HTS in
HTS (High Throughput Screening) Lehetőségek a Debreceni Egyetemen Virág László DE OEC Orvosi Vegytani Intézet ET III. emelet BIO MMKK DE-BIK
Mi a HTS? Robotizált mintamozgatási, műszeres mérési és adatfeldolgozó egységek integrált rendszere, mely alkalmas molekulakönyvtárak és nagy expressziós könyvtárak (pl. phage display) szűrésére akár napi 1 millió mérés elvégzésével. HTS = High throughput screening
Egyetemi vs Ipari HTS Laboratórium: Átfedő és Egyedi Igények Ipari HTS laboratórium Szűk betegségcsoportra fókuszált, korlátozott számú fehérjét és sejten belüli útvonalat célba vevő, kizárólag gyógyszerfejlesztési célú HTS. Egyetemi HTS laboratórium Szélesebb targetspektrum, alapkutatási és K+F igények kiszolgálása
Mi a HTS Debrecenben? Folyadékkezelés: Tecan Freedom EVO 150 robot Tecan Power Washer plate mosó Detektálás: Perkin Elmer Victor 3 V multilabel reader Sejttenyésztő egység: Forma CO 2 inkubátor Nuaire Lamináris box Zeiss invert mikroszkóp Általános laborfelszerelés: ph mérő, mérlegek, vízfürdő, pipetták, stb
A DEBRET HTS laboratórium hosszú távú szerepe és hatásai A DEOEC-en folyó transzlációs kutatások segítése Új lead molekulák azonosításának, szabadalmaztatásának elősegítése Ipari kollaborációk serkentése: gyógyszergyárak, biotechnológiai vállalkozások Munkahelyteremtés Spinoff és startup vállalkozások lehetősége
Folyadékkezelő Robot Tecan Freedom EVO 150 folyadékkezelő robot: A munkaasztalon a jelenlegi konfigurációban 6 darab plate elhelyezésére van lehetőség. A berendezés 96 - és 384 lyukú plate-ekkel egyaránt kompatibilis Tecan Power Washer 384 plate mosó: Jelenlegi felszereltségével 384 lyukú plate-ekkel használható. Sejtmentes és sejtes vizsgálatok mosási lépéseinek kivitelezésére egyaránt alkalmas.
8 független csatorna és 96 csatornás pipettázó fej
Széles Térfogattartomány 1-1000 µl
Folyadékszint Detektálás
Tesztvegyületek bemérése pin tool: 25nl
Inkubálási és rázási lehetőség
Mintamozgatás: 360º-ban forgó robotkar
Gemini Vezérlő Szoftver
Detektálás: Victor 3 V Multilabel Reader Fluorescence (top and bottom) Time-resolved Fluorescence (TRF) Fluorescence Polarization (FP) Dual window TRF Luminescence (glow, flash or dual type) Absorbance (UV and visible) FRET Dual excitation and emission fluorescence Scanning of the well area Fast and slow kinetic measurements Incubation (up to 45 C) 2 injectors 6-1534 well plates
Fluorescence Polarization Fluorescence polarization (FP) measurements are based on the assessment of the rotational motions of species. FP can be considered a competition between the molecular motion and the lifetime of fluorophores in solution. If linear polarized light is used to excite an ensemble of fluorophores only those fluorophores, aligned with the plane of polarization will be excited. The fluorescence polarization (P) of a labeled macromolecule depends on the fluorescence lifetime and the rotational correlation time
Fluorescence Polarization membrane lipid mobility domain motions in proteins interactions at the molecular level clinical diagnostics Advantage: only one labeled species (unlike in FRET). Many of these assays are based on the use of antibodies that provide the specificity needed to selectively detect a wide variety of antigens.
Fluorescence Polarization
Time Resolved Fluorescence (TRF)
TRF Allows Multiplexing Sensitivity: 5 amol Eu/well (384 well plate; 5 min reading time)
HTRF kinase assay FRET + TRF = TR-FRET = HTRF
Fejlesztési lehetőségek: HCS (High Content Screening)
Fejlesztési lehetőségek: Molekulakönyvtárak Beszerzése Maybridge Chembridge Timtec AMRI Genevac Library Maintenance system (centrifugal evaporator)
Milyen Szolgáltatást Nyújtunk? Assay Fejlesztés Assay adaptálása HTS környezetre Molekulakönyvtár szűrése adott assay-ben Nagy mintaszámú vizsgálatok robotizálása (pl. ELISA) Mérési szolgáltatás (plate reader) Közös pályázatok