A medvehagyma (Allium ursinum) kardioprotektív hatásainak vizsgálata magas koleszterin tartalmú diétán tartott New Zealand nyúl modellen

Átírás

1 A medvehagyma (Allium ursinum) kardioprotektív hatásainak vizsgálata magas koleszterin tartalmú diétán tartott New Zealand nyúl modellen Zilinyi Rita DE ÁOK Klinikai Laboratóriumi Kutató 2. éves MSc hallgató Témavezető: Dr. Juhász Béla Docens DE Gyógyszerésztudományi Kar Gyógyszerhatástani Tanszék, 2015

2 BEVEZETŐ *WHO adatai

3 RIZIKÓFAKTOROK HIPERTÓNIA DOHÁNYZÁS DISZLIPIDÉMIÁ K

4 Allium ursinum Flavonoid glikozidok: -kaempferol 3-O-flneohesperidoside- 7-O-[2-O-(trans-p-coumaroyl)]-fl-D- glucopyranoside, -kaempferol 3-O-fl-neohesperidoside-7-O-[2- O-(trans-feruloyl)]-fl-D-glucopyranoside, -kaempferol 3-O-fl-neohesperidoside-7-O-[2- O-(trans-p-coumaroyl)-3-O-fl- D-glucopyranosyl-1-fl-D-glucopyranosid GALACTOLIPID -1,2-di-O-α- linolenoyl-3-o-β-dgalactopyranosyl-sn-glycerol Trombocita aggregáció-gátló * Sabha et al. Pharmacology, 2012;89(5-6):260-9

5 Allium ursinum SH patkányok SBP HDL chol 5 LO, COX TA = ACE gátló

6 CÉLKITŰZÉS Kutatócsoportunk célul tűzte ki a medvehagyma szívfunkciós paraméterekre, vérlipid-szintekre, valamint a hemoxigenáz-1 fehérje expressziójára kifejtett hatásainak vizsgálatát hiperkoleszterinémiás nyúl modellen.

7 KÍSÉRLETI ELRENDEZÉS A vizsgálat során hím New Zealand nyulakat 3 csoportra osztottunk (n=6): I. csoport: normál táp (C) II. csoport: 2% koleszterinnel dúsított táp (HC) III. csoport: 2% koleszterinnel és 2% medvehagyma liofilizátummal dúsított táp (HCM), melyet az állatok 8 héten keresztül kaptak ad libitum.

8 MÓDSZEREK Munkánk során a következő vizsgálatokat végeztük el: I. Szérum paraméterek mérése II. Szívfunkciós paraméterek meghatározása III. Plakkok méretének meghatározása IV. Hemoxigenáz-1 fehérje expressziójának vizsgálata

9 SZÉRUM PARAMÉTEREK 1) Lipid paraméterek - ApoA - ApoB - LDL - HDL - Koleszterin - Triglicerid 2) Atherogenezis fázisát jelző prognosztikus marker - CRP 3) Miokardiális nekrózis markerei - CK - LDH - GOT

10 95 % O2+ 5% CO2 Szívfunkciós paraméterek preload afterload F lo w m ét e r Langendorff készülék transzducer pumpa 95% O2+ 5% CO2 pumpa Koronária átáramlás

11 SZÍVFUNKCIÓS PARAMÉTEREK Izolált dolgozó szív perfúziós készülék aorta nyomás (AoP) aorta kiáramlás (AF) koronária átáramlás (CF) 30min 60min 90min 120 min 10 min 30 min 120 min perfúzió iszkémia reperfúzió mérés mérés mérés

12 Ateroszklerotikus plakkok területének meghatározása Aorta thoracica kimetszése Az ér kipreparálása Mosás Fixálás Inkubálás: Sudan-III Mosás Területek meghatározása (Scion for Windows Densitometry Image version Alpha (Scion Corporation, Maryland, USA) programmal)

13 Hemoxigenáz-1 expressziója Citoplazma frakció izolálása miokardiumból Fehérjekoncentráció mérés Western blot analízis

14 Eredmények és következtetések I. * Ábráinkon *-gal jelöltük a HC vc. HCM csoportot

15 Eredmények és következtetések I. * * *

16 Eredmények és következtetések I. * * *

17 Eredmények és következtetések II. Szívfunkciós paraméterek *

18 Eredmények és következtetések III. Ateroszklerotikus plakkok kiterjedése *

19 Eredmények és következtetések IV. Western blot analízis * HO-1 32 kda GAPDH 36 kda

20 Összefoglalás Lipid paraméterek Myocardium LDL Összkoleszterin Atheromás plakk LDH, GOT, CK HO-1 ApoA ApoB Aorta kiáramlás

21 KÖSZÖNETNYÍLVÁNÍTÁS Szeretném megköszönni Dr. Tósaki Árpád professzor úrnak, a Gyógyszerhatástani Tanszék vezetőjének, hogy lehetőséget biztosított számomra a TDK munkám elkészítéséhez. Köszönettel tartozom Dr. Juhász Béla témavezetőmnek, hogy támogatott és segített a laborban. Továbbá köszönettel tartozom Dr. Bombicz Mariannak és Dr. Priksz Dánielnek, hogy segítséget és támogatást nyújtottak nekem. Továbbá köszönöm Hohmann Juditnak a Szegedi Tudományi Egyetem, Gyógyszerésztudományi Kar, Farmakognóziai Tanszék munkatársának, hogy liofilizációs eljárással előállított növényi kivonatot biztosított számunkra. A kutatás az OTKA , OTKA 78223, TÁMOP A/ (T.Á.), Debreceni Egyetem (KUTEGY), TÁMOP A-11/1/KONV kereteiből valósult meg.

22 FÜGGELÉK Önállóan végzett munkák: Segítséggel végzett munkák: -Kísérleti állatok gondozása -Krebs-oldat készítése -Izolált szív funkciós paraméterek -Fehérje izolálás -Koncentráció mérés -Western blot analízis -Medvehagyma liofilizátummal dúsított táp készítése -Izolált szív perfúziós készülék használata -Plakk festése Sudan-III-mal -Eredmények kiértékelése, statisztika