SEMMELWEIS EGYETEM Orvosi Biokémiai Intézet 1094 Budapest, Tű zoltó u. 37-47. című gyakorlat előkészítése Készítette: 2010.01.28. A dokumentáció kódja: SE-OBI-OKT- MU-12 Dr. Törőcsik Beáta tudományos munkatárs Dátum Változat száma: 01 Jóváhagyta: 2010.01.28. Érvénybelépé s időpontja: 2010.01.28. Dr. Kolev Kraszimir tanulmányi felelős Dátum Oldalak száma: 6 MIR szempontból ellenőrizte: 2010.01.28. Mellékletek száma: 0 Dr. Kolev Kraszimir minőségirányítási megbízott Dátum Nyilvántartott példány: Munkapéldány: A példány sorszáma: Ezen Szabványműveleti előírás a Semmelweis Egyetem szellemi tulajdona. Továbbadása, sokszorosítása írásos engedélyhez kötött. A Munkautasításban szereplő információt csak a minőség- és környezetirányítási rendszer működtetéséhez lehet felhasználni.
MÓDOSÍTÁSOK JEGYZÉKE Módosította Dátum/Aláírás Módosítot t oldalszám Jóváhagyta Dátum/Aláírás Ellenőrizte Dátum/Aláírás Kibocsátás időpontja Oldal:2/6
TARTALOMJEGYZÉK A CÉLJA... 4 A ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE... 4 ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA... 4 A LEÍRÁSA... 4 Oldal:3/6
A CÉLJA Összefoglalja a rutinszerűen alkalmazott technológiai eljárás részleteit. A ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE Orvosi Biokémiai Intézet oktatási előkészítő laboratóriuma. ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA A dokumentum kidolgozásáért felelős: Tanulmányi felelős A dokumentum alkalmazásáért felelős: Vezető laborasszisztens A dokumentumban foglaltak végrehajtásáért felelős: Beosztott laborasszisztensek. A dokumentumban szabályozott tevékenység rendszer felülvizsgálat alkalmával történő felülvizsgálatáért felelős: A Minőségirányítási megbízott A LEÍRÁSA Szükséges oldatok: 1. M 9 minimál medium: NH4Cl 5g NaCl 25g K2HPO4 30g KH2PO4 15g 87% glicerin 32ml Desztvízzel 5000ml-re kiegészítve, sterilizálva Oldal:4/6
2. 100 ml 1 m% MgSO4, sterilizálva 3. 150 ml 10% Tripkazin, sterilizálva 2 ml 1 m% MgSO4-t, 4 ml 10% Tripkazin-t belemérünk 200 ml M 9 minimál mediumba, így készül el a végleges M 9 médium. 4. 2 L 0.02 M K-foszfát puffer 5. 400 ml 0.5 mg/ml IPTG 6. 400 ml 1.5 mg/ml OPNG 7. 80 ml 0.5mg/ml Chloramphenicol MÉREG 8. 120 ml 2.5mg/ml Rifampicin MÉREG 9. 2L 0.5 M Na2Co3 10. 500 ml Toluol A nem pathogen, ártalmatlan szerotipusú (gyalog) Escherichia coli baktériumot a SE Mikrobiológia intézete oltja le számunkra, ferde agarba. Ebből áthozatal után egy kacsnyi baktérium azonnal leoltásra kerül 100 ml M 9 médiumba, 37C-on történő 16 órás rázó inkubálás után 550 nm-en desztvízzel szemben extinkcióját lemérjük, majd M 9 médiummal 0.05-ös extinkcióra hígítjuk. A rázó inkubálást 0.2 extinkcióig folytatjuk (exponencális/log fazisban lévő baktériumokkal dolgozunk). A maradék baktérium 4C fokon a hűtőben tárolódik, és minden gyakorlat előtt friss leoltásra kerül sor. Bekészített anyagok termenként: 4 üveg desztviz 4 üveg 0.02 M K-foszfát puffer 4 üveg 0.5 M Na2CO3 4 üveg Toluol 2 pohár pipettahegy 200-1000 µl 2 pohár pipettahegy 20-200 µl Escherichia coli bacterium 50 ml (100 ml-es Erlenmeyer lombikban) Oldal:5/6
Fotométerek (420 nm) (mellé 4 db szűkített poliakril küvetta, pohár, papirvatta, spriccflaska) Vízfürdő 37 C 80 db rövid kémcső 4 db kémcsőállvány 2 db jégtartó, benne -IPTG 2x3 ml -OPTG 2x3 ml - Chloramphenicol 1x1.2 ml - Rifampicin 1x2 ml Kosárba: 4 db 200-1000 µl pipetta 4 db 20-200 µl pipetta 4 db stopper 1 db filctoll Oldal:6/6