SEMMELWEIS EGYETEM Orvosi Biokémiai Intézet 1094 Budapest, Tű zoltó u. 37-47. SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS című gyakorlat előkészítése Készítette: 2009.02.24. A dokumentáció kódja: SE-OBI-OKT-MU- 07 Dr. Bartha Katalin tanársegéd Dátum Változat száma: 01 Jóváhagyta: 2009.02.24. Érvénybelépés időpontja: 2009.02.24. Dr. Kolev Kraszimir tanulmányi felelős Dátum Oldalak száma: 6 MIR szempontból ellenőrizte: 2009.02.24. Mellékletek száma: 0 Dr. Kolev Kraszimir minőségirányítási vezető Dátum Nyilvántartott példány: Munkapéldány: A példány sorszáma: Ezen Szabványműveleti előírás a Semmelweis Egyetem szellemi tulajdona. Továbbadása, sokszorosítása írásos engedélyhez kötött. A Munkautasításban szereplő információt csak a minőség- és környezetirányítási rendszer működtetéséhez lehet felhasználni.
MÓDOSÍTÁSOK JEGYZÉKE Módosította Dátum/Aláírás Módosított oldalszám Jóváhagyta Dátum/Aláírás Ellenőrizte Dátum/Aláírás Kibocsátás időpontja Oldal:2/6
TARTALOMJEGYZÉK A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS CÉLJA... 4 A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE... 4 ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA... 4 A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS LEÍRÁSA... 4 Oldal:3/6
A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS CÉLJA Összefoglalja a rutinszerűen alkalmazott technológiai eljárás részleteit. A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE Orvosi Biokémiai Intézet oktatási előkészítő laboratóriuma. ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA A dokumentum kidolgozásáért felelős: Tanulmányi felelős A dokumentum alkalmazásáért felelős: Vezető laborasszisztens A dokumentumban foglaltak végrehajtásáért felelős: Beosztott laborasszisztensek. A dokumentumban szabályozott tevékenység rendszer felülvizsgálat alkalmával történő felülvizsgálatáért felelős: A Minőségirányítási vezető A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS LEÍRÁSA Transzaminázok (ASAT, ALAT) aktivitásának meghatározása I. Oldatok elkészitése: I.1. ALAT (GOT) reagens, (Diagnosticum Zrt.) 1. Reagens: Tris puffer, ph=7.5 110 mmol/l L-Alanin 550 mmol/l 2. Reagens: LDH 1200 U/l NADH 0.2 mmol/l -Ketoglutarát 16 mmol/l I.2. ASAT (GPT) reagens, (Diagnosticum Zrt.) Oldal:4/6
1. Reagens: Tris buffer, ph:7.8 88 mmol/l L-Aszpartát 260 mmol/l 2. Reagens: NADH 0.22 mmol/l LDH 900 U/l MDH 600 U/l -Ketoglutarate 12 mmol/l A kitben lévő 1. és 2. reagens mindkét enzimnél egy hétre előre összeönthető, és 1+2 Reagens formájában kell a gyakorlatra bekésziteni. I.3. Normál és patológiás szérum minta (Diagnosticum Zrt.) A kittől függő adag oldható fel előre. Normál szérum 6ml DV-ben oldva, patologiás szérum 5ml DV-ben oldva. II. Bekészitett anyagok, eszközök termenként: 25ml-es Erlenmeyer lombikba: 12 ml ALAT reagens 12 ml ASAT reagens Müanyag csőbe, pohárban jegelve: 1,2 ml normál szérum 1,2 ml patológiás szérum 3db akril szükitett küvetta, pohár, spriccflaska, pipettahegyek. III. Mérési módszer Közvetlenül a küvettába bemérünk 1ml reagenst és 0,1ml normál ill. patológiás szérumot. Összekeverés és 3-6 perc inkubálás után mérjük az extinkciót 340 nm-en desztvizzel szemben. Az extinkció percenkénti változását hatátozzuk meg 5 percen át történő méréssel. Kreatin kináz aktivitás mérése I. Oldatok elkészitése: 50mM TRIS-HCl puffer ph:7.2, 1000ml, az enzimek higitásához. 50mM TRIS-HCl puffer ph:7.2 + 1mM NADP + 20mM Glükóz-6P (G-6P). G-6P dehidrogenáz (G-6PDH) higitása: 10ul enzimet 100x higitva az enzim 5 napig 4C o -on eltartható, további higitásokat minden reggel frissen kell késziteni. Minták elkészitése: normál szérum + G-6PDH, további 400x higitás TRIS-el, Oldal:5/6
végkoncentráció: 40 000x hig G-6PDH patológiás szérum + G-6PDH, további 50x higitás TRIS-el, végkoncentráció: 5000x hig G-6PDH II. Bekészitett anyagok, eszközök termenként: DV TRIS-HCl puffer +NADP+G-6P 15ml, Erlenmeyer lombikban. Hexokináz: 0,6ml/cső G-6P-DH: 0,6ml/cső CK/1 normál szérum: 0,6ml/cső CK/2 infarktusos szérum: 0,6/ml/cső 3db poliakril szükitett küvetta +1 keverőkanál Pohár, papirvatta, spriccflaska pipettahegyek III. Mérési módszer: A TRIS puffert, enzimeket, és a normál/patológiás mintát közvetlenül a küvettába pipettázzuk. 2-6 perces inkubáció után a minták extinkcióját mérjük 340nm-en a kontrollal szemben. Az enzim aktivitását az optikai denzitás percenkénti változásának meghatározásával az extinkciós koefficiens ismeretében számitjuk ki. Oldal:6/6