kenyítés, MT(24 24) Sertés MT kenyítés, MT(25) Sertés s MT 1. Sperma gyűjtés, kezelés és szétosztás Kézzel való stimulálás, 5 7 naponta Vol: 100-150 ml, szűrés Minőség ellenőrzés, hígítás: 1000-2000-3000 X 10 6 sperm/adag/50-100 ml Tárolás: 3 nap, majd életképesség csökken Hatékonyság: 65-75% PR, 9-11 malac friss/hígított spermával 40-50% PR X MT, 6-8 malac fagyasztott kenyítés, MT(26) Sertés s MT Problémák: Sem a tojás sárgája, sem a tej nem biztosít olyan védelmet a sertés spermának, mint másállat fajban Phospholipidek szintén nem olyan hatékonyak Glicerin toxikussága nagyon kifejezett min. sejt # fagyasztottnál > 5000-6000 X 10 6 5 állat MT/ 1 ejakulátumból kenyítés, MT(27) Sertés s MT 2. MT szolgálatok Inszeminátori szolgálatok Sperma szállítási szolgálat A gazdaságban gyűjtik és MT A sertés MT-e A MT optimális ideje: az ivarzás 50-60 órája alatt, annak közepén van egy 24 órás időtartam, amikor OK Az ivarzási tünetek leginkább kan jelenlétében detektálhatók (androgén szteroidot tartalmazó spray > kan spray) Spirális gumi katétert vezetnek (csavarnak) a cervix-be Türelem, csend, óvatos kivitelezés > befolyással van a sikerre/eredményre kenyítés, MT(28 28) Sperma gyűjtés kézzel AV MT cervikális
kenyítés, MT(31) Sertés s MT
kenyítés, MT(29) Sertés s MT kenyítés, MT(30) Sertés s MT kenyítés, MT(32 32) Kanca MT
kenyítés, MT(35 35) Sperma gyűjtés AV MT cervikális kenyítés, MT(33) Kanca MT 1. A sperma kezelése és tárolása MT natúr spermával Hígítás (1:3) egyszerű hígítókban (fölözött tej +AB), tárolás 4 o C-on 24-48 óra, összetett hígítóban az ondóplazma eltávolítása után a tárolási időtartam növelhető 72 órára Fagyasztás 4% GLY + fölözött tej, glükóz, tojás sárgája, vagy 4% GLY + laktóz, EDTA, tojás sárgája és ondóplazma eltávolítás fagyasztógép vagy LN 2 gőz vagy szárazjég kenyítés, MT(34) Kanca MT 2. MT Minden másnap vagy naponta (fagyasztott sperma 6 órán belül) Hűtött sperma 48 órán belül (12-24 óra) Rutin munka: 200-500 X 10 6 total sperma (eredetileg hűtött spermából, hígított sperma 1000-2000 X 10 6, 10-50 ml adagban, napjainkban 100 X 10 6 mozgó) fertilis mén spermája tovább hígítható nagy különbségek vannak mének között fagyasztott: 100-200 X 10 6
kenyítés Kutya MT Spermagyűjt jtés A spermagyűjtés előkészítése Nyugodt környezet biztosítása Tüzelő szuka jelenléte (sperma minősége, illatanyag: konzervált ivari szag, és metilhidroxibenzoat) Hőmérséklet, eszközök Padozat Séta Szuka behozatala, esetleg rögzítése A sperma gyűjt jtéshez szüks kséges eszközök Műanyag vagy üveg csövek; speciális spermavételi pohár Vízfürdő??, 37 o C, kémcsőállvány Tárgylemez és fedőlemez (olaj) Melegíthető tárgyasztal Pipetta; higítás Számláló kamra Festék(ek) Spermagyűjt jtés Spermagyűjtés Engedjük a kant alkalmazkodni a helyzethez, majd felugrani Az erekció kezdetekor húzzuk hátra a fitymát a bulbus-ig Állandó, folyamatos nyomás a bulbus-ra, átlépés Ejakuláció (3 frakció) Adatgyűjtés, az erekció megszűnésének figyelemmel kísérése
Az ejakulátum vizsgálata A normális kutya-ejakulátum jellemzői származás ürülés mennyiség szín ideje (p) (ml) 1. Frakció prosztata 0.5-2.0 0.2-5.0 víztiszta 2. Frakció sp. gazdag 0.5-1.5 0.5-3.0 tejszerű 3. Frakció prosztata 5.0-20.0 2.5-35.0 víztiszta 4. Teljes 6.5-22.5 3.0-43.0 Sejttartalom: 300-800X10 6 /ml A sperma tárolása és a szuka mesterséges termékeny kenyítése A sperma tárolt rolása Friss és szobahőmérsékletre hűtött; 4 óra??, de hígítva Higított és 5 o C-ra hűtött, 4-5 nap Higított és LN 2 -re hűtött, korlátlan A hígító feladatai: Védelem + energia/tápanyag biztosítása (glukóz, fruktóz, mannoz) Pufferolás/pH és ozmolalitás tartása (370 mosm) Pufferek: PBS Tojás-sárgája, tejfehérjék Zwitterion pufferek (Tris, Tes, Hepes) Gyári hígítók Bika hígítók (ne tartalmazzon krioprotektív anyagot) A sperma tárolása Fagyasztott: Krioprotektiv anyagok (intra- és extracelluláris) Extracelluláris: Riboz, szacharóz, arabinoz Intracelluláris: glicerin, DMSO AB Speciális védőanyagok: tejfehérje, tojás-sárgája, BSA
A friss sperma előkész szítésese Spermagyűjtés A spermiumban gazdag frakció minőségének értékelése Egy ejakulátum egy MT használandó MT (vaginális/intravaginális (IV) és intrauterin inszeminálás (IU)) IV: Nem ideális, de jó spermával (friss/hűtött) elfogadható eredményt lehet elérni IU: fagyasztottnál csak ez jöhet szóba Hütőtttt sperma előkész szítésese Higító 37 o C-ra melegítése Spermagyűjtés, minőség ellenőrzés Próbahigítás, és értékelés Kedvező próbahigítás esetén a teljes ejakulátum higítása (1 : 4) Lassan 5 o C-ra hűtés Lassú felmelegítés 37 o C-os vízben Fagyasztott sperma előkész szítésese Hígító 37 o C-ra melegítése Próbahígítás, minőség ellenőrzés Kedvező eredmény esetén, a teljes ejakulátum hígítása (1 : 4) Minőség ellenőrzés Lassan 5 o C-ra hűtés; equilibráció 2 4 óra Műszalmába töltés, LN 2 gőz, LN 2 37 o C-os vízfürdő kenyítés Friss spermás MT Higított és hűtött spermás MT Fagyasztott spermás MT Időzit zités Az időzítésnek különösen nagy a jelentősége az MTben: friss, de gyenge minőségű spermánál, vagy mélyhütőtt spermánál Ideális: Fagyasztott/hütőtt: 2 5 órával az ovuláció után (P4 vagy LH meghatározással ovuláció kontroll) Friss: hüvely citológia/hüvely endoszkópia (P4 meghat.) Min. 200 X 10 6 motilis spermium Időzítés Az ovulált petesejtnek érési folyamaton kell átesnie (48 óra az ovuláció után) Az ovuláció 2 nappal az LH csúcs után következik be A petesejtek kb. 4 5 napig maradnak életben Periódus, amikor a petesejtek termékenyülni képesek: 4 nappal az LH csúcs után 7 nappal az LH csúcs után (2 5 nappal az ovuláció után) A párosodás időzítése: 3 nappal az LH csúcs előttől 7 nappal az LH csúcs utánig (a sperma túlélésétől függ)
Időzit zités Plazma P4 meghatározás 2 nappal az ovuláció előtt kezd el emelkedni (preovulációs luteinizáció) 48 óránkénti vérvételek 4 6 nappal azután fedeztessünk/mt, hogy a P4 2.0 ng/ml (6.5 nmol/l) fölé emelkedett; vagy 1 nappal azután, hogy 8-10.0 ng/ml (25.0-32.0 nmol/l) fölé emelkedett (termékenyülési periódus kezdete) Termékeny kenyítési technikák 1. Hüvelybe történő MT 2. Intrauterin MT Foley katéter Norvég katéter Endoszkópos technika nyakcsatornán keresztül hasfalon keresztül Sebészi MT 3. Eredményesség: friss 60-90%, hűtött 50-70%, fagy. 20-60% Intravaginális termékeny kenyítés 30 cm hosszú, közepesen merev plastik katéter (rövidebb kis méretű szuka esetében) Gumi dugattyú??? (öblités fiz. oldat, higító) Katéter bevezetése a hüvelybe, sperma befecskendezése (levegő) vestibulum stimulálása, a szuka hátsó lábainak felemelése (10 perc) 2 X MT (24 órával később) Intrauterin MT Foley katéteres termékenyítés I. Az első katétert egészen a cervix bejáratáig felvezetik, majd a balonnal rögzítik Az első katéteren keresztül bevezetik a 2. katétert Sperma befecskendezése és visszahúzzák a 2. katétert az elsőbe 15 perc várakozás Előnyök: kevés visszafolyás, stimuláló hatás, sok sperma helyezkedik el közvetlenül a cervix bejáratánál Foley katéteres termékenyítés II.
Intrauterin MT Norvég-katéteres MT Külső plastik katéter + belső fém katéter gombos véggel A cervixet transabdominálisan rögziteni kell??? Nagy gyakorlat, nagy testű kutyában nehézségek. Intrauterin MT Endoszkópos MT Speciális endoszkóp + levegő bejuttatására alkalmas eszköz + irányító mechanizmus + monitor Az endoszkópot egészen a cervix-ig fel kell vezetni, majd az inszemináló katétert vezetik be egészen a méhbe Nagy gyakorlat, türelem Intrauterin MT Sebészi MT Általános altatás és median laparatomia iv katéterrel juttatjuk be a spermát a méh testbe Sebzárás Etikai aggályok Hatékonys konyság A friss sperma hosszabb ideig őrzi meg életképességét és termékenyítőképességét, mint a fagyasztott sperma Az időzítésnek különös jelentősége van fagyasztott spermás MT-nél Bizonyos kanok spermája nem fagyasztható vagy csak nagyon gyenge hatékonysággal Friss: 60-90% Hűtött: 50 70% Fagyasztott: 20 60%
A sperma tárolása 1. A sperma tárolása szobahőmérsékleten hígítva vagy hígítatlanul, egyből használható 2. A sperma tárolása 4 C o -on tej-por 2.4 g, glükóz, 4.9 g, Na(CO3) 2 0.15 g, deszt.víz 100 ml-ig, penicillin 150000 NE, streptomycin 150000 mg alacsony zsírtartalmú pasztőrözött tej forralás után próbahígítás, hígítási arány 1:4 lassú hűtés, majd lassú felmelegítés után MT 3. Fagyasztás Tris 6.06 g, fruktóz 2.5, citromsav 3.4, deszt.víz 184 ml, 8% glicerin, 20% tojássárgája, penicillin és streptomycin próba hígítás, hígítási arány 1:4, lassú hűtés 4-5 C o.ra, 2-4 órás ekvilibráció, gyors fagyasztás, gyors felmelegítés, MT kenyítés, MT A MT optimális ideje különböző fajokban Tehén: ovulátio 10-15 órával az ivarzás vége után AM/PM szabály; MT az ivarzás második felében Juh: ovulátio 25-30 órával az ivarzás kezdete után MT ivarzás közepe/második fele (12-18 órával az ivarzás kezdete után) fagyasztott: 2X Kecske: ovulátio 30-36 órával az ivarzás kezdete után MT az ivarzás közepe vagy az ivarzás második felében (12-18 órával az ivarzás kezdete után) fagyasztott: 2X kenyítés, MT(39) MT optimális ideje Sertés:ovulátio az ivarzás utolsó harmadában MT ivarzás közepe, pozitív teszt (az első nap vége, vagy második nap eleje) PR 10%-al nagyobb ha 2 MT van Kanca:ovulátio 1 vagy 2 nappal az ivarzás vége előtt MT minden másnap az ovulációig, az ivarzás másnapjától UH kenyítés, MT(40) A MT technikája a különböző háziállatfajokban Tehén: rektovaginális eljárás Kanca: vaginális módszer Anyajuh: vaginális cervikális laparoszkópiás transzcervikális Kecske: cervikális (uterinális) Koca: cervikális/uterinális Hímek meddősége 1) Párzásképtelenség (Nemzőképesség hiánya) Impotentia coeundi Nem hajlandó felugrani az állat (nincs/alacsony a libidó, gyakorlatlan, érettlen, stb.) Felugrás megtörténik, de nem tudja bevezetni a péniszt/nincsenek hágómozgások, stb. (libidó OK) 2) Termékenyítőképesség hiánya Impotentia generandi
Hímek meddősége Párzásképtelenség/Impotentia ceoundi Fiatal, érettlen, gyakorlatlan állat Nem tud, vagy nem hajlandó felugrani Nem tudja bevezetni a péniszt Nem tud ejakulálni az állat (ejakuláció hiánya) Hímek meddősége Párzásképtelenség/Impotentia ceoundi Fiatal, érettlen, gyakorlatlan állat Fiatal bika (érettlen és/vagy gyakorlatlan) Alacsony libidó/libidó teljes hiánya Anaphrodisia Kezelés: türelem, ivarzó nőstények biztosítása, hormon terápia (5000-10000 NE hcg/gnrh, vagy tesztoszteron /10-50 100-500 mg/hetente/), E-vitamin Cél: tesztoszteron hormon termelés/szint tartási/takarmányozási körülmények javítása Hímek meddősége Párzásképtelenség/Impotentia ceoundi Nem tud vagy nem akar felugrani (alacsony/nincs libidó vagy szervi elváltozás van) Tartási problémák (durva bánásmod, csuszós padozat, nagy meleg, rangsor probléma, stb.) Végtagbántalmak, gerincproblémák, pénisz sérülése/gyulladása, stb. Túlsúly Hímek meddősége Párzásképtelenség/Impotentia ceoundi Nem tudja bevezetni a péniszt (nincs hágómozgás) Nem alakul ki erekció (vérellátási zavar, sérülés, elzáródás, stb.) Nem alakul ki erekció/erekció zavara Sérülés a péniszen/tasakon A pénisz deformitása/elhajlása, stb. Hímek meddősége Párzásképtelenség/Impotentia ceoundi Nem tudja bevezetni a péniszt (nincs hágómozgás) Nem alakul ki erekció (vérellátási zavar, sérülés, elzáródás, stb.) Nem alakul ki erekció/erekció zavara Sérülés a péniszen/tasakon (balanoposthitis, stb.) A pénisz deformitása/elhajlása, stb. Összenővés/szükület/paraphimosis/elhalás, stb. Nem tud ejakulálni az állat (nincs ejakuláció) Hímek meddősége Termékenyítőképtelenség/Impotentia generandi Subfertilitás Infertilitás Okok: kromoszóma rendellenesség spermaminőség romlása spermiogenesis zavara here, mellékhere és járulékos nemi mirigyek elváltozása (heregyulladás, a here degenerációja, rejtettheréjűség, daganat, járulékos hím nemi mirigyek gyulladása, stb.)
Heregyulladás és s mellékhere gyulladás Here gyulladás/orchitis Elsődleges v. másodlagos fertőzés (hematogén szoródás) (trauma, vírusos fertőzés, parazita) (Brucella species; B. abortus, B. canis, B. melitensis, B. suis) Felszálló fertőzés a húgycső felől v. hematogén szórodás Egy oldali v. két oldali és általában magában foglalja az mellékherét Heregyulladás és s mellékhere gyulladás Tünetek: Akut fázis: gyulladás, hyperaemia, hőmérséklet emelkedés, duzzadás, megnagyobbodás, fájdalom, láz Krónikus fázis: zsugorodás, kötőszövet szaporodás, összenövés, tályog képz., a parenchyma degenerációja, magas hőm. indukálta degeneráció a másik herében Kezelés: Reménytelen prognózis Az érintett here eltávolítása (hőm. indukálta degeneráció a másik oldali herében) Ha kétoldali a jövőbeni tenyésztés reménytelen > kasztráció Heregyulladás és s mellékhere gyulladás Mellékhere gyulladás Elsődleges fertőzés v. here fertőzés terjed át a mellékherére (Br. ovis) Tünetek: Here gyulladáshoz hasonló; hőm. emelkedés, duzzadás, fájdalom, elzáródás, csökkent fertilitás, A mellékhere funkciójának csökkenése/elvesztése, Ha kétoldali infertilitás, hőm. indukálta degeneráció a kontra laterális herében Kezelés: Az E és a here eltávolítása(hőm. indukálta temp. deg. a kontra laterális oldalon), sperma AB A here degeneráci ciója A here csatorna hámja nagyon érzékeny a sérülésre; Számos ok idézhet elő reverzibilis v. irreverzibilis degenerációt a here csatorna hámjában. Hőmérséklet, toxin, endokrin zavar, fertőzés A tünetek fázis késéssel kezdődnek Hőmérséklet: Hőmérséklet indukálta nyári infertilitás (boar, bull, ram) Helyi gyulladás a here zacskó bőrében/v. más struktúrában a here zacskóban (orchitis, epididymitis) hőm. indukálta deg. Zavar a here vér ellátásában, > nincs hő kicserélődés (here sérv, stb.) A here degeneráci ciója Hőmérséklet: Tartós láz > általános fertőzés > TDTD Here zacskó fagyási sérülése > TDTD Toxin: nehézfém, sugárzás Stressz okozta degeneráció: Az LH termelés gátlása kortikoszteroidok által Hormonális degeneráció: A gonadotrop hormon produkció zavart (daganat) Idős állat: progresszív, irreverzibilis degeneráció > elsődleges degenerált formák száma, később oligospermia, kötöszövet szaporodás Fertőzés: A here degeneráci ciója Lag interval: 4 6 hét Az ejakulátum mennyisége nem változik # és motilitás Abnormális formák Biopszia és/v. sperma gyűjtés Ha a bazális membrán sértetlen és a spermatogónium sejtek kimutathatók a prognózis OK Ha a here csatorna hámja elveszett a prognózis reménytelen