Innovációk a glutén meghatározásban laboratóriumok és az élelmiszeripar számára Tanyi Ervin Romer Labs # 1 1 Romer Labs
Romer Labs - Globális partner Union, MO, USA Runcorn, UK Tulln, Ausztria Peking, Kína Campinas, Brazília Szingapúr USA, Kanada Európa, Latin Amerika Közel és Közép-Kelet, Afrika Ázsia, Óceánia, Japán # 2
Romer Labs szakterületek Mikotoxinok Élelmiszerallergének Genetikailag Módosított Szervezetek (GMO) Gyógyszermaradványok Szennyező anyagok # 3
Miért vizsgáljuk az élelmiszerallergéneket? Márka védelem Törvényi szabályozás és Szabványok Allergén-mentes piac Média érdeklődés Termék visszahívások Élelmiszerallergének = Élelmiszerbiztonsági kockázat # 4
Mire kell figyelmet fordítani a vizsgálatok során? Határértékek Mintavétel Mértékegységek és definíciók Validációk és jóváhagyások Vizsgálati kitek Kalibrálás Az ellenőrzés a minimális gondosság # 5
Termékfejlesztés és tervezés Fogyasztói csoport? Különleges igények? pl. gluténmentes Természetesen mentes vagy különleges módon feldolgozott Összetevők szelektálása kereszt-szennyeződés Gyártási folyamat közös berendezések? Helyes jelölés # 6
Hogyan kerülnek allergének a termékbe? Receptúra (összetevők, pre-mix összetevők, újrabedolgozott termékek, ) Kereszt-szennyeződés Összetevők tárolása Gyártás (bemérés, keverés, gyártósor nem megfelelő takarítás) Szennyeződés átvitel tisztítás Személyzet Az allergének eloszlása egyenlőtlen # 7
ÉLELMISZER-ELŐÁLLÍTÁS KRITIKUS IRÁNYÍTÁSI PONTOK (CCP) ALLERGÉNEK SZEMPONTJÁBÓL # 8
Beérkező áruk és Raktár Beszállító audit Ellátási lánc audit Beérkező áruk Beszállítói specifikációk,tanúsítványok ellenőrzése Raktár Tárolás Összetevők megfelelő elkülönítése Kép forrás: http://allergytraining.food.gov.uk/default.aspx # 9
Feldolgozás és csomagolás Gyártósor Takarítás ellenőrzés Kereszt-szennyeződés vizsgálata Kifolyás Tisztítás biztosítása Gyártás során Lehetséges keresztszennyeződések vizsgálata Be dolgozás Kereszt-szennyeződés vizsgálata Kép forrás: http://allergytraining.food.gov.uk/default.aspx # 10
Késztermék és raktár Kész termék Megfelelő jelölés Tárolás Termékek elkülönítése Ellátási lánc Audit és a mentesség betartatása Kép forrás: http://allergytraining.food.gov.uk/default.aspx # 11
Miért használja az AgraStrip és AgraQuant allergén teszteket? Az ellenőrzés biztonságot nyújt Megnövelt mintavétel/mintaszám Folyamatszabályozás és ellátási lánc kritikus pontok vizsgálata Valós idejű vizsgálatok döntések Egyszerű használat könnyen megtanulható Képzés tanúsítás (minőségbiztosítás) Költség-hatékonyság akár egy minta is vizsgálható AgraStrip tesztek nem igényelnek műszeres hátteret # 12
ALLERGÉNEK VIZSGÁLATA GYORSMÓDSZEREK # 13
EU: Big 14 élelmiszerallergén Sikértartalmú gabonafélék Diófélék Rákfélék Zeller Tojás Mustár Halak Szezámmag Földimogyoró SO 2 és szulfitok Szója Csillagfürt Tej (kazein) Puhatestűek # 14
Kereskedelmi forgalomban elérhető analitkai eljárások Fehérje vagy DNS kimutatás ELISA -> AgraQuant Allergen Immunkromatográfiás tesztcsík -> AgraStrip Allergen PCR RT-PCR # 15
AgraQuant Allergén ELISA Földimogyoró Rákfélék Törökmogyoró, mandula, dió, kesudió/pisztácia, brazil dió, makadámia dió Béta-Laktoglobulin (Tejsavó) Csillagfürt Kazein Glutén Szezámmag Mustár Tojásfehérje Szója # 16
AgraQuant Allergén ELISA tesztek Megnevezés Cikkszám Mérési tartomány LOD AgraQuant Peanut COKAL0148 1-40 ppm 0.1 ppm AgraQuant Gluten COKAL0248 4-120 ppm 0.6 ppm AgraQuant Hazelnut COKAL0348 1-40 ppm 0.3 ppm AgraQuant Soy COKAL0448 40-1000 ppb 16 ppb AgraQuant Almond COKAL0748 0.4-10 ppm 0.2 ppm AgraQuant Egg White COKAL0848 0.4-10 ppm 0.05 ppm AgraQuant Walnut COKAL 0948 2-60 ppm 0.35 ppm AgraQuant Beta- Lactoglobulin COKAL1048 10-400 ppb 1.5 ppb AgraQuant Casein COKAL1200 0.2-6 ppm 0.04 ppm AgraQuant Mustard COKAL2148 2-60 ppm 1 ppm AgraQuant Lupin COKAL1548 2-30 ppm 0.2 ppm AgraQuant Crustacea COKAL2248 20-400 ppb 0.9 ppb AgraQuant Sesame COKAL1948 2-30 ppm 0.2 ppm AgraQuant Gluten G12 COKAL0200 4-200 ppm 2 ppm # 17
AgraQuant Allergén ELISA tesztek Mintaelőkészítés 1g + 20 ml Extrakciós puffer; 15 perc, 60 C Termékminták Környezeti tamponminták ELISA eljárás azonos lépések minden kit esetén Excel-alapú számolótáblázatok, jegyzőkönyvek Mennyiségi meghatározás # 18
AgraStrip Allergén Gyorstesztek AgraStrip tesztcsíkok élelmiszerallergének kimutatására AgraStrip Peanut (COKAL0110AS) AgraStrip Hazelnut (COKAL0310AS) AgraStrip Gluten (COKAL0210AS) AgraStrip Gluten G12* (COKAL0200AS) AgraStrip Egg (COKAL1810AS) AgraStrip Almond (COKAL0710AS) AgraStrip Casein (COKAL1210AS) AgraStrip Lupine (COKAL1510AS) # 19
AgraStrip Allergén Gyorstesztek AgraStrip tesztcsíkok élelmiszerallergének kimutatására AgraStrip Mustard (COKAL2110AS) AgraStrip Walnut (COKAL0910AS) AgraStrip Cashew/Pistachio (COKAL1310AS) AgraStrip Brazil Nut (COKAL1710AS) AgraStrip Sesame (COKAL1910AS) AgraStrip Macadamia (COKAL1610AS) # 20
AgraStrip Allergén helyszíni vizsgálatok A kit tartalma: 10 tesztcsík 10 reakció cső 10 extrakciós cső 10 szűrő/cseppentő feltét Extrakciós pufferoldat 10 tampon Tesztállvány # 21
Extrakció a mintavétel helyén Minta homogenizálás 0.2g minta 3.2ml extrakciós puffer (csövekbe kiszerelve) Környezeti minták: Tamponminta Intenzív rázás 1 percig Szűrőkupak felhelyezése # 22
Helyszínen elvégezhető vizsgálat Mérjen be 12 csepp extraktumot Rázza intenzíven 15 másodpercig Hagyja állni 5 percig Helyezze a tesztet az inkubációs csőbe 5 perc után távolítsa el a tesztcsíkot és értékelje az eredményt azonnal # 23
AgraStrip Allergén Eredmények Előnyök: Helyszínen elvégezhető nem igényel műszeres hátteret Egyszerű könnyen elvégezhető, azonnal felhasználató reagensek Érzékeny alacsony kimutatási határok Gyors 11 perc, extrakcióval együtt # 24
# 25 GLUTÉN ELLENŐRZÉS GYORSMÓDSZEREK
Gabonafehérjék csoportosítása Csoportosítás oldhatóság szerint Oldószer Víz NaCl oldat Fehérje Albuminok Globulinok A glutént (búzában) prolaminok és glutelinek alkotják, a fehérjetartalom 80%-át teszik ki. 40-70% etanol Prolaminok Maradék Glutelinek Glutén Frakció Búza Rozs Árpa Zab Kukorica Albuminok Leukozin A búzában, rozsban és árpában található prolaminok nagyon hasonlóak a növények közötti szoros botanikai kapcsolat következtében. Mindhárom fehérjéről ismert, hogy képesek kiváltani coeliákiát, amíg a zabban található prolamin még vita tárgyát képezi. # 26 Globulinok Edesztin Prolaminok Gliadin Szekalin Hordein Avenin Zein Glutelinek Glutenin Szekalinin Hordenin Avenalin Zeanin
Coeliákia a 2 -gliadin fragmentum 33 aminosav (56 88) LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF Anderson et al, Nat Med 2000;6:337-342 Arentz-Hansen et al. J Exp Med 2000; 191:603-621 Shan et al. Science 2002; 297: 2275-2279 # 27
G12 monoklonális antitest 33 aminosavból álló peptid fragmentum Rendkívüli T sejt stimuláló hatású G12 antitest specifitás QPQLPY (gliadin - búza) QPQQPY (secalin rozs) QPQLPF (hordein - árpa) Zab (avenin zab) # 28
AgraStrip Gluten G12 Kimutatási határ: 5 ppm 3 különböző érzékenység: 5, 10 és 20 ppm Specificitás: Keresztreakció rozs, tönkölybúza, árpa és néhány zabfajtára. Magas korreláció az AgraQuant G12 ELISA eredményekkel # 29
G12 antitest alapú módszerek Kapocs a coeliákia és az immuntoxikus peptidek kimutatása között A vizsgálat célpontja egy erős hatással rendelkező, robusztus immunotoxikus peptid Egy új generációs antitest a glutén kimutatás javítására # 30
Sajnos nincs jó hírem, Önnek mogyoró allergiája van. # 31
Köszönöm a figyelmet! Making the World s Food Safer www.romerlabs.com # 32 32 2011, Romer Labs