oxidatív fehérje foldingban patkány máj mikroszómákban PhD értekezés tézisek Varsányi Marianne 2005 Témavezető: Dr. Bánhegyi Gábor Semmelweis Egyetem Orvosi Vegytani, Molekuláris
RészletesebbenDr. Nemes Nagy Zsuzsa Szakképzés Karl Landsteiner Karl Landsteiner:
Az AB0 vércsoport rendszer Dr. Nemes Nagy Zsuzsa Szakképzés 2011 Az AB0 rendszer felfedezése 1901. Karl Landsteiner Landsteiner szabály 1901 Karl Landsteiner: Munkatársai vérmintáit vizsgálva fedezte fel
RészletesebbenAz ioncsatorna fehérjék szerkezete, működése és szabályozása. A patch-clamp technika
Az ioncsatorna fehérjék szerkezete, működése és szabályozása. A patch-clamp technika Panyi György 2014. November 12. Mesterséges membránok ionok számára átjárhatatlanok Iontranszport a membránon keresztül:
RészletesebbenTDK lehetőségek az MTA TTK Enzimológiai Intézetben
TDK lehetőségek az MTA TTK Enzimológiai Intézetben Vértessy G. Beáta egyetemi tanár TDK mind 1-3 helyezettek OTDK Pro Scientia különdíj 1 második díj Diákjaink Eredményei Zsűri különdíj 2 első díj OTDK
RészletesebbenDOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI AZ OPPORTUNISTA HUMÁNPATOGÉN CANDIDA PARAPSILOSIS ÉLESZTŐGOMBA ELLENI TERMÉSZETES ÉS ADAPTÍV IMMUNVÁLASZ VIZSGÁLATA
DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI AZ OPPORTUNISTA HUMÁNPATOGÉN CANDIDA PARAPSILOSIS ÉLESZTŐGOMBA ELLENI TERMÉSZETES ÉS ADAPTÍV IMMUNVÁLASZ VIZSGÁLATA TÓTH ADÉL TÉMAVEZETŐ: DR. GÁCSER ATTILA TUDOMÁNYOS FŐMUNKATÁRS
RészletesebbenVIZSGÁLATA FLOWCYTOMETRIA
TERÁPIAREZISZTENCIA FEHÉRJ RJÉK K MŐKÖDÉSÉNEK M VIZSGÁLATA FLOWCYTOMETRIA ALKALMAZÁSÁVAL Szendi Eszter V. évfolyam Témavezetı: Dr. Vajdovich Péter TDK konferencia, 2008.11.26. Terápiarezisztencia alapvetı
RészletesebbenKutatási beszámoló 2006-2009. A p50gap intracelluláris eloszlásának és sejtélettani szerepének vizsgálata
Kutatási beszámoló 6-9 Kutatásaink alapvetően a pályázathoz benyújtott munkaterv szerint történtek. Először ezen eredményeket foglalom össze. z eredeti tervektől történt eltérést a beszámoló végén összegzem.
RészletesebbenI. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS
I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS 1/33 1. A GYÓGYSZER MEGNEVEZÉSE Resolor 1 mg-os filmtabletta 2. MINŐSÉGI ÉS MENNYISÉGI ÖSSZETÉTEL 1 mg prukaloprid filmtablettánként (prukaloprid-szukcinát formájában).
RészletesebbenRövid ismertető. Modern mikroszkópiai módszerek. A mikroszkóp. A mikroszkóp. Az optikai mikroszkópia áttekintése
Rövid ismertető Modern mikroszkópiai módszerek Nyitrai Miklós 2010. március 16. A mikroszkópok csoportosítása Alapok, ismeretek A működési elvek Speciális módszerek A mikroszkópia története ld. Pdf. Minél
RészletesebbenDoktori értekezés tézisei
Doktori értekezés tézisei A komplement- és a Toll-szerű receptorok kifejeződése és szerepe emberi B-sejteken fiziológiás és autoimmun körülmények között - az adaptív és a természetes immunválasz kapcsolata
RészletesebbenEgyetemi doktori (PhD) értekezés tézisei. Gyulladásos szöveti mediátorok vazomotorikus hatásai Csató Viktória. Témavezető: Prof. Dr.
Egyetemi doktori (PhD) értekezés tézisei Gyulladásos szöveti mediátorok vazomotorikus hatásai Csató Viktória Témavezető: Prof. Dr. Papp Zoltán DEBRECENI EGYETEM LAKI KÁLMÁN DOKTORI ISKOLA Debrecen, 2015
RészletesebbenSzénhidrátok monoszacharidok formájában szívódnak fel a vékonybélből.
Vércukorszint szabályozása: Szénhidrátok monoszacharidok formájában szívódnak fel a vékonybélből. Szövetekben monoszacharid átalakítás enzimjei: Szénhidrát anyagcserében máj központi szerepű. Szénhidrát
RészletesebbenÚj terápiás lehetőségek (receptorok) a kardiológiában
Új terápiás lehetőségek (receptorok) a kardiológiában Édes István Kardiológiai Intézet, Debreceni Egyetem Kardiomiociták Ca 2+ anyagcseréje és új terápiás receptorok 2. 1. 3. 6. 6. 7. 4. 5. 8. 9. Ca
RészletesebbenTermodinamikai egyensúlyi potenciál (Nernst, Donnan). Diffúziós potenciál, Goldman-Hodgkin-Katz egyenlet.
Termodinamikai egyensúlyi potenciál (Nernst, Donnan). Diffúziós potenciál, Goldman-Hodgkin-Katz egyenlet. Biológiai membránok passzív elektromos tulajdonságai. A sejtmembrán kondenzátorként viselkedik
RészletesebbenNÖVÉNYGENETIKA. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP /1/A
NÖVÉNYGENETIKA Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010 A NÖVÉNYI TÁPANYAG TRANSZPORTEREK az előadás áttekintése A tápionok útja a növényben Növényi tápionok passzív és
RészletesebbenAz elmúlt években végzett kísérleteink eredményei arra utaltak, hogy az extracelluláris ph megváltoztatása jelentősen befolyásolja az ATP és a cink
A cystás fibrosis (CF) a leggyakoribb autoszomális, recesszív öröklődés menetet mutató halálos kimenetelű megbetegedés a fehérbőrű populációban. Hazánkban átlagosan 2500-3000 élveszületésre jut egy CF
RészletesebbenAz aminoxidázok és a NADPH-oxidáz szerepe az ér- és neuronkárosodások kialakulásában (patomechanizmus és gyógyszeres befolyásolás)
Az aminoxidázok és a NADPH-oxidáz szerepe az ér- és neuronkárosodások kialakulásában (patomechanizmus és gyógyszeres befolyásolás) Az aminoxidázok két nagy csoportjának, a monoamin-oxidáznak (MAO), valamint
RészletesebbenKutatási beszámoló ( )
Kutatási beszámoló (2008-2012) A thrombocyták aktivációja alapvető jelentőségű a thrombotikus betegségek kialakulása szempontjából. A pályázat során ezen aktivációs folyamatok mechanizmusait vizsgáltuk.
RészletesebbenLeukotriénekre ható molekulák. Eggenhofer Judit OGYÉI-OGYI
Leukotriénekre ható molekulák Eggenhofer Judit OGYÉI-OGYI Mik is azok a leukotriének? Honnan ered az elnevezésük? - először a leukocitákban mutatták ki - kémiai szerkezetükből vezethető le - a konjugált
RészletesebbenIntelligens molekulákkal a rák ellen
Intelligens molekulákkal a rák ellen Kotschy András Servier Kutatóintézet Rákkutatási kémiai osztály A rákos sejt Miben más Hogyan él túl Áttekintés Rákos sejtek célzott támadása sejtmérgekkel Fehérjék
RészletesebbenCYP2C19 polimorfizmusok szerepe a clopidogrel rezisztencia vizsgálatában iszkémiás stroke-on átesett betegekben
CYP2C19 polimorfizmusok szerepe a clopidogrel rezisztencia vizsgálatában iszkémiás stroke-on átesett betegekben Bádogos Ágnes DE-ÁOK V. évfolyam Témavezető: Dr. Bagoly Zsuzsa Debreceni Egyetem, Általános
RészletesebbenEgy idegsejt működése
2a. Nyugalmi potenciál Egy idegsejt működése A nyugalmi potenciál (feszültség) egy nem stimulált ingerelhető sejt (neuron, izom, vagy szívizom sejt) membrán potenciálját jelenti. A membránpotenciál a plazmamembrán
Részletesebbenszekrécióra kifejtett hatásukat vizsgáltuk. I. Epesavak hatásának karakterizálása a pankreász duktális sejtek működésére
A pankreász duktális sejtek fő funkciója egy HCO 3 ban gazdag, izotónikus folyadék szekréciója, amely alapvető szerepet játszik az acinusok által termelt emésztőenzimek kimosásában illetve a gyomor felől
RészletesebbenCélkitűzés/témák Fehérje-ligandum kölcsönhatások és a kötődés termodinamikai jellemzése
Célkitűzés/témák Fehérje-ligandum kölcsönhatások és a kötődés termodinamikai jellemzése Ferenczy György Semmelweis Egyetem Biofizikai és Sugárbiológiai Intézet Biokémiai folyamatok - Ligandum-fehérje kötődés
RészletesebbenBiológus Bsc. Sejtélettan II. Szekréció és felszívódás a gasztrointesztinális tractusban. Tóth István Balázs DE OEC Élettani Intézet
Biológus Bsc. Sejtélettan II. Szekréció és felszívódás a gasztrointesztinális tractusban Tóth István Balázs DE OEC Élettani Intézet 2010. 11. 12. A gasztrointesztinális rendszer felépítése http://en.wikipedia.org/wiki/file:digestive_system_diagram_edit.svg
RészletesebbenTRANSZPORTFOLYAMATOK A SEJTEKBEN
16 A sejtek felépítése és mûködése TRANSZPORTFOLYAMATOK A SEJTEKBEN 1. Sejtmembrán elektronmikroszkópos felvétele mitokondrium (energiatermelõ és lebontó folyamatok) citoplazma (fehérjeszintézis, anyag
RészletesebbenMagyarkuti András. Nanofizika szeminárium JC Március 29. 1
Magyarkuti András Nanofizika szeminárium - JC 2012. Március 29. Nanofizika szeminárium JC 2012. Március 29. 1 Abstract Az áram jelentős részéhez a grafén csík szélén lokalizált állapotok járulnak hozzá
RészletesebbenGlukuronidtranszport az endoplazmás retikulumban
Glukuronidtranszport az endoplazmás retikulumban Doktori értekezés Dr. Révész Katalin Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Doktori Iskola Témavezető: Dr. Csala Miklós egyetemi docens, Ph.D. Hivatalos
RészletesebbenDózis-válasz görbe A dózis válasz kapcsolat ábrázolása a legáltalánosabb módja annak, hogy bemutassunk eredményeket a tudományban vagy a klinikai
Dózis-válasz görbe A dózis válasz kapcsolat ábrázolása a legáltalánosabb módja annak, hogy bemutassunk eredményeket a tudományban vagy a klinikai gyakorlatban. Például egy kísérletben növekvő mennyiségű
RészletesebbenImmunológia alapjai. 16. előadás. Komplement rendszer
Immunológia alapjai 16. előadás Komplement rendszer A gyulladás molekuláris mediátorai: Plazma enzim mediátorok: - Kinin rendszer - Véralvadási rendszer Lipid mediátorok Kemoattraktánsok: - Chemokinek:
RészletesebbenA lézer-szkenning citometria lehetőségei. Laser-scanning cytometer (LSC) Pásztázó citométer. Az áramlási citometria fő korlátai
Az áramlási citométer bevezetésének fontosabb állomásai A lézer-szkenning citometria lehetőségei Bacsó Zsolt Coulter, 1949 Coulter számláló szabadalmaztatása Crosland-Taylor, 1953 sejtek hidrodinamikai
RészletesebbenAz adenozin-dezamináz gátlás hatása az interstitialis adenozin-szintre eu-és hyperthyreoid tengerimalac pitvaron
Az adenozin-dezamináz gátlás hatása az interstitialis adenozin-szintre eu-és hyperthyreoid tengerimalac pitvaron Erdei Tamás IV. éves gyógyszerészhallgató Témavezető: Dr. Gesztelyi Rudolf DE GYTK Gyógyszerhatástani
Részletesebbenklorid ioncsatorna az ABC (ATP Binding Casette) fehérjecsaládba tartozik, amelyek általánosságban részt vesznek a gyógyszerek olyan alapvetı
Szegedi Tudományegyetem Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet Igazgató: Prof. Dr. Varró András 6720 Szeged, Dóm tér 12., Tel.: (62) 545-682 Fax: (62) 545-680 e-mail: varro.andras@med.u-szeged.hu Opponensi
RészletesebbenELEKTROLIT VIZSGÁLATOK 1. ELEKTROLITOK
ELEKTROLIT VIZSGÁLATOK 1. ELEKTROLITOK - A SZERVEZET VÍZTEREI (KOMPARTMENTEK) -A VÉRPLAZMA LEGFONTOSABB ELEKTROLITJAI *nátrium ion (Na + ) *kálium ion ( ) *klorid ion (Cl - ) TELJES TESTTÖMEG: * szilárd
RészletesebbenEgy idegsejt működése. a. Nyugalmi potenciál b. Transzport proteinek c. Akciós potenciál
Egy idegsejt működése a. Nyugalmi potenciál b. Transzport proteinek c. Akciós potenciál Nyugalmi potenciál Az ionok vándorlása 5. Alacsonyabb koncentráció ioncsatorna membrán Passzív Aktív 3 tényező határozza
RészletesebbenA vérképző rendszerben ionizáló sugárzás által okozott mutációk kialakulásának numerikus modellezése
A vérképző rendszerben ionizáló sugárzás által okozott mutációk kialakulásának numerikus modellezése Madas Balázs Gergely XXXIX. Sugárvédelmi Továbbképző Tanfolyam Hajdúszoboszló, Hunguest Hotel Béke 2014.
RészletesebbenMultidrog rezisztens tumorsejtek szelektív eliminálására képes vegyületek azonosítása és in vitro vizsgálata
Multidrog rezisztens tumorsejtek szelektív eliminálására képes vegyületek azonosítása és in vitro vizsgálata Doktori értekezés tézisei Türk Dóra Témavezető: Dr. Szakács Gergely MTA TTK ENZIMOLÓGIAI INTÉZET
RészletesebbenDiabéteszes redox változások hatása a stresszfehérjékre
Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Tudományági Doktori Iskola Pathobiokémia Program Doktori (Ph.D.) értekezés Diabéteszes redox változások hatása a stresszfehérjékre dr. Nardai Gábor Témavezeto:
RészletesebbenA glükóz reszintézise.
A glükóz reszintézise. A glükóz reszintézise. A reszintézis nem egyszerű megfordítása a glikolízisnek. A glikolízis 3 irrevezibilis lépése más úton játszódik le. Ennek oka egyrészt energetikai, másrészt
Részletesebben1. Előadás Membránok felépítése, mebrán raftok
1. Előadás Membránok felépítése, mebrán raftok Plazmamembrán Membrán funkciói: sejt integritásának fenntartása állandó hő, energia, és információcsere biztosítása homeosztázis biztosítása Klasszikus folyadékmozaik
RészletesebbenRészletes szakmai beszámoló Az erbb proteinek asszociációjának kvantitatív jellemzése című OTKA pályázatról (F049025)
Részletes szakmai beszámoló Az erbb proteinek asszociációjának kvantitatív jellemzése című OTKA pályázatról (F049025) A pályázat megvalósítása során célunk volt egyrészt a molekulák asszociációjának tanulmányozására
RészletesebbenVízben oldott antibiotikumok (fluorokinolonok) sugárzással indukált lebontása
Vízben oldott antibiotikumok (fluorokinolonok) sugárzással indukált lebontása Doktori beszámoló 5. félév Készítette: Tegze Anna Témavezető: Dr. Takács Erzsébet ÓBUDAI EGYETEM ANYAGTUDOMÁNYOK ÉS TECHNOLÓGIÁK
RészletesebbenVezikuláris transzport
Molekuláris Sejtbiológia Vezikuláris transzport Dr. habil KŐHIDAI László Semmelweis Egyetem, Genetikai, Sejt- és Immunbiológiai Intézet 2005. november 3. Intracelluláris vezikul uláris transzport Kommunikáció
Részletesebbena. Nyugalmi potenciál b. Transzport proteinek c. Akciós potenciál. Nyugalmi potenciál. 3 tényező határozza meg:
Egy idegsejt működése a. Nyugalmi potenciál b. Transzport proteinek c. Nyugalmi potenciál Az ionok vándorlása 5. Alacsonyabb koncentráció ioncsatorna membrán Passzív Aktív 3 tényező határozza meg: 1. Koncentráció
RészletesebbenMULTIDROG REZISZTENCIA IN VIVO KIMUTATÁSA PETEFÉSZEK TUMOROKBAN MOLEKULÁRIS LEKÉPEZÉSSEL
MULTIDROG REZISZTENCIA IN VIVO KIMUTATÁSA PETEFÉSZEK TUMOROKBAN MOLEKULÁRIS LEKÉPEZÉSSEL Dr. Krasznai Zoárd Tibor Debreceni Egyetem OEC Szülészeti és Nőgyógyászati Klinika Debrecen, 2011. 10.17. Bevezetés
RészletesebbenSejtek membránpotenciálja
Sejtek membránpotenciálja Termodinamikai egyensúlyi potenciál (Nernst, Donnan) Diffúziós potenciál, (Goldman-Hodgkin-Katz egyenlet) A nyugalmi membránpotenciál: TK. 284-285. A nyugalmi membránpotenciál
RészletesebbenÚj orális véralvadásgátlók
Új orális véralvadásgátlók XI. Magyar Sürgősségi Orvostani Kongresszus Lovas András, Szegedi Tudományegyetem, Aneszteziológiai és Intenzív Terápiás Intézet Véralvadásgátlók alkalmazási területei posztoperatív
RészletesebbenA II. kategória Fizika OKTV mérési feladatainak megoldása
Nyomaték (x 0 Nm) O k t a t á si Hivatal A II. kategória Fizika OKTV mérési feladatainak megoldása./ A mágnes-gyűrűket a feladatban meghatározott sorrendbe és helyre rögzítve az alábbi táblázatban feltüntetett
RészletesebbenZSÍRSAVAK OXIDÁCIÓJA. FRANZ KNOOP német biokémikus írta le először a mechanizmusát. R C ~S KoA. a, R-COOH + ATP + KoA R C ~S KoA + AMP + PP i
máj, vese, szív, vázizom ZSÍRSAVAK XIDÁCIÓJA FRANZ KNP német biokémikus írta le először a mechanizmusát 1 lépés: a zsírsavak aktivációja ( a sejt citoplazmájában, rövid zsírsavak < C12 nem aktiválódnak)
RészletesebbenPROGRAM. Dizájner drogok a feketepiacon kihívások a lefoglalt anyagok azonosításában
PROGRAM 2016. április 6. (szerda) 11.00 Regisztráció 12.50 Megnyitó Monostory Katalin, a Szimpózium elnöke S1 13.00 Nyitó előadás Elnök: Vastag Monika, Monostory Katalin S1 1 13.00 Szántay Csaba, Béni
RészletesebbenRöntgen-gamma spektrometria
Röntgen-gamma spektrométer fejlesztése radioaktív anyagok elemi összetétele és izotópszelektív radioaktivitása egyidejű meghatározására Szalóki Imre, Gerényi Anita, Radócz Gábor Nukleáris Technikai Intézet
RészletesebbenAz Oxidatív stressz hatása a PIBF receptor alegységek összeszerelődésére.
Újabban világossá vált, hogy a Progesterone-induced blocking factor (PIBF) amely a progesteron számos immunológiai hatását közvetíti, nem csupán a lymphocytákban és terhességgel asszociált szövetekben,
Részletesebben