Újabb alloherpeszvírusok rusok kimutatása Kelet-Eur Európában Doszpoly Andor, Igor Shchelkunov, Benkő Mária Halászati Tudományos Tanácskoz cskozás Szarvas 2012
Herpeszvírusok rusok nagyméret retű,, burkos vírusok d: 150-250 nm tegument a kapszid és a burok között k genom: lineáris, dsdns,, 134-295 kb G+C tartalom: 32-75% 79-156 géng tegument kapszid a vírus-maggal burok
Herpesvirales rend Herpesviridae hüllők, madarak, emlősök Alloherpesviridae halak, kétéltk ltűek Malacoherpesviridae puhatestű
Alloherpeszvírusok rusok Ictalurivirus Cyprinivirus Salmonivirus Batrachovirus IcHV-1, 2, AciHV-2 CyHV-1, 2, 3, AngHV-1 SalHV-1, 2, 3 RaHV-1, 2
Betegségek gek lefolyása és tünetek I. Magas virulenciájú vírusok, melyek akut, szisztémás fertőzést és nagy mortalitással járó megbetegedéseket okoznak. Idesorolható az IcHV-1 és a CyHV-2. II. Alacsony virulenciájú vírusok, melyek krónikus, szisztémás megbetegedést okoznak. Ilyen például a SalHV-1. III. Magas virulenciájú vírusok, melyek akut, elsősorban bőrtünetekkel (eróziókkal, fekélyekkel, vérzéses elváltozásokkal) járó, nagy mortalitással kísért megbetegedéseket okoznak. Az AciHV-1 és 2, a SalHV-2, CyHV-3. IV. Alacsony virulenciájú vírusok, melyek rendszerint enyhe vagy jóindulatú bőrelváltozásokat okoznak, mint például az AngHV-1, CyHV-1.
Lazac (Salmo salar) Atlantic salmon papillomatosis Észak-Amerika és s Európa
Lénai tok (Acipenser baeri) Siberian sturgeon herpesvirus-2 (SbSHV-2) Korábbi Szovjetunió és Ázsia
Atlantic salmon papillomatosis Skandinávia és Oroszország észak- nyugati részer július-október ritkán n okoz magas mortalitást a betegség g tipikus tünetei: 5-105 mm bőrléziók EM alapján n herpeszvírus rus
Vizsgált minták Földrajzi eredet Gyűjtés dátuma Gazdaállat 1 Pecha Augusztus ivadék, természetes vizek 2 Pak Július ivadék, halgazdaság 3 Pak Július ivadék, halgazdaság 4 Tuloma Július-Augusztus ivarérett 5 Tuloma Július-Augusztus ivarérett 6 Tuloma Július-Augusztus ivarérett 7 Tuloma Július-Augusztus ivarérett 8 Tuloma Július-Augusztus ivarérett 10 Tuloma Július-Augusztus ivarérett 11 Kulanga Szeptember ivadék, természetes vizek 12 Kulanga Szeptember ivadék, természetes vizek 13 Kulanga Szeptember ivadék, természetes vizek 14 Kulanga Szeptember ivadék, természetes vizek 15 Kulanga Szeptember ivadék, természetes vizek 16 Kulanga Szeptember ivadék, természetes vizek 17 Kola Augusztus ivadék, halgazdaság 18 Kola Augusztus ivadék, halgazdaság
Eredmények mind a 18 minta pozitívnak bizonyult nested PCR módszerrel, m salmonivírusokra kidolgozott konszenzus primerekkel szekvencia adatok: DNS-polimer polimeráz, termináz, membrán-glikoprotein G+C tartalom: 50.4% nagyfokú homológia a SalHV-3-mal, de valósz színűleg nem azonos vírusfaj: v SalHV-4 izolálási kísérletek: k CHSE és s RTG sejtvonalakon
99 Törzsfa-rekonstrukció,, Bayesian statisztika 118 aminosav-marad maradék k alapján n (DNS-polimer polimeráz) RaHV-1 RaHV-2 Batrachovirus AngHV-1 100 CyHV-2 Cyprinivirus 91 CyHV-1 66 CyHV-3 AciHV-1 100 AciHV-2 100 100 SbsHV Ictalurivirus IcHV-1 100 IcHV-2 100 96 SalHV-2 0.1 100 SalHV-1 SalHV-3 Salmonivirus Atlantic salmon HV
Lénai tok-herpeszv herpeszvírus-2 (SbSHV-2) 2011 tavasz, Urál-hegys hegység, g, halgazdaság CPE eltérő: : nincs szincícium cium képzés, csak vakuolizáci ció SbSHV-ra specifikus rt-pcr negatív v volt, ezért virális DNS-t t küldtek k laboratóriumunkba riumunkba nested, konszenzus primereket alkalmazó PCR-rel bizonyítottuk, hogy herpeszvírus, rus, de nem egyezik a korábban leírt lénai l tok-herpeszv herpeszvírussalrussal 11.000 bp DNS-szekvencia alapján n közelebbi k rokonságot mutat az amerikai törzsekkel t mint az SbSHV-val
Clinical and pathologo-anatomical picture of fingerling Siberian sturgeon experimentally infected with Siberian sturgeon herpesvirus plaques of skin hyperplasia - pale liver (arrow) and inflamed hind gut
Clinical and pathologo-anatomical picture of 2-yr-old Siberian sturgeon experimentally infected with Siberian sturgeon herpesvirus А В Hemorrhagic ulceration of the skin and the lateral scutes of the caudal trunk (A); the liver of marble color, with light brown to pinky spots of different size (B)
Mortality dynamics in 2-mo-old or 2-yr-old Siberian sturgeon kept at 15-17 o C after infection by immersion for 1 hr with Siberian sturgeon herpesvirus (10 4.7 or 10 3.85 TCID 50 /ml water, respectively)
DNS-vakcina fejlesztés 3 feltételezetten telezetten az antigenitásért felelős fehérje génjg njét t választottuk v ki ORF59 membrán n fehérje ORF39 kapszid fehérje ORF46 membrán n glikoprotein pcdna3.1 expressziós s vektor
DNS-vakcina fejlesztés intramuszkuláris ris 0.3-0.4 0.4 mg/kg DNS-vakcina (legalább 1 mg kellett volna!) halak átlagos testtömege: 35 g fertőzés s SbSHV-1-gyel 1.5 hónappal h a vakcinázás s után vízfürdő: : 1 óra, 10 4 /ml TCID 50 vízhőmérséklet: 14-16 16 o C 4 csoport (kontroll, ORF39, ORF46, ORF59)
DNS-vakcina fejlesztés Dinamics of fish survival 100 80 Survival,% 60 40 constr. 4 (control) constr. 1 constr. 2 constr. 3 20 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 Days post infection
Köszönetnyilvánítás Az összehasonlító virológia és s a molekuláris virológia csoportok korábbi és s jelenlegi dolgozóinak