Innovációk a glutén meghatározásban

Átírás

1 Innovációk a glutén meghatározásban laboratóriumok és az élelmiszeripar számára Tanyi Ervin Romer Labs # 1 1 Romer Labs

2 Romer Labs - Globális partner Union, MO, USA Runcorn, UK Tulln, Ausztria Peking, Kína Campinas, Brazília Szingapúr USA, Kanada Európa, Latin Amerika Közel és Közép-Kelet, Afrika Ázsia, Óceánia, Japán # 2

3 Romer Labs szakterületek Mikotoxinok Élelmiszerallergének Genetikailag Módosított Szervezetek (GMO) Gyógyszermaradványok Szennyező anyagok # 3

4 Miért vizsgáljuk az élelmiszerallergéneket? Márka védelem Törvényi szabályozás és Szabványok Allergén-mentes piac Média érdeklődés Termék visszahívások Élelmiszerallergének = Élelmiszerbiztonsági kockázat # 4

5 Mire kell figyelmet fordítani a vizsgálatok során? Határértékek Mintavétel Mértékegységek és definíciók Validációk és jóváhagyások Vizsgálati kitek Kalibrálás Az ellenőrzés a minimális gondosság # 5

6 Termékfejlesztés és tervezés Fogyasztói csoport? Különleges igények? pl. gluténmentes Természetesen mentes vagy különleges módon feldolgozott Összetevők szelektálása kereszt-szennyeződés Gyártási folyamat közös berendezések? Helyes jelölés # 6

7 Hogyan kerülnek allergének a termékbe? Receptúra (összetevők, pre-mix összetevők, újrabedolgozott termékek, ) Kereszt-szennyeződés Összetevők tárolása Gyártás (bemérés, keverés, gyártósor nem megfelelő takarítás) Szennyeződés átvitel tisztítás Személyzet Az allergének eloszlása egyenlőtlen # 7

8 ÉLELMISZER-ELŐÁLLÍTÁS KRITIKUS IRÁNYÍTÁSI PONTOK (CCP) ALLERGÉNEK SZEMPONTJÁBÓL # 8

9 Beérkező áruk és Raktár Beszállító audit Ellátási lánc audit Beérkező áruk Beszállítói specifikációk,tanúsítványok ellenőrzése Raktár Tárolás Összetevők megfelelő elkülönítése Kép forrás: # 9

10 Feldolgozás és csomagolás Gyártósor Takarítás ellenőrzés Kereszt-szennyeződés vizsgálata Kifolyás Tisztítás biztosítása Gyártás során Lehetséges keresztszennyeződések vizsgálata Be dolgozás Kereszt-szennyeződés vizsgálata Kép forrás: # 10

11 Késztermék és raktár Kész termék Megfelelő jelölés Tárolás Termékek elkülönítése Ellátási lánc Audit és a mentesség betartatása Kép forrás: # 11

12 Miért használja az AgraStrip és AgraQuant allergén teszteket? Az ellenőrzés biztonságot nyújt Megnövelt mintavétel/mintaszám Folyamatszabályozás és ellátási lánc kritikus pontok vizsgálata Valós idejű vizsgálatok döntések Egyszerű használat könnyen megtanulható Képzés tanúsítás (minőségbiztosítás) Költség-hatékonyság akár egy minta is vizsgálható AgraStrip tesztek nem igényelnek műszeres hátteret # 12

13 ALLERGÉNEK VIZSGÁLATA GYORSMÓDSZEREK # 13

14 EU: Big 14 élelmiszerallergén Sikértartalmú gabonafélék Diófélék Rákfélék Zeller Tojás Mustár Halak Szezámmag Földimogyoró SO 2 és szulfitok Szója Csillagfürt Tej (kazein) Puhatestűek # 14

15 Kereskedelmi forgalomban elérhető analitkai eljárások Fehérje vagy DNS kimutatás ELISA -> AgraQuant Allergen Immunkromatográfiás tesztcsík -> AgraStrip Allergen PCR RT-PCR # 15

16 AgraQuant Allergén ELISA Földimogyoró Rákfélék Törökmogyoró, mandula, dió, kesudió/pisztácia, brazil dió, makadámia dió Béta-Laktoglobulin (Tejsavó) Csillagfürt Kazein Glutén Szezámmag Mustár Tojásfehérje Szója # 16

17 AgraQuant Allergén ELISA tesztek Megnevezés Cikkszám Mérési tartomány LOD AgraQuant Peanut COKAL ppm 0.1 ppm AgraQuant Gluten COKAL ppm 0.6 ppm AgraQuant Hazelnut COKAL ppm 0.3 ppm AgraQuant Soy COKAL ppb 16 ppb AgraQuant Almond COKAL ppm 0.2 ppm AgraQuant Egg White COKAL ppm 0.05 ppm AgraQuant Walnut COKAL ppm 0.35 ppm AgraQuant Beta- Lactoglobulin COKAL ppb 1.5 ppb AgraQuant Casein COKAL ppm 0.04 ppm AgraQuant Mustard COKAL ppm 1 ppm AgraQuant Lupin COKAL ppm 0.2 ppm AgraQuant Crustacea COKAL ppb 0.9 ppb AgraQuant Sesame COKAL ppm 0.2 ppm AgraQuant Gluten G12 COKAL ppm 2 ppm # 17

18 AgraQuant Allergén ELISA tesztek Mintaelőkészítés 1g + 20 ml Extrakciós puffer; 15 perc, 60 C Termékminták Környezeti tamponminták ELISA eljárás azonos lépések minden kit esetén Excel-alapú számolótáblázatok, jegyzőkönyvek Mennyiségi meghatározás # 18

19 AgraStrip Allergén Gyorstesztek AgraStrip tesztcsíkok élelmiszerallergének kimutatására AgraStrip Peanut (COKAL0110AS) AgraStrip Hazelnut (COKAL0310AS) AgraStrip Gluten (COKAL0210AS) AgraStrip Gluten G12* (COKAL0200AS) AgraStrip Egg (COKAL1810AS) AgraStrip Almond (COKAL0710AS) AgraStrip Casein (COKAL1210AS) AgraStrip Lupine (COKAL1510AS) # 19

20 AgraStrip Allergén Gyorstesztek AgraStrip tesztcsíkok élelmiszerallergének kimutatására AgraStrip Mustard (COKAL2110AS) AgraStrip Walnut (COKAL0910AS) AgraStrip Cashew/Pistachio (COKAL1310AS) AgraStrip Brazil Nut (COKAL1710AS) AgraStrip Sesame (COKAL1910AS) AgraStrip Macadamia (COKAL1610AS) # 20

21 AgraStrip Allergén helyszíni vizsgálatok A kit tartalma: 10 tesztcsík 10 reakció cső 10 extrakciós cső 10 szűrő/cseppentő feltét Extrakciós pufferoldat 10 tampon Tesztállvány # 21

22 Extrakció a mintavétel helyén Minta homogenizálás 0.2g minta 3.2ml extrakciós puffer (csövekbe kiszerelve) Környezeti minták: Tamponminta Intenzív rázás 1 percig Szűrőkupak felhelyezése # 22

23 Helyszínen elvégezhető vizsgálat Mérjen be 12 csepp extraktumot Rázza intenzíven 15 másodpercig Hagyja állni 5 percig Helyezze a tesztet az inkubációs csőbe 5 perc után távolítsa el a tesztcsíkot és értékelje az eredményt azonnal # 23

24 AgraStrip Allergén Eredmények Előnyök: Helyszínen elvégezhető nem igényel műszeres hátteret Egyszerű könnyen elvégezhető, azonnal felhasználató reagensek Érzékeny alacsony kimutatási határok Gyors 11 perc, extrakcióval együtt # 24

25 # 25 GLUTÉN ELLENŐRZÉS GYORSMÓDSZEREK

26 Gabonafehérjék csoportosítása Csoportosítás oldhatóság szerint Oldószer Víz NaCl oldat Fehérje Albuminok Globulinok A glutént (búzában) prolaminok és glutelinek alkotják, a fehérjetartalom 80%-át teszik ki % etanol Prolaminok Maradék Glutelinek Glutén Frakció Búza Rozs Árpa Zab Kukorica Albuminok Leukozin A búzában, rozsban és árpában található prolaminok nagyon hasonlóak a növények közötti szoros botanikai kapcsolat következtében. Mindhárom fehérjéről ismert, hogy képesek kiváltani coeliákiát, amíg a zabban található prolamin még vita tárgyát képezi. # 26 Globulinok Edesztin Prolaminok Gliadin Szekalin Hordein Avenin Zein Glutelinek Glutenin Szekalinin Hordenin Avenalin Zeanin

27 Coeliákia a 2 -gliadin fragmentum 33 aminosav (56 88) LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF Anderson et al, Nat Med 2000;6: Arentz-Hansen et al. J Exp Med 2000; 191: Shan et al. Science 2002; 297: # 27

28 G12 monoklonális antitest 33 aminosavból álló peptid fragmentum Rendkívüli T sejt stimuláló hatású G12 antitest specifitás QPQLPY (gliadin - búza) QPQQPY (secalin rozs) QPQLPF (hordein - árpa) Zab (avenin zab) # 28

29 AgraStrip Gluten G12 Kimutatási határ: 5 ppm 3 különböző érzékenység: 5, 10 és 20 ppm Specificitás: Keresztreakció rozs, tönkölybúza, árpa és néhány zabfajtára. Magas korreláció az AgraQuant G12 ELISA eredményekkel # 29

30 G12 antitest alapú módszerek Kapocs a coeliákia és az immuntoxikus peptidek kimutatása között A vizsgálat célpontja egy erős hatással rendelkező, robusztus immunotoxikus peptid Egy új generációs antitest a glutén kimutatás javítására # 30

31 Sajnos nincs jó hírem, Önnek mogyoró allergiája van. # 31

32 Köszönöm a figyelmet! Making the World s Food Safer # , Romer Labs